X 100 % (3)
[0062] 對比例1的方法和本發(fā)明的方法主要區(qū)別有3點：
[0063] 1)去雄套袋步驟中將混合花枝上雌花及先端葉片一起套入果袋中；
[0064] 2)用于雜交的花粉來源于父本植株混合花枝上的雄花序；
[0065] 3)雌花人工授粉時僅授粉1次；
[0066] 由表2可見，3個板栗品種混合花枝上的花粉發(fā)芽率介于2. 08~3. 05%之間，雖 3個品種間花粉發(fā)芽率不盡相同，但均較低。
[0067] 由表2可見，對比例1的實施結(jié)果中板栗母本植株'燕山早豐'、'燕晶'和'燕光' 的坐苞率介于52. 31~60. 9%之間，而苞內(nèi)含1粒堅果刺苞數(shù)量多，苞內(nèi)含2粒和3粒堅果 刺苞數(shù)量少，苞內(nèi)平均含堅果數(shù)不足2. 0粒/刺苞。總體來看，不同板栗品種雜交授粉后坐 苞率和苞內(nèi)含堅果數(shù)量較少，實施結(jié)果不理想。
[0068] 實驗例：板栗花粉采集時間對其發(fā)芽率的影響
[0069] 一天中不同時間段（具體見表3)，采用本發(fā)明步驟2)分別采集燕山早豐和燕光2 個品種2種類型花枝（雄花枝、混合花枝）上花粉。之后用針尖挑少許父本花粉灑落在涂 有10%蔗糖溶液的載玻片上，然后將載玻片放置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，置于25°C的恒 溫箱中24小時，之后取出用解剖鏡鏡檢，每片取3個視野，統(tǒng)計其發(fā)芽率，
[0070] 花粉發(fā)芽率=發(fā)芽花粉數(shù)/花粉總數(shù)X 100% (4)
[0071] 結(jié)果見表1。
[0072] 表1.板栗花粉采集時間對其發(fā)芽率的影響
[0074] 由表1可見，不論板栗雄花枝還是混合花枝上的花粉，10:00-11:00時間段采集的 花粉發(fā)芽率均最高。
[0075] 實施例1 :
[0076] 實施例1選配燕山早豐（早）X燕光（? )、燕晶（早）X燕山早豐（? )和燕光 (早）X燕山短枝（? ) 3個雜交組合（燕山早豐、燕光、燕晶、燕山短枝均為河北省主栽板 栗品種），試驗材料位于河北省昌黎果樹研究所板栗育種基地，以本發(fā)明方法進行板栗雜交 授粉操作，具體步驟如下：
[0077] 1)去雄套袋
[0078] 分別于板栗母本植株'燕山早豐'、'燕晶'和'燕光'雌花柱頭出現(xiàn)前， 選擇樹冠外圍混合花枝，將其上雄花序全部去除，用果袋（材質(zhì)：木漿紙；規(guī)格： 14. 5-15cmX18. 5-19cm)僅將混合花枝上雌花和雌花著生節(jié)位的葉片一同套入袋中，用訂 書針把果袋口封閉嚴緊。
[0079] 2)花粉采集和貯藏
[0080] 分別于板栗父本植株'燕光'、'燕山早豐'、'燕山短枝'雄花盛花期采集花粉，且選 擇雄花枝上雄花序為花粉采集對象。上午10:00-11:00時間段采集雄花枝上雄花序，把采 集下來的雄花序攤在干凈的報紙上，置于陰涼干燥處晾干。待雄花序晾干后，雙手輕搓雄花 序，再把雄花序上的花粉和花藥輕輕抖落下來，最后用花粉篩（孔徑0.20mm)篩去花瓣、花 藥和花絲，留下的花粉置于干燥器中備用。
[0081] 3)授粉
[0082] 分別于板栗母本植株'燕山早豐'、'燕晶'和'燕光' 75%雌花中花柱頭分叉達到 35° - 45°時第一次授粉。選擇上午8:30- 9:30時間段授粉，授粉時去掉訂書針，打開果 袋口，用毛筆蘸上父本花粉在母株雌花柱頭上反復(fù)涂抹3-5次，動作要輕而快。授粉完成后 立即再次用訂書針封閉果袋口。
[0083] 第一次授粉后第3天（第一次授粉為0天），進行第二次授粉。同樣選擇上午 8:30-9:30時間段授粉，授粉時再次去掉訂書針，打開果袋口，用毛筆蘸上父本花粉在母株 雌花柱頭上反復(fù)涂抹3-5次。授粉完成后再次用訂書針封閉果袋口。
[0084] 4)掛牌標記
[0085] 分別于板栗母本'燕山早豐'、'燕晶'和'燕光'植株上每一雜交的混合花枝上掛 一個編寫有號碼的標牌。標牌上寫明雜交組合、授粉日期、袋內(nèi)雌花數(shù)等雜交授粉信息。
[0086] 5)拆袋
[0087] 母本植株'燕山早豐'授粉后第21天拆袋，母本植株'燕晶'授粉后第25天拆袋， 母本植株'燕光'授粉后第26天拆袋，此時3個母本植株的雌花柱頭反卷并開始變黃枯萎。
[0088] 6)采果
[0089] 待母本植株'燕山早豐'、'燕晶'、'燕光'上75%的刺苞自然開裂時，把整株樹上所 有掛有標牌的混合花枝（果枝）上的刺苞打落地下，人工去除苞皮，把苞內(nèi)堅果（種子）收 集起來。
[0090] 7)雜交授粉效果調(diào)查
[0091] 花粉發(fā)芽率檢測：技術(shù)步驟3)授粉操作前進行，用針尖挑少許父本花粉灑落在涂 有10%蔗糖溶液的載玻片上，然后將載玻片放置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，置于25°C的恒 溫箱中24小時，之后取出用解剖鏡鏡檢，每片取3個視野，統(tǒng)計其發(fā)芽率。
[0092] 坐苞率檢測：技術(shù)步驟6)采果操作前進行，隨機選擇3株授粉母本植株，調(diào)查全株 上授粉混合花枝上現(xiàn)存刺苞數(shù)量，統(tǒng)計標牌上原有雌花數(shù)量。
[0093] 刺苞內(nèi)含堅果數(shù)量檢測：技術(shù)步驟6)采果操作后進行，隨機選擇3株授粉母本植 株，調(diào)查全株授粉混合花枝上苞內(nèi)含3粒堅果（種子）的刺苞數(shù)量、苞內(nèi)含2粒堅果（種 子）刺苞數(shù)量、苞內(nèi)含1粒堅果（種子）刺苞數(shù)量，統(tǒng)計全樹授粉混合花枝上刺苞數(shù)量，計 算苞內(nèi)含不同堅果數(shù)量的刺苞率。
[0094] 8)實施結(jié)果
[0095] 表2板栗花粉發(fā)芽率與其來源花枝類型關(guān)系
[0097] 注：采用Tukey法檢驗差異。小寫字母代表5%顯著水平；大寫字母代表1%極顯 著水平。
[0098] 表3不同板栗雜交授粉技術(shù)對坐苞率與苞內(nèi)堅果數(shù)量的影響
[0100] 注：采用Tukey法檢驗差異。小寫字母代表5%顯著水平；大寫字母代表1%極顯 著水平。
[0101] 花粉發(fā)芽率的高低直接決定雜交工作的成敗，獲得高發(fā)芽率的花粉是雜交工作取 得良好實施結(jié)果的保證。由表2可見，'燕光'、'燕山早豐'和'燕山短枝'這3個板栗品種 雄花枝的花粉發(fā)芽率均極顯著高于其混合花枝的花粉發(fā)芽率，并達到7~9倍水平，說明 不同板栗品種雄花枝上花粉發(fā)芽率均高于其混合花枝上花粉發(fā)芽率，并且這一現(xiàn)象穩(wěn)定存 在。
[0102] 由表3可見，采用本發(fā)明板栗雜交授粉方法后，板栗母本植株'燕山早豐'、'燕晶' 和'燕光'的坐苞率均達到70%以上，比對比例1有了極顯著提高，并且3個品種間苞內(nèi)含 1粒堅果的刺苞比率極顯著降低，而苞內(nèi)含2粒堅果的刺苞比率和苞內(nèi)含3粒堅果的刺苞比 率極顯著增加，各品種苞內(nèi)堅果數(shù)均極顯著高與對比例1，即獲得的雜交種子數(shù)量比對比例 1明顯多，取得了良好的雜交授粉結(jié)果。
[0103] 3個板栗品種采用本發(fā)明方法后，均表現(xiàn)出了坐苞率高，刺苞內(nèi)含堅果數(shù)量多的 效果，說明此發(fā)明方法在不同板栗品種上應(yīng)用，均能取得較高坐苞率和刺苞內(nèi)堅果數(shù)量多 (結(jié)實率高）的效果，且穩(wěn)定性強，并不受板栗品種間差異的影響。
[0104] 目前生產(chǎn)上沒有技術(shù)步驟規(guī)范、標準一致的板栗雜交授粉方法，因此本發(fā)明的方 法具有推廣應(yīng)用價值。
[0105] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明、【具體實施方式】及實例，對本發(fā)明作了詳盡的描 述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對本方法的判別模型作出一定的補充和優(yōu)化。因此，在不偏離 本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種板栗雜交授粉方法，包括如下步驟： 1) 去雄套袋 板栗母本植株雌花柱頭出現(xiàn)前，選擇樹冠外圍混合花枝，將其上雄花序全部去除，用果 袋將雌花和葉片一同套入袋中，把果袋口封閉嚴緊； 2) 花粉采集和貯藏 在父本植株雄花盛花期，采集雄花枝上雄花序，把采集下來的雄花序攤開，置于陰涼干 燥處晾干，待雄花序晾干后，雙手輕搓雄花序，再把雄花序上的花粉和花藥輕輕抖落下來， 最后用花粉篩篩去花瓣、花藥和花絲，留下的花粉置于干燥器中備用； 3) 授粉 母本植株雌花的花柱頭分叉達到35° - 45°時為第一次授粉時期，授粉時去掉訂書 針，打開果袋口，用毛筆蘸上父本花粉在母株雌花柱頭上反復(fù)涂抹3-5次，授粉完成后再次 封閉果袋口； 第一次授粉后第2-4天，為第二次授粉時期，授粉時打開果袋口，用毛筆蘸上父本花粉 在母株雌花柱頭上反復(fù)涂抹3-5次，授粉完成后再次用訂書針封閉果袋口； 4) 掛牌標記 每一雜交的混合花枝上掛一個編寫有號碼的標牌，標牌上寫明雜交組合、授粉日期、袋 內(nèi)雌花數(shù)等雜交授粉信息； 5) 拆袋 授粉后20-30天拆袋； 6) 米果 待母本植株上的刺苞自然開裂時，把整株樹上所有掛有標牌的混合花枝（果枝）上的 刺苞打落地下，人工去除苞皮，把苞內(nèi)堅果（種子）收集起來。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的板栗雜交授粉方法，其特征在于，步驟1)所述用果袋的材質(zhì) 為木漿紙；規(guī)格為14. 5-15cmX18. 5-19cm，用果袋將雌花和雌花著生節(jié)位的葉片一同套入 袋中。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效板栗雜交授粉方法，其特征在于，所述步驟2)在父本植 株盛花期采集花粉，為在上午10:00-11:00時間段采集雄花枝上雄花序。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的板栗雜交授粉方法，其特征在于，所述步驟3)中，母本植株 75%的雌花的花柱頭分叉達到35° - 45°時為第一次授粉時期。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的板栗雜交授粉方法，其特征在于，所述步驟3)中，在上 午8:30- 9:30時間段授粉。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的板栗雜交授粉方法，其特征在于，步驟3)所述第一次 授粉后第3天進行第二次授粉。7. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的板栗雜交授粉方法，其特征在于，所述步驟5)中，以授 粉后的雌花柱頭反卷，并開始變黃枯萎時為拆袋標準。8. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的板栗雜交授粉方法，其特征在于，所述步驟6)中，待母 本植株上75 %的刺苞自然開裂時采果。9. 權(quán)利要求1-8任一項所述的板栗雜交授粉方法在板栗雜交育種中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明屬果樹育種技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種高效板栗雜交授粉方法，包括如下步驟：1)去雄套袋；2)花粉采集和貯藏；3)授粉；4)掛牌標記；5)拆袋；6)采果。本發(fā)明具有以下優(yōu)點：1)板栗母本植株上坐苞率高，采用降低袋中溫濕度劇變的處理，來減少雌花灼花脫落率，提高坐苞率；2)板栗母本植株上刺苞內(nèi)堅果數(shù)量多，采用①僅選擇父本植株雄花枝上雄花序為花粉采集對象、②上午10:00-11:00時間段采集雄花序，此特定時間和部位來源的花粉，能提高授到雌花柱頭上的花粉發(fā)芽率、③對母本植株雌花進行二次授粉來增加柱頭上花粉著生數(shù)量，以此3個綜合措施提高母本植株雌花授粉受精成功率，達到板栗刺苞內(nèi)堅果數(shù)量多的效果。
【IPC分類】A01H1/02
【公開號】CN105265304
【申請?zhí)枴緾N201410369514
【發(fā)明人】王廣鵬, 劉慶香, 張樹航, 李穎, 商賀立, 李海山
【申請人】河北省農(nóng)林科學(xué)院昌黎果樹研究所
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2014年7月30日