一種山杏組織培養(yǎng)基、其制備方法及應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領域，特別涉及一種山杏組織培養(yǎng)基、其制備方法及應用。
【背景技術】
[0002]山杏(Armeniaca sibirica(L.)Lam)為薔薇科杏屬植物，是集生態(tài)效益、社會效益和經濟效益于一體的木本糧油經濟樹種。山杏產區(qū)將其列為經濟發(fā)展的重點經濟林樹種，是經濟發(fā)展、農民增收的重要保證。但山杏產業(yè)的發(fā)展卻受到品種及栽培管理欠缺的阻礙。
[0003]河北省平泉縣正在籌劃山杏種植體系的改革，引進優(yōu)良品種是必要條件，但購買新品種苗木成本高，且沒有在承德當地進行引種試驗，存在一定風險；嫁接技術雖然可以實現(xiàn)品種的改變，但由于嫁接親和力、砧木對嫁接苗的影響等因素，嫁接后的山杏苗木是否能夠與原有母本性狀保持一致，還未有更深入的研究，而且將現(xiàn)有的野生山杏全部嫁接成新品種也是不現(xiàn)實的。因此，需要根據產區(qū)當地的栽培環(huán)境選擇性狀優(yōu)良的苗木進行大規(guī)模的繁育以用于生產。
[0004]在三北地區(qū)，山杏栽培生產常會遇早春寒流的侵襲，導致大幅度減產，選擇抗寒、高產、晚開花的品種符合本地區(qū)的栽培環(huán)境。各山杏主產區(qū)野生山杏類型豐富，其中有抗寒、高產、晚開花、抗逆性強的品種，如果將其栽培利用，將會大大推動山杏產業(yè)的發(fā)展，但這些野生資源數量少，且分布不均，如何在短時間內獲得大量與上述母株優(yōu)良性狀一致的優(yōu)良苗木是擺在山杏產業(yè)發(fā)展要面前的首道難題。植物無性系繁殖技術為此提供了一條更為可靠的途徑。利用植物無性系繁殖技術可以在短時間內獲得大量與母本植株性狀一致的苗木，且成本低廉，不受季節(jié)限制，是現(xiàn)代化工廠育苗的主要手段。
[0005]如果在組培條件下，以農藝性狀優(yōu)良的山杏單株為材料，建立其高效克隆繁殖體系，從而實現(xiàn)其工廠化育苗，則可一年四季進行，能大大提高山杏育種、育苗的效率，縮短工作進程。
[0006]CN 103392597 A公開了一種北美海棠的組織培養(yǎng)方法，包括初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽，以北美海棠當年生嫩枝條為外植體，經過無菌接種于初代培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，將初代培養(yǎng)基上的北美海棠小苗切割后接種在繼代培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，當叢生苗長到2-3cm時轉接到生根培養(yǎng)基上進行生根誘導形成生根苗，生根苗經過煉苗馴化得到再生植株。所述組織培養(yǎng)的方法已經有較成功的經驗，但是山杏較難生根，此方法對山杏卻不太適用。
[0007]劉小蕾等發(fā)表在植物生理學通訊第44卷第3期的“西伯利亞杏的組織培養(yǎng)”中介紹了杏的組織再生培養(yǎng)，但是其采用的是愈傷組織再生苗，馬鋒旺的報道“山杏原生質體培養(yǎng)再生植株”采用的是原生質體再生苗，并非通過母體采集樣品、經過初代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)而來，這些離體苗本身是否發(fā)生了基因上的變異沒有定論，并不符合建立工廠化育苗體系的目的。

【發(fā)明內容】

[0008]本發(fā)明利用組織培養(yǎng)技術，提供一種山杏組織培養(yǎng)基、其制備方法及應用，通過本方法將初代培養(yǎng)而來的山杏組織培養(yǎng)的生根率提高到了 95%以上。
[0009]為達上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案:
[0010]第一方面，本發(fā)明提供了一種山杏組織培養(yǎng)的生根培養(yǎng)基，所述生根培養(yǎng)基包括1/2MS培養(yǎng)基、4-8g/L的瓊脂、25-50g/L的蔗糖、植物生長調節(jié)劑IBA2_4mg/L和15杏仁殼木醋液。
[0011]本發(fā)明中，所述山杏殼木醋液有助于山杏生根，提高生根率，配合植物生長調節(jié)劑，使得山杏生根率可以達到95%以上，平均根長1.68-1.98cm，平均根數4.2-5.78條。
[0012]使用1/2MS培養(yǎng)基，添加4-8g/L的瓊脂，30g/L蔗糖，25_50g/L的蔗糖、植物生長調節(jié)劑IBA 2.0-4.0mg/L，pH值調至5.8，在121°C下滅菌17min后，加入稀釋1500-2500倍的、滅菌后的山杏仁殼木醋液，待其凝固后備用；將經過初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)2-3代后的山杏組織培養(yǎng)苗接種至制備好的生根培養(yǎng)基中，觀察山杏組培苗生根情況。7天后即可觀察到有根長出，隨時觀察山杏組培苗的生根情況。
[0013]所述瓊脂可以為4g/L、5g/L、6g/L、7g/L 或 8g/L。
[0014]所述蔗糖可以為25g/L、26g/L、28g/L、30g/L、32g/L、33g/L、35g/L、36g/L、38g/L、40g/L、42g/L、45g/L、46g/L、48g/L 或 50g/L。
[0015]所述植物生長調節(jié)劑IBA 可以為 2mg/L、2.5mg/L、3mg/L、3.5mg/L 或 4mg/L。
[0016]優(yōu)選地，所述生根培養(yǎng)基由1/2MS培養(yǎng)基、5g/L的瓊脂、30g/L的蔗糖、植物生長調節(jié)劑IBA 2.0-3.0mg/L和1500-3000倍杏仁殼木醋液組成。優(yōu)選地，所述生根培養(yǎng)基的pH值為5.5-6，例如可以是5.5,5.6,5.7,5.8,5.9或6，優(yōu)選為5.8。
[0017]第二方面，本發(fā)明提供了一種山杏組織培養(yǎng)的生根培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟:
[0018](1)配制生根基本培養(yǎng)基，使用1/2MS培養(yǎng)基，添加5.0g/L瓊脂，30g/L蔗糖，植物生長調節(jié)劑IBA 2.5-3.0mg/L, PH值調至5.8，在121°C下滅菌17min備用；
[0019](2)將山杏殼制成的木醋液稀釋1500-3000倍滅菌后加入生根基本培養(yǎng)基中，待其凝固后備用，既得山杏組培苗生根培養(yǎng)基；
[0020](3)將經過初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)2-3代后的山杏組織培養(yǎng)苗接種至(2)制備的生根培養(yǎng)基中。
[0021]第三方面，本發(fā)明提供了一種山杏組織培養(yǎng)的方法，包括如下步驟:將山杏外植體進行預處理、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)；
[0022]其中，所述生根培養(yǎng)采用如第一方面所述的生根培養(yǎng)基。
[0023]優(yōu)選地，所述山杏外植體選自山杏的莖段和/或莖尖。
[0024]所述初代培養(yǎng)的時間為23-35天，例如可以是23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天或35天，優(yōu)選為26-32天。
[0025]優(yōu)選地，所述繼代培養(yǎng)的代數為2-3代。
[0026]優(yōu)選地，所述繼代培養(yǎng)的時間為15-20天，例如可以是15天、16天、17天、18天、19天或20天。
[0027]本發(fā)明中，山杏組織培養(yǎng)的時間短，整個培養(yǎng)過程只需2個月，相比于其他方法縮短了培