一種紫葉酢漿草的組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物組培育苗技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種紫葉酢漿草的組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫葉酢漿草是酢漿草科(Oxalidaceae)酢漿草屬(Oxalis L.)多年生彩葉草本植 物，又名堇花酢漿草、紫蝴蝶。紫葉酢漿草原產(chǎn)于美洲熱帶區(qū)域，是一種珍稀的優(yōu)良彩葉地 被植物，越來越受到廣大花友及園林工作者的寵愛。紫葉酢漿草植株整齊，葉色紫紅，紫紅 色葉片美麗誘人，粉紅色花朵爛漫可愛，是極好的盆栽和地被植物。目前，紫葉酢漿草常規(guī) 種子繁殖速度較慢，且變異率較高，分株繁殖速度較慢，人工成本較高，大量繁殖存在一定 的局限性，遠(yuǎn)不能滿足國內(nèi)對種苗的需求。
[0003] 因此，如何提高其生產(chǎn)效率，縮短培育時間，降低變異率，降低人工成本，保持優(yōu)良 幼苗的遺傳穩(wěn)定性，提高其繁殖系數(shù)成為目前亟待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本申請?zhí)峁┮环N紫葉酢漿草的組培快繁方法，所用培養(yǎng)基配方簡單，組 培流程簡便，培養(yǎng)時間短，增殖頻率高，幼苗整齊，便于后期統(tǒng)一的移栽和種植管理，降低了 人工成本，變異率低，能保證所長出的幼苗植株在形狀上的一致性，易于操作，可進(jìn)行產(chǎn)業(yè) 化生產(chǎn)。
[0005] 為解決W上技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種紫葉酢漿草的組培快繁方 法，包括W下步驟：
[0006] (1)外植體選取及滅菌:切取紫葉酢漿草的葉片或葉柄，采用酒精和升隸滅菌處理 后，得外植體；
[0007] (2)初代培養(yǎng):將步驟(1)所得外植體接種到初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-6周，幼苗生成， 所述初代培養(yǎng)基的組成包括:MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.5-1.5mg/L6-BA、0.1-0.5mg/L NAA、 0.05-0.25mg/L IAA；
[000引（3)增殖培養(yǎng):切取步驟(2)所得幼苗，接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-6周，叢生芽生 成，所述增殖培養(yǎng)基的組成包括:MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.5-1.5mg/L 6-BA、0.1-0.5mg/L NAA ；
[0009] (4)生根培養(yǎng):將步驟(3)所得叢生芽幼苗分離成單株，接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2-4周即得紫葉酢漿草無菌苗，所述生根培養(yǎng)基的組成包括：1/2MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充 0.05-0.15mg/L NAA；
[0010] (5)煉苗移栽:將步驟(4)所得紫葉酢漿草無菌苗轉(zhuǎn)移到室外，閉瓶煉苗3-5天，松 口煉化一2天，即可移栽，煉苗基質(zhì)為體積比為2:1:1的腐殖±、珍珠巖、賠石的混合物。
[0011] 優(yōu)選的，所述外植體選取及滅菌的具體操作為:選取紫葉酢漿草的葉片或葉柄，先 采用自來水清洗干凈，再用流水沖洗30min，用75%的酒精處理20-40s，再用0.1 %的升隸 處理3-4min，無菌水沖洗4-6次，用吸水紙吸干水分，將葉柄切成0.5-1.5cm長度，或?qū)⑷~ 片切成邊長0.5-1.5cm的正方形即可。
[0012] 優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基的組成包括:MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.5-1.0mg/L6-BA、 0.1-0.3mg/L NAA、0.1-0.2mg/L IAA。
[0013] 更為優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基的組成包括:MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充I.Omg/L 6-BA、 0.2mg/L NAA、0.1mg/L lAA，還補(bǔ)充30g/L薦糖、5.5g/L瓊脂。
[0014] 優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)基的組成包括:MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.5-1.0mg/L6-BA、 0.2-0.4mg/L NAA。
[0015] 更為優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)基的組成包括:MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充I.Omg/L 6-BA、 0.2mg/L NAA。
[0016] 優(yōu)選的，所述生根培養(yǎng)基的組成包括：1/2MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.05-O.lmg/L NAAo
[0017]更為優(yōu)選的，所述生根培養(yǎng)基的組成包括：1/2MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充O.lmg/L NAA， 還補(bǔ)充30g/L薦糖、5.5g/L瓊脂。
[001引優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基的抑值為5.8-6.0。
[0019] 優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng) 度為1500-2500LX，光照時間為12-16h/d。
[0020] 本申請所述的MS基本培養(yǎng)基具有較高的無機(jī)鹽濃度，能夠保證組織生長所需的礦 質(zhì)營養(yǎng)，還能加速愈傷組織的生長，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分 的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細(xì)胞的營養(yǎng)和生理需要，因而適用范圍比較廣，多數(shù)植物組 織培養(yǎng)快速繁殖用它作為培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基。
[0021] 所述1/2MS基本培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中，大量元素減半，其余不變形成的培養(yǎng) 基。
[0022] 所述6-BA為6-節(jié)氨基腺嚷嶺，是一種植物生長激素，其主要作用是促進(jìn)芽的形成， 也可W誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生，促進(jìn)細(xì)胞分裂，促進(jìn)非分化組織分化，促進(jìn)生物體內(nèi)物質(zhì)的積 累，促進(jìn)側(cè)芽發(fā)生，防止老化，是植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞分裂素。
[0023] 所述NAA為糞乙酸，是一種植物生長激素，在植物使用桿插法繁殖時使用，也可用 于植物組織培養(yǎng)，能促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根增加座果，防止落果，改變雌、雄 花比率等，可經(jīng)葉片、樹枝的嫩表皮，種子進(jìn)入到植株內(nèi)，隨營養(yǎng)流輸導(dǎo)到全株。
[0024] 所述IAA為嗎I噪乙酸，是一種植物生長激素，能夠調(diào)節(jié)植物的生長，不僅能促進(jìn)生 長，而且具有抑制生長和器官建成的作用。在細(xì)胞水平上，可刺激形成層細(xì)胞分裂、刺激枝 的細(xì)胞伸長、抑制根細(xì)胞生長、促進(jìn)木質(zhì)部、初皮部細(xì)胞分化、促進(jìn)插條發(fā)根、調(diào)節(jié)愈傷組織 的形態(tài)建成，因此可用作植物組織培養(yǎng)。
[0025] 本申請技術(shù)方案提供了一種紫葉酢漿草的組培快繁方法，包括外植體的選取及滅 菌、初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽的步驟，通過對初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根 培養(yǎng)基的篩選，得到最佳的培養(yǎng)基組分和配比，采用前述植物生長激素配比形成的培養(yǎng)基， 配方簡單，培養(yǎng)基成本低，配合各階段的培養(yǎng)條件，得到的幼苗培養(yǎng)時間短，培養(yǎng)流程簡便， 提高了紫葉酢漿草繁殖的效率，繁殖系數(shù)為11.9，變異率低，能快速獲得遺傳性狀一致的紫 葉酢漿草無菌苗，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，進(jìn)行外植體培養(yǎng)，可不受季節(jié)氣候變化、自然災(zāi)害的 影響，可進(jìn)行大規(guī)模的工業(yè)化育苗及深加工。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對 本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0027] 實(shí)施例1
[0028] 本實(shí)施例所述的一種紫葉酢漿草的組培快繁方法，包括W下步驟：
[0029] (1)外植體選取及滅菌:選取紫葉酢漿草的葉片或葉柄，先采用自來水清洗干凈， 再用流水沖洗30min，用75 %的酒精處理20-40s，再用0.1 %的升隸處理3-4min，無菌水沖 洗4-6次，用吸水紙吸干水分，將葉柄切成0.5-1.5cm長度，或?qū)⑷~片切成邊長0.5-1.5cm 的正方形，得外植體；
[0030] (2)初代培養(yǎng):將步驟（1)所得外植體接種到pH值為5.8-6.0的初代培養(yǎng)基中培養(yǎng) 5-6周，幼苗生成，所述初代培養(yǎng)基的組成為:MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充1. Omg/L 6-BA、0.2mg/L NAA、0.1 mg/L IAA、30g/L薦糖、5.5g/L瓊脂；
[0031] (3)增殖培養(yǎng):切取步驟(2)所得幼苗，接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)5-6周，叢生芽生 成，所述增殖培養(yǎng)基的組成為:MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充1.0mg/L6-BA、0.2mg/L NAA;
[0032] (4)生根培養(yǎng):將步驟(3)所得叢生芽幼苗分離成單株，接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2-4周即得紫葉酢漿草無菌苗，所述生根培養(yǎng)基的組成為：1/2MS基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充O.lmg/L NAA、30g/L 薦糖、5.5g/L 瓊脂；
[0033] (5)煉苗移栽:將步驟(4)所得紫葉酢漿草無菌苗轉(zhuǎn)移到室外，閉瓶煉苗3-5天，松 口煉化一2天，即可移栽，煉苗基質(zhì)為體積比為2:1:1的腐殖±、珍珠巖、賠石的混合物。
[0034] 其