一種殼寡糖銀杏酚酸復(fù)合生物農(nóng)藥的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及一種殼寡糖銀杏酚酸復(fù)合生物農(nóng)藥的制備方法,屬于農(nóng)藥制備領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]天然產(chǎn)物殼寡糖具有廣譜抑菌活性,對(duì)人畜無毒,且能夠誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性,因此可開發(fā)成為安全高效的新型生物農(nóng)藥。生物農(nóng)藥(指用生物活體、或生物代謝過程產(chǎn)生的具有生物活性的物質(zhì)、或從生物體中提取的物質(zhì),用來防治農(nóng)林作物病蟲草鼠害,并可以制成商品上市流通的制劑,包括殺菌劑,生物殺蟲劑,農(nóng)用抗生素,生態(tài)農(nóng)藥等。
[0003]植物病原菌的感染是引起植物病害、造成作物減產(chǎn)的重要原因,而甲殼素酶對(duì)病原真菌具有抑制生長(zhǎng)的作用,殼聚糖和殼寡糖在植物中是激活甲殼素酶的誘導(dǎo)物此外,殼聚糖和殼寡糖還能調(diào)節(jié)植物基因的關(guān)閉和開放,促進(jìn)植物細(xì)胞的活化,刺激植物的生長(zhǎng)。作為生物農(nóng)藥,殼寡糖在防病和抗病方面有著多種機(jī)制。
[0004]銀杏外種皮中銀杏酚酸對(duì)甜菜夜蛾的作用方式多種多樣,包括胃毒、觸殺、拒食、內(nèi)吸等。胃毒和觸殺試驗(yàn)處理隨著時(shí)間的延長(zhǎng),殺蟲效果增強(qiáng),0.lg/L質(zhì)量濃度下處理6天后,胃毒效果達(dá)96.7%,觸殺效果達(dá)93.3%,胃毒作用略大于觸殺作用。拒食試驗(yàn)表明,銀杏酚酸的拒食作用在藥后2天開始表現(xiàn)明顯,且隨著質(zhì)量濃度的升高,效果增強(qiáng),其機(jī)制可能是干擾試蟲的正常蛻皮和影響成蟲的羽化。從內(nèi)吸試驗(yàn)看,銀杏酚酸具有一定的內(nèi)吸作用,隨著質(zhì)量濃度的升高,內(nèi)吸作用增強(qiáng),葉片比根部更易吸收傳導(dǎo)銀杏酚酸。田間試驗(yàn)表明,銀杏綜合來看,銀杏酚酸是適于害蟲防治的新型生物農(nóng)藥,對(duì)減少害蟲防治中化學(xué)農(nóng)藥的使用以及促進(jìn)無公害蔬菜的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對(duì)目前傳統(tǒng)農(nóng)藥大多是化學(xué)合成的劇毒成分,不易降解,使用后隨雨水等散逸后,會(huì)嚴(yán)重污染周邊環(huán)境,對(duì)魚鳥以及人類都會(huì)產(chǎn)生危害,且長(zhǎng)期使用后害蟲會(huì)對(duì)其產(chǎn)生抗藥性,致使殺蟲效果減弱等缺陷,提供了一種從銀杏外果皮中提取出銀杏酚酸,與殼聚糖酶解后產(chǎn)生的殼寡糖進(jìn)行混合復(fù)配,濃縮后制得殼寡糖銀杏酚酸復(fù)合生物農(nóng)藥,用純天然生物提取物代替化學(xué)合成的劇毒物質(zhì)制成農(nóng)藥,避免了不易生物降解化學(xué)品對(duì)環(huán)境造成的污染,并且殼寡糖可有效誘導(dǎo)植物抗病性,持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),超高效的優(yōu)點(diǎn),也解決了因害蟲抗藥性致使藥效減弱的不足,是一種安全高效的新型生物農(nóng)藥。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)稱取10?20g殼聚糖粉末,裝入500mL燒杯中,加入100?1501^蒸餾水,用玻璃棒攪拌均勻后靜置溶脹25?35min后,加入120?130mL濃度為lmol/L的醋酸溶液,放置在磁力攪拌機(jī)上,以300?400r/min的轉(zhuǎn)速攪拌I?2h,直至殼聚糖粉末充分溶解;
(2)將上述制得的殼聚糖溶液倒入500mL容量瓶中,加入pH為5?6,濃度為0.2mol/L的醋酸和醋酸鈉緩沖溶液定容至500mL,制得殼聚糖膠體,將其轉(zhuǎn)入陶瓷酶解罐中,加入3?5g殼聚糖酶移入水浴鍋中,加熱升溫至50?60°C保溫酶解10?12h,酶解結(jié)束后升溫至90?100°C沸水浴10?15min,滅酶處理;
(3)待滅酶后冷卻至室溫,用濃度為0.3mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8?9去除大分子殼聚糖,再將其放入臥式離心機(jī)中,以7000?8000r/min的轉(zhuǎn)速離心10?15min分離得到上清液,放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中,升溫至60?70°C,旋蒸濃縮至原體積的2/3,得到殼寡糖濃縮液,備用;
(4)稱取100?200g曬干的銀杏外種皮,放入氣流粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎后裝入帶有攪拌器、溫度計(jì)和冷凝回流裝置的500mL三口燒瓶中,加入200?300mL濃度為0.5mol/L的氫氧化鉀乙醇溶液,常溫冷提12?14h后,油浴加熱至80?90°C冷凝回流3?5h,收集冷凝液;
(5)取100?150mL冷凝液和50?60mL蒸饋水均勾混合后裝入蒸饋裝置中,于70?80°C下蒸餾去除乙醇后,用質(zhì)量濃度為10%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至2?3,再加入1?20g氯化鈉,用100?200mL乙醚萃取2?3次,蒸餾回收乙醚后得銀杏酚酸;
(6 )將50?I OOmL上述備用的殼寡糖溶液通過滴液漏斗分3?5次逐滴滴入銀杏酚酸中,控制滴加速度使其20?30min內(nèi)滴加完畢,放入超聲分散儀中以200?300W的功率分散10?20min后移入濃縮罐,減壓至900?100Pa濃縮至原體積的1/3后即得一種殼寡糖銀杏酚酸復(fù)合生物農(nóng)藥。
[0007]本發(fā)明的具體應(yīng)用方法:將本發(fā)明制得的殼寡糖銀杏酚酸復(fù)合生物農(nóng)藥用蒸餾水稀釋至100?120倍,混合均勻后裝入農(nóng)藥噴霧器中,對(duì)農(nóng)作物進(jìn)行人工噴灑,噴灑量為50?80g/畝,經(jīng)檢測(cè),施藥7?8天后害蟲死亡率達(dá)90?95%。
[0008]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明制得的農(nóng)藥用純天然生物提取物代替化學(xué)合成的劇毒物質(zhì)制成農(nóng)藥,避免了不易生物降解化學(xué)品對(duì)環(huán)境造成的污染,并且殼寡糖可有效誘導(dǎo)植物抗病性,持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),超高效的優(yōu)點(diǎn),也解決了因害蟲抗藥性致使藥效減弱的不足。
【具體實(shí)施方式】
[0009]稱取10?20g殼聚糖粉末,裝入500mL燒杯中,加入100?150mL蒸餾水,用玻璃棒攪拌均勻后靜置溶脹25?35min后,加入120?130mL濃度為lmol/L的醋酸溶液,放置在磁力攪拌機(jī)上,以300?400r/min的轉(zhuǎn)速攪拌I?2h,直至殼聚糖粉末充分溶解;將上述制得的殼聚糖溶液倒入500mL容量瓶中,加入pH為5?6,濃度為0.2mol/L的醋酸和醋酸鈉緩沖溶液定容至500mL,制得殼聚糖膠體,將其轉(zhuǎn)入陶瓷酶解罐中,加入3?5g殼聚糖酶移入水浴鍋中,加熱升溫至50?60°C保溫酶解10?12h,酶解結(jié)束后升溫至90?100°C沸水浴10?15min,滅酶處理;待滅酶后冷卻至室溫,用濃度為0.3mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8?9去除大分子殼聚糖,再將其放入臥式離心機(jī)中,以7000?8000r/min的轉(zhuǎn)速離心10?15min分離得到上清液,放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中,升溫至60?70°C,旋蒸濃縮至原體積的2/3,得到殼寡糖濃縮液,備用;稱取100?200g曬干的銀杏外種皮,放入氣流粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎后裝入帶有攪拌器、溫度計(jì)和冷凝回流裝置的500mL三口燒瓶中,加入200?300mL濃度為0.5mol/L的氫氧化鉀乙醇溶液,常溫冷提12?14h后,油浴加熱至80?90°C冷凝回流3?5h,收集冷凝液;取100?150mL冷凝液和50?60mL蒸饋水均勾混合后裝入蒸饋裝置中,于70?80°C下蒸饋去除乙醇后,用質(zhì)量濃度為10%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至2?3,再加入10?20g氯化鈉,用100?200mL乙醚萃取2?3次,蒸餾回收乙醚后得銀杏酚酸;將50?10mL上述備用的殼寡糖溶液通過滴液漏斗分3?5次逐滴滴入銀杏酚酸中,控制滴加速度使其20?30min內(nèi)滴加完畢,放入超聲分散儀中以200?300W的功率分散10?20min后移入濃縮罐,減壓至900?100Pa濃縮至原體積的I/3后即得一種殼寡糖銀杏酚酸復(fù)合生物農(nóng)藥。
[0010]實(shí)例I
稱取1g殼聚糖粉末,裝入500mL燒杯中,加入10mL蒸餾水,用玻璃棒攪拌均勻后靜置溶脹25min后,加入120mL濃度為lmol/L的醋酸溶液,放置在磁力攪拌機(jī)上,以300r/min的轉(zhuǎn)速攪拌Ih,直至殼聚糖粉末充分溶解;將上述制得的殼聚糖溶液倒入500mL容量瓶中,加入pH為5,濃度為0.2mol/L的醋酸和醋酸鈉緩沖溶液定容至500mL,制得殼聚糖膠體,將其轉(zhuǎn)入陶瓷酶解罐中,加入3g殼聚糖酶移入水浴鍋中,加熱升溫至50°C保溫酶解10h,酶解結(jié)束后升溫至90°C沸水浴lOmin,滅酶處理;待滅酶后冷卻至室溫,用濃度為0.3mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至8去除大分子殼聚糖,再將其放入臥式離心機(jī)中,以7000r/min的轉(zhuǎn)速離心1min分離得到上清液,放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中,升溫至60°C,旋蒸濃縮至原體積