殖培養(yǎng)的條件為:在室溫2rC，光 照時(shí)數(shù)16h/d，光照強(qiáng)度2000LX，室內(nèi)濕度50 %的條件下，增殖培養(yǎng)45d。
[0076] 其中，所述增殖培養(yǎng)基中添加各組分含量為：6-節(jié)氨基嚷嶺l.Omg/L、糞乙酸 0.005mg/L、瓊脂7.5g/L、薦糖32g/L、青霉素鋼的含量為Img/L，增殖培養(yǎng)基抑值為6.0。
[0077] 該實(shí)施例中，其余培養(yǎng)步驟中所用培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件均與實(shí)施例1中相同。
[007引實(shí)施例5
[0079] W山葡萄品種雙優(yōu)為試驗(yàn)材料，材料取自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所的國(guó)家果樹 種質(zhì)左家山葡萄資源圃。并按照實(shí)施例1所述方法步驟山葡萄幼苗培養(yǎng)。
[0080] 其中，該實(shí)施例山葡萄幼苗培養(yǎng)過程中，所用誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基，其中溶 有6-節(jié)氨基嚷嶺、糞乙酸、瓊脂、薦糖，并添加有活性炭。所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，6-節(jié)氨基嚷嶺 的含量為1. Omg/L、糞乙酸的含量為0.005mg/L、瓊脂含量為7. Og/L、薦糖含量為35g/L、活性 炭含量為0.4g/L，誘導(dǎo)培養(yǎng)基pH值為5.8。
[0081] 該實(shí)施例中，其余培養(yǎng)步驟中所用培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件均與實(shí)施例1中相同。
[0082] 對(duì)比例1
[0083] W山葡萄品種北冰紅為試驗(yàn)材料，材料取自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所的國(guó)家果 樹種質(zhì)左家山葡萄資源圃。取山葡萄枝條后在水中進(jìn)行萌芽培養(yǎng)，剪下長(zhǎng)出4~5片葉的1年 生新梢，去掉葉片，剪成約2cm長(zhǎng)的單芽莖段，然后，將運(yùn)些單芽莖段放入少量洗衣粉水中搖 晃lOmin，流水沖洗20min，于超凈工作臺(tái)上用0.1%升隸表面消毒3111111，無菌水沖洗5次后， 并按照如下所述步驟進(jìn)行培養(yǎng)，具體步驟如下：
[0084] (1)誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒沖洗后的2cm長(zhǎng)的山葡萄單芽莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并 在培養(yǎng)條件為室溫20°C、光照時(shí)數(shù)lOh/d、光照強(qiáng)度2000LX、室內(nèi)濕度控制在30%的培養(yǎng)條 件下，誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間20d。
[0085] 其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基，其中溶有6-節(jié)氨基嚷嶺、糞乙酸、瓊脂、薦 糖。所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，6-節(jié)氨基嚷嶺的含量為2.0mg/L、糞乙酸的含量為O.Olmg/L、瓊脂含 量為5. Og/L、薦糖含量為30g/L，誘導(dǎo)培養(yǎng)基pH值為5.8。
[0086] (2)增殖培養(yǎng)，將誘導(dǎo)培養(yǎng)所得到的2~3節(jié)的單芽莖段，并剪掉葉片后，轉(zhuǎn)移至增 殖培養(yǎng)基中，并在培養(yǎng)條件為室溫20°C、光照時(shí)數(shù)16h/d、光照強(qiáng)度2000LX、室內(nèi)濕度控制在 30%的培養(yǎng)條件下，誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間40d。
[0087] 其中，所述增殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基，其中溶有6-節(jié)氨基嚷嶺、糞乙酸、瓊脂、薦 糖。所述增殖培養(yǎng)基中，6-節(jié)氨基嚷嶺的含量為2.0mg/L、糞乙酸的含量為O.Olmg/L、瓊脂含 量為5. Og/L、薦糖含量為30g/L，增殖培養(yǎng)基pH值為5.8。
[0088] (3)生根培養(yǎng):選取一簇增殖培養(yǎng)所得到的植株，并轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中，并在室 溫23°C，光照時(shí)數(shù)16h/d，光照強(qiáng)度2000LX，室內(nèi)濕度50%的條件下，生根培養(yǎng)30d，即得山葡 萄幼苗。
[0089] 其中，所述生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基，其中溶有嗎I噪下酸、瓊脂、薦糖。所述 生根培養(yǎng)基中，嗎I噪下酸的含量為0.0 Img/L、瓊脂含量為5. Og/L、薦糖含量為15g/L，培養(yǎng)基 抑為6.0。
[0090] W上各階段培養(yǎng)中，所用培養(yǎng)瓶均為150mL塑料瓶，所述Ξ角瓶?jī)?nèi)含有約20mL培養(yǎng) 基，并用通氣好的帶封口膜的塑料瓶蓋進(jìn)行封口，每瓶培養(yǎng)液中最多培養(yǎng)不超過3個(gè)外植 體。
[0091] 對(duì)比例2
[0092] W山葡萄品種左優(yōu)紅為試驗(yàn)材料，并按照對(duì)比例1所述方法步驟培養(yǎng)山葡萄幼苗。
[0093] 對(duì)比例3
[0094] W山葡萄品種雙紅為試驗(yàn)材料，并按照對(duì)比例1所述方法步驟培養(yǎng)山葡萄幼苗。
[00巧]對(duì)比例4
[0096] W山葡萄品種雙豐為試驗(yàn)材料，并按照對(duì)比例1所述方法步驟培養(yǎng)山葡萄幼苗。
[0097] 對(duì)比例5
[0098] W山葡萄品種雙優(yōu)為試驗(yàn)材料，并按照對(duì)比例1所述方法步驟培養(yǎng)山葡萄幼苗。
[0099] 實(shí)驗(yàn)例1
[0100] 對(duì)實(shí)施例1-5W及對(duì)比例1-5培養(yǎng)得到的山葡萄幼苗進(jìn)行觀測(cè)，并分別對(duì)不同實(shí)施 例或?qū)Ρ壤猩狡咸延酌绮ＡЩ闆r進(jìn)行記錄和統(tǒng)計(jì)，并分別計(jì)算出各組山葡萄幼苗玻璃 化率，結(jié)果如下表1所示：
[0101 ] 表1實(shí)施例1-5 W及對(duì)比例1-5山葡萄幼苗玻璃化比例對(duì)照 [0102]
[0103]
[0104] 實(shí)驗(yàn)例2
[0105] 選取適量如圖3所示W(wǎng)莖尖為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)過程中發(fā)生玻璃化的山葡萄誘 導(dǎo)芽，然后，將其轉(zhuǎn)移至實(shí)施例1所述的過渡培養(yǎng)基中，并按照實(shí)施例1所述的步驟W及相應(yīng) 培養(yǎng)基進(jìn)行過渡培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)得到山葡萄植株，并對(duì)山葡萄植株玻璃化情況進(jìn)行記錄和 統(tǒng)計(jì)，并分別計(jì)算出各組山葡萄幼苗玻璃化率。經(jīng)統(tǒng)計(jì)和計(jì)算，73%的玻璃化的山葡萄誘導(dǎo) 芽經(jīng)過上述過渡培養(yǎng)W及生根培養(yǎng)的步驟后，能夠培養(yǎng)得到圖4所示由玻璃化山葡萄誘導(dǎo) 芽成長(zhǎng)的正常植株。
[0106] 盡管已用具體實(shí)施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識(shí)到，在不背離本發(fā)明的 精神和范圍的情況下可W作出許多其它的更改和修改。因此，運(yùn)意味著在所附權(quán)利要求中 包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有運(yùn)些變化和修改。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種山葡萄組織培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中溶有6-芐氨基 嘌呤、萘乙酸、瓊脂以及蔗糖，并進(jìn)一步加入活性炭和/或青霉素鈉制成； 其中，6-芐氨基嘌呤在所述培養(yǎng)基中的含量為0.1-2. Omg/L，萘乙酸在所述培養(yǎng)基中的 含量為 0.001-0 .Olmg/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述山葡萄組織培養(yǎng)基中，6-芐氨基嘌 呤的含量為〇 · 1-2 · Omg/L，萘乙酸的含量為0 · 001-0 · 01mg/L，瓊脂含量為5 · 0-10 · Og/L，蔗糖 的含量為20_50g/L，活性炭含量為0.1-2.(^/1，青霉素鈉的含量為1-311^/1。3. -種山葡萄組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述組織培養(yǎng)包括如下步驟： 將山葡萄外植體接種于權(quán)利要求1或2所述山葡萄組織培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)； 將誘導(dǎo)培養(yǎng)后的外植體進(jìn)行過渡培養(yǎng)； 將過渡培養(yǎng)后的外植體轉(zhuǎn)入1或2所述山葡萄組織培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，并得到山葡 萄植株； 其中，所述過渡培養(yǎng)所用培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中溶有6-芐氨基嘌呤、萘乙酸、瓊 脂和鹿糖，并進(jìn)一步加入活性炭所制成的； 所述過渡培養(yǎng)所述培養(yǎng)基中，6-芐氨基嘌呤的含量為0.1-1.0mg/L，萘乙酸的含量為 0.001-0.005mg/L〇4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)、過渡培養(yǎng)以及增殖培養(yǎng)是 在玻璃培養(yǎng)瓶中進(jìn)行的。5. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的溫度為21~23°C，培養(yǎng) 的環(huán)境濕度為30~50%。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)是在光照條件下進(jìn)行的，所 述光照時(shí)數(shù)為12-18h/d，光照強(qiáng)度為2000-25001X;其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的時(shí)間為20-24d。7. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述過渡培養(yǎng)的溫度為21~23°C，培養(yǎng) 的環(huán)境濕度為30~50%。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述過渡培養(yǎng)時(shí)間為7-10d。9. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)是在光照條件下進(jìn)行的； 其中，所述光照時(shí)數(shù)為12_18h/d，光照強(qiáng)度為2000-25001X;增殖培養(yǎng)的溫度為21~23 °C，培養(yǎng)的環(huán)境濕度為30~50%。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)的時(shí)間為40-45d。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種山葡萄組織培養(yǎng)基，本發(fā)明培養(yǎng)基中，通過增加培養(yǎng)基內(nèi)瓊脂、蔗糖等物質(zhì)的濃度，來降低培養(yǎng)基的水勢(shì)，這在一定程度上較好地減輕了山葡萄組培苗玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生，特別是誘導(dǎo)階段的玻璃化現(xiàn)象。同時(shí)，培養(yǎng)基內(nèi)活性炭的加入可避免因培養(yǎng)基蔗糖濃度的增加而導(dǎo)致的組培苗褐變現(xiàn)象的發(fā)生，進(jìn)而提高山葡萄組織培養(yǎng)的成功率。同時(shí)，本發(fā)明還提供了一種山葡萄組織培養(yǎng)方法，本發(fā)明方法中，通過在現(xiàn)有的組織培養(yǎng)幼苗過程中進(jìn)一步加入過渡培養(yǎng)步驟，并使用本發(fā)明所述培養(yǎng)基作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基以及增殖培養(yǎng)基，從而通過對(duì)培養(yǎng)流程以及所用培養(yǎng)基的優(yōu)化，有效控制了山葡萄誘導(dǎo)培養(yǎng)和增殖培養(yǎng)過程中的玻璃化現(xiàn)象。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105594597
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610188089
【發(fā)明人】趙瀅, 艾軍, 李昌禹, 秦紅艷, 張寶香, 楊義明, 范書田, 王振興, 許培磊, 劉迎雪, 孫丹, 王春偉
【申請(qǐng)人】中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所
【公開日】2016年5月25日
【申請(qǐng)日】2016年3月29日