一種蟲(chóng)草栽培的復(fù)合促進(jìn)劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)種植技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種蟲(chóng)草快速高效栽培技術(shù)的栽培胚料 復(fù)合促進(jìn)劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛹蟲(chóng)草又名北冬蟲(chóng)夏草，簡(jiǎn)稱蟲(chóng)草，屬于子囊菌綱肉座菌目麥角菌科蟲(chóng)草屬。蟲(chóng)草 分為子座、菌絲體、子實(shí)體，其中子實(shí)體富含多種人體必需氨基酸、有益微量元素和維生素 等營(yíng)養(yǎng)成分，W及腺巧、蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草多糖、超氧化物歧化酶（SOD)等活性成分，具 有抗腫瘤、抗病原、抗氧化W及增強(qiáng)人體免疫力等多種藥理功能，因此，開(kāi)發(fā)利用蟲(chóng)草屬真 菌資源具有十分重要的意義，其中子實(shí)體的人工栽培是蟲(chóng)草資源開(kāi)發(fā)利用的重要途徑。
[0003] 近年來(lái)，隨著人們的生活水平的提高和對(duì)健康食品需求的增加，冬蟲(chóng)夏草日益受 到人們的喜愛(ài)，北蟲(chóng)草W其與天然冬蟲(chóng)夏草有相同的醫(yī)療營(yíng)養(yǎng)保健功效，及可人工規(guī)?；?生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì)，成為天然冬蟲(chóng)夏草的替代品，在醫(yī)療保健、食品、餐飲等行業(yè)得到廣泛應(yīng)用，北 蟲(chóng)草的人工培養(yǎng)在我國(guó)已獲得成功并進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化階段。
[0004] 毛霉（Mucor)是接合菌亞口接合菌綱毛霉目毛霉科真菌中的一個(gè)大屬，一種好氣 性、生長(zhǎng)快、易培養(yǎng)、分布廣、產(chǎn)復(fù)合酶的菌株，是我國(guó)釀造傳統(tǒng)食品醬的菌種，在國(guó)內(nèi)外發(fā) 酵生產(chǎn)腐乳、制豆鼓、釀酒等工業(yè)上的應(yīng)用有歷史悠久。毛霉也可生產(chǎn)蛋白酶、脂肪酶、果膠 酶、凝乳酶，糖化淀粉，產(chǎn)生草酸、乳酸、班巧酸及甘油等，在現(xiàn)代食品工業(yè)中應(yīng)用廣泛。 陽(yáng)〇化]蟲(chóng)草的生長(zhǎng)和發(fā)育需要高效的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，目前采用大米為主要原料制作培養(yǎng)基， 蟲(chóng)草的產(chǎn)量受到了限制，蟲(chóng)草中的蟲(chóng)草素含量較低，并且栽培周期較長(zhǎng)。中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?201410079301. 8 "綠色北蟲(chóng)草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)方法"公布了蟲(chóng)草產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的方法和具體規(guī) 范；中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01310192693. 4 "蠶蛹北冬蟲(chóng)夏草工廠化栽培技術(shù)"對(duì)蟲(chóng)草工業(yè)化生 產(chǎn)過(guò)程中的各項(xiàng)條件和設(shè)備要求進(jìn)行了優(yōu)化；中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01310266374. 3 "-種廣 東蟲(chóng)草子實(shí)體規(guī)?；耘喾椒?公布了蟲(chóng)草菌種的選育方法和深層發(fā)酵菌種的方法；中國(guó) 專利申請(qǐng)?zhí)?01310068907. 7 "-種人工培育的冬蟲(chóng)夏草快速栽培技術(shù)"對(duì)蟲(chóng)草菌種進(jìn)行 了雜交和馴化沖國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00310119105. 0 "北冬蟲(chóng)夏草培養(yǎng)液"和中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?201110263224. 8 "-種北蟲(chóng)草快速栽培技術(shù)"，通過(guò)添加碳源、氮源、無(wú)機(jī)物和部分維生素來(lái) 促進(jìn)蟲(chóng)草的生長(zhǎng)，W上對(duì)蟲(chóng)草栽培的發(fā)明只是從栽培條件、菌種選育和添加營(yíng)養(yǎng)液來(lái)優(yōu)化 蟲(chóng)草的生長(zhǎng)，并沒(méi)有使蟲(chóng)草的生長(zhǎng)周期明顯縮短，高效產(chǎn)業(yè)化，并提高其中蟲(chóng)草素的含量。
[0006] 綜上，目前迫切需要一種高效簡(jiǎn)易的胚料復(fù)合促進(jìn)劑，W縮短栽培周期，有效節(jié)省 時(shí)間，并提高經(jīng)濟(jì)效益，增加活性成分含量，使蟲(chóng)草的生產(chǎn)高效產(chǎn)業(yè)化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于利用毛霉菌絲體破碎自溶液，加W肌醇、二十八燒醇、薦果Ξ糖 和葡萄糖酸銅進(jìn)行復(fù)配，從而制備成一種適合蟲(chóng)草生長(zhǎng)所需的胚料復(fù)合促進(jìn)劑。運(yùn)種胚料 復(fù)合促進(jìn)劑可明顯縮短蟲(chóng)草生長(zhǎng)周期，提高出草率、增加單位體積內(nèi)蟲(chóng)草的重量，并使其蟲(chóng) 草素含量顯著增加，且加工方法簡(jiǎn)單，成本低廉，可廣泛使用，增強(qiáng)企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過(guò)大量試驗(yàn)研究，最終獲得了如下技術(shù)方案： 一種蟲(chóng)草生長(zhǎng)復(fù)合促進(jìn)劑，所述的胚料復(fù)合促進(jìn)劑由微生物毛霉菌體破碎自溶液的濃 縮液與肌醇、二十八燒醇、低聚果糖和葡萄糖酸銅復(fù)配而成，所述的低聚果糖為1~3個(gè)果 糖基通過(guò)β(2-1)糖巧鍵與薦糖中的果糖基結(jié)合生成的薦果Ξ糖。
[0009] 一種蟲(chóng)草生長(zhǎng)復(fù)合促進(jìn)劑的制備方法，該方法包括如下步驟： (1) 在YPG液態(tài)培養(yǎng)基上培養(yǎng)毛霉，培養(yǎng)溫度為30~35°C，起始Ρ冊(cè).0~7. 0,轉(zhuǎn)速為 150-20化/min,時(shí)間40~6化，分離得到毛霉菌絲體； (2) 將毛霉菌絲體在如下條件下破碎自溶得到破碎自溶液：菌絲重量與水體積比為 1:1~1:5 (m/v)，超聲破碎條件每次30s~60s，間隔30s~60s，循環(huán)15~30次，菌絲破碎后在 30~35 °C，靜置6~1化； (3) 向步驟（2)所得的毛霉破碎自溶液中加入二十八燒醇、肌醇、低聚果糖、葡萄糖酸銅 并混合均勻，得胚料復(fù)合促進(jìn)劑。其中二十八燒醇按照與毛霉菌絲體破碎自溶液的質(zhì)量體 積比0. 59?^2%添加，肌醇按照與毛霉菌絲體破碎自溶液的質(zhì)量體積比19?^5%添加，低聚果糖 按照與毛霉菌絲體破碎自溶液的質(zhì)量體積比0. 05%。~0. 2%。添加，葡萄糖酸銅按照與毛霉 菌絲體破碎自溶液的質(zhì)量體積比0. 05%。~0. 1%。添加。
[0010] (4)將制備好的蟲(chóng)草生長(zhǎng)胚料復(fù)合促進(jìn)劑加入到原有的胚料中，滅菌，接種，培養(yǎng) 49天即可采收。
[0011] 優(yōu)選地，如上所述蟲(chóng)草生長(zhǎng)復(fù)合促進(jìn)劑的制備方法，其中所述的毛霉為普雷恩毛 霉CICC3115。
[0012] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，毛霉菌絲在缺乏營(yíng)養(yǎng)的條件下，菌絲體內(nèi)部的各種酶系開(kāi)始分解 細(xì)胞壁和生物大分子。超聲加速細(xì)胞壁的破碎，胞內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)流出，同時(shí)在酶的作用下，胞 內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、多糖進(jìn)一步水解。在破碎自溶過(guò)程中菌絲體釋放出來(lái)的氨基酸、蛋白質(zhì)、核 酸和糖類具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。構(gòu)成菌體主要成分的干物質(zhì)中約有50%蛋白質(zhì)、6%核酸、 16%的糖、11%的氨基酸、6%的脂質(zhì)。毛霉菌絲破碎自溶出大量的酶，多膚、氨基酸、糖類等營(yíng) 養(yǎng)物質(zhì)和核酸等風(fēng)味物質(zhì)，另外毛霉在破碎自溶過(guò)程不僅溶出大量氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、 糖類，還溶出草酸、乳酸、班巧酸及甘油等。
[0013] 二十八燒醇是一種天然存在的一元高級(jí)脂肪醇，是世界公認(rèn)的抗疲勞功能性物 質(zhì)。作為一種天然醇，二十八燒醇具有良好的生物降解性，易為動(dòng)物體吸收及利用。肌醇廣 泛分布在動(dòng)物和植物體內(nèi)，是動(dòng)物、微生物的生長(zhǎng)因子，廣泛存在于食物中的一種物質(zhì)，結(jié) 構(gòu)類似于葡萄糖。低聚果糖是一種天然活性物質(zhì)。甜度為薦糖的0.3-0. 6倍；既保持了薦 糖的純正甜味性質(zhì)，又比薦糖甜味清爽，具有調(diào)節(jié)腸道菌群，增殖雙歧桿菌，促進(jìn)巧的吸收， 調(diào)節(jié)血脂，免疫調(diào)節(jié)，抗離齒等保健功能的新型甜味劑，被譽(yù)為繼抗生素時(shí)代后最具潛力的 新一代添加劑一促生物質(zhì)；銅為胞內(nèi)多種重要酶系的成分，并能夠促進(jìn)鐵的吸收和利用，葡 萄糖酸銅作為有機(jī)物易被微生物所利用。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明充分地利用了毛霉培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的菌絲，對(duì)菌絲進(jìn)行 破壁和自溶處理，獲得胞內(nèi)豐富的蛋白質(zhì)、多膚、核酸、糖、脂質(zhì)、有機(jī)酸、多元醇，經(jīng)濃縮后 與肌醇、二十八燒醇、低聚果糖和葡萄糖酸銅，按照一定比例進(jìn)行復(fù)配。在通常的蟲(chóng)草生長(zhǎng) 所需的胚料中添加此復(fù)配劑，可W有效地促進(jìn)蟲(chóng)草生長(zhǎng)，縮短生長(zhǎng)周期，提高出草率和蟲(chóng)草 素含量，增加企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，且加工簡(jiǎn)單，成本較低廉，可廣泛使用。
【具體實(shí)施方式】
[0015] W下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容不僅僅局限于下面的 實(shí)施例。各實(shí)施例中所采用的毛霉為普雷恩毛霉CICC3115,來(lái)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏 管理中屯、。
[0016] 實(shí)施例1: (1)將毛霉CICC3115抱子懸液接種在115°C滅菌15min的YPG液態(tài)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫 度為30°C，起始抑6. 0,轉(zhuǎn)速為15化/min,時(shí)間60h。
[0017] (2)毛霉培養(yǎng)結(jié)束后，過(guò)濾出菌絲體并清洗，然后對(duì)濾出菌絲進(jìn)行冷凍超聲破碎， 菌絲重量與水體積比（m/v)為1:5,超聲破碎條件為每次30s，間隔60s，循環(huán)30次，菌絲破 碎后在35°C，靜置化，得到破碎自溶液。
[0018] (3)向步驟（2)所得的毛霉破碎自溶液中加入二十八燒醇、肌醇、低聚果糖(為1~ 3個(gè)果糖基通過(guò)β(2-1)糖巧鍵與薦糖中的果糖基結(jié)合生成的薦果Ξ糖)、葡萄糖酸銅并 混合均勻，得胚料復(fù)合促進(jìn)劑；其中二十八燒醇按照與毛霉菌絲體破碎自溶液的質(zhì)量體積 比1%添加，肌醇按照與毛霉菌絲體破碎自溶液的質(zhì)量體積比1. 5%添加，低聚果糖按照與毛 霉菌絲體破碎自溶液的質(zhì)量體積比0. 05%。添加，葡萄糖酸銅按照與毛霉菌絲體破碎自溶液 的質(zhì)量體積比0. 06%。添加。
[0019] (4)將制備好的蟲(chóng)草生長(zhǎng)胚料復(fù)合促進(jìn)劑加入到原有的胚料中混拌均勻，滅菌，接 種，培養(yǎng)49天即可采收。
[0020] 實(shí)施例2: (1)將毛霉CICC3115抱子懸液接種在115°C滅菌15min的YPG液態(tài)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫 度為30°C，起始抑6. 0,轉(zhuǎn)速為15化/min,時(shí)間60h。
[0021] (2)毛霉培養(yǎng)結(jié)束后，過(guò)濾出菌絲體并清洗。然后對(duì)濾出菌絲進(jìn)行冷凍超聲破碎， 菌絲重量與水體積比（m/v)為1:4,超聲破碎條件為每次30s，間隔60s，循環(huán)30次，菌絲破 碎后在35°C，靜置化，得到破碎自溶液。
[0022] (3 )向步驟（2 )所得的毛霉破碎自溶液中加入