明月草組織培養(yǎng)快速繁殖培養(yǎng)基及組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及明月草組織培養(yǎng)快速繁殖培養(yǎng)基及組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]明月草(Angelica keiskei koidzumi)又稱金雞毛草，屬菊科菊三七屬，為宿根多年生長(zhǎng)常綠直立草本植物，原產(chǎn)于新加坡。明月草含有多種天然活性物質(zhì)，特別是富含特有物質(zhì)查爾酮及香豆素(尹慧丹等，2011)，全草可入藥，具有增強(qiáng)人體免疫力、舒張血管、抑制胃酸分泌、抗血栓、降血糖、降血壓、抗組胺、防癌變等功效(Enoki T, et al.，2007)。近年來(lái)，明月草又成為人們喜愛的一種蔬菜，主要食用莖葉，食法多樣，可炒食、炸食、涼拌，氽湯或做成茶汁，其具有獨(dú)特的芳香，可解魚、肉的腥膻味，莖葉煮水后食味柔滑，口感清爽。
[0003]明月草以分株或扦插繁殖為主，多在每年3-5月進(jìn)行，但受季節(jié)影響較大，且繁殖系數(shù)和出苗率低，難以滿足規(guī)?；a(chǎn)的需求。組織培養(yǎng)繁殖速度快，所產(chǎn)種苗為脫毒苗，因此，采用組織培養(yǎng)技術(shù)是實(shí)現(xiàn)對(duì)明月草規(guī)?；敝车挠行緩健?guó)內(nèi)利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁育明月草的研究尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明的一個(gè)目的是建立一種有效的明月草組織培養(yǎng)快速繁殖方法，提高繁殖系數(shù)，縮短繁殖周期，并解決季節(jié)性限制問題。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述明月草組織培養(yǎng)快速繁殖培養(yǎng)基。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0006]明月草組織培養(yǎng)快速繁殖培養(yǎng)基，包括腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，其中:
[0007]腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5~5.8 ；
[0008]繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉3-4g/L，ρΗ5.5-5.8 ；
[0009]壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5~5.8 ；
[0010]生根培養(yǎng)基為1/2MSq+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5-5.8。
[0011]本發(fā)明所述的MS基本培養(yǎng)基成分構(gòu)成如下:
[0012](1)大量元素:KN031260mg/L、NH4N031320mg/L、CaCl2.2H20 440mg/L、MgS04.7H20370mg/L、KH2P04170mg/L、FeS04.7H20 427.8mg/L、EDTA_2Na 37.3mg/L ；
[0013](2)微量元素:MnS04.4H20 22.3mg/L、ZnS04.7H20 8.6mg/L、H3P036.2mg/L、Na2Mo04.2H20 0.25mg/L、KI 0.83mg/L、CuS04.5H20 0.025mg/L、CoCl2.6H20 0.025mg/L ；
[0014](3)有機(jī)物:C6H1206.2H20(肌醇)100mg/L、NH2CH2C00H(甘氨酸)2.0mg/L、C8Hn03N.HC1 (鹽酸吡哆醇)0.5mg/L、NC5H4C00H(煙酸)0.5mg/L、C12H17C10S.2HCL(鹽酸硫胺素)0.lmg/L ；
[0015]余量為蒸餾水。
[0016]所述1/2MS基本培養(yǎng)基的成分為:大量元素是MS基本培養(yǎng)基的一半，其余成分微量兀素、鐵鹽、有機(jī)成分與MS基本培養(yǎng)基相同。
[0017]所述的MS。培養(yǎng)基成分構(gòu)成如下:
[0018](1)大量元素:KN031260mg/L、NH4N031320mg/L、CaCl2.2H20 440mg/L、MgS04.7H20370mg/L、KH2P04170mg/L、FeS04.7H20 855.6mg/L、EDTA_2Na 37.3mg/L ；
[0019](2)微量元素:MnS04.4H20 22.3mg/L、ZnS04.7H20 8.6mg/L、H3P036.2mg/L、Na2Mo04.2H20 0.25mg/L、KI 0.83mg/L、CuS04.5H20 0.025mg/L、CoCl2.6H20 0.025mg/L ；
[0020](3)有機(jī)物:C6H1206.2H20(肌醇)100mg/L、NH2CH2C00H(甘氨酸)2.0mg/L,C8Hn03N.HC1 (鹽酸吡哆醇)0.5mg/L、NC5H4C00H(煙酸)0.5mg/L、C12H17C10S.2HCL(鹽酸硫胺素)0.lmg/L。
[0021]明月草組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟:
[0022]步驟1，外植體的選擇:春季以明月草母株上帶有潛伏芽的新發(fā)枝條為外植體；
[0023]步驟2，外植體的消毒:剪去枝條葉片，用自來(lái)水沖洗2-3分鐘，再用洗潔精洗滌1-2次，接著用自來(lái)水沖洗3-5分鐘，再在超凈工作臺(tái)上以0.1 %取(:12溶液消毒8-12分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗4-5遍，瀝干后待用；
[0024]步驟3，腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒好的枝條切除莖尖，余下的枝條剪成每段帶有1-2個(gè)腋芽的莖段，接種到腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上放進(jìn)培養(yǎng)室進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5-5.8，MS 培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌15-20分鐘，培養(yǎng)條件為溫度25-30°C，光照強(qiáng)度1500-20001x，每日光照12小時(shí)條件下培養(yǎng)，接種后5天腋芽開始萌動(dòng)，當(dāng)15-20天伸長(zhǎng)至2±0.5cm時(shí)，即可進(jìn)入繼代培養(yǎng)；
[0025]步驟4，繼代培養(yǎng):將步驟3中獲得的不定芽進(jìn)行繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)基為:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，pH5.5-5.8，MS 培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌15-20分鐘，培養(yǎng)條件為溫度25-30°C，光照強(qiáng)度1500-20001x，每日光照12-14小時(shí)條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)7-10天，待叢生芽長(zhǎng)至1.5-2cm時(shí)進(jìn)行壯苗培養(yǎng)；
[0026]步驟5，壯苗培養(yǎng):將繼代苗切下接種進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)基為MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉3_4g/L，pH5.5-5.8，溫度、光照條件同步驟4，培養(yǎng)10天，將長(zhǎng)至3-4cm的幼苗轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)；
[0027]步驟6，生根培養(yǎng):將步驟5中獲得的幼苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)基為1/2MS?！崽?0g/L+瓊脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，培養(yǎng)條件同步驟4，培養(yǎng)兩周當(dāng)生根條數(shù)達(dá)到6條以上，平均根長(zhǎng)0.5cm以上時(shí)便用清水將根部瓊脂清洗干凈進(jìn)行移栽；
[0028]步驟7，移栽與管護(hù):育苗棚具有一定遮陰效果和通風(fēng)條件，移栽基質(zhì)選用黃心土，苗床提前1天用0.15% ΚΜη04消毒(袋苗需將黃心土裝袋后移栽前一天噴淋0.15%ΚΜη04消毒液)，生根苗移栽后用清水淋透，用塑料薄膜覆蓋，以后每隔一周噴施800-1000倍甲基托布津或1000倍多菌靈藥液，連續(xù)噴3-4次，20天后逐步通風(fēng)，并移除遮蓋物。
[0029]本發(fā)明明月草組織培養(yǎng)快速繁殖方法中所述的高壓滅菌，優(yōu)選壓力為1.lkg/cm2。
[0030]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0031]1、本發(fā)明建立了以莖段為外植體的明月草組織培養(yǎng)快速繁殖方法，一個(gè)培養(yǎng)周期內(nèi)的增殖系數(shù)達(dá)到5-6倍，生根率和移栽成活率均達(dá)到95%以上。
[0032]2、本發(fā)明克服了傳統(tǒng)繁殖方式受季節(jié)與氣候限制的不足，有效提高了明月草的繁殖系數(shù)，縮短了繁殖周期，并解決季節(jié)性限制問題，建立的規(guī)?；a(chǎn)體系穩(wěn)定、苗木品質(zhì)高，生產(chǎn)周期只需一個(gè)半月左右，滿足了種苗繁育的工廠化需求，為該物種的保存及產(chǎn)業(yè)化提供了可靠、高效的繁殖方法。
【附圖說(shuō)明】
[0033]圖1為明月草莖段誘導(dǎo)。
[0034]圖2為明月草叢生芽。
[0035]圖3為明月草生根苗。
[0036]圖4為明月草移栽袋苗。
[0037]圖5為苗床明月草小苗。
【具體實(shí)施方式】
[0038]下面以實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施
[0039]例。實(shí)施例1:
[0040]明月草組織培養(yǎng)快速繁殖培養(yǎng)基，包括腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，配制方法為:
[0041]腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 3_4g/L，ρΗ5.5，經(jīng)1.lkg/cm2高壓滅菌20分鐘；
[0042]繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉3_4g/L，pH5.8，經(jīng) 1.lkg/cm2高壓滅菌 20 分鐘；
[0043]壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖 30g/L+瓊脂粉 3_4g/L，ρΗ5.8，經(jīng)1.lkg/cm2高壓滅菌20分鐘；
[0044]生根培養(yǎng)基為1/2MSq+蔗糖30g/L+瓊脂粉3_4g/L，pH5.8，經(jīng)L lkg/cm2高壓滅菌20分鐘。
[0045]實(shí)施例2:
[0046]明月草組織培養(yǎng)快速繁殖培養(yǎng)基，包括腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，配制方法為: