17、SEQIDNo:19和SEQIDNo:21的組合、標(biāo)記SEQIDNo:17、SEQIDNo: 19和SEQ ID No:23的組合、標(biāo)記SEQ ID No:17、SEQ ID No:19和SEQ ID No:25的組合、標(biāo)記 SEQ ID No:17、SEQ ID No:21 和SEQ ID No:23的組合、標(biāo)記SEQ ID No:17、SEQ ID No:21 和 SEQ ID No:25的組合、標(biāo)記SEQ ID No:17、SEQ ID No:23和SEQ ID No:25的組合、標(biāo)記SEQ ID No:17和SEQ ID No:15的組合、標(biāo)記SEQ ID No:17和SEQ ID No:19的組合、標(biāo)記SEQ ID No:17和SEQ ID No:21 的組合、標(biāo)記SEQ ID No:17和SEQ ID No:23的組合、標(biāo)記SEQ ID No: 17和SEQ ID No:25的組合。特別地，可以使用標(biāo)記SEQ ID No:15、SEQ ID No:17、SEQ ID No:19、SEQ ID No:21、SEQ ID No:23和SEQ ID No:25的組合、更具體地SEQ ID No:17和SEQ ID No :15的組合以及最具體地SEQ ID No :17和SEQ ID No :19的組合，鑒定引起本發(fā)明新風(fēng) 味性狀的QTL2。
[0021 ] 在從保藏物NCMB 42138的種子所培育的植物的基因組中，兩種標(biāo)記SEQ ID No: 11和SEQ ID No: 13(全序列數(shù)據(jù)均在表1中給出）均與也引起果實(shí)具有增加的本發(fā)明類(lèi)萜總 含量、尤其增加的(Ε)-β-羅勒烯含量的第三個(gè)QTU卩QTL3連鎖（圖1C)。雖然這些標(biāo)記的任一 個(gè)或這些標(biāo)記的任何組合可以用于鑒定引起本發(fā)明類(lèi)萜總含量增加性狀和尤其(Ε)-β-羅 勒烯含量增加性狀的QTL3,但是標(biāo)記SEQ ID Ν0:13是優(yōu)選的，因?yàn)樗诮y(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)中具有最 高LOD評(píng)分。可以使用標(biāo)記SEQ ID No: 11和SEQ ID No: 13的組合，鑒定引起本發(fā)明類(lèi)萜總含 量增加性狀的QTL3。
[0022] QTLl因此存在于以保藏編號(hào)NCMB 42140保藏的材料的基因組中，而QTL2和QTL3 存在于以保藏編號(hào)NCMB 42138保藏的材料的基因組中，并且這些材料因此是可以用來(lái)將 類(lèi)萜總含量增加性狀引入辣椒物種的其他辣椒植物中的QTL來(lái)源。這類(lèi)植物可以作為起點(diǎn) 用來(lái)進(jìn)一步開(kāi)發(fā)類(lèi)萜總含量增加的其他變種。
[0023] 本發(fā)明QTL(LG1(QTL1)或LG10.1(QTL2和QTL3)上的種質(zhì)滲入片段）的另一個(gè)可能 來(lái)源是風(fēng)鈴椒。風(fēng)鈴椒，尤其風(fēng)鈴椒下垂變種(Capsicum baccatum var.pendulum)，可以用 作任一種基因組片段(本發(fā)明QTL)的來(lái)源，以將類(lèi)萜總含量增加性狀引入辣椒植物。這通過(guò) 片段內(nèi)標(biāo)記的可用性來(lái)促進(jìn)。包含本發(fā)明三種QTL(LG1上的QTLl和在LG10.1上的QTL2和 QTL3)中至少一者的任何辣椒植物，無(wú)論這些QTL的來(lái)源是什么，均是本發(fā)明的植物。包含本 發(fā)明三種QTL中至少一者（其中這種QTL或這些QTL從本發(fā)明的辣椒植物（例如從保藏物 NCMB 42140(對(duì)于QTLl)和/或NCMB 42138(對(duì)于QTL2和/或QTL3)的種子所培育的植物引 入這種辣椒植物）的辣椒植物因此與包含本發(fā)明這些QTL中至少一者（其中這種QTL或這些 QTL從風(fēng)鈴椒植物、尤其風(fēng)鈴椒下垂變種植物引入這種辣椒植物)的辣椒植物相同或等同。 [0024]在以保藏編號(hào)NCIMB 42140保藏的種子中，引起本發(fā)明性狀的遺傳決定子QTLl與 以下每種分子標(biāo)記連鎖：SEQ ID No: 1、SEQ ID No:3、SEQ ID No:5、SEQ ID No: 7和SEQ ID No: 9。這些標(biāo)記也可以與包含于雜交中作為親本用來(lái)向其他植物轉(zhuǎn)移類(lèi)萜總含量增加性狀 的任一種或兩種辣椒植物中的QTLl連鎖，但是至少一種所提到標(biāo)記的存在不是必需的，只 要QTLl存在即可。
[0025]在以保藏編號(hào)NCIMB 42138保藏的種子中，引起本發(fā)明性狀的遺傳決定子QTL2與 以下每種分子標(biāo)記連鎖：SEQ ID No:15、SEQ ID No:17、SEQ ID No:19、SEQ ID No:21、SEQ ID No:23和SEQ ID No:25。這些標(biāo)記也可以與包含于雜交中作為親本用來(lái)向其他植物轉(zhuǎn)移 類(lèi)萜總含量增加性狀的任一種或兩種辣椒植物中的QTL2連鎖，但是至少一種所提到標(biāo)記的 存在不是必需的，只要QTL2存在即可。
[0026]在以保藏編號(hào)NCIMB 42138保藏的種子中，引起本發(fā)明性狀的遺傳決定子QTL3與 以下每種分子標(biāo)記連鎖:SEQ ID No: 11和SEQ ID No: 13。這些標(biāo)記也可以與包含于雜交中 作為親本用來(lái)向其他植物轉(zhuǎn)移(Ε)-β-羅勒烯含量增加性狀的任一種或兩種辣椒植物中的 QTL3連鎖，但是至少一種所提到標(biāo)記的存在不是必需的，只要QTL3存在即可。
[0027] 如本文所述的類(lèi)萜總含量增加性狀或表型的存在是存在本發(fā)明三種QTU卩QTLl、 QTL2和QTL3中至少一者的直接指示物，因?yàn)檫@些QTL是編碼類(lèi)萜總含量性狀的遺傳信息。因 此，作為該表型基礎(chǔ)的三種QTU卩QTLl、QTL2和QTL3至少一者存在于其中，但所述標(biāo)記不再 存在于其中時(shí)，如本文所述具有類(lèi)萜總含量增加性狀的本發(fā)明植物仍然是本發(fā)明的植物。
[0028] 標(biāo)記有時(shí)是性狀的遺傳原因，但并非總是這樣。標(biāo)記可以位于引起性狀的基因中 或與它遺傳連鎖。這些標(biāo)記經(jīng)常用作追蹤性狀遺傳的工具。在育種期間，與保藏種子中遺傳 決定子連鎖的分子標(biāo)記可以因此用來(lái)輔助類(lèi)萜總含量增加性狀轉(zhuǎn)移至其他植物。熟練育種 者將理解，可以通過(guò)使用生物化學(xué)分析，或通過(guò)監(jiān)測(cè)如本文所述的分子標(biāo)記的存在和對(duì)其 育種（即標(biāo)記輔助選擇)或通過(guò)兩種方式監(jiān)測(cè)類(lèi)萜總含量增加性狀轉(zhuǎn)移入辣椒植物中。將這 類(lèi)標(biāo)記定位至特定基因組區(qū)域還允許在育種中利用相關(guān)的序列及允許開(kāi)發(fā)額外的連鎖遺 傳標(biāo)記。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，與LGl和LG10.1上如本文中鑒定的種質(zhì)滲入片段的染色體 區(qū)域連鎖的其他標(biāo)記或探針可以用來(lái)鑒定包含本發(fā)明三種QTL中至少一者的植物。對(duì)本發(fā) 明染色體區(qū)域的認(rèn)識(shí)促進(jìn)本發(fā)明的類(lèi)萜總含量增加性狀從包含本發(fā)明三種QTL即QTLl、 QTL2和QTL3中至少一者的植物(如從保藏的種子所培育的植物或風(fēng)鈴椒植物，尤其風(fēng)鈴椒 下垂變種植物)種質(zhì)滲入其他辣椒植物中。大小各異的連鎖區(qū)域可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)轉(zhuǎn) 移，只要至少一個(gè)染色體區(qū)域賦予總類(lèi)萜增加的本發(fā)明性狀。因此，強(qiáng)調(diào)本發(fā)明可以使用以 遺傳方式定位于所鑒定區(qū)域內(nèi)部的任何分子標(biāo)記實(shí)施，條件是這些標(biāo)記在親本之間呈多態(tài) 性。
[0029] 本發(fā)明因此提供一種產(chǎn)生類(lèi)萜總含量增加的果實(shí)的辣椒植物(辣椒），其中辣椒植 物包含三種QTU卩QTLl、QTL2和QTL3中的至少一者并且其中位于LGl上的QTLl如在風(fēng)鈴椒植 物基因組或從按照登錄號(hào)NCIMB 42140在NCMB保藏的種子所培育的辣椒植物的基因組中 那樣存在或從其中可獲得，并且其中位于LG10.1上的QTL2和QTL3如在風(fēng)鈴椒植物基因組或 從按照登錄號(hào)NCMB 42140在NCMB保藏的種子所培育的辣椒植物的基因組中那樣存在或 從其中可獲得。
[0030] QTLl位于LGl上并且所述QTL與存在于從保藏物NCHMB 42140的種子所培育的植物 的基因組中并且在其中與選自SEQ ID No:l、SEQ ID No:3、SEQ ID No:5、SEQ ID No:7和 SEQ ID No :9的至少一個(gè)標(biāo)記連鎖的QTL相同。
[0031 ] QTL2位于LG10.1上并且所述QTL與存在于從保藏物NCIMB 42138的種子所培育的 植物的基因組中并且在其中與選自SEQ ID No:15、SEQ ID No:17、SEQ ID No:19、SEQ ID No:21、SEQ ID No:23、SEQ ID No:25的至少一個(gè)標(biāo)記連鎖的QTL相同。
[0032] QTL3位于LG10.1上并且所述QTL與存在于從保藏物NCIMB 42138的種子所培育的 植物的基因組中并且在其中與選自SEQ ID No: 11和SEQ ID No: 13的至少一個(gè)標(biāo)記連鎖的 QTL相同。
[0033] 本發(fā)明尤其涉及辣椒物種的植物?？梢岳斫?，辣椒植物是表型上本身可辨認(rèn)的，不 過(guò)所述植物可以在其基因組中含有來(lái)自其他辣椒屬物種的種質(zhì)滲入。熟練辣椒育種者或培 育者知道如何區(qū)分辣椒植物和果實(shí)與來(lái)自其他辣椒屬物種的植物和果實(shí)。
[0034] 本發(fā)明的辣椒植物可以長(zhǎng)出以下果實(shí)類(lèi)型:甜椒，包括辣椒、鈴狀椒、方形大辣椒、 錐形辣椒、長(zhǎng)圓錐狀辣椒或塊型辣椒或點(diǎn)心椒或dolma( =微型塊狀辣椒）。本發(fā)明辣椒植物 的果實(shí)在成熟時(shí)可以是綠色、黃色、橙色、紅色、奶白色、棕色或紫色。
[0035] 通過(guò)生物化學(xué)分析確立本發(fā)明辣椒果實(shí)的類(lèi)萜總含量、尤其類(lèi)單萜總含量令人驚 訝地增加。生物化學(xué)剖析具有QTL1(NIL36和NIL47)或〇孔2011^45、1?1^48和[1^54)和/或 QTL3(NIL45和NIL54)種質(zhì)滲入的NIL(圖1)揭示，它們對(duì)成熟果實(shí)的類(lèi)萜含量具有重大影 響，同時(shí)影響至少15種不同類(lèi)萜(表1) 4TL1、QTL2和QTL3僅影響單萜類(lèi)積累，而倍半萜和二 萜不受這些種質(zhì)滲入影響。在大多數(shù)情況下，包含QTLl和QTL2的種質(zhì)滲入導(dǎo)致相同化合物 的上調(diào)，然而，某些類(lèi)萜受這些種質(zhì)滲入之一特異性影響。對(duì)于上調(diào)桉樹(shù)腦，僅LGl種質(zhì)滲入 (QTLl)有效，并且對(duì)于(E) -β-羅勒烯，這種上調(diào)作用是對(duì)QTL3特異的。
[0036] QTLl和QTL2二者種質(zhì)滲入導(dǎo)致α-松油烯、γ-松油烯、萜品油烯、苧烯、月桂烯、脫 氫芳樟醇、對(duì)-薄荷-I-稀-9-醛、白梓檬環(huán)醚(Geranic-oxide)、月桂稀醇、α-松油醇、芳樟 醇、(E)-氧化芳樟醇和氧化芳樟醇的上調(diào)。QTL3導(dǎo)致(Ε)-β-羅勒烯的上調(diào)。
[0037]令人驚訝地，包含所述兩個(gè)種質(zhì)滲入QTLl和QTL2中至少一者的本發(fā)明植物產(chǎn)生這 樣的果實(shí)，其中α-松油稀、γ-松油烯、砲品油烯、芋稀、月桂烯、脫氫芳樟醇、對(duì)-薄荷-1-烯-9_醛、白檸檬環(huán)醚、月桂烯醇、α-松油醇、芳樟醇、(E)-氧化芳樟醇和氧化芳樟醇的水平顯著 高于生成這些植物的任一種雜交親本(風(fēng)鈴椒下垂變種、SM和GNM)的那些。另外，與生成這 些植物的任一種雜交親本(風(fēng)鈴椒下垂變種、SM和G匪)的類(lèi)單萜(桉樹(shù)腦)相比，由LGl上具 有本發(fā)明QTLl種質(zhì)滲入的植物產(chǎn)生的果實(shí)額外地顯示類(lèi)單萜(桉樹(shù)腦)的顯著更高濃度。另 一方面，與生成這些植物的任一種雜交親本(風(fēng)鈴椒下垂變種、SM和G匪)的類(lèi)單萜（（Ε)-β-羅勒烯)相比，由LGlO. 1上具有本發(fā)明QTL3種質(zhì)滲入的植物產(chǎn)生的果實(shí)僅顯示類(lèi)單萜（(E)-羅勒烯)的顯著更高濃度。
[0038]根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明辣椒植物的果實(shí)至少具有增加濃度的一種或多種類(lèi)萜，所述 類(lèi)砲選自α-松油稀、γ -松油稀、砲品油稀、芋稀、月桂稀、(Ε)-β-羅勒稀、脫氫芳樟醇、對(duì)-薄 荷-1-烯-9-醛、白檸檬環(huán)醚、月桂烯醇、α-松油醇、芳樟醇、桉樹(shù)腦、（E)-氧化芳樟醇和氧化 芳樟醇。這些類(lèi)萜中哪一種上調(diào)取決于存在的QTL。這種增加相比于來(lái)自不攜帶這種特定 QTL的同基因性植物的相似成熟期辣椒果實(shí)。
[0039] 可以通過(guò)以下方式確定本發(fā)明每種QTL獨(dú)立影響包含所述QTL的植物的果實(shí)中類(lèi) 萜含量的（加合)效應(yīng):測(cè)量類(lèi)萜、尤其類(lèi)單萜、尤其類(lèi)單萜α-松油烯、γ-松油烯、萜品油烯、 苧烯、月桂烯、（Ε)-β-羅勒烯、脫氫芳樟醇、對(duì)-薄荷-1-烯-9-醛、白檸檬環(huán)醚、月桂烯醇、 α-松油醇、芳樟醇、桉樹(shù)腦、(Ε)-氧化芳樟醇和氧化芳樟醇的揮發(fā)性化合物豐度(也稱(chēng)作強(qiáng)度、 水平或濃度)并且將測(cè)量的豐度與來(lái)自不攜帶本發(fā)明這種特定QTL的同基因性植物的相似 成熟期辣椒果實(shí)中所測(cè)量的豐度比較。
[0040]由于成熟期影響辣椒果實(shí)的生物化學(xué)特征，可以理解，在攜帶本發(fā)明三種QTL中至 少一者的辣椒植物與不攜帶這些QTL中一者或任一者的辣椒植物之間的比較應(yīng)當(dāng)在具有相 似果實(shí)成熟期(例如處于完全成熟和其中辣椒果實(shí)著色95-100%的成熟階段，如實(shí)施例2中 提到）的植物之間進(jìn)行。
[0041]就針對(duì)攜帶本發(fā)明一種或多種QTL的本發(fā)明植物的果實(shí)樣品所測(cè)量的特定揮發(fā)性 化合物而言，增加的濃度在本文中定義為，揮發(fā)性化合物豐度(也稱(chēng)作強(qiáng)度)按增加的優(yōu)選 性順序，至少1.5倍高于、2倍高于、3倍高于、4倍高于、5倍高于、6倍高于、7倍高于、10倍高 于、15倍高于、20倍高于、25倍高于、30倍高于、35倍高于、40倍高于、45倍高于、50倍高于來(lái) 自相同實(shí)驗(yàn)中所包含的不含所述QTL的同基因性辣椒植物的相似成熟期果實(shí)的平均峰強(qiáng) 度。
[0042]適當(dāng)?shù)?，針?duì)攜帶本發(fā)明一種或多種QTL的本發(fā)明植物的果實(shí)樣品所測(cè)量的特定 揮發(fā)性化合物的揮發(fā)性化合物豐度最大200倍高于來(lái)自相同GC-MS實(shí)驗(yàn)中所包含的不含所 述QTL的同基因性辣椒植物的相似成熟期果實(shí)的揮發(fā)性化合物豐度。當(dāng)峰強(qiáng)度值作為log2 變換的峰強(qiáng)度值給出時(shí)，這對(duì)應(yīng)于按增加的優(yōu)選性順序增加至少0.58倍、至少1.0倍、至少 1.58倍、至少2.0倍、至少2.32倍、至少2.58倍、至少2.81倍、至少3.32倍、至少3.91倍、至少 4.32倍、至少4.64倍、至少4.91倍、至少5.13倍、至少5.32倍、至少5.49倍、至少5.46倍和最 大7.64倍。
[0043]與來(lái)自不攜帶QTLl的同基因性植物的相似成熟期辣椒果實(shí)相比，攜帶QTLl的本發(fā) 明果實(shí)具有增加濃度的一種或多種類(lèi)萜，所述類(lèi)萜選自α-松油稀、γ-松油稀、萜品油稀、苧 烯、月桂烯、脫氫芳樟醇、對(duì)-薄荷-1-烯-9-醛、白檸檬環(huán)醚、月桂烯醇、α-松油醇、芳樟醇、桉 樹(shù)腦、(E)-氧化芳樟醇和氧化芳樟醇。
[0044]優(yōu)選地，與來(lái)