用于培養(yǎng)牛樟芝的方法以及培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于培養(yǎng)牛樟芝（Antrodia cinnamomea)的方法，它包括：將一 牛棒芝菌株培養(yǎng)于一添加有一牛棒的蒸饋產(chǎn)物（distillation products of Cinnamomum kanehirae Hayata)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（basal medium)中，其中該牛樟的蒸饋產(chǎn)物是選自于 由下列所構(gòu)成的群組：一萃取自牛樟葉的精油（essential oil)、一萃取自牛樟葉的純露 (hydrolate)、一萃取自牛樟枝條的精油、一萃取自牛樟枝條的純露，以及它們的組合。本發(fā) 明也涉及一種用于培養(yǎng)牛樟芝的培養(yǎng)基，它包含有一如上所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及一如上所 述的牛樟的蒸餾產(chǎn)物。
【背景技術(shù)】
[0002] 牛樟芝（Antrodia cinnamomea)(中文別名為樟芝、樟燕、樟內(nèi)燕以及牛樟 ? ;同種異名為 Antrodia camphorata、Ganoderma comphoratum 以及 Taiwanofungus camphoratus)是屬于多孔菌目（Polyporales)、多孔菌科（Polyporaceae)、薄孔菌屬 (Antrodia)的臺灣特有真菌，它主要生長在臺灣高海拔的牛樟（Cinnamomum kanehirai Hayata)的樹干上。
[0003] 在臺灣民俗療法中，牛樟芝具有化瘀活血、解毒消腫以及鎮(zhèn)靜止痛的功效，并且常 被用來治療腹瀉、嘔吐、食物中毒、糖尿病、肝炎、肝硬化以及肝癌等。此外，有研究報告指 出，牛樟芝具有抗氧化（antioxidant)、抗腫瘤（antitumor)、抗細菌（antibacterial)、抗 發(fā)炎（anti-inflammation)以及增加免疫力等生物活性，因而在生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)上具有極大 的應用價值。
[0004] 為了大量生成牛樟芝，許多人工培養(yǎng)方法已被用來培養(yǎng)牛樟芝，其中主要包括下 列4種方法：椴木培養(yǎng)法、太空包培養(yǎng)法、液態(tài)培養(yǎng)法以及（皿式）固態(tài)培養(yǎng)法。然而，這些 人工培養(yǎng)方法存在使用上的缺點，例如，椴木培養(yǎng)法必須砍伐天然的牛樟來作為培養(yǎng)基質(zhì)， 因而無法被廣泛地應用。此外，這些人工培養(yǎng)方法所培養(yǎng)出的牛樟芝在生長速度以及產(chǎn)量 上仍受到限制，無法滿足市場上的廣大需求。因此，發(fā)展出新的牛樟芝培養(yǎng)技術(shù)以提高牛樟 芝的產(chǎn)量即成一個極為重要的研發(fā)課題。
[0005] 已有文獻指出，在用于培養(yǎng)牛樟芝的一基礎(chǔ)培養(yǎng)基（basal medium)中添加額外的 添加物（additive)或改變該基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配方時會影響牛樟芝的生長。例如，在臺灣大學 森林學研究所的吳升原所著碩士論文[名稱："牛樟抽出物對樟芝生長影響之探討（Effect of the extracts from Cinnamomum kanehirai on the mycelial growth of Antrodia camphorata)"]中，吳升原將牛樟木材以70%乙醇（70% ethanol)進行萃取而得到一乙醇 粗萃取物，接著對該乙醇粗萃取物依序以正己燒（n-hexane)、乙酸乙酯（ethyl acetate)、 丁醇（butanol)以及水進行萃取而分別得到一正己烷萃取物、一乙酸乙酯萃取物、一丁醇 萃取物以及一水萃取物，繼而將所得到的5種萃取物分別添加至一麥芽萃取物瓊脂（MEA) 培養(yǎng)基[malt extract agar(MEA)medium]中，并且觀察牛樟芝菌絲體在含有不同濃度（包 括100ppm、500ppm以及l(fā)OOOppm)的萃取物的MEA培養(yǎng)基上的生長情形。而實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 牛樟木材的乙醇粗萃取物、正己烷萃取物以及乙酸乙酯萃取物在一為500ppm的濃度下皆 可以促進牛樟芝的生長，而牛樟木材的丁醇萃取物與水萃取物沒有被發(fā)現(xiàn)具有這方面的功 效。
[0006] 于該篇碩士論文中，吳升原進一步將牛樟木材的精油中所含有的10種化 學成分[包括：丁香酸（eugenol)、香葉草醇（geraniol)、黃樟油精（safrole)、香 茅醇（citronellol)、α-廠品醇（a-terpineol)、4_廠品醇（4-terpinenol)、沉 香醇（Linalool)、d_ 棒腦（d-camphor)、p-異丙基甲苯（p-cymene)以及 1，8_ 按謎 (1,8-cineole)]分別添加至一 MEA培養(yǎng)基中，并且觀察牛樟芝菌絲體在含有不同濃度（包 括50ppm、100ppm以及500ppm)的化學成份的MEA培養(yǎng)基上的生長情形。而實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 黃樟油精、α -廠品醇以及d-樟腦在一為lOOppm以及500ppm的濃度下皆可以促進牛樟芝 的生長，而4-萜品醇、p-異丙基甲苯以及1，8-桉醚在3種濃度下皆無法促進牛樟芝的生 長。至于丁香酚、香葉草醇、香茅醇以及沉香醇在低濃度（也就是說50ppm以及l(fā)OOppm)下 可以促進牛樟芝的生長，但是在高濃度（也就是說500ppm)下反而會抑制牛樟芝的生長。
[0007] 在臺灣大學森林學研究所的高郁婷所著碩士論文[名稱：牛樟抽出物及精油 對棒芝菌絲及子實體生長之影響（Effect of the extracts and essential oil from Cinnamomum kanehirai on the growth of mycelium and fruiting body of Antrodia camphorata)]中，高郁婦為了評估不同樟屬植物的精油對于牛樟芝生長的影響，將牛樟木 材的精油、樟樹木材的精油、兩種品系（也就是說桂皮醛型與枷羅木醇型）的土肉桂葉的 精油以及山肉桂葉的精油（上述5種精油都是通過水蒸餾法而被獲得）分別添加至一 MEA 培養(yǎng)基中并觀察牛樟芝菌絲體在含有不同濃度（包括100ppm、500ppm以及l(fā)OOOppm)的精 油的MEA培養(yǎng)基上的生長情形。而實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)：牛樟木材的精油、樟樹木材的精油、枷 羅木醇型土肉桂葉的精油以及山肉桂葉的精油在上述3種濃度下皆可以促進牛樟芝的生 長，其中牛樟木材的精油在一為100ppm、500ppm以及l(fā)OOOppm的濃度下的生長指數(shù)分別為 114. 2 %、148. 9 %以及160. 3 %，至于同為樟屬植物的桂皮醛型土肉桂葉的精油在上述3種 濃度下皆會完全地抑制牛樟芝的生長。
[0008] 在嘉義大學森林暨自然資源研究所的李名訓所著碩士論文[名稱：樟芝栽培之 研究（Study on the culture of Antrodia cinnamomea)]中，李名訓主要是探討不同的 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方、環(huán)境因子以及刺激物質(zhì)對于牛樟芝菌絲體固態(tài)培養(yǎng)的影響。特別地，在 刺激物質(zhì)方面，李名訓將牛樟木材精油（它是通過對牛樟實木進行水蒸餾而被獲得）以及 市售的本棒精油[Cinnamomum camphora(eucamphor) essential oil]與市售的芳棒精油 [Cinnamomum camphora (linaloola) essential oil]分別添加至一 MEA 培養(yǎng)基中并且觀察 牛樟芝菌絲體在含有不同濃度（也就是說，lOOOppm至6000ppm)的精油的MEA培養(yǎng)基上 的生長情形。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)：牛樟木材精油、市售的本樟精油以及市售的芳樟精油在上述 濃度下皆可以促進牛樟芝的生長，其中牛樟木材精油在一為3000ppm的濃度下可達致最高 的生長指數(shù)為126%，市售的本樟精油在一為4000ppm的濃度下可達致最高的生長指數(shù)為 133%，以及市售的芳樟精油在一為lOOOppm的濃度下可達致最高的生長指數(shù)147%。
[0009] 雖然已存在有上述文獻報導，本技藝中仍然存在有一需要去發(fā)展出可以低成本、 快速并且大量地培育牛樟芝的方法以供產(chǎn)業(yè)界所需。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 于是，在第一個方面，本發(fā)明提供一種用于培養(yǎng)牛樟芝的方法，它包括：將一牛樟 芝菌株培養(yǎng)于一添加有一牛樟的蒸餾產(chǎn)物的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其中該牛樟的蒸餾產(chǎn)物是選自 于由下列所構(gòu)成的群組：一萃取自牛樟葉的精油、一萃取自牛樟葉的純露、一萃取自牛樟枝 條的精油、一萃取自牛樟枝條的純露，以及它們的組合。
[0011] 在第二個方面，本發(fā)明提供一種用于培養(yǎng)牛樟芝的培養(yǎng)基，它包含有一如上所述 的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及一如上所述的牛樟的蒸餾產(chǎn)物。
【附圖說明】
[0012] 圖1顯示將牛樟芝菌株的接種源分別接種于含有不同濃度的牛樟葉的精油的MEA 培養(yǎng)基中并進行培育歷時5周后所測得的生長指數(shù)，其中對照組表示未添加牛樟葉的精油 的MEA培養(yǎng)基所培育出的牛樟芝菌株；以及實驗組L0-1至L0-21分別表示被添加有一濃度 范圍落在100至lOOOOppm的牛樟葉的精油的MEA培養(yǎng)基所培育出的牛樟芝菌株；
[0013] 圖2顯示將牛樟芝菌株的接種源分別接種于含有不同濃度的牛樟葉的純露的MEA 培養(yǎng)基中并進行培育歷時5周后所測得的生長指數(shù)，其中對照組表示未添加牛樟葉的純露 的MEA培養(yǎng)基所培育出的牛樟芝菌株；以及實驗組LL-1至LL-28分別表示被添加有一濃度 范圍落在1000至180000ppm的牛樟葉的純露的MEA培養(yǎng)基所培育出的牛樟芝菌株；
[0014] 圖3顯示將牛樟芝菌株的接種源分別接種于含有不同濃度的牛樟枝條的精油的 MEA培養(yǎng)基中并進行培育歷時5周后所測得的生長指數(shù)，其中對照組表示未添加牛樟枝條 的精油的MEA培養(yǎng)基所培育出的牛樟芝菌株；以及實驗組W0-1至W0-21分別表示被添加有 一濃度范圍落在100至lOOOOppm的牛樟枝條的精油的MEA培養(yǎng)基所培育出的牛樟芝菌株； 以及
[0015] 圖4顯示將牛樟芝菌株的接種源分別接種于含有不同濃度的牛樟枝條的純露的 MEA培養(yǎng)基中并進行培育歷時5周后所測得的生長指數(shù)，其中對照組表示未添加牛樟枝條 的純露的MEA培養(yǎng)基所培育出的牛樟芝菌株；以及實驗組WL-1至WL-24分別表示被添加 有一濃度范圍落在1000至46000ppm的牛樟枝條的純露的MEA培養(yǎng)基所培育出的牛樟芝菌 株。
【具體實施方式】
[0016] 為了開發(fā)出可以低成本、快速并且大量地培養(yǎng)牛樟芝的新穎方法，申請 人嘗試將在園藝修枝的過程中所遺留的牛樟葉與牛樟枝條分別拿來進行水蒸餾 (hydrodistillation)，而由此所獲得的4種牛樟的蒸饋產(chǎn)物[包括：牛樟葉的精油、牛樟葉 的純露、牛樟枝條的精油以及牛樟枝條的純露]以及它們的組合，接著分別被拿來進行牛 樟芝的固態(tài)培養(yǎng)試驗以及液態(tài)培養(yǎng)試驗。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)：依據(jù)本發(fā)明所得到的4種牛樟的 蒸餾產(chǎn)物以及它們的組合在牛樟芝的固態(tài)培養(yǎng)以及液態(tài)培養(yǎng)上皆能夠有效地促進牛樟芝 菌株的生長。
[0017] 因此，本發(fā)明提供一種用于培養(yǎng)牛樟芝的方法，它包括：將一牛樟芝菌株培養(yǎng)于一 添加有一牛樟的蒸餾產(chǎn)物的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，其中該牛樟的蒸餾產(chǎn)物是選自于由下列所構(gòu)成 的群組：一萃取自牛樟葉的精油、一萃取自牛樟葉的純露、一萃取自牛樟枝條的精油、一萃 取自牛樟枝條的純露，以及它們的組合。
[0018] 如本文中所用的，術(shù)語"培育（cultivation) "以及"培養(yǎng)（culturing) "可被交換 地使用。
[0019] 如本文中所用的，術(shù)語"牛棒枝條（branch wood of Cinnamomum kanehirae Hayata)"意指由牛樟的主干（trunk)所衍伸出來的分枝。依據(jù)本發(fā)明，所述的牛樟葉或牛 樟枝條可通過自然脫落或者園藝修枝的方式而被獲得。在本發(fā)明的一個較佳具體例中，所 述的牛樟葉或牛樟枝條是通過園藝修枝的方式而被獲得。
[0020] 如本文中所用的，術(shù)語"精油（essential oil)"與"揮發(fā)油（volatile oil)"以 及"香精油（ethereal oil)"可被交換地使用。
[0021] 如本文中所用的，術(shù)語"純露（hydrolate) "與"花水（hydrosol) "、"花露（floral water)"以及"精露（essential water)"可被交換地使用。
[0022] 依據(jù)本發(fā)明，該萃取自牛樟葉的精油與純露以及該萃取自牛樟枝條的精油與純露 是通過對牛樟葉或牛樟枝條進行一萃取處理（extraction treatment)而被制得。適用 于本發(fā)明的萃取處理可以是，但不限于：水蒸饋（hydrodistillation)、蒸汽蒸饋（steam distillation)、水蒸汽蒸饋（water and steam distillation),以及它們的組合。
[0023] 有關(guān)這些萃取處理的操作程序與參數(shù)條件等是落在熟習此項技術(shù)的人士的專 業(yè)素養(yǎng)與例行技術(shù)范疇內(nèi)。在此方面，可以參照，例如，吳升原（2002)(同上述）、高郁婷 (2004)(同上述）以及李名訓（2006)(同上述）。
[0024] 在本發(fā)明的一