本發(fā)明涉及膳食營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種富硒蛋白肽的制備工藝。
背景技術(shù)：
：豬血蛋白肽是以豬血為原料，經(jīng)溶血、酶解、脫色、超濾及干燥而得。豬血蛋白肽是一種高品質(zhì)蛋白質(zhì)原料，含有生長(zhǎng)因子和小分子肽等多種功能性蛋白質(zhì)，具有適口性好、蛋白質(zhì)含量高、氨基酸平衡、吸收利用率高、附加值高等特點(diǎn)，這種蛋白肽對(duì)改善缺鐵性貧血、調(diào)節(jié)免疫作用顯著，可廣泛應(yīng)用于食品、保健食品和醫(yī)藥領(lǐng)域。目前豬血蛋白肽的應(yīng)用鮮見(jiàn)報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是公開(kāi)一種可將豬血的蛋白利用發(fā)揮到最佳的酶解富硒蛋白肽的制備工藝。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：一種富硒蛋白肽的制備工藝，步驟如下：（1）蛋白肽酶解液的制備，以豬血為原料，經(jīng)溶血、酶解、脫色、超濾而得；（2）將殼聚糖、硒化合物和檸檬酸按一定比例混合，水相中制備納米硒溶液；（3）將所述納米硒溶液加入溫度為55~65℃的所述酶解液中，得到混合液，將混合液加熱至45~60℃反應(yīng)1~2h，得到成液；（4）將所述成液濃縮、干燥得到成品。通過(guò)本發(fā)明的制備工藝：1.硒是人體生命活動(dòng)中必需的微量元素之一，是人體內(nèi)的抗氧化劑，能提高人體免疫力，具有多種生物功能。與無(wú)機(jī)硒相比，有機(jī)硒的利用價(jià)值好、易于吸收、毒性小等優(yōu)勢(shì)，逐漸代替無(wú)機(jī)硒，納米硒則在許多方面更優(yōu)于有機(jī)硒，低毒高效：其體外清除自由基效率為有機(jī)硒的2.5倍，為無(wú)機(jī)硒的5倍；而且納米硒在是它在人體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)計(jì)量和毒性計(jì)量之間的范圍較無(wú)機(jī)硒和有機(jī)硒要寬很多。殼聚糖是一種直鏈型高分子聚合物,具有良好的生物兼容性,在藥用載體、醫(yī)藥等方面有廣泛的應(yīng)用，在人體內(nèi)吸收率近100％，具有提高免疫，抑制癌腫細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)肝脾抗體形成，促進(jìn)鈣及礦物質(zhì)的吸收，增殖雙岐桿菌、乳酸菌等人體有益菌群，能預(yù)防多種疾病。將具有生物學(xué)意義的納米硒與殼聚糖結(jié)合起來(lái)，納米態(tài)的硒被殼聚糖吸附包裹成穩(wěn)定的粒子，在與高生物活性的氨基酸螯合，產(chǎn)物兼有納米硒和殼聚糖免疫調(diào)節(jié)，養(yǎng)顏抗衰，預(yù)防癌癥及心血管疾病等功效，結(jié)合生物體極易消化利用的蛋白質(zhì)，用于人們營(yíng)養(yǎng)保健或者疾病治療或輔助治療，具有廣泛的應(yīng)用前景。2.豬血蛋白肽是一種高品質(zhì)蛋白質(zhì)原料，含有生長(zhǎng)因子和小分子肽等多種功能性蛋白質(zhì)，具有適口性好、蛋白質(zhì)含量高、氨基酸平衡、吸收利用率高、附加值高等特點(diǎn)，這種蛋白肽對(duì)改善缺鐵性貧血、調(diào)節(jié)免疫作用顯著；利用酶解獲得的該活性肽與由殼聚糖、硒化合物混合，由于殼聚糖大分子中有活潑的羥基和氨基，活性肽可以很好的反應(yīng)結(jié)合在殼聚糖上，從而制得納米硒并螯合成富硒蛋白肽，螯合的溫度過(guò)高或過(guò)低，影響活性肽的活性，而且溶液的粘度減弱，殼聚糖對(duì)納米硒以及活性肽的包裹吸附作用減弱，通過(guò)本發(fā)明的具體條件控制得到高活性、易吸收，富含納米硒和短肽鏈以及平衡氨基酸的活性肽蛋白粉，易于消化吸收，提高機(jī)體免疫力，預(yù)防多種疾病，改善健康狀況。3.檸檬酸可以促成納米硒的形成，同時(shí)還為反應(yīng)體系提供一個(gè)酸性環(huán)境；殼聚糖分子上的氨基性質(zhì)活潑，具有很好的吸附能力，而且殼聚糖在酸性環(huán)境中所構(gòu)成的微環(huán)境具有良好的懸浮、乳化、穩(wěn)定作用，可以很好的穩(wěn)定納米硒的作用，殼聚糖還是一個(gè)很好的緩釋載體，可以逐步將硒釋放出來(lái)，起到持久補(bǔ)硒作用。作為優(yōu)選，所述殼聚糖、硒化合物和檸檬酸的質(zhì)量比為80~100:1:10~15。作為優(yōu)選，步驟（2）中納米硒溶液中所述殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2×10-4~5×10-4，所述硒化合物的濃度為2~3mmol/L，所述檸檬酸或檸檬酸的濃度為5~7g/L。作為優(yōu)選，所述殼聚糖為羧甲基殼聚糖、水溶性殼聚糖和殼寡糖中的一種或多種混合物。作為優(yōu)選，步驟（2）中將得到的所述納米硒溶液進(jìn)行超聲波處理30~60min。超聲波處理有利于粒子分散，使其粒度減小，降低聚合度，易于下一步的吸附。作為優(yōu)選，所述超聲波功率為100~150w、頻率為15~20kHz，連續(xù)處理5~10min后間歇5min。超聲波可以一定程度上降低殼聚糖的分子量，而低分子量殼聚糖同超高分子量殼聚糖相比具有很強(qiáng)的殺菌和優(yōu)越的生物活性，但是超聲波功率過(guò)大、頻率過(guò)快則會(huì)導(dǎo)致殼聚糖降解，間歇性的使用超聲波處理，效果更顯著。作為優(yōu)選，所述硒化合物為亞硒酸鈉。作為優(yōu)選，步驟（4）中所述干燥方式為噴霧干燥，所述噴霧干燥進(jìn)風(fēng)口溫度為200~230℃，出風(fēng)口溫度為80~100℃。通過(guò)實(shí)施上述的技術(shù)方案，本發(fā)明具有如下的有益效果：本發(fā)明利用豬血為原料，充分利用蛋白資源，同時(shí)還避免了對(duì)環(huán)境的污染，工藝中以酶解的方式得到多肽，其酶解徹底，得到的生物活性多肽含量高，而且免疫蛋白含量高，利于提高機(jī)體的免疫力，同時(shí)以殼聚糖作為介質(zhì)，吸附納米硒與多肽，形成一個(gè)多功能的富含納米硒和短肽鏈以及平衡氨基酸的活性肽蛋白粉，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、易吸收，亦能預(yù)防多種疾病。具體實(shí)施方式實(shí)施例1：一種富硒蛋白肽的制備工藝，步驟如下：（1）蛋白肽酶解液的制備：a）采集新鮮豬血，以5g／L的檸檬酸鈉抗凝，在4℃、8000r／min離心10min，收集下層沉淀，以獲得紅血球；將紅血球加入同等體積的生理鹽水沖洗并離心兩次后加入2倍體積的蒸餾水，超聲波細(xì)胞破碎輔助溶血20min，然后在4℃、4000r／min離心10min，得到血紅蛋白溶液，于4℃保存?zhèn)溆?；b）取血紅蛋白溶液，加入適量的胰蛋白酶酶解，攪拌，2mol/LNaoH溶液維持體系pH8.0，45~50℃，6~10h；將酶解反應(yīng)產(chǎn)物迅速升溫至85℃并保持此溫度10~15分鐘，再迅速冷卻至50℃以下，調(diào)節(jié)pH值至7.0左右，8000r／min離心15min，獲得上清酶解液，4℃冷藏備用；c）活性炭用量為酶解液總重的5~30％，溫度55℃，攪拌脫色20~30min；再進(jìn)行粗濾處理后得粗濾酶解液；將粗濾酶解液在0.1~0.2Mpa的工作壓力和0~45℃的工作溫度下，采用截留分子質(zhì)量為1kD超濾膜進(jìn)行超濾處理，收集1kD以下蛋白肽酶解液。（2）將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和檸檬酸按質(zhì)量比為80:1:10混合，在水相中制備納米硒溶液，溫度控制在60℃，溶液中殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2×10-4，硒化合物的濃度為2mmol/L，檸檬酸的濃度為5g/L；（3）將納米硒溶液加入溫度為60℃的酶解液中，得到混合液，混合液在60℃螯合2h，得到成液；（4）將所述成液濃縮、噴霧干燥得到成品，其中噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度為200℃、出風(fēng)口溫度為80℃。實(shí)施例2：一種富硒蛋白肽的制備工藝，步驟如下：（1）蛋白肽酶解液的制備同實(shí)施例1；（2）將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和檸檬酸按質(zhì)量比為100:1:15混合，在水相中制備納米硒溶液，溫度控制在60℃，溶液中殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5×10-4，硒化合物的濃度為3mmol/L，檸檬酸的濃度為7g/L；（3）將納米硒溶液加入溫度為55℃的酶解液中螯合2h，得到成液；（4）將所述成液濃縮、噴霧干燥得到成品，其中噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度為220℃、出風(fēng)口溫度為90℃。實(shí)施例3：一種富硒蛋白肽的制備工藝，步驟如下：（1）蛋白肽酶解液的制備同實(shí)施例1；（2）將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和維生素C按質(zhì)量比為90:1:12混合，在水相中制備納米硒溶液，溫度控制在65℃保溫2小時(shí)，再超聲波100W、15kHz處理30分鐘，處理6分鐘間歇7分鐘，溶液中殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5×10-4，硒化合物的濃度為3mmol/L，檸檬酸的濃度為6g/L；（3）將納米硒溶液加入溫度為60℃的酶解液中，螯合1.5h，得到成液；（4）將所述成液濃縮、噴霧干燥得到成品，其中噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度為230℃、出風(fēng)口溫度為100℃。實(shí)施例4：一種富硒蛋白肽的制備工藝，步驟如下：（1）蛋白肽酶解液的制備同實(shí)施例1；（2）將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和檸檬酸按質(zhì)量比為90:1:12混合，在水相中制備納米硒溶液，溫度控制在65℃保溫2小時(shí)，再超聲波150W、20kHz處理60分鐘，處理10分鐘間歇10分鐘，溶液中殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5×10-4，硒化合物的濃度為3mmol/L，檸檬酸的濃度為6g/L；（3）將納米硒溶液加入溫度為60℃的酶解液中，混合，在45℃螯合1.5h，得到成液；（4）將所述成液濃縮、噴霧干燥得到成品，其中噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度為230℃、出風(fēng)口溫度為100℃。實(shí)施例5：一種富硒蛋白肽的制備工藝，步驟如下：（1）蛋白肽酶解液的制備同實(shí)施例1；（2）將羧甲基殼聚糖、亞硒酸鈉和檸檬酸按質(zhì)量比為90:1:12混合，在水相中制備納米硒溶液，溫度控制在65℃保溫2小時(shí)，再超聲波120W、18kHz處理50分鐘，處理5分鐘間歇5分鐘，溶液中殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5×10-4，硒化合物的濃度為3mmol/L，檸檬酸的濃度為7g/L；（3）將納米硒溶液加入溫度為60℃的酶解液中，混合，在45℃螯合1.5h，得到成液；（4）將所述成液濃縮、噴霧干燥得到成品，其中噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度為220℃、出風(fēng)口溫度為90℃。對(duì)上述實(shí)施例的工藝將等量的豬血制備所得到的成品進(jìn)行活性肽含量以及大小的檢測(cè)以及功效檢測(cè)?；钚怨央暮浚喝〉攘康某善啡苡诘攘康乃校玫綑z測(cè)液進(jìn)行檢測(cè)；其中活性肽含量檢測(cè)所用儀器為日立L-8800型氨基酸自動(dòng)分析儀，活性肽的大小檢測(cè)儀器為高效液相色譜儀；功效檢測(cè)是對(duì)抵抗力差的人進(jìn)行臨床試驗(yàn)。結(jié)果如表1表1：活性寡肽含量活性肽分子量＜1000Da活性肽分子量≥1000Da實(shí)施例186%93%7%實(shí)施例284%93%7%實(shí)施例393%97%3%實(shí)施例492%96%4%實(shí)施例592%96%4%從上表中可以看出，實(shí)施例所得到的寡肽分子量集中在1000Da以下，更加利于吸收消化；納米硒與所得活性肽螯合的條件以及噴霧干燥的溫度控制，影響著其螯合效果，直接影響產(chǎn)品中活性肽的含量和質(zhì)量。功效檢測(cè)：以體質(zhì)弱、經(jīng)常感冒、頭暈、疲勞乏力者300人為臨床試驗(yàn)對(duì)象，對(duì)照組1、對(duì)照組2和試驗(yàn)組各100人，其年齡分布如表2：表2：30歲以下30-50歲50歲以上試驗(yàn)組263539對(duì)照組1283438對(duì)照組2333532其中，試驗(yàn)組服用實(shí)施例1所得到的成品，對(duì)照組1服用豬血蛋白肽，對(duì)照組2不服用任何蛋白粉，服用方法和劑量為：每餐飯后1小時(shí)溫水送服，一天3次，每次5g，連續(xù)服用6個(gè)月。結(jié)果：根據(jù)顯效、有效和無(wú)效三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)判，經(jīng)觀察1年：顯效為頭暈、疲勞乏力癥狀消失，無(wú)感冒；有效為偶有頭暈、乏力癥狀，基本無(wú)感冒；無(wú)效為癥狀無(wú)改善，仍表現(xiàn)為頭暈、疲勞乏力，經(jīng)常感冒。結(jié)果見(jiàn)表3：表3：顯效有效無(wú)效總有效率試驗(yàn)組899298%對(duì)照組12197921%對(duì)照組203973%結(jié)果顯示：服用富硒活性肽產(chǎn)品（試驗(yàn)組）可以提高機(jī)體的免疫力，極大地改善其健康狀況，服用單一的活性肽產(chǎn)品（對(duì)照組1）可以一定程度上改善機(jī)體的健康，但效果不明顯。本發(fā)明得到的產(chǎn)品也同樣適用于動(dòng)物食用，同樣具有提高免疫力、改善健康狀況的功效。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3