技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明包括治療與肥胖相關(guān)的病癥和疾病的組合物和方法。本申請也包括差異地表達(dá)于動(dòng)物中的基因，且特別是與瘦動(dòng)物比較的差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物中的基因。本發(fā)明也包括用目標(biāo)營養(yǎng)物(targeted nutrition)來調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪的量的組合物和方法，這些營養(yǎng)物被設(shè)計(jì)為影響尤其是參與脂肪代謝的主基因。本發(fā)明還鑒定生物活性的食物成分，這些食物成分可單獨(dú)地或共同地影響參與脂肪代謝的主基因的表達(dá)和活性。

背景技術(shù)：

學(xué)術(shù)界普遍公認(rèn)，基因表達(dá)的調(diào)節(jié)在一些影響動(dòng)物的健康和良好狀態(tài)的疾病或病癥的發(fā)生中起著關(guān)鍵作用。類似地，基因的差異表達(dá)是發(fā)生此類疾病或病癥的一個(gè)因素，且基因表達(dá)模型的評價(jià)已被認(rèn)為是對在分子水平上了解此類疾病和病癥的發(fā)生和控制方面至關(guān)重要的。為了推進(jìn)對基因及其與疾病的關(guān)系的了解，已開發(fā)許多方法用于研究差異基因表達(dá)，如DNA微列陣、表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)、基因表達(dá)的序列分析(SAGE)、mRNA的消減雜交,消減克隆和差異展示(DD)、RNA-隨意引物PCR(RAP-PCR)、代表性差異分析(RDA)、二維凝膠電泳、質(zhì)譜法、反相蛋白質(zhì)陣列和多個(gè)陣列。

與瘦動(dòng)物比較，過重動(dòng)物中的基因表達(dá)尚未充分地進(jìn)行研究。因此，存在鑒定與瘦動(dòng)物比較的差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因和蛋白質(zhì)的需求。這樣的基因、蛋白質(zhì)，及其片段將用于配制預(yù)測動(dòng)物可能發(fā)胖的預(yù)示劑(prognosis)，開發(fā)診斷動(dòng)物肥胖的診斷劑，篩選物質(zhì)以確定它們是否有可能用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量，以及使用此類物質(zhì)調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量。

體重過重動(dòng)物可被定義為具有過多身體脂肪組織的那些動(dòng)物。一般說來，動(dòng)物如人、犬科動(dòng)物和貓科動(dòng)物的稱重超過其理想體重的15％時(shí)被稱為肥胖。動(dòng)物發(fā)胖的最常見原因是過量消費(fèi)食物，導(dǎo)致卡路里的過量攝取。然而，存在其它可增加動(dòng)物發(fā)胖的機(jī)會(huì)的因素，如生活方式、健康、飲食習(xí)慣、品種、卵巢摘除術(shù)和閹割動(dòng)物。而且，動(dòng)物變得過重的發(fā)生率一般隨著年齡的增加而增加，因?yàn)榇x率和體力活動(dòng)全面減少。調(diào)查估計(jì)，在美國去獸醫(yī)診所的25％的狗發(fā)胖達(dá)到肥胖的程度。研究已表明，過重動(dòng)物顯著面臨發(fā)生疾病如關(guān)節(jié)炎、心臟病、呼吸道疾病、糖尿病、膀胱癌、甲狀腺機(jī)能減退和胰腺炎的更大風(fēng)險(xiǎn)。

調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量，包括防止動(dòng)物變得過重或治療過重動(dòng)物以減少動(dòng)物脂肪組織的量或治療瘦小動(dòng)物以增加動(dòng)物脂肪組織的量是困難的。增加動(dòng)物脂肪組織的量通常涉及增加食物消耗的量。防止動(dòng)物變得過重或減少動(dòng)物脂肪的量的最有效和最容易的方法是飲食控制和鍛煉。然而，確保對飲食和鍛煉計(jì)劃的順從性往往是困難的。其它方法包括使用藥物如芬特明、芬氟拉明、西布曲明、奧利司他和苯丙醇胺。不辛地，使用這些藥物出現(xiàn)副作用。例如，給予芬氟拉明和芬特明用于治療人的肥胖癥可導(dǎo)致人的心瓣膜受損害。西布曲明可增加血壓而奧利司他可具有討厭的胃腸道副作用。

對于目前的處理動(dòng)物的脂肪組織的方法所帶來的問題，發(fā)明人已開發(fā)用于治療動(dòng)物的疾病和病癥的方法和組合物和用于配制預(yù)測動(dòng)物很可能發(fā)胖的預(yù)示劑，開發(fā)診斷動(dòng)物肥胖的診斷劑，篩選物質(zhì)以確定它們是否有可能用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量，以及使用此類物質(zhì)調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明包括用于治療有需要的陪伴動(dòng)物的病癥的組合物和方法。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括犬科動(dòng)物寵物食品組合物，其包含有效量的一種或多種組分，所述組分干擾差異地表達(dá)于過重動(dòng)物(與瘦動(dòng)物比較)中的一種或多種基因的表達(dá)，其中干擾一種或多種基因表達(dá)的所述一種或多種組分包含基于干物質(zhì)組成計(jì)的26wt.％-35wt.％的粗蛋白質(zhì)，基于干物質(zhì)組成計(jì)的7.5wt.％-8.5wt.％的粗脂肪，基于干物質(zhì)組成計(jì)的20wt.％-30wt.％的總食物纖維，和基于干物質(zhì)組成計(jì)的10wt.％-20wt.％的粗纖維。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括貓科動(dòng)物寵物食品組合物，其包含有效量的一種或多種組分，所述組分干擾差異地表達(dá)于過重動(dòng)物(與瘦動(dòng)物比較)中的一種或多種基因的表達(dá)，其中干擾一種或多種基因表達(dá)的所述一種或多種組分包含：基于干物質(zhì)組成計(jì)的30wt.％-37wt.％的粗蛋白質(zhì)，基于干物質(zhì)組成計(jì)的7.5wt.％-9wt.％的粗脂肪，基于干物質(zhì)組成計(jì)的30wt.％-35wt.％的總食物纖維和基于干物質(zhì)組成計(jì)的20wt.％-25wt.％的粗纖維。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防胰島素抵抗的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防胰腺炎的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防甲狀腺機(jī)能減退的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防異常脂血癥的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防高血壓的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防眼科病癥的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防改變的腎功能的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防呼吸道疾病的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防糖尿病的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防尿道疾病的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防肝脂肪沉積癥的方法

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防肝異常脂血癥的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防肝脂肪沉積癥的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防腫瘤形成的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防口腔/牙齒疾病的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防皮膚病的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防跛行的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防高脂血癥的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防葡萄糖代謝紊亂的方法。

另一個(gè)實(shí)施方案包括用本發(fā)明的組合物在有需要的陪伴動(dòng)物，例如犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物中治療或預(yù)防冠心病的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括一種或多種基因或基因片段，其與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括兩種或更多種多核苷酸或多肽的組合，其與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括適合于檢測與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因表達(dá)的兩種或更多種多核苷酸或多肽探針的組合物和裝置如包含基片(substrate)陣列的探針。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括用于檢測樣品中與瘦動(dòng)物比較的差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因差異表達(dá)的方法和組合物。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括用于測定試驗(yàn)基片對與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因表達(dá)概況的作用的方法，作為篩選試驗(yàn)基片以確定是否其有可能用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括配制預(yù)測動(dòng)物可能變得過重的預(yù)示劑或開發(fā)診斷動(dòng)物肥胖的診斷劑的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括用于調(diào)節(jié)與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因表達(dá)或用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的方法和組合物。

這些實(shí)施方案的一個(gè)或多個(gè)使用表現(xiàn)基因和基因片段的433個(gè)多核苷酸探針的新組合而實(shí)現(xiàn)，所述基因和基因片段與瘦動(dòng)物的脂肪組織比較差異地表達(dá)于過重動(dòng)物的脂肪組織中(表1)。此外，這些實(shí)施方案的一個(gè)或多個(gè)使用表現(xiàn)基因和基因片段的1703多核苷酸探針的新組合而實(shí)現(xiàn)，所述基因和基因片段與取自瘦動(dòng)物的淋巴細(xì)胞比較差異地表達(dá)于取自過重動(dòng)物的淋巴細(xì)胞中(表2)。而且，這些實(shí)施方案的一個(gè)或多個(gè)使用表現(xiàn)基因和基因片段的多核苷酸探針的新組合而實(shí)現(xiàn)，所述基因和基因片段差異地表達(dá)于過重的和瘦小的狗中并被認(rèn)為是脂肪酸代謝的主基因(表3)。多核苷酸被用于生產(chǎn)組合物、探針、基于探針的裝置，以及用于測定與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的多核苷酸的狀況的方法，用于實(shí)現(xiàn)上述確定的目標(biāo)，如預(yù)測和診斷與動(dòng)物脂肪組織相關(guān)的病癥和用于篩選物質(zhì)以確定是否它們有可能用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量。一旦鑒定了這樣的物質(zhì)，即可用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量。也提供包含探針、使用探針的裝置和物質(zhì)的組合的各種試劑盒。

本發(fā)明的實(shí)施方案也包括通過給予已顯示可調(diào)節(jié)參與脂肪代謝的基因表達(dá)的本發(fā)明的組合物，在動(dòng)物體內(nèi)調(diào)節(jié)脂肪組織的量的方法。

本發(fā)明的實(shí)施方案也包括通過給予有需要的動(dòng)物有效調(diào)節(jié)生物標(biāo)記化合物的量的本發(fā)明組合物，調(diào)節(jié)各種犬科動(dòng)物的與肥胖相關(guān)的生物標(biāo)記化合物?？杀徽{(diào)節(jié)的與肥胖相關(guān)的生物標(biāo)記化合物的實(shí)例包括，但不限于葡萄糖、胰島素、GLP-I、IGF-I、膽固醇、甘油三酯、LDL、乳糜微粒、堿性磷酸酶、2型軟骨合成物、瘦蛋白、生長素釋放肽，及其組合。

本發(fā)明的其它和進(jìn)一步的目標(biāo)、特征和優(yōu)點(diǎn)對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見的。

附圖說明

圖1顯示對狗喂給本發(fā)明的食物制劑與對照的體重減輕食物制劑比較的體重?fù)p失的結(jié)果。

圖2顯示在喂給本發(fā)明的食物制劑后，與瘦狗比較的肥胖狗中的基因概況的轉(zhuǎn)移。

具體實(shí)施方式

定義

術(shù)語"動(dòng)物"意指人或其它動(dòng)物，包括鳥類、牛、犬科動(dòng)物、馬、貓科動(dòng)物、hicrine、鼠科動(dòng)物、羊和豬等具有脂肪組織的動(dòng)物。當(dāng)該術(shù)語在上下文中用于比較過重與瘦動(dòng)物時(shí)，被比較的動(dòng)物為同種動(dòng)物并可能是相同的物種或品種。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述動(dòng)物是犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物，最優(yōu)選是犬科動(dòng)物。

術(shù)語"抗體"意指結(jié)合至特異性抗原的任何免疫球蛋白，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE抗體。該術(shù)語包括多克隆抗體、單克隆抗體、單價(jià)抗體、人源化抗體、雜軛合物(heteroconjugate)、具有多抗原特異性(polyepitopic specificity)的抗體組合物、嵌合抗體、雙特異性抗體、雙抗體、單鏈抗體和抗體片段如Fab、Fab'、F(ab')₂和Fv，或其它抗原-結(jié)合片段。

術(shù)語"陣列"意指基片上的至少兩個(gè)探針的有序排列。至少一個(gè)探針是對照或標(biāo)準(zhǔn)的和至少一個(gè)探針是診斷探針。在基片上的兩種或更多種探針的排列(現(xiàn)在有超過40,000個(gè)探針的陣列、芯片(chips)和其它平臺(tái)(platforms))確保探針和樣品多核苷酸或多肽之間形成的各個(gè)標(biāo)記復(fù)合物的大小和信號(hào)強(qiáng)度分別為可識(shí)別的。

術(shù)語"肥度評分"(BCS)意指用于基于動(dòng)物的體重和體型的身體組成分析的方法。幾種方法是本領(lǐng)域熟練的技術(shù)人員已知的，如公開于US專利號(hào)6,691,639和在題目為"Small Animal Clinical Nutrition(小動(dòng)物臨床營養(yǎng)物)",第四版,13章(ISBN 0-945837-05-4)的參考文獻(xiàn)中的方法。

術(shù)語"身體質(zhì)量指數(shù)"(BMI)意指動(dòng)物的體重(以千克計(jì))除以其身高(以米計(jì))的平方。

術(shù)語"DEXA"意指身體組成分析雙能X-線吸光光度法。

術(shù)語"差異表達(dá)"或"差異地表達(dá)"意指增加或上調(diào)基因表達(dá)，或者意指減少或下調(diào)基因表達(dá)，如通過樣品中轉(zhuǎn)錄信使RNA或轉(zhuǎn)譯蛋白的不存在、存在，或至少1.3-倍的量的改變所檢測的。

術(shù)語"肥胖的"應(yīng)用于動(dòng)物時(shí)，意指經(jīng)測定具有過量身體脂肪組織的任何動(dòng)物或使用衛(wèi)生保健提供者和其它熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的技術(shù)和方法易于產(chǎn)生過量身體脂肪組織的動(dòng)物。如果在與總的群體動(dòng)物的平均體重比較時(shí)，所述動(dòng)物具有產(chǎn)生過量脂肪組織的傾向或較高的可能性，則動(dòng)物易于變得過重。一般說來，不限于該定義，如果(1)動(dòng)物具有25或以上的BMI(在表征動(dòng)物狀況的某些方法中被認(rèn)為包括"體重過重"和"肥胖"的數(shù)字)，(2)動(dòng)物'的體重超出如由衛(wèi)生保健專業(yè)人員或有關(guān)的熟練技術(shù)人員定義的其"理想"體重的15％或以上，(3)如經(jīng)DEXA測定，動(dòng)物的身體脂肪百分比為27％或以上，或(4)如由熟練的專業(yè)技術(shù)人員使用在"Small Animal Clinical Nutrition"(小動(dòng)物臨床營養(yǎng)物)",第四版,13章(ISBN 0-945837-05-4)中公開的方法或使用其它BCS方法的等同方法所測定的，動(dòng)物的肥度評分超過3，則動(dòng)物被認(rèn)為是過重的。

術(shù)語"肥胖相關(guān)基因"意指表1和2中鑒定的所有基因或基因亞群，特別是差異地表達(dá)于取自過重動(dòng)物的脂肪組織和取自瘦動(dòng)物的脂肪組織之間的由433個(gè)探針序列表示的基因，以及差異地表達(dá)于取自過重動(dòng)物的淋巴細(xì)胞和取自瘦動(dòng)物的淋巴細(xì)胞之間的由1703個(gè)探針序列表示的基因。

術(shù)語"主基因"意指表3中鑒定的所有基因或基因亞群。

術(shù)語"倍"在用作差異基因表達(dá)的量度時(shí)，意指動(dòng)物中的基因表達(dá)的量，該量是與對比動(dòng)物(如過重動(dòng)物對比瘦動(dòng)物)中的基因表達(dá)的量比較的基因表達(dá)的倍數(shù)和分?jǐn)?shù)。例如，在所述動(dòng)物中表達(dá)的為對比動(dòng)物的3倍的基因具有3倍差異基因表達(dá)并且所述基因被認(rèn)為是上調(diào)的。在另一方面，在所述動(dòng)物中表達(dá)的為對比動(dòng)物的三分之一的基因也具有3倍差異基因表達(dá)并且所述基因被認(rèn)為是下調(diào)的。

術(shù)語"片段"意指(1)為全序列的一部分和對于特別用作多核苷酸全序列的具有相同或相似活性的寡核苷酸或多核苷酸序列或(2)為全序列的一部分和對于特別用作多肽全序列的具有相同或相似活性的肽或多肽序列。這樣的片段可包含被視為適合特定用途的任何數(shù)量的核苷酸或氨基酸。一般說來，寡核苷酸或多核苷酸片段含有至少10、50、100或1000個(gè)核苷酸，而多肽片段含有來自全序列的至少4、10、20或50個(gè)連續(xù)的氨基酸。該術(shù)語包括片段的多核苷酸和多肽變異體(variants)。

術(shù)語"基因"或"多個(gè)基因"意指參與產(chǎn)生多肽，包括編碼區(qū)之前和之后的區(qū)域(前導(dǎo)區(qū)和非轉(zhuǎn)錄尾區(qū))和各編碼區(qū)段(外顯子)之間的間插序列(內(nèi)含子)的完全DNA區(qū)段或部分DNA區(qū)段。該術(shù)語包括雜交至互補(bǔ)基因編碼序列的任何DNA序列。

術(shù)語"差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因"意指與瘦動(dòng)物比較，從過重動(dòng)物組織的mRNA表達(dá)量或從mRNA轉(zhuǎn)譯的基因產(chǎn)物的量的基因可檢測地不同，無論是多于或少于瘦動(dòng)物。

術(shù)語"同系物"意指(1)多核苷酸,包括來自相同或不同的動(dòng)物品種的多核苷酸，具有與表1、2、3和5中鑒定的多核苷酸大于30％、50％、70％或90％的序列相似性，以及具有與全多核苷酸相同或基本相同的特性并執(zhí)行相同或基本相同的功能，或具有在嚴(yán)格條件下特異性地雜交至表1、2、3和5中鑒定的多核苷酸的能力或(2)多肽，包括來自相同或不同的動(dòng)物品種的多肽，具有與表1、2、3和5中鑒定的多核苷酸的表達(dá)鑒定的多肽大于30％、50％、70％或90％的序列相似性，以及具有與完全多肽相同或基本相同的特性并執(zhí)行相同或基本相同的功能，或具有特異地結(jié)合至表1、2、3和5中鑒定的多核苷酸的表達(dá)鑒定的多肽的能力。兩種多肽序列或兩種多核苷酸序列的序列相似性采用熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的方法測定，如Karlin和Altschul算法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268(1990))。這樣的算法結(jié)合到Altschul等(J.MoI.Biol.215:403-410(1990))的NBLAST和XBLAST程序中。為了獲得用于比較目的的序列空位排列比較(gapped alignments)，Gapped Blast可如Altschul等(Nucl.Acids Res.25:3389-3402(1997))所述使用。當(dāng)使用BLAST和Gapped BLAST程序時(shí)，使用各程序(如，XBLAST和NBLAST)的缺省參數(shù)(default parameters)。見http://ww.ncbi.nlm.nih.gov。

術(shù)語"雜交復(fù)合物"意指當(dāng)一個(gè)多核苷酸的嘌呤經(jīng)氫鍵與互補(bǔ)多核苷酸的嘧啶結(jié)合，如5'-A-G-T-C-3'堿基對與3'-T-C-A-G-5'結(jié)合時(shí)，樣品多核苷酸之間形成的復(fù)合物?；パa(bǔ)性的程度和核苷酸類似物的使用影響雜交反應(yīng)的效率和嚴(yán)格性。

術(shù)語"聯(lián)合"意指藥物、食物或其它物質(zhì)(1)以組合物，特別是食物組合物的形式一起給予動(dòng)物，或(2)以相同或不同的頻率，使用相同或不同的給予途徑，在相同的時(shí)間或周期性地分開給予動(dòng)物。"周期性地"意指對特定物質(zhì)以可接受的劑量方案給予該物質(zhì)，"相同的時(shí)間"一般意指所述物質(zhì)(食物或藥物)在相同的時(shí)間給予或彼此在72小時(shí)內(nèi)給予。"聯(lián)合"尤其包括給予方案，其中物質(zhì)如藥物給予規(guī)定時(shí)期和本發(fā)明的組合物無限期地給予。

術(shù)語"瘦的"應(yīng)用于動(dòng)物時(shí)，意指采用衛(wèi)生保健提供者和其它熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的技術(shù)和方法測定的體重不超重的任何動(dòng)物。一般說來(但不限于)，如果(1)動(dòng)物具有少于25的BMl或(2)動(dòng)物的體重由衛(wèi)生保健專業(yè)人員或有關(guān)的熟練專業(yè)技術(shù)人員確定超過其"理想"體重不足15％，(3)經(jīng)DEXA測定動(dòng)物的身體脂肪百分比少于27％，或(4)經(jīng)熟練的專業(yè)技術(shù)人員使用"Small Animal Clinical Nutrition(小動(dòng)物臨床營養(yǎng)物)",第四版,13章(ISBN 0-945837-05-4)中公開的方法或使用其它BCS方法的等同方法所測定的，動(dòng)物具有肥度評分為3或以下，則認(rèn)為動(dòng)物是瘦的。

術(shù)語"調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量"意指引起動(dòng)物失去脂肪組織，引起動(dòng)物獲得脂肪組織，或引起動(dòng)物維持動(dòng)物脂肪組織的量，如果動(dòng)物易于獲得或失去脂肪組織的話。因此，調(diào)節(jié)動(dòng)物的脂肪組織的量包括防止瘦動(dòng)物變得體重過重和治療過重動(dòng)物以減少動(dòng)物脂肪組織的量，以及治療瘦動(dòng)物以增加脂肪組織(在合適的情況下)，如當(dāng)治療被熟練的專業(yè)技術(shù)人員確定為體重不足的瘦動(dòng)物時(shí)，則增加脂肪組織是合乎需要的?？墒褂贸Ｒ?guī)方法評價(jià)動(dòng)物脂肪組織的量，以及確定動(dòng)物的瘦肌肉質(zhì)量和/或骨礦物質(zhì)含量，可與這樣的評價(jià)具有關(guān)聯(lián)性的信息。

術(shù)語"多核苷酸"或"寡核苷酸"意指核苷酸的聚合物。該術(shù)語包括DNA和RNA(包括cDNA和mRNA)分子，或者單鏈的或者雙鏈的，并且如果是單鏈的，其互補(bǔ)序列或者是線性的，或者呈環(huán)狀形式。該術(shù)語也包括片段、變異體、同系物和等位基因，如在合適時(shí)具有與原始序列相同或基本相同的特性和執(zhí)行相同或基本相同的功能的序列。當(dāng)比對或可具有至多30％序列錯(cuò)配時(shí)，所述序列可以是完全互補(bǔ)(無錯(cuò)配)的，優(yōu)選地，對于多核苷酸，所述鏈含有50-10,000個(gè)核苷酸，更優(yōu)選從150至3,500個(gè)核苷酸，優(yōu)選地，對于寡核苷酸，所述鏈含有2-100個(gè)核苷酸，更優(yōu)選6-30個(gè)核苷酸。多核苷酸或寡核苷酸的精確大小將取決于各種因素并取決于特殊應(yīng)用和多核苷酸或寡核苷酸的用途。該術(shù)語包括合成的和從天然來源分離和純化的核苷酸聚合物。術(shù)語"多核苷酸"包括"寡核苷酸"在內(nèi)。

術(shù)語"多肽"、"肽"或"蛋白質(zhì)"意指氨基酸的聚合物。該術(shù)語包括天然存在的和非-天然存在的(合成的)聚合物和其中人工化學(xué)模擬物取代一種或多種氨基酸的聚合物。該術(shù)語也包括片段、變異體和同系物，它們具有與原始序列相同或基本相同的特性并執(zhí)行相同或基本相同的功能。該術(shù)語包括任意長度的聚合物，優(yōu)選聚合物含有2-1000個(gè)氨基酸，更優(yōu)選5-500個(gè)氨基酸。該術(shù)語包括合成的和從天然來源分離和純化的氨基酸聚合物。

術(shù)語"探針"意指(1)寡核苷酸或多核苷酸，無論是RNA或者是DNA，不管是作為純化的限制性內(nèi)切酶消化而天然存在或合成產(chǎn)生的，其能夠用與探針互補(bǔ)的序列復(fù)性或特異性地與帶有與探針互補(bǔ)的序列的多核苷酸雜交，或(2)能夠特異性地結(jié)合特殊蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段以基本排除其它蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段的肽或多肽。寡核苷酸或多核苷酸探針可以是或者單鏈的或者雙鏈的。探針的精確長度將取決于許多因素，包括溫度、來源和用途。例如，對于取決于目標(biāo)序列的復(fù)雜性的診斷應(yīng)用，寡核苷酸探針通常含有10-100,15-50，或15-25個(gè)核苷酸。在某些診斷應(yīng)用中，多核苷酸探針含有100-1000,300-600個(gè)核苷酸，優(yōu)選300個(gè)核苷酸。選擇"基本上"與不同鏈的特定目標(biāo)序列互補(bǔ)的本文所述的探針。這是指探針在一組預(yù)定條件下必須充分地互補(bǔ)，以與它們各自的目標(biāo)序列特異性地雜交或用它們各自的目標(biāo)序列復(fù)性。因此，探針序列不須反映目標(biāo)的精確的互補(bǔ)序列。例如，非互補(bǔ)核苷酸片段可連接至探針的5'或3'末端，探針序列的剩余部分與目標(biāo)序列互補(bǔ)。作為選擇，非互補(bǔ)堿基或較長序列可散布在探針中，前提是探針序列與目標(biāo)多核苷酸的序列具有充分的互補(bǔ)性，以特異性地復(fù)性到目標(biāo)多核苷酸。肽或多肽探針可以是蛋白質(zhì)或肽特異性結(jié)合的任何分子，包括DNA(對于DNA結(jié)合蛋白質(zhì))、抗體、細(xì)胞膜受體、肽、輔因子、凝集素、糖、多糖、細(xì)胞、細(xì)胞膜、細(xì)胞器和細(xì)胞器膜(organellar membranes)。

術(shù)語"樣品"意指含有例如多核苷酸、多肽、抗體、代謝物等的任何動(dòng)物組織或液體，包括細(xì)胞和含有DNA和RNA的其它組織。實(shí)例包括脂肪、血液、軟骨、結(jié)締組織、上皮、淋巴結(jié)、肌肉、神經(jīng)、痰等。樣品可以是固體或液體并可以是DNA、RNA、cDNA、體液如血液或尿、細(xì)胞、細(xì)胞制備物或可溶性部分或其介質(zhì)等分試樣、染色體、細(xì)胞器等。

術(shù)語"單一包裝"意指試劑盒的成分與或和一種或多種容器物理地聯(lián)系在一起并被認(rèn)為是制備、分配、銷售或使用的單位。容器包括，但不限于袋、盒、瓶、熱塑塑料包裝、裝訂組件(stapled)或粘貼組件(affixed components)，或其組合。單一包裝可以是各食物組分物理地聯(lián)合在一起的多個(gè)容器，以致它們被認(rèn)為是制備、分配、銷售或使用的單位。

術(shù)語"有用的變體(variations)"意指(1)對于多核苷酸，多核苷酸的補(bǔ)體；多核苷酸及其補(bǔ)體的同系物；多核苷酸、其補(bǔ)體，及其同系物的變異體；和多核苷酸、其補(bǔ)體、其同系物，及其變異體的片段和(2)對于多肽，多肽的同系物；多肽及其同系物的變異體；和多核苷酸、其同系物及其變異體的片段。

術(shù)語"虛擬包裝(virtual package)"意指試劑盒的成分與一種或多種實(shí)際的或虛擬的試劑盒組件上的使用說明書結(jié)合，指示用戶如何獲得其它成分，如在含有一種成分的袋中并指示用戶去網(wǎng)站的指南，接觸已記錄的信息，觀察視感信息，或接觸保健工作者或指導(dǎo)者以獲得如何使用試劑盒的說明書。

術(shù)語"標(biāo)準(zhǔn)品"意指(1)含有來自瘦動(dòng)物的組織(如果測試過重動(dòng)物)或來自過重動(dòng)物的組織(如果測試瘦動(dòng)物)的對照樣品，或者(2)含有來自瘦動(dòng)物或過重試驗(yàn)動(dòng)物的組織(其在相應(yīng)的瘦動(dòng)物或過重動(dòng)物中未暴露于待檢測的試驗(yàn)基片)的對照樣品，以確定試驗(yàn)基片是否引起差異基因表達(dá)，如在關(guān)于其用途的文字中說明的。

術(shù)語"嚴(yán)格的條件"意指(1)雜交于42℃在含0.1％牛血清白蛋白、0.1％Ficoll(菲科爾)、0.1％聚乙烯吡咯烷酮、50mM磷酸鈉緩沖液(pH6.5)、750mM NaCl、75mM檸檬酸鈉的50％(vol/vol)甲酰胺中進(jìn)行，(2)雜交于42℃在50％甲酰胺、5x SSC(0.75M NaCl、0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH 6.8)、0.1％焦磷酸鈉、5x Denhardt's溶液、超聲處理的蛙魚精(salmon sperm)DNA(50μg/ml)、0.1％SDS和10％硫酸葡聚糖中進(jìn)行；于42℃以0.2x SSC和0.1％SDS洗滌，或于50℃用0.015M NaCl、0.0015M檸檬酸鈉、0.1％Na₂SO₄或類似的方法，采用類似的低離子強(qiáng)度和高溫洗滌劑和類似的變性劑洗滌。

術(shù)語"物質(zhì)"意指可有效用于診斷、預(yù)測或調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的元素、化合物,分子，或其混合物或任何其它材料，包括任何藥物、化學(xué)實(shí)體，或生物學(xué)實(shí)體。

術(shù)語"siRNA"意指形成雙鏈RNA的多核苷酸，當(dāng)siRNA在與基因相同的細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，其減少或抑制基因表達(dá)。該術(shù)語包括由互補(bǔ)鏈形成的雙鏈RNA。雜交形成雙鏈分子的siRNA互補(bǔ)部分典型地具有基本的或完全的同一性。典型地，siRNA含有至少15-50個(gè)核苷酸且雙鏈siRNA含有15-50堿基對,優(yōu)選地20-30個(gè)核苷酸和堿基對。

術(shù)語"特異性結(jié)合"意指兩個(gè)分子之間的特異性的和精確的相互作用，這取決于它們的結(jié)構(gòu)，特別是它們的分子側(cè)基。例如，調(diào)節(jié)蛋白插入DNA分子的大溝，沿著兩個(gè)單鏈核酸之間的主鏈進(jìn)行氫鍵結(jié)合，或在蛋白的表位和激動(dòng)劑、拮抗劑，或抗體之間結(jié)合。

術(shù)語"特異性地雜交"意指充分互補(bǔ)序列的兩個(gè)單鏈多核苷酸之間的綴合使得此類雜交在本領(lǐng)域通常使用的預(yù)定條件下進(jìn)行(有時(shí)稱為"基本互補(bǔ)")。例如，依據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，該術(shù)語可以指多核苷酸探針與包含在單鏈DNA或RNA分子中的基本互補(bǔ)序列的雜交，指多核苷酸探針與非互補(bǔ)序列的單鏈多核苷酸雜交的基本排斥。

術(shù)語"變異體"意指(1)含有一種或多種核苷酸的任何取代、變化、修飾、替換、從多核苷酸序列缺失一種或多種核苷酸，或向該多核苷酸序列添加一種或多種核苷酸并與原始序列具有相同或基本相同的特性和執(zhí)行相同或基本相同的功能的多核苷酸序列，以及(2)含有一種或多種氨基酸的任何取代、變化、修飾、替換、從多肽序列缺失一種或多種氨基酸，或向該多肽序列添加一種或多種氨基酸并與原始序列具有相同或基本相同的特性和執(zhí)行相同或基本相同的功能的多肽序列。因此，該術(shù)語包括單一的核苷酸多態(tài)性(SNPs)和等位變異體并包括在多肽中的保守和非-保守氨基酸取代。該術(shù)語也包括在自然界不會(huì)出現(xiàn)的多核苷酸或多肽的化學(xué)衍化和在合適時(shí)用核苷酸或氨基酸取代核苷酸或氨基酸。

本發(fā)明不限于本文描述的具體方法、方案和試劑，因?yàn)樗鼈兛梢宰兓?。此外，本文所用的術(shù)語只用于描述具體實(shí)施方案的目的并不意欲限制本發(fā)明的范圍。如在此和在所附權(quán)利要求書中所用的，單數(shù)形式"一"、"一個(gè)"和"該"包括復(fù)數(shù)形式，除非在文中其它地方另有明確規(guī)定，如提及"一個(gè)變異體"時(shí)包括多個(gè)變異體。此外，定義的術(shù)語包括在正確的語法文句中所用術(shù)語的變化，如術(shù)語"特異性地結(jié)合"包括"特異性結(jié)合"和該術(shù)語的其它形式。類似地，單詞"包含"、"包括"和"含有"應(yīng)解釋為包含在內(nèi)，而不是排除在外。

除非在其它地方另有限定，本文所用的所有科技術(shù)語和任何縮寫具有本發(fā)明領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同意義。雖然在本發(fā)明的實(shí)踐中可使用任何組合物、方法、制備的物品，或與本文描述的那些類似的或等價(jià)的其它方式或材料，優(yōu)選的組合物、方法、制備的物品，或其它方式或材料在本文中描述。

本文引用或參考的所有專利、專利申請、出版物和其它參考文獻(xiàn)在法律允許的程度下通過引用結(jié)合到本文中。這些參考文獻(xiàn)的討論僅僅意欲概括本文作出的論斷。并不認(rèn)可任何此類專利、專利申請、出版物或參考文獻(xiàn)，或其任何部分，是本發(fā)明相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)并明確地保留對此類專利、專利申請、出版物和其它參考文獻(xiàn)準(zhǔn)確性和相關(guān)性進(jìn)行挑戰(zhàn)的權(quán)利。

基因蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種或多種基因或基因片段("基因"如本文所定義)，其與瘦動(dòng)物的脂肪組織和/或淋巴細(xì)胞相比，差異地表達(dá)于過重動(dòng)物的脂肪組織和/或淋巴細(xì)胞中。本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即差異性表達(dá)的基因由過重動(dòng)物的脂肪組織中的445種多核苷酸表示(與瘦動(dòng)物的脂肪組織相比)和由取自過重動(dòng)物淋巴細(xì)胞的1767種多核苷酸表示(與取自瘦動(dòng)物的淋巴細(xì)胞相比)。本發(fā)明還基于參與脂肪酸代謝的7種主基因的鑒定，這些基因在體重過重和瘦動(dòng)物之間差異地表達(dá)并列于表3中。這些主基因代表丙酮酸脫氫酶激酶家族、內(nèi)毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶家族和溶質(zhì)載體家族27(脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)的成員和與長鏈脂肪酸的延長有關(guān)的基因、與丙酮酸脫氫酶(dehedrogenase)激酶家族和內(nèi)毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶家族有關(guān)的基因是最重要的并在某些情況下與限速酶速率有關(guān)。通過使用Affymetrix技術(shù)，比較取自診斷為過重動(dòng)物的脂肪組織和淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)與取自診斷為瘦動(dòng)物的脂肪組織和淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)，鑒定所述基因。多核苷酸示于表1、2和3中。這些表含有Affymetrix Probe Identification Number(Affymetrix探針標(biāo)識(shí)號(hào)碼)(此處為"APIN")、p-值、q-值、倍數(shù)表達(dá)(肥胖的/瘦的)、所述探針的top BLAST注釋、最高BLAST Hit的檢索號(hào)(Accession Number of Highest BLAST Hit)、基因符號(hào)的信息，而最終的基因描述在最后一欄中給出。在某些情況下，假設(shè)的或?qū)嶋H的基因描述可使用熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的方法，從BLAST數(shù)據(jù)庫獲得。一般說來，假設(shè)的或?qū)嶋H的基因功能通過(1)鑒定各基因與瘦動(dòng)物比較的具有表達(dá)于過重動(dòng)物中的1.3倍或以上基因的APlN，(2)通過將APlN輸入公眾可獲得的Affymetrix數(shù)據(jù)庫確定每一個(gè)這樣基因的核苷酸序列，該數(shù)據(jù)庫將AIPN號(hào)碼與序列聯(lián)系起來，和(3)將核苷酸序列輸入國立衛(wèi)生研究所(National Institutes of Health)提供的BLAST數(shù)據(jù)庫并由與數(shù)據(jù)庫的同源序列配對所生成的序列測定假設(shè)的或?qū)嶋H的基因功能來測定。

多核苷酸和基因通過測定取自診斷為過重犬科動(dòng)物的脂肪組織和淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)與取自診斷為瘦犬科動(dòng)物的脂肪組織和淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)的差異來鑒定?；虮磉_(dá)的變化可通過熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的任何方法確定。一般說來，基因表達(dá)的變化通過測定轉(zhuǎn)錄(測定由基因產(chǎn)生的mRNA的量)或測量轉(zhuǎn)譯(測定由基因產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的量)來測定。由基因產(chǎn)生的RNA或蛋白質(zhì)的量可使用熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的用于定量多核苷酸和蛋白質(zhì)的任何方法測定。一般說來，RNA表達(dá)使用方法，包括但不限于聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)(包括，但不限于逆轉(zhuǎn)錄-PCR(RT-PCR)和定量實(shí)時(shí)(real-time)PCR(qPCR))、RNase保護(hù)、RNA印跡法和其它雜交方法測定。測量的RNA典型地為mRNA或逆轉(zhuǎn)錄mRNA或互補(bǔ)DNA(cDNA)的形式。蛋白質(zhì)或多肽表達(dá)使用各種比色法、熒光和光譜檢定法和包括但不限于蛋白質(zhì)印跡法、ELISA、Multiple Reaction Monitoring(多重反應(yīng)監(jiān)測)、反相和抗體陣列在內(nèi)的方法測定。在優(yōu)選的方法中，基因表達(dá)的變化使用購自Affymetrix,Inc.的Affymetrix Canine-1和Caninc-2(犬科動(dòng)物-1和犬科動(dòng)物-2基因芯片)和指示使用此類芯片測定基因表達(dá)的使用說明書測定。

一般說來，與瘦動(dòng)物比較的于過重動(dòng)物中的差異基因表達(dá)通過測定至少一種基因的表達(dá)來確定，優(yōu)選地，測定兩種或更多種差異地表達(dá)基因的表達(dá)以提供基因表達(dá)譜或基因表達(dá)概況，更優(yōu)選地，測定多種差異地表達(dá)基因的表達(dá)。

多核苷酸、基因、由多核苷酸和基因編碼的蛋白質(zhì)，以及補(bǔ)體、同系物、變異體，或基于序列的片段用于與動(dòng)物脂肪組織的量有關(guān)的各種預(yù)測和診斷化驗(yàn)和用于篩選試驗(yàn)物質(zhì)，以確定是否該物質(zhì)可用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量。其它的用途將從包括于本文中的本發(fā)明的描述而變得顯而易見。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供包含兩種或更多種多核苷酸的組合，與瘦動(dòng)物相比，所述多核苷酸差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中，或者兩種或更多種多核苷酸的表達(dá)所產(chǎn)生的兩種或更多種蛋白質(zhì)，與瘦動(dòng)物相比其差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合包含兩種或更多種多核苷酸或由選自表1和2并優(yōu)選選自表3的多核苷酸表達(dá)的蛋白質(zhì)，優(yōu)選地，所述組合包含多種多核苷酸或由表1和2和優(yōu)選自表3鑒定的多核苷酸表達(dá)的蛋白質(zhì)，一般來說，對于特殊的組和用途，10、20、50、100、200或更多種多核苷酸或蛋白質(zhì)是合適的。當(dāng)所述組合包含一或多個(gè)片段時(shí)，所述片段可以具有保留原始多核苷酸或蛋白質(zhì)的特性和功能的任何大小,優(yōu)選地保留原始多核苷酸或蛋白質(zhì)的30％、60％或90％。多核苷酸和蛋白質(zhì)可來自任何動(dòng)物，優(yōu)選犬科動(dòng)物和貓科動(dòng)物，最優(yōu)選犬科動(dòng)物。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供包含兩種或更多種寡核苷酸或多核苷酸探針的組合物，其適合于檢測與瘦動(dòng)物相比的差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述探針包含選自表1和2和優(yōu)選地選自表3的多核苷酸。在另一實(shí)施方案中，所述探針包含這樣的多核苷酸的有用的變體。所述探針含有足夠數(shù)目的核苷酸以特異性地(基本排他性地)與合適的互補(bǔ)多核苷酸雜交。在某些實(shí)施方案中，所述探針包含至少10、15、20、25或30種核苷酸。在一些實(shí)施方案中，所述探針含有更多種核苷酸并包含至少30、50、70、90或100種核苷酸，或更多。所述探針可包含本發(fā)明的全長功能基因，優(yōu)選地，所述組合物包含適合于檢測與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因的多種多核苷酸探針，一般為10、50、200、500、1000或2000，甚或更多種探針。多核苷酸探針使用熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的方法制得或獲得，如由天然來源分離和純化的核苷酸在體外合成，或酶促裂解本發(fā)明的基因。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供適合于檢測與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的多種基因的表達(dá)的裝置。所述裝置包含具有本發(fā)明的附接于基片已知位置的多種寡核苷酸或多核苷酸探針的基片。所述裝置基本為本文描述的寡核苷酸或多核苷酸探針的固定化譯本(immobilized version)。所述裝置可用于快速和特異性地檢測基因和多核苷酸及其表達(dá)模型和概況。典型地，此類探針與基片或類似的固體載體連接。并使含有一種或多種多核苷酸(如，基因、PCR產(chǎn)物、連接酶鏈反應(yīng)(LCR)產(chǎn)物、已使用擴(kuò)增技術(shù)合成的DNA序列，或其混合物)的樣品與探針接觸，以使樣品多核苷酸可與探針雜交。無論是探針，樣品多核苷酸，或者兩者，通常用熒光或其它標(biāo)記物如抗生物素蛋白鏈菌素標(biāo)記，并使用熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的方法檢測。如果樣品多核苷酸被標(biāo)記，可通過檢測結(jié)合的熒光檢測雜交。如果探針被標(biāo)記，通常通過標(biāo)記技術(shù)檢測雜交。如果探針和樣品多核苷酸兩者均被標(biāo)記，通常通過監(jiān)測兩個(gè)結(jié)合的標(biāo)記物的接近性(proximity)產(chǎn)生的色移檢測雜交。各種標(biāo)記策略和標(biāo)記物是熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的，特別是對于熒光標(biāo)記物，優(yōu)選地，所述探針固定于與本領(lǐng)域已知的那些基片比較而適合于形成陣列(已知有幾個(gè)名稱包括DNA微陣列、基因芯片、生物芯片、DNA芯片和基因陣列)的基片上。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供包含適合于檢測與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因表達(dá)的兩種或更多種肽或多肽探針的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，探針包含特異性結(jié)合于由一種或多種多核苷酸的表達(dá)所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的肽或多肽，所述多核苷酸包含選自表1和2的序列。在另一方面，探針包含特異性結(jié)合于由一種或多種多核苷酸的表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的肽或多肽，所述多核苷酸包含選自表3的序列。在另一方面，探針包含特異性結(jié)合于此類多肽的一種或多種有用變體的表達(dá)所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的肽或多肽。探針含有特異性結(jié)合于合適多肽的足夠數(shù)量的氨基酸，優(yōu)選地，探針包含至少4、10、20、40或80種氨基酸。在一些實(shí)施方案中，探針含有更多的氨基酸并包含至少100種或以上的氨基酸。探針可包含衍生自由本發(fā)明鑒定的全長功能基因表達(dá)的全長功能蛋白質(zhì)，優(yōu)選地，本發(fā)明提供適合于檢測與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因的多種多肽探針，更優(yōu)選10、50、100、500或1000種或以上的此類探針的集合。在一個(gè)實(shí)施方案中，探針為抗體，優(yōu)選為單克隆抗體。

多肽探針可依據(jù)常規(guī)方法制得，如使用由本發(fā)明的多核苷酸和本領(lǐng)域已知的方法提供的核苷酸序列數(shù)據(jù)。這樣的方法包括，但不限于從細(xì)胞中直接分離多肽，分離或合成的DNA或RNA編碼多肽和使用DNA或RNA以產(chǎn)生重組產(chǎn)物，從各氨基酸化學(xué)合成多肽，以及通過化學(xué)裂解現(xiàn)有的多肽產(chǎn)生多肽片段。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供適合于檢測與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的多種基因的表達(dá)的裝置。所述裝置包含具有附接于基片已知位置上的本發(fā)明的多個(gè)肽或多肽探針的基片。裝置基本為本文描述的肽或多肽探針的固定譯本。裝置可用于蛋白質(zhì)及其-表達(dá)模型的快速和特異性檢測。典型地，此類探針與基片連接而含有一種或多種蛋白質(zhì)的樣品暴露于探針，以使樣品蛋白質(zhì)可與探針雜交。在某些實(shí)施方案中，所述探針、樣品蛋白質(zhì)，或這兩者，通常用熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的熒光或其它試劑標(biāo)記和檢測。一般說來，用于讀出多核苷酸微陣列的相同方法和裝置可應(yīng)用于蛋白質(zhì)陣列，優(yōu)選地，所述探針固定于適合形成陣列的基片上。

測定樣品中的蛋白質(zhì)的量或濃度的方法是熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的。這樣的方法包括放射免疫測定法、競爭性-結(jié)合測定法、蛋白質(zhì)印跡分析和ELlSA測定法。使用抗體、多克隆和單克隆抗體的方法是合適的。這樣的抗體對于蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)抗原決定部位或蛋白質(zhì)片段可以是免疫學(xué)上特異性的。

本發(fā)明的某些實(shí)施方案使用抗體以檢測和定量本發(fā)明的多核苷酸表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。雖然蛋白質(zhì)可通過免疫沉淀反應(yīng)、親和力分離、蛋白質(zhì)印跡分析、蛋白質(zhì)陣列等檢測，優(yōu)選的方法是采用ELISA技術(shù)，其中抗體被固定于固體載體上，而目標(biāo)序列蛋白質(zhì)或肽暴露于固定化抗體?；蛘咛结?，或者目標(biāo)序列，或者兩者可使用已知的方法標(biāo)記。

在某些實(shí)施方案中，與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的多種基因的表達(dá)模式或概況采用檢測多核苷酸或多肽的探針陣列觀察。在某些實(shí)施方案中，可利用寡核苷酸或多核苷酸探針的陣列。而另一個(gè)實(shí)施方案可利用特異性結(jié)合于本發(fā)明的差異地表達(dá)的基因產(chǎn)品的抗體或其它蛋白質(zhì)的陣列。這樣的陣列可以是商業(yè)上可獲得的或者它們可使用熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的方法定制，如在固體載體上原位(in-situ)合成或者通過微印刷技術(shù)將預(yù)合成的探針附接于固體載體上。在各種實(shí)施方案中，多核苷酸或多肽探針的陣列被定制以特異性地檢測由本發(fā)明的差異地表達(dá)基因產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄物或蛋白質(zhì)。

在某些實(shí)施方案中，多核苷酸或多肽探針被定制以特異性地檢測由表2中鑒定的兩種或更多種多核苷酸或基因產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄物或蛋白質(zhì)。這些探針被設(shè)計(jì)以檢測與動(dòng)物的脂質(zhì)和葡萄糖代謝途徑有關(guān)的基因。在另一個(gè)實(shí)施方案中，多核苷酸或多肽探針的轉(zhuǎn)錄被定制以特異性地檢測由表3中鑒定的兩種或更多種多核苷酸或基因產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄物或蛋白質(zhì)。這些探針被設(shè)計(jì)以檢測特別是與瘦動(dòng)物比較而與過重動(dòng)物相關(guān)的基因。

在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供檢測樣品中與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因的差異表達(dá)的方法。方法包括(a)使包含與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的多種多核苷酸探針的組合與樣品中的多核苷酸雜交，形成一種或多種雜交復(fù)合物；(b)任選地，使包含與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的多種多核苷酸探針的組合與標(biāo)準(zhǔn)品中的多核苷酸雜交，形成一種或多種雜交復(fù)合物；(c)檢測來自樣品的雜交復(fù)合物并任選地檢測得自步驟(b)的標(biāo)準(zhǔn)品；和(d)比較來自樣品的雜交復(fù)合物與來自標(biāo)準(zhǔn)品中的雜交復(fù)合物，其中標(biāo)準(zhǔn)品和樣品之間雜交復(fù)合物的量之差指示樣品中與瘦動(dòng)物相比，差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中基因的差異表達(dá)。在各種實(shí)施方案中，多種多核苷酸探針選自表1和2并優(yōu)選選自表3。這些多核苷酸被用于制備與樣品多核苷酸雜交以形成雜交復(fù)合物的探針，檢測所述雜交復(fù)合物檢測并與標(biāo)準(zhǔn)品的雜交復(fù)合物比較。在一些實(shí)施方案中，樣品多核苷酸在雜交前被擴(kuò)增。在一些實(shí)施方案中，探針結(jié)合于基片，優(yōu)選固定在陣列中。

步驟(b)和部分步驟(c)是任選的并可使用，如果相對同時(shí)地進(jìn)行兩種或更多種測試系統(tǒng)的比較的話。然而，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于比較的標(biāo)準(zhǔn)品基于先前使用所述方法獲得的數(shù)據(jù)。

這些探針暴露于樣品以形成雜交復(fù)合物，其被檢測并與標(biāo)準(zhǔn)品的雜交復(fù)合物比較。得自樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的雜交復(fù)合物之間的差表示樣品中多核苷酸的差異表達(dá)，因而表示與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因的差異表達(dá)。在優(yōu)選的實(shí)施方案，制備探針以特異性地檢測由本發(fā)明鑒定的一種或多種基因或基因片段產(chǎn)生的多核苷酸或其片段。檢測雜交復(fù)合物的方法是熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括在雜交前使動(dòng)物或樣品暴露于試驗(yàn)基片。然后，比較為是否試驗(yàn)基片改變樣品中與瘦動(dòng)物相比，差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因表達(dá)的指征，特別是與肥胖有關(guān)的基因。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供檢測與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物樣品中的基因的差異表達(dá)的方法。方法包括(a)使包含多種多肽探針的組合與樣品中的蛋白質(zhì)在允許探針和所述蛋白質(zhì)之間發(fā)生特異性結(jié)合的條件下反應(yīng)，其中的被探針結(jié)合的蛋白質(zhì)與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中；(b)任選地，使包含多種多肽探針的組合與標(biāo)準(zhǔn)品中的蛋白質(zhì)在允許探針和所述蛋白質(zhì)之間發(fā)生特異性結(jié)合的條件下反應(yīng)，其中的被探針結(jié)合的蛋白質(zhì)與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中；(c)檢測樣品中的特異性結(jié)合并任選地檢測得自步驟(b)的標(biāo)準(zhǔn)品的特異性結(jié)合；和(d)比較樣品中的特異性結(jié)合與標(biāo)準(zhǔn)品中的特異性結(jié)合，其中標(biāo)準(zhǔn)品中的特異性結(jié)合與樣品中的特異性結(jié)合之間的差表示與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物樣品中的基因的差異表達(dá)。

在各種實(shí)施方案中，所述多種多肽探針為特異性結(jié)合于由選自表1和2并優(yōu)選選自表3的一種或多種多核苷酸和此類多核苷酸的有用變體的表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的探針。這些多核苷酸被用于制備特異性結(jié)合于蛋白質(zhì)的探針，所述蛋白質(zhì)被檢測并與標(biāo)準(zhǔn)品的蛋白質(zhì)比較。在一些實(shí)施方案中，所述探針結(jié)合于基片,優(yōu)選地結(jié)合于陣列中。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述探針為抗體。

步驟(b)和部分步驟(c)是任選的并可使用，如果相對同時(shí)地進(jìn)行兩種或更多種測試系統(tǒng)的比較的話。然而，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于比較的標(biāo)準(zhǔn)品基于先前使用所述方法獲得的數(shù)據(jù)。

這些探針暴露于樣品以形成特異性結(jié)合，其被檢測并與標(biāo)準(zhǔn)品的特異性結(jié)合比較。得自樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的特異性結(jié)合之間的差表示蛋白質(zhì)的差異表達(dá)，因而表示樣品中與瘦動(dòng)物相比，差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因(特別是樣品中的肥胖相關(guān)基因)的差異表達(dá)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，制備探針以特異性地檢測由本發(fā)明鑒定的一種或多種基因或基因片段產(chǎn)生的蛋白質(zhì)或其片段。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括在多肽與蛋白質(zhì)反應(yīng)前，使動(dòng)物或樣品暴露于試驗(yàn)基片。然后，比較為是否試驗(yàn)基片改變與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因表達(dá)的指征，特別是樣品中與肥胖有關(guān)的基因。

在另一個(gè)方面，當(dāng)試圖調(diào)節(jié)響應(yīng)于脂肪組織調(diào)節(jié)方案的動(dòng)物脂肪組織的量時(shí)，檢測樣品中與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因表達(dá)的方法被用于監(jiān)測動(dòng)物的進(jìn)展。該方法在調(diào)節(jié)方案期間的間隔時(shí)進(jìn)行，優(yōu)選通過比較在調(diào)節(jié)方案期間兩個(gè)或更多個(gè)點(diǎn)時(shí)該方法的結(jié)果監(jiān)測的調(diào)節(jié)方案和動(dòng)物'的進(jìn)展期間設(shè)定的間隔時(shí)進(jìn)行。與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因的表達(dá)，特別是肥胖相關(guān)基因，或基因表達(dá)譜中的變化，或由比較導(dǎo)致的任何變化的缺乏表明調(diào)節(jié)方案的有效性。例如，被設(shè)計(jì)以減少動(dòng)物脂肪組織的量的脂肪組織調(diào)節(jié)方案可以被監(jiān)測并且表明是有效的，如果與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中基因，特別是肥胖相關(guān)基因的基因表達(dá)的量響應(yīng)于所述方案的刺激而隨時(shí)間的推移下降的話。類似地，增加瘦動(dòng)物或過瘦動(dòng)物的脂肪組織的方案應(yīng)增加此類基因的表達(dá)概況。調(diào)節(jié)方案可以是調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的任何計(jì)劃，如食譜、鍛煉、藥物，或其它類似的方案。

在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供用于測定試驗(yàn)基片對與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因的表達(dá)概況的作用的方法和用于篩選試驗(yàn)基片以確定是否其很可能有用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的方法。方法包括(a)通過在試驗(yàn)系統(tǒng)中，在試驗(yàn)基片的不存在下，測定選自表1和2和優(yōu)選選自表3的兩種或更多種多核苷酸或其有用的變體的轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)譯產(chǎn)物，來測定第一表達(dá)概況；(b)通過在試驗(yàn)系統(tǒng)中，在試驗(yàn)基片的存在下，測定選自表1和2和優(yōu)選選自表3的兩種或更多種多核苷酸或其有用的變體的轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)譯產(chǎn)物，來測定第二表達(dá)概況；和(c)比較第一表達(dá)概況與第二表達(dá)概況。

第二表達(dá)概況與第一表達(dá)概況比較的1.3倍或以上的變化表明與瘦動(dòng)物相比，試驗(yàn)基片影響在過重動(dòng)物中差異地表達(dá)的基因表達(dá)并表明試驗(yàn)基片很可能有益于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因?yàn)榕c脂肪酸代謝有關(guān)的主基因和變化是第一表達(dá)概況與第二表達(dá)概況之間的至少兩個(gè)基因的表達(dá)的1.3倍或以上變化。本發(fā)明也提供使用所述方法鑒定的物質(zhì)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸選自表3或其有用的變體且所述變化為1.3倍或更高。

在一個(gè)實(shí)施方案中，試驗(yàn)系統(tǒng)是體外試驗(yàn)系統(tǒng)如組織培養(yǎng)物、細(xì)胞提取物，或細(xì)胞系。在另一方面，試驗(yàn)系統(tǒng)是體內(nèi)試驗(yàn)系統(tǒng)，即動(dòng)物如犬科動(dòng)物。在其它實(shí)施方案中，試驗(yàn)系統(tǒng)是離體組織系統(tǒng)或硅上系統(tǒng)(in silico system)。

試驗(yàn)物質(zhì)可以是可具有對與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的多核苷酸或基因(特別是肥胖相關(guān)基因)的作用的任何物質(zhì)。試驗(yàn)物質(zhì)包括，但不限于氨基酸；蛋白質(zhì)、肽、多肽、核酸、寡核苷酸、多核苷酸、小分子、大分子、維生素、礦物質(zhì)。單糖；復(fù)糖；多糖；碳水化合物；中-鏈甘油三酯(MCTs)；三?；视王?TAGs)；n-3(ω-3)脂肪酸包括DHA、EPA、ALA；n-6(ω-6)脂肪酸包括LA、γ-亞麻酸(GLA)和ARA；SA、MA、共軛亞油酸(CLA)；膽堿來源如卵磷脂；脂肪-可溶性維生素包括維生素A及其前體如類胡蘿卜素(如，β-胡蘿卜素)、維生素D來源如維生素D₂(麥角鈣化甾醇)和維生素D₃(膽鈣化甾醇)、維生素E來源如生育酚(如，α-生育酚)和生育三烯酚類和維生素K來源如維生素K₁(葉綠醌)和維生素K₂(甲萘醌)；水-可溶性維生素包括B維生素如核黃素、煙酸(包括煙酰胺和尼克酸)、吡哆醇、泛酸、葉酸、生物素和鈷維生素；和維生素C(抗壞血酸)；抗氧化劑，包括上文列出的一些維生素，特別是維生素E和C；也包括生物黃酮類如兒茶素、五羥黃酮和茶黃素；醌類如泛醌；類胡蘿卜素如番茄紅素和番茄黃素；白藜蘆醇；和α-硫辛酸；L-內(nèi)毒堿；D-苧烯；葡糖胺；S-腺苷甲硫氨酸；和殼聚糖。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，試驗(yàn)物質(zhì)為可加入到食物或作為補(bǔ)充劑消費(fèi)的營養(yǎng)素。實(shí)例包括，但不限于脂肪酸如ω-3脂肪酸(如，DHA和EPA)和ω-6脂肪酸(如，ARA)、內(nèi)毒堿、甲硫氨酸、維生素C、維生素E和維生素D。

在優(yōu)選的實(shí)施方案中，影響與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因表達(dá)，特別是肥胖相關(guān)基因表達(dá)的有用物質(zhì)可使用在同時(shí)待審的US臨時(shí)專利申請?zhí)?0/657980(2005年3月2日提交)和任何隨后的要求其優(yōu)先權(quán)的US或外國專利申請中公開的方法鑒定。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括用于配制預(yù)測動(dòng)物有可能變得過重的預(yù)示劑或開發(fā)診斷動(dòng)物發(fā)胖的診斷劑的方法。方法包括確定選自表1和2的一種或多種多核苷酸或其有用的變體或由選自表1,2的一種或多種多核苷酸或其有用變體的表達(dá)產(chǎn)生的特異性結(jié)合于蛋白質(zhì)的一種或多種多肽是否差異地表達(dá)于所述動(dòng)物中(與一種或多種瘦動(dòng)物比較)。如果這種比較表明多核苷酸差異地表達(dá)于所述動(dòng)物(與瘦動(dòng)物比較達(dá)1.3倍或以上)時(shí)，則確定動(dòng)物有可能變得過重或確定動(dòng)物過重。

在各種實(shí)施方案中，預(yù)測或診斷均基于選自表3的多核苷酸，或此類多肽的有用的變體。

用于比較的瘦動(dòng)物的表達(dá)概況可從與待測動(dòng)物的表達(dá)概況同時(shí)發(fā)生的一種或多種瘦動(dòng)物或從瘦動(dòng)物表達(dá)概況的數(shù)據(jù)庫獲得，優(yōu)選地，可獲得隨時(shí)間推移積累的瘦動(dòng)物表達(dá)概況的數(shù)據(jù)庫以用作參考。

確定多核苷酸或多肽是否差異地表達(dá)可通過使用熟練的專業(yè)技術(shù)人員已知的方法(其中一些方法已在本文中描述)檢測多核苷酸或多肽完成。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供用于處理動(dòng)物的基因組或基因組的表達(dá)的方法，特別是非-人動(dòng)物。方法包括干擾與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因的表達(dá)，優(yōu)選地使用利用選自表1和2和優(yōu)選選自表3的多核苷酸或其有用的變體構(gòu)建的寡核苷酸或多核苷酸。

處理基因組的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。這樣的方法包括轉(zhuǎn)基因和敲除動(dòng)物的生產(chǎn)和轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)譯的破壞。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用選自表1和2的一種或多種多核苷酸或其有用的變體，以制備用于干擾或"敲除"動(dòng)物的相應(yīng)的內(nèi)源性基因的構(gòu)件。這種方法生產(chǎn)具有對基因座位的無效突變的動(dòng)物。在其它實(shí)施方案中，所述動(dòng)物顯示與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因表達(dá)的減少或完全消除，特別是肥胖相關(guān)基因。本發(fā)明也提供使用該方法產(chǎn)生的動(dòng)物。在各種實(shí)施方案中，基因組使用選自表3的一種或多種多核苷酸，或此類序列的有用的變體處理。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物優(yōu)選地為哺乳動(dòng)物，如嚙齒動(dòng)物如小鼠和大鼠，但可以是其它哺乳動(dòng)物如貓科動(dòng)物和犬科動(dòng)物。

處理基因組的表達(dá)的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。這樣的方法包括使用反義或siRNA分子和使用此類分子以干擾基因組的轉(zhuǎn)譯或轉(zhuǎn)錄。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自表1和2和優(yōu)選選自表3的一種或多種多核苷酸或其有用的變體被用于制備反義和類似的DNA結(jié)合分子，所述分子用于干擾轉(zhuǎn)錄或制備用于功能性破壞轉(zhuǎn)譯的短(小)干擾RNAs(siRNA)。簡言之，基因表達(dá)受到經(jīng)通過結(jié)合于DNA并預(yù)防轉(zhuǎn)錄的反義分子和通過RNA干擾(RNAi)或后-轉(zhuǎn)錄基因沉默(PTGS)的siRNA的抑制。siRNA分子通過在siRNA分子跨度的區(qū)域內(nèi)裂解mRNA分子靶向用于破壞的同源mRNA分子。因此，能夠靶向和裂解由肥胖相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的mRNA的siRNAs被用于減少或消除一種或多種此類基因的表達(dá)。在其它實(shí)施方案中，能夠結(jié)合于DNA的反義分子和能夠靶向和裂解mRNA的siRNAs由選自表1和2和優(yōu)選選自表3的一種或多種多核苷酸或基因或其有用的變體轉(zhuǎn)錄。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供適合于處理動(dòng)物基因組的組合物。組合物包含一種或多種干擾與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因(特別是肥胖相關(guān)基因)的表達(dá)的物質(zhì)，優(yōu)選地，所述物質(zhì)包含結(jié)合于一種或多種基因或它們的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物并干擾它們的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)譯的寡核苷酸或多核苷酸，最優(yōu)選地使用選自表1和2和優(yōu)選選自表3的多核苷酸或其有用的變體構(gòu)建的寡核苷酸或多核苷酸。在各種實(shí)施方案中，所述物質(zhì)包含反義分子或siRNAs。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括用于調(diào)節(jié)與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因(特別是肥胖相關(guān)基因)表達(dá)的方法，或調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的方法，該方法包含給予所述動(dòng)物基因表達(dá)或組織調(diào)節(jié)量的組合物，所述組合物包含DHA、EPA、EPA和DHA、ALA、LA、ARA、SA和MA中的一種或多種。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物包含以毫克/每千克體重每日(mg/kg/天)的量計(jì)的1-30，優(yōu)選3-15mg/kg/天的量的DHA；1-30，優(yōu)選3-15mg/kg/天的量的EPA；4/2-30/45，優(yōu)選9/6-18/12mg/kg/天的量的EPA/DHA二元組合物(Combo)(1.5:1比例)；10-100，優(yōu)選30-60mg/kg/天的量的ALA；30-600，優(yōu)選60-300mg/kg/天的量的LA；5-50，優(yōu)選15-30mg/kg/天的量的ARA；3-60，優(yōu)選6-30mg/kg/天的量的SA；3-60，優(yōu)選6-30mg/kg/天的量的MA；和6-120，優(yōu)選地12-60mg/kg/天的量的CLA(作為對照)。所述組合物可以適合于組合物的任何方式或形式給予動(dòng)物，優(yōu)選地，組合物以食物組合物或補(bǔ)充劑的形式經(jīng)口服給予動(dòng)物。食物組合物可以為用于動(dòng)物，特別是伴侶動(dòng)物如貓科動(dòng)物和犬科動(dòng)物的任何形式，如本領(lǐng)域已知的營養(yǎng)平衡食物組合物如干食物、半濕潤食物和濕食物。補(bǔ)充劑包括諸如片劑、膠囊劑和類似形式的劑型。在進(jìn)一步的方面，組合物與調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的一種或多種藥物或其它物質(zhì)聯(lián)合給予。藥物或物質(zhì)包括，但不限于抑制食欲、增加代謝，或干擾特別是來自食物的特殊營養(yǎng)素的吸收的物質(zhì)。實(shí)例包括，但不限于奧利司他(阻斷脂肪分解和吸收)、減食欲藥如右旋苯丙胺硫酸鹽(Dexedrine)(抑制食欲)、減食欲劑如芬氟拉明和苯丁胺(phentermine)，和西布曲明及苯丙醇胺。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供適合于調(diào)節(jié)與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因，特別是肥胖相關(guān)基因的表達(dá)，或調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的組合物。組合物包含基因表達(dá)或組織調(diào)節(jié)的量的DHA、EPA、EPA和DHA、ALA、LA、ARA、SA、MA中的一種或多種。在各種實(shí)施方案中，組合物包含以mg/kg/天計(jì)的足以給予動(dòng)物的1-30mg/kg/天的量的DHA；足以給予動(dòng)物的1-30mg/kg/天的量的EPA；足以給予動(dòng)物的4/2-30/45mg/kg/天的量的EPA/DHA二元組合物(Combo)(1.5:1比例)；足以給予動(dòng)物的10-100mg/kg/天的量的ALA；足以給予動(dòng)物的30-600mg/kg/天的量的LA；足以給予動(dòng)物的5-50mg/kg/天的量的ARA；足以給予動(dòng)物的3-60mg/kg/天的量的SA；足以給予動(dòng)物的3-60mg/kg/天的量的MA和足以給予動(dòng)物的6-120mg/kg/天的量的CLA(作為對照)。這樣的物質(zhì)用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量。優(yōu)選地，所述物質(zhì)影響多種此類基因的表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含一種或多種藥物或調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的其它物質(zhì)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括選擇包含在一或多個(gè)組或亞組中的動(dòng)物的方法。方法包括測定動(dòng)物(a)選自表1和2和優(yōu)選選自表3的多核苷酸或其有用的變體或(b)其各自特異性結(jié)合于由選自表1和2和優(yōu)選選自表3的一種或多種多核苷酸或其有用變體的表達(dá)所產(chǎn)生蛋白質(zhì)的多肽的表達(dá)概況并基于表達(dá)概況將動(dòng)物指定為某個(gè)組。所述組可以是任何有用的組，優(yōu)選參與研究實(shí)驗(yàn)、試驗(yàn)、臨床試驗(yàn)，或其它類似種類的組。例如，所述組可以是參與研究實(shí)驗(yàn)或臨床試驗(yàn)的組，所述研究實(shí)驗(yàn)或臨床試驗(yàn)需要一或多個(gè)對照組和一或多個(gè)治療組。在一個(gè)實(shí)施方案中，對照組包含瘦動(dòng)物和治療組包含過重動(dòng)物，或在另外的組中反之亦然?？蓽y定多種動(dòng)物的表達(dá)概況并基于概況的結(jié)果將這些動(dòng)物指派到對照組或治療組，即與標(biāo)準(zhǔn)品比較具有差異表達(dá)1.3倍或以上的動(dòng)物被指定為過重組，而與標(biāo)準(zhǔn)品比較差異表達(dá)為1.3倍或以下的動(dòng)物被指定為瘦動(dòng)物組。當(dāng)測試潛在藥物或其它物質(zhì)減少動(dòng)物脂肪組織的量的能力時(shí)，該方法對分派動(dòng)物至臨床試驗(yàn)是特別有用的。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供適合于處理與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因(特別是肥胖相關(guān)基因)相關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)。系統(tǒng)包含含有在瘦動(dòng)物和/或過重動(dòng)物中鑒定選自表1和2和優(yōu)選選自表3的一種或多種多核苷酸或其有用的變體和/或特異性結(jié)合于由選自表1和2和優(yōu)選選自表3的一種或多種多核苷酸或其有用變體表達(dá)所產(chǎn)生蛋白質(zhì)的多肽表達(dá)水平的信息的數(shù)據(jù)庫和與數(shù)據(jù)庫相互作用的用戶界面，特別是輸入、處理和檢查不同動(dòng)物或動(dòng)物分類，如瘦動(dòng)物或過重動(dòng)物的信息。在一個(gè)實(shí)施方案中，數(shù)據(jù)庫還包含鑒定由選自表1和2和優(yōu)選選自表3的一種或多種多核苷酸或其有用的變體編碼的一種或多種多肽的活性水平的信息。在另一方面，數(shù)據(jù)庫還包含選自表1和2和優(yōu)選選自表3的一種或多種多核苷酸或其有用的變體的序列信息。在其它實(shí)施方案中，數(shù)據(jù)庫含有描述一種或多種動(dòng)物品種中的基因的假設(shè)描述的額外信息。計(jì)算機(jī)系統(tǒng)為能包含和處理數(shù)據(jù)并與用戶相互作用的任何電子裝置，如被設(shè)計(jì)成易于使用本發(fā)明并輸出動(dòng)物狀況有關(guān)的結(jié)果的典型的計(jì)算機(jī)或分析儀器。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供使用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)或本發(fā)明以呈現(xiàn)鑒定與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因，特別是肥胖相關(guān)基因的表達(dá)概況的信息的方法。方法包括比較由選自表1和2和優(yōu)選選自表3的多核苷酸表達(dá)的兩種或更多種多核苷酸或蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，形成在計(jì)算機(jī)系統(tǒng)中的多核苷酸或蛋白質(zhì)的表達(dá)概況。

在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供適合于在試驗(yàn)系統(tǒng)中測定與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因，特別是肥胖相關(guān)基因的差異表達(dá)的試劑盒。所述試劑盒包含單一包裝中的分開的容器或在虛擬包裝中的分開的容器(以方便使用)和試劑盒組分，兩種或更多種適合于檢測與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因表達(dá)的探針，所述探針包含(a)選自表1和2和優(yōu)選選自表3的多核苷酸或其有用的變體或(b)特異性結(jié)合于選自表1和2和優(yōu)選選自表3的一種或多種多核苷酸或其有用的變體表達(dá)所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的多肽和以下方面的至少之一：(1)如何使用本發(fā)明的探針的使用說明書；(2)使用探針?biāo)匦璧脑噭┖驮O(shè)備；(3)適合于調(diào)節(jié)與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因表達(dá)的組合物；(4)適合于干擾與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因表達(dá)的組合物；(5)適合于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的食物組合物；和(6)一種或多種藥物或其它調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的物質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，探針固定于基片上，優(yōu)選固定在陣列中。

本發(fā)明的組合物

本發(fā)明包括犬科動(dòng)物食物組合物，其包含基于干物質(zhì)組成計(jì)的26wt.％-35wt.％的粗蛋白質(zhì)、基于干物質(zhì)組成計(jì)的7.5wt.％-8.5wt.％的粗脂肪、基于干物質(zhì)組成計(jì)的20wt.％-30wt.％的總食物纖維和基于干物質(zhì)組成計(jì)的10wt.％-20wt.％的粗纖維。

本發(fā)明也包括貓科動(dòng)物食物組合物，其包括基于干物質(zhì)組成計(jì)的30wt.％-37wt.％的粗蛋白質(zhì)、基于干物質(zhì)組成計(jì)的7.5wt.％-9wt.％的粗脂肪、基于干物質(zhì)組成計(jì)的30wt.％-35wt.％的總食物纖維和基于干物質(zhì)組成計(jì)的20wt.％-25wt.％的粗纖維。

在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可包含基于干物質(zhì)組成計(jì)的至少0.02％(或0.05％-10％，或0.1％-6％)重量的ω-3多不飽和脂肪酸含量。在一些實(shí)施方案中，ω-3多不飽和脂肪酸為DHA。在其它實(shí)施方案中，ω-3多不飽和脂肪酸為EPA。在另外的其它實(shí)施方案中，ω-3多不飽和脂肪酸包含DHA和EPA的混合物。

在其它實(shí)施方案中，包括ω-3多不飽和脂肪酸的組合物是食物。雖然提供液體和固體食物兩者，但固體食物是特別有利的。食物包括干食物和濕食物兩者。某些食物的非-多不飽和脂肪酸成分和有用的比例包括在下表列出的那些。

犬科動(dòng)物食物組合物

貓科動(dòng)物食物組合物

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的犬科動(dòng)物食物組合物包含有效促進(jìn)動(dòng)物生活質(zhì)量的量的各組分。這樣的組合物通常包含：

(a)基于干物質(zhì)組成計(jì)的26wt.％-35wt.％的粗蛋白質(zhì)，

(b)基于干物質(zhì)組成計(jì)的7.5wt.％-8.5wt.％的粗脂肪，

(c)基于干物質(zhì)組成計(jì)的20wt.％-30wt.％的總食物纖維，和

(d)基于干物質(zhì)組成計(jì)的10wt.％-20wt.％的粗纖維。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括貓科動(dòng)物食物組合物，其通常包含：

(a)基于干物質(zhì)組成計(jì)的30wt.％-37wt.％的粗蛋白質(zhì)，

(b)基于干物質(zhì)組成計(jì)的7.5wt.％-9wt.％的粗脂肪，

(c)基于干物質(zhì)組成計(jì)的30wt.％-35wt.％的總食物纖維，和

(d)基于干物質(zhì)組成計(jì)的20wt.％-25wt.％的粗纖維。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物通常包含：

(a)至少一種以下組分：

(i)至少0.05％(或0.05％-0.30％，或0.1％-0.30％，或0.1％-0.2％)的DHA，和

(ii)至少0.1％(或0.1％-0.5％，或0.2％-0.5％，或0.2％-0.3％)的EPA，

(b)至少15％(或15％-55％，或30％-55％，或33％-36％)的蛋白質(zhì)，

(c)至少9％(或9％-35％，或18％-35％，或18％-24％)的脂肪，和

(d)至少一種以下組分：

(i)至少250IU/kg(或250IU/kg-1500IU/kg，或500IU/kg-1500IU/kg，或500IU/kg-1100IU/kg)的維生素E，

(xii)至少50ppm(或50ppm-300ppm，或100ppm-300ppm，或100ppm-200ppm)的維生素C，

(xiii)至少1100ppm(或1100ppm-3500ppm，或2300ppm-3500ppm，或2300ppm-2350ppm)的牛磺酸，和

(xiv)至少200ppm(或200-750ppm，或400ppm-750ppm，或400-525ppm)的內(nèi)毒堿，和

(xv)至少0.05％(或0.05％-0.6％，或0.1％-0.6％，或0.1％-0.4％)胱氨酸。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物通常包含：

(a)0.02％(或0.05％-10％，或0.1％-6％)的至少一種ω-3多不飽和脂肪酸，和

(b)至少一種以下組分：

(xvi)10％-55％(或18％-30％，或33％-55％或18％-20％或33％-36％)蛋白質(zhì)，

(xvii)7％-35％(或18％-35％，或7％-24％，或14％-24％，或14％-16％或18％-24％)的脂肪。

(xviii)至少.05(或0.05ppm-7500ppm，或250-3600，或250ppm-1650ppm，或5ppm-225ppm，或0.05ppm-2.4ppm)抗氧劑，和

(xix)至少1000ppm(或1000ppm-5000ppm,3300ppm-5000ppm，或2000ppm-3000ppm，或3000ppm-4000ppm)膽堿。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物通常包含：

(a)至少一種以下組分：

(i)至少0.02％(或0.02％-0.3％，或0.05％-0.3％，或0.05％-0.2％)DHA，和(ii)至少0.1％(或0.1％-0.5％，或0.2％-0.5％，或0.2％-0.3％)的EPA，

(b)至少9％(或9％-30％，或18％-30％，或18％-20％)蛋白質(zhì)，

(c)至少7％(或7％-24％，或14％-24％，或14％-16％)的脂肪，

(d)至少一種以下組分：

(i)至少250IU/kg(或250IU/kg-1500IU/kg，或500IU/kg-1500IU/kg，或500IU/kg-1000IU/kg)的維生素E，

(xx)至少50ppm(或50ppm-500ppm，或100ppm-500ppm，或100ppm-301ppm)的維生素C，

(xxi)至少600ppm(或600ppm-2400ppm，或1260ppm-2400ppm，或1260ppm-1545ppm)?；撬幔?/p>

(xxii)至少50ppm(或50ppm-200ppm，或100-160，或100-155)的硫辛酸，和

(xxiii)至少50ppm(或50ppm-500ppm，或200ppm-500ppm，或200ppm-350ppm)的內(nèi)毒堿，

(e)至少1000ppm(或1000ppm-3200ppm，或2000ppm-3200ppm，或2000ppm-2500ppm)膽堿，

(f)至少50ppm(或50ppm-150ppm，或100ppm-150ppm，或100ppm-110ppm)錳，和

(g)至少0.4％(或0.4％-2％，或0.9％-2％，或0.9％-1.2％)賴氨酸，和

(h)至少0.4％-1.5％的甲硫氨酸.

在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物通常包含：

(a)至少一種以下組分：

(i)至少0.02％(或0.02％-0.3％，或0.05％-0.3％，或0.05％-0.2％)的DHA，和

(ii)至少0.1％(或0.1％-0.5％，或0.2％-0.5％，或0.2％-0.3％)的EPA，

(b)至少9％(或9％-30％，或18％-30％，或18％-20％)蛋白質(zhì),

(c)至少7％(或7％-24％，或14％-24％，或14％-16％)脂肪，

(d)至少一種以下組分：

(i)至少250IU/kg(或250IU/kg-1500IU/kg，或500lU/kg-1500IU/kg，或500IU/kg-1000IU/kg)的維生素E，

(xxiv)至少50ppm(或50ppm-500ppm，或100ppm-500ppm，或100ppm-301ppm)的維生素C，

(xxv)至少600ppm(或600ppm-2400ppm，或1260ppm-2400ppm，或1260ppm-1575ppm)牛磺酸，和

(xxvi)至少50ppm(或50ppm-200ppm，或100-160，或100-155)硫辛酸，和

(xxvii)至少50ppm(或50ppm-500ppm，或200ppm-500ppm，或200ppm-350ppm)內(nèi)毒堿，

(e)至少1000ppm(或1000ppm-3200ppm，或2000ppm-3200ppm，或2000ppm-2500ppm)膽堿，

(f)至少50ppm(或50ppm-150ppm，或100ppm-150ppm，或100ppm-110ppm)錳，和

(g)至少0.4％(或0.4％-2％，或0.9％-2％，或0.9％-1.2％)賴氨酸，和

(h)至少0.4％-1.5％的甲硫氨酸。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物通常包含：

(a)至少一種以下組分：

(i)至少0.05％(或0.05％-0.30％，或0.1％-0.30％，或0.1％-0.2％)DHA，和

(ii)至少0.1％(或0.1％-0.5％，或0.2％-0.5％，或0.2％-0.3％)的EPA，

(b)至少15％(或15％-55％，或30％-55％，或33％-36％)蛋白質(zhì)，

(c)至少9％(或9％-35％，或18％-35％，或18％-24％)脂肪，

(d)至少一種以下組分：

(i)至少250IU/kg(或250IU/kg-1500IU/kg，或500IU/kg-1500IU/kg，或500IU/kg-1100IU/kg)的維生素E，

(xxviii)至少50ppm(或50ppm-300ppm，或100ppm-300ppm，或100ppm-200ppm)的維生素C，

(xxix)至少1100ppm(或1100ppm-3500ppm，或2300ppm-3500ppm，或2300ppm-2350ppm)?；撬幔?/p>

(xxx)至少200ppm(或200-750ppm，或400ppm-750ppm，或400-525ppm)內(nèi)毒堿，和

(xxxi)至少0.05％(或0.05％-0.6％，或0.1％-0.6％，或0.1％-0.4％)胱氨酸，

(e)至少1600ppm(或1600ppm-5000ppm，或3300ppm-5000ppm，或3300ppm-3400ppm)膽堿，

(f)至少50ppm(或50ppm-150ppm，或100ppm-150ppm，或100ppm-110ppm)錳，和

(g)至少0.7％(或0.7％-3％，或1.4％-3％，或1.4％-1.7％)賴氨酸，和

(h)至少0.4％-1.5％的甲硫氨酸。

治療或預(yù)防疾病和紊亂的方法

本發(fā)明包括用于治療或預(yù)防疾病和病癥的方法，其包括在動(dòng)物體外和體內(nèi)給予有效調(diào)節(jié)與肥胖有關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)和/或活性的本發(fā)明組合物。本發(fā)明人已經(jīng)令人吃驚地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的組合物在動(dòng)物中有效調(diào)節(jié)與肥胖有關(guān)的蛋白質(zhì)。不受理論的限制，相信在動(dòng)物中調(diào)節(jié)與肥胖有關(guān)的蛋白質(zhì)表達(dá)和/或活性有用于治療或預(yù)防與異常血液葡萄糖水平、體重增加，或脂肪貯存水平有關(guān)的紊亂。本發(fā)明還包括有用于調(diào)節(jié)過重和/或肥胖動(dòng)物的蛋白質(zhì)活性的組合物和制劑。本發(fā)明也包括調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)或基因活性的方法，其包括給予受試者，優(yōu)選地給予需要所述治療或預(yù)防的陪伴哺乳動(dòng)物治療或預(yù)防有效量的組合物，以調(diào)節(jié)受試者的與肥胖有關(guān)的蛋白質(zhì)或基因的活性。在示例性實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)lyn激酶活性的藥物是本發(fā)明的化合物。

在一個(gè)實(shí)施方案中，將本發(fā)明的組合物給予哺乳動(dòng)物，優(yōu)選地患有以下疾病的陪伴動(dòng)物：心血管疾病、異常脂血癥、異常脂蛋白血癥、葡萄糖代謝紊亂、代謝綜合征(即，X綜合征)、PPAR-相關(guān)紊亂、敗血癥、血栓形成障礙、II型糖尿病、肥胖癥、胰腺炎、高血壓、腎病或炎癥。

在一個(gè)實(shí)施方案中，"治療"或"處理"指疾病或紊亂，或其至少一種可鑒別的癥狀的改善，優(yōu)選與肥胖相關(guān)的癥狀的改善。在另一個(gè)實(shí)施方案中，"治療"或"處理"指至少一種可測量的(不必是動(dòng)物可辨別的)物理的參數(shù)的改善。在還一個(gè)實(shí)施方案中，"治療"或"處理"指抑制疾病或紊亂的進(jìn)展，或者是物理上的，如可辨別的癥狀的穩(wěn)定，或者是生理上的，如物理參數(shù)的穩(wěn)定，或兩者兼而有之。在又一個(gè)實(shí)施方案中，"治療"或"測量"指延遲疾病或紊亂的發(fā)作。

在某些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的組合物作為對抗此類疾病的預(yù)防措施給予患者,優(yōu)選陪伴動(dòng)物。如本文所用的，"防止"或"預(yù)防"指減少獲得給定疾病或紊亂的風(fēng)險(xiǎn)。在實(shí)施方案的優(yōu)選模式中，將本發(fā)明的組合物作為預(yù)防措施給予患者,優(yōu)選給予對以下疾病具有遺傳傾向性的陪伴動(dòng)物：心血管疾病、異常脂血癥、異常脂蛋白血癥、葡萄糖代謝紊亂、代謝綜合征(即，綜合征X)、PPAR-相關(guān)紊亂、敗血癥、血栓形成障礙、II型糖尿病、肥胖癥、胰腺炎、高血壓、腎病或炎癥。

在實(shí)施方案的其它示例性模式中，將本發(fā)明的組合物作為預(yù)防措施給予具有易患以下疾病的傾向的陪伴動(dòng)物：心血管疾病、異常脂血癥、異常脂蛋白血癥、葡萄糖代謝紊亂、代謝綜合征(即，綜合征X)、PPAR-相關(guān)紊亂、敗血癥、血栓形成障礙、II型糖尿病、肥胖癥、胰腺炎、高血壓、腎病或炎癥。因此，本發(fā)明的組合物可用于預(yù)防一種疾病或紊亂并同時(shí)治療另一種疾病(如，預(yù)防肥胖癥同時(shí)治療糖尿病；預(yù)防炎癥同時(shí)治療心血管疾病)。

治療或預(yù)防心血管疾病

本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防心血管疾病的方法，其包括給予陪伴動(dòng)物治療有效量的本發(fā)明的組合物和藥學(xué)上可接受的媒介物。在一些實(shí)施方案中，心血管疾病與異常/改變的蛋白質(zhì)表達(dá)有關(guān)。如本文所用的，術(shù)語"心血管疾病"指心和循環(huán)系統(tǒng)疾病。這些疾病通常與異常脂蛋白血癥和/或異常脂血癥有關(guān)。本發(fā)明的組合物可用于預(yù)防或治療的心血管疾病包括，但不限于動(dòng)脈硬化癥；動(dòng)脈粥樣硬化；中風(fēng)；局部缺血；內(nèi)皮功能障礙，特別是影響血管彈性的那些功能障礙；周圍性血管疾病；冠心??；心肌梗塞；腦梗塞和再狹窄。

治療或預(yù)防異常脂血癥

本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防異常脂血癥的方法，其包括給予陪伴動(dòng)物治療有效量的本發(fā)明的組合物和藥學(xué)上可接受的媒介物。在一些實(shí)施方案中，異常脂血癥與異常/改變的lyn激酶活性和/或表達(dá)有關(guān)。如本文所用的，術(shù)語"異常脂血癥"指導(dǎo)致或表現(xiàn)為異常的循環(huán)脂質(zhì)水平的病癥。在血液中的脂質(zhì)水平太高時(shí)，將本發(fā)明的組合物給予陪伴動(dòng)物以恢復(fù)正常水平。脂質(zhì)的正常水平在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的醫(yī)學(xué)條文中有報(bào)告。例如，推薦的血液LDL、HDL、游離甘油三酯水平和與脂質(zhì)代謝有關(guān)的其它參數(shù)可在美國衛(wèi)生協(xié)會(huì)(American Heart Association)的網(wǎng)站和國家心、肺、血液研究所的國立膽固醇教育方案(National Cholesterol Education Program of the National Heart,Lung and Blood Institute)的網(wǎng)站中發(fā)現(xiàn)。目前，血液中的HDL膽固醇的推薦水平為約35mg/dL；血液中的LDL膽固醇的推薦水平在130mg/dL以下；血液中的LDL:HDL膽固醇推薦的比例低于5:1，理想地為3.5:1；和血液中的游離甘油三酯的推薦水平低于200mg/dL。

本發(fā)明的組合物可用于預(yù)防或治療的異常脂血癥包括但不限于高脂血癥和高密度脂蛋白(HDL)膽固醇的低血液水平。在某些實(shí)施方案中，由本發(fā)明的化合物預(yù)防或治療的高脂血癥為家族性高膽固醇血癥；家族性混合高脂血癥；脂蛋白脂酶水平或活性減少或缺乏，包括脂蛋白脂酶突變導(dǎo)致的減少或缺乏；高甘油三酯血癥；高膽固醇血癥；酮體(如，β-OH丁酸)的高血液水平；Lp(a)膽固醇的高血液水平；低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的高血液水平；極低密度脂蛋白(VLDL)膽固醇的高血液水平和非酯化脂肪酸的高血液水平。

本發(fā)明還提供用于改變患者的脂質(zhì)代謝的方法，例如，減少陪伴動(dòng)物血液中的LDL，減少患者血液中的游離甘油三酯，增加患者血液中的HDL:LDL比例，和抑制皂化的和/或非皂化的脂肪酸合成，所述方法包括給予所述患者包含有效改變脂質(zhì)代謝的量的本發(fā)明化合物的組合物。

治療或預(yù)防異常脂蛋白血癥

本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防異常脂蛋白血癥的方法，其包括給予陪伴動(dòng)物治療有效量的本發(fā)明的組合物和藥學(xué)上可接受的媒介物。如本文所用的，術(shù)語"異常脂蛋白血癥"指導(dǎo)致或表現(xiàn)為異常的循環(huán)脂蛋白水平的病癥。在血液中的脂蛋白水平達(dá)到太高的程度時(shí)，將本發(fā)明的組合物給予患者以恢復(fù)正常水平。相反，在血液中的脂質(zhì)水平達(dá)到太低的程度時(shí)，將本發(fā)明的組合物給予患者以恢復(fù)正常水平。脂蛋白的正常水平在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的醫(yī)學(xué)條文中有報(bào)告。

本發(fā)明的組合物用于預(yù)防或治療的異常脂蛋白血癥包括，但不限于LDL的高血液水平；脫脂載脂蛋白B(apo B)的高血液水平；Lp(a)的高血液水平；apo(a)的高血液水平；VLDL的高血液水平；HDL的低血液水平；脂蛋白脂酶水平或活性的減少或缺乏，包括由脂蛋白脂酶突變導(dǎo)致的減少或缺乏；低α脂蛋白血癥；與糖尿病相關(guān)的脂蛋白異常；與II型糖尿病、肥胖相關(guān)的脂蛋白異常；與阿爾茨海默氏病相關(guān)的脂蛋白異常；和家族性混合異常脂血癥。

治療或預(yù)防葡萄糖代謝紊亂。

本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防葡萄糖代謝紊亂的方法，其包括給予陪伴動(dòng)物治療有效量的本發(fā)明的組合物和藥學(xué)上可接受的媒介物。如本文所用的，術(shù)語"葡萄糖代謝紊亂"指導(dǎo)致或表現(xiàn)為異常葡萄糖貯存和/或利用的病癥。在葡萄糖代謝(即，血液胰島素、血液葡萄糖)的指標(biāo)太高時(shí)，將本發(fā)明的組合物給予患者以恢復(fù)正常水平。相反，在葡萄糖代謝的指標(biāo)太低時(shí)，將本發(fā)明的組合物給予患者以恢復(fù)正常水平。葡萄糖代謝的正常指標(biāo)在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的醫(yī)學(xué)條文中有報(bào)告。在一些實(shí)施方案中，葡萄糖代謝紊亂與異常/改變的lyn激酶活性和/或表達(dá)有關(guān)。

本發(fā)明的組合物用于預(yù)防或治療的葡萄糖代謝紊亂包括但不限于葡萄糖耐量減弱；胰島素抵抗；胰島素抵抗相關(guān)的乳腺癌、結(jié)腸癌或前列腺癌；糖尿病，包括但不限于非-胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)、胰島素依賴型糖尿病(IDDM)、妊娠糖尿病(GDM)，和青年人發(fā)病的成年型糖尿病(MODY)；胰腺炎；高血壓；多囊卵巢??；和高水平的血液胰島素和/或葡萄糖。

本發(fā)明還提供改變患者的葡萄糖代謝，例如增加陪伴動(dòng)物對胰島素敏感性和/或氧耗的方法，所述方法包括給予陪伴動(dòng)物包含有效改變葡萄糖代謝的量的本發(fā)明化合物的組合物。

治療或預(yù)防代謝綜合征

如本文所用的，"治療或預(yù)防X綜合征或代謝綜合征"包括治療或預(yù)防與代謝綜合征有關(guān)的癥狀，包括，但不限于葡萄糖耐量減弱、高血壓和異常脂血癥和/或異常蛋白血癥。在一些實(shí)施方案中，代謝綜合征與異常/改變的lyn激酶活性和/或表達(dá)有關(guān)。

代謝綜合征以人中的一組代謝風(fēng)險(xiǎn)因素為特征。與代謝綜合征有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素可通過給予包含本發(fā)明化合物的組合物得到治療或預(yù)防，包括，但不限于向心型肥胖(即，過多的脂肪組織在腹部和腹部周圍)；導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣化的異常脂血癥(血脂紊亂-主要是高甘油三酯和低HDL膽固醇-其促進(jìn)粥樣斑在動(dòng)脈壁中聚集)；升高的血壓(130/85mmHg或更高)；胰島素抵抗或葡萄糖耐量(身體不能正確地利用胰島素或血糖)；前血栓形成狀態(tài)(prothrombotic state)(如，高血纖蛋白原或纖維蛋白溶酶原活化因子抑制劑[-1]在血液中)；和前炎癥狀態(tài)(proinflammatory state)(如，升高的高度敏感性C-反應(yīng)性蛋白質(zhì)在血液中)。

這種綜合征的根部原因?yàn)轶w重過重/肥胖癥、缺乏體格鍛煉和遺傳因素，患有代謝綜合征的陪伴動(dòng)物處于發(fā)生冠心病、與粥樣斑在動(dòng)脈壁中聚集有關(guān)的其它疾病(如，中風(fēng)和周圍性血管疾病)和2型糖尿病的增加的風(fēng)險(xiǎn)中。

代謝綜合征與稱作胰島素抵抗的全身性代謝紊亂密切相關(guān)，其中身體不能有效地利用胰島素。這是為什么代謝綜合征也稱為胰島素抵抗綜合征的原因。

某些陪伴動(dòng)物在遺傳學(xué)上易產(chǎn)生胰島素抵抗。后天因素，如過度身體肥胖和缺乏體格鍛煉可在這些人群中引起胰島素抵抗和代謝綜合征。大多數(shù)患有胰島素抵抗的陪伴動(dòng)物具有向心型肥胖。胰島素抵抗和代謝風(fēng)險(xiǎn)因素之間的分子水平的生物學(xué)機(jī)理不能充分地理解，因而似乎是復(fù)雜的。

因此，本發(fā)明的組合物用于治療或預(yù)防代謝綜合征和病癥以及與代謝綜合征有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素.

治療或預(yù)防II型糖尿病

如本文所用的，"II型糖尿病的治療或預(yù)防"包括治療或預(yù)防與II型糖尿病有關(guān)的并發(fā)癥包括，但不限于，視網(wǎng)膜病(即，失明)；導(dǎo)致足潰瘍、壞疽和截肢的神經(jīng)病(即，神經(jīng)損傷)；腎臟損傷，其導(dǎo)致透析；和心血管疾病。在一些實(shí)施方案中，II型糖尿病與異常/改變的lyn激酶活性和/或表達(dá)有關(guān)。

II型糖尿病與肥胖和衰老相關(guān)。該病是生活方式-依賴型疾病，并具有強(qiáng)烈的遺傳成分(在雙胞胎中的一致性(concordance in twins)達(dá)80-90％)。問題似乎是胰島素產(chǎn)生不足，但當(dāng)胰島素到達(dá)其目標(biāo)細(xì)胞時(shí)，它卻不能正常地工作。大多數(shù)II型糖尿病患者最初具有高胰島素水平并伴有高血糖。然而，由于糖傳遞信號(hào)給胰腺以釋放胰島素，II型糖尿病最終變得對該信號(hào)產(chǎn)生抵抗，因而內(nèi)分泌-胰腺不久就不能產(chǎn)生足夠的胰島素。這些陪伴動(dòng)物終止用胰島素處理該疾病，由于它們對胰島素抵抗，它們需要更高得多的劑量。

當(dāng)陪伴動(dòng)物攝入高載量的糖時(shí)，糖刺激胰腺以釋放胰島素。胰島素的目標(biāo)是肌肉、脂肪和肝細(xì)胞。這些細(xì)胞在細(xì)胞膜外側(cè)具有胰島素受體部位，對于大多數(shù)陪伴動(dòng)物,當(dāng)胰島素與受體結(jié)合時(shí)，一連串事件發(fā)生，其導(dǎo)致糖從血液被轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。在II型糖尿病中，即使當(dāng)胰島素存在于細(xì)胞膜時(shí)，該過程也不起作用。葡萄糖不被吸收到細(xì)胞內(nèi)而保留在血流中。

肝對葡萄糖產(chǎn)生負(fù)責(zé)，而胰島素為產(chǎn)生的調(diào)節(jié)劑。高血糖含量引起胰腺釋放胰島素，而胰島素應(yīng)傳遞信號(hào)至肝以停止制造糖，但是在糖尿病中，對這種信號(hào)產(chǎn)生抵抗，而肝保持產(chǎn)生葡萄糖。高血糖癥導(dǎo)致葡萄糖毒性。

糖尿病的疾病過程不是高血糖，而是高血糖引起的并發(fā)癥。醫(yī)師面臨主要問題是某些具有高血糖的人群感覺良好；治療無癥狀的疾病是困難的，因?yàn)榇蠖鄶?shù)人群不愿服藥，由于他們并沒有感到不適的事件。因此，包含本發(fā)明化合物的組合物用于治療或預(yù)防II型糖尿病或由II型糖尿病和病癥和與代謝綜合征有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素引起的并發(fā)癥。糖尿病的并發(fā)癥包括，但不限于糖尿病性神經(jīng)病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、勃起功能障礙和腎病，并且本發(fā)明的化合物用于治療或預(yù)防這些并發(fā)癥。

肥胖癥的治療或預(yù)防

如本文所用的，"肥胖癥的治療或預(yù)防"包括治療或預(yù)防與肥胖相關(guān)的并發(fā)癥。肥胖癥的并發(fā)癥包括，但不限于高膽固醇血癥、高血壓、異常脂血癥(例如高總膽固醇或高水平的甘油三酯)、2型糖尿病、冠心病、中風(fēng)、膽囊疾病、骨關(guān)節(jié)炎、睡眠呼吸暫停和呼吸道問題，以及某些癌癥(子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌和結(jié)腸癌)。在一些實(shí)施方案中，肥胖癥與異常/改變的lyn激酶活性和/或表達(dá)相關(guān)。

治療或預(yù)防其它疾病

本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防敗血癥、血栓形成病癥、胰腺炎、高血壓、炎癥和陽痿的方法，其包括給予患者治療有效量的包含本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的媒介物的組合物。在一些實(shí)施方案中，這些病癥與異常/改變的lyn激酶活性和/或表達(dá)相關(guān)。

如本文所用的，"敗血癥的治療或預(yù)防"包括治療或預(yù)防敗血癥性休克。

如本文所用的，"血栓形成病癥的治療或預(yù)防"包括治療或預(yù)防高血液水平的血纖蛋白原和促進(jìn)纖維蛋白溶解。

除了治療或預(yù)防肥胖癥外，本發(fā)明的組合物可給予個(gè)體以促進(jìn)個(gè)體的體重減輕。

本發(fā)明的試劑盒

當(dāng)試劑盒包含虛擬包裝時(shí)，試劑盒限于在虛擬環(huán)境中與一種或多種物理的試劑盒組分組合的使用說明書。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒含有探針和/或其它物理組分，而使用探針和其它組分的使用說明書可通過互聯(lián)網(wǎng)獲得。試劑盒可含有增列項(xiàng)目如用于混合樣品探針和試劑的裝置和使用試劑盒的裝置，如試驗(yàn)試管或混合器皿。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供用于以下一種或多種用途的溝通信息或指示的工具：(1)使用本發(fā)明的多核苷酸以檢測樣品中與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因表達(dá)，(2)使用本發(fā)明的多核苷酸用于測定試驗(yàn)基片對與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因表達(dá)的影響,(3)使用本發(fā)明的多核苷酸篩選試驗(yàn)基片，以確定其是否有可能用于調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量,(4)使用本發(fā)明的多核苷酸以配制預(yù)示劑，預(yù)測動(dòng)物是否可能變得過重或開發(fā)診斷劑以診斷動(dòng)物的肥胖,(5)使用本發(fā)明的多核苷酸以處理非人動(dòng)物的基因組或動(dòng)物基因組的表達(dá),(6)使用本發(fā)明的多核苷酸以調(diào)節(jié)與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的一種或多種基因的表達(dá)，特別是肥胖相關(guān)基因的表達(dá)，或調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量,(7)使用本發(fā)明的多核苷酸以選擇包含在一組或多組中的動(dòng)物，(8)使用本發(fā)明的多核苷酸以使用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)處理與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中的基因有關(guān)的數(shù)據(jù)，特別是肥胖相關(guān)基因的數(shù)據(jù),(9)將本發(fā)明的物質(zhì)單獨(dú)或與本發(fā)明的其它元素給予動(dòng)物，(10)使用本發(fā)明的物質(zhì)以調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量,(11)使用本發(fā)明的計(jì)算機(jī)系統(tǒng),(12)使用本發(fā)明的試劑盒，和(13)本發(fā)明與一種或多種藥物或調(diào)節(jié)動(dòng)物脂肪組織的量的其它物質(zhì)聯(lián)合使用的方法和組合物的使用說明書。所述工具包括文件、數(shù)字存儲(chǔ)介質(zhì)、光存儲(chǔ)介質(zhì)、包含信息或指示的聲頻顯示器(audio presentation)或視頻顯示器。在某些實(shí)施方案,通信工具由含有此類信息或指示的網(wǎng)站、視頻顯示器、信息站(kiosk)、小冊子、產(chǎn)品標(biāo)簽、包裝插頁、廣告、免費(fèi)分發(fā)的印刷品、布告、錄音磁帶、錄像磁帶、DVD、CD-ROM、計(jì)算機(jī)可讀芯片、計(jì)算機(jī)可讀卡片、計(jì)算機(jī)可讀磁盤、計(jì)算機(jī)存儲(chǔ)器或其組合顯示。有用的信息包括一種或多種of(1)促進(jìn)動(dòng)物的健康和福利的方法和(2)動(dòng)物的保健護(hù)理者(caregivers)與用戶的接觸信息，如果他們具有本發(fā)明的問題及其用途。有用的指示包括使用探針的技術(shù)、進(jìn)行基因表達(dá)測定的指示，和該物質(zhì)的給予量和頻率。通信方式對于指出使用本發(fā)明的益處是有用的。

本文公開了典型的示例性本發(fā)明實(shí)施方案，并且盡管使用了特定術(shù)語，它們僅僅用于上位概念和描述性意義，且無限制的目的，因?yàn)楸景l(fā)明的許多修飾和變化根據(jù)本文包含的講述應(yīng)是可能的。本發(fā)明可通過以下實(shí)施例被進(jìn)一步地說明，盡管應(yīng)該理解，包括的這些實(shí)施例僅僅是用于舉例說明的目的并不打算限制本發(fā)明的范圍，除非另外特別說明。

實(shí)施例

材料和方法

從組織分離核糖核酸(RNA)

將已經(jīng)收集、在液氮中冷凍并解凍的組織樣品勻化并使用RNA提取方法進(jìn)行加工，以產(chǎn)生優(yōu)質(zhì)RNA，然后將其經(jīng)歷進(jìn)一步的基因組分析。

材料：冰、液氮、冷凍的犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物組織，溶胞試劑、氯仿最少量99％、異丙醇、70％乙醇(用無水乙醇，絕對的和去離子的，RNase-游離水制備)、RNase去離子水、得自Ambion的RNA

設(shè)備：Ultra-Turrax T25 Power Homogenizcr(勻化器)、Bcckman Coulter Allegra 25R Centrifuge(離心機(jī))、Eppendorf Centrifuge(離心機(jī))、鉗子(forceps)、解剖刀、硬質(zhì)切削表面，即纖維切板(cutting board)、1.5mL無DNase和RNase/無菌微量離心管、50mL無DNase和RNase/無菌一次性聚丙烯管、P1000、P200、P20、P10和P2 Rainin Pipetman pipettes(移液管)、用于P1000、P200、P20、P10和P2移液管的過濾器移液管尖頭(filter pipette tips)、DNase和RNase游離/無菌，和無棉擦布。

制備：制備裝有4mL(選擇用于RNA分離的每種組織各一管)的50mL聚丙烯管。

組織勻漿化：用3-4勺液氮填充能夠容納液氮的容器。將一片冷凍組織立即放入上述容器中(所述組織應(yīng)為豌豆大小)并將該組織放入適當(dāng)標(biāo)記的50mL聚丙烯管中(管內(nèi)已含有4mL)。立即使用Ultra-Turrax T25 Power Homogenizer(勻化器)開始勻化。在最高設(shè)置上(6)勻化10-15秒鐘。在冰上冷卻樣品另外10-15秒，然后重復(fù)該過程。繼續(xù)至組織完全勻化且溶液為混濁的。完全勻化后，蓋住50mL試管并返回到冰上。將勻化的組織于室溫下溫育5分鐘，然后進(jìn)行分離程序。

RNA分離：填充按照由試劑供應(yīng)的Invitrogen使用說明書給出的程序進(jìn)行。在四個(gè)1.5mL微量離心試管中，將勻化樣品分成四份1mL等分試樣。向每份I mL等分試樣加入200uL氯仿。蓋住試管，渦流15秒，然后上下震搖。結(jié)果應(yīng)為粉紅色乳狀液體。將該試管于室溫下溫育2-3分鐘。將該試管以14,000rpm和4℃下離心15分鐘。將液相(上層)轉(zhuǎn)移至無菌1.5mL微量離心試管。應(yīng)被轉(zhuǎn)移至新試管的液相的通常體積為500uL。須確保不轉(zhuǎn)移任何中間成或低相。通過加入500uL異丙醇至含有水層的每一微量離心試管，使RNA從溶液中沉淀。上下震搖試管至少20秒鐘。將樣品于室溫下溫育10分鐘。于4℃，將樣品以14,000rpm離心10分鐘。通過抽吸液體小心地除去上清液，以確保不損失沉淀顆粒。加入1mL 70％乙醇以洗滌沉淀顆粒。通過輕彈試管(或在工作臺(tái)面上輕叩試管)移出沉淀顆粒并震搖至混合。于4℃，以8,200rpm離心5分鐘。通過抽吸液體小心地除去上清液，以確保不損失沉淀顆粒。使用無棉擦布小心地吸收過量的乙醇，以確保沉淀顆粒干燥。將各沉淀顆粒再懸浮于30uL RNA貯存溶液中。通過移液操作溫和地混合直至RNA返回溶液狀態(tài)，然后于-80℃貯存?？赡苄枰缘退贉u流樣品幾秒鐘以促使RNA再懸浮。如果這種操作是必要的，在冷凍前使用微量離心機(jī)倒轉(zhuǎn)自旋樣品。

RNA凈化：按照Mini Handbook(小冊子)給出的程序進(jìn)行。

使用RNeasy Mini Kit(微量試劑盒)，從在OptiCell Chambers(優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)室)培養(yǎng)的細(xì)胞中分離RNA。

使用從哺乳動(dòng)物細(xì)胞系培養(yǎng)的細(xì)胞以分離高品質(zhì)的RNA，然后將其用于進(jìn)一步的下游染色體組分析。所有與細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的工作在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行。

試劑：10X PBS、去離子化H₂O、絕對乙醇、RNA儲(chǔ)備液、β-巰基乙醇、RNaseBuffer RLT(緩沖液RLT)，和Buffer RWl(緩沖液RWl)和Buffer RPE(緩沖液RPE)(以RNeasy Mini Kit(微量試劑盒)提供)

設(shè)備/材料：RNeasy Mini Kit(微量試劑盒),QIAshredder自旋柱、OptiCell刀、20mL無菌注射器、OptiCell tips(尖端)、Cell scraper(細(xì)胞刮刀)、P1000 Pipetman移液管，Rainin、P200 Pipetman移液管，Rainin、100-l00uL過濾移液管尖、1-200uL過濾移液管尖、無菌轉(zhuǎn)移移液管、55mL無菌溶液水槽、1.5mL無菌微量離心試管和Eppcndorf Microcentrifuge(微量離心器)。

溶液：Buffer RLT在RNeasy Mini Kit(微量試劑盒)中提供的貯備液)；-加入l00uL的β-巰基乙醇/每10mL Buffer RLT(緩沖液RLT)，然后開始該方案。70％乙醇：通過加入35mL絕對乙醇至15mL去離子的無RNase的水中，制備50mL 70％的乙醇。IX PBS：無RNase的水。使用22um濾器過濾該溶液。

程序：從OptiCell Chamber(每次處理一個(gè)OptiCell)除去細(xì)胞。在顯微鏡下檢查細(xì)胞以確保細(xì)胞是活的，然后分離RNA。除去和棄去細(xì)胞培養(yǎng)基。使用OptiCell刀切開上層膜以暴露較下層膜上的細(xì)胞。用IX PBS洗滌附著有細(xì)胞的膜3次。將600uL Buffer RLT(緩沖液RLT)溶液(含β-巰基乙醇)移液至附著有細(xì)胞的膜的中央。使用細(xì)胞刮刀，輕輕地將Buffer RLT(緩沖液RLT)分布至膜的整個(gè)外表面，然后在一個(gè)角落收集液體。移出全部體積的Buffer RLT(緩沖液RLT)并置于QIAshrcdder自旋柱中。

RNA分離：將QIAshredder自旋柱以14,000rpm離心2分鐘。棄去自旋柱，但保留收集試管及其內(nèi)容物。加入600uL 70％乙醇至收集試管并通過移液操作充分混合(現(xiàn)在總體積＝1.2mL)。將600uL細(xì)胞溶胞產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至RNeasy微型柱中并以14,000rpm離心15秒。棄去流過的液體，但保留收集試管和自旋柱。將剩余體積的細(xì)胞溶胞產(chǎn)物(～600uL)轉(zhuǎn)移至自旋柱并重復(fù)離心。棄去流過的液體，但保留收集試管和自旋柱。加入700uL Buffer RWl(緩沖液RWl)至自旋柱。以14,000rpm離心15秒以洗滌柱。棄去流過的液體和收集試管。將自旋柱轉(zhuǎn)移至新的2mL收集試管中并加入500uL Buffer RPE(緩沖液RPE)至柱中。以14,000rpm離心15秒。棄去流過的液體，但保留收集試管/柱。加入額外500uL Buffer RPE(緩沖液RPE)至柱中。以14,000rpm離心2分鐘。將自旋柱轉(zhuǎn)移至1.5mL收集試管中。將30uL RNA貯存溶液直接加入到硅膠膜上并以14,000rpm離心1分鐘以洗脫RNA。于-70℃貯存最終的RNA。

RNA 6000Nano Assay(納米測定法)

使用Agilent 2100Bioanalyzer(生物分析儀)和RNA 6000Nano Assay(納米測定)，分析從培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或組織分離的RNA用于定性。

試劑：RNA 6000Nano(納米)凝膠基質(zhì)，RNA 6000Nano(納米)染料濃縮物，RNA 6000Nano Marker(納米標(biāo)記物)，(所有以上試劑均包含在RNA 6000Nano Assay kit(納米測定試劑盒)中，Agilent)，RNA6000ladder(梯度液)，RNase Zap，和無RNase水，得自Ambion。

設(shè)備/其它材料：Agilent Chip Priming Station,Agilent,RNA 6000芯片、Agilent,電極洗滌器(cleaners)，P2、P10、P200和P1000 Rainin Pipetman移液管，無菌，無DNase/RNase過濾移液管尖，1.5mL微量離心試管，無菌，渦流，IKA渦流混合器，微量離心機(jī)，和加熱塊。

程序：程序在試劑盒指南(Reagent Kit Guide)中給出，RNA 6000Nano Assay(納米測定法)，2003年11月版本，由Agilent Technologies出版。程序按照指南給出的指示進(jìn)行，伴有以下修飾：制備Gel,pg.17-不是分離過濾的凝膠至各65uL的等分試樣，而是將貯液過濾凝膠保存在原始微量離心試管中并在需要時(shí)等分為65uL。載荷RNA 6000Nano Marker(納米標(biāo)記物),pg.22-加入1uL無RNase-水(替代RNA6000Nano Marker(納米標(biāo)記物))至各樣品孔中，所述孔將不含有樣品。這樣不僅將保存一定量的所用標(biāo)記物(Marker)，而且還可用作陰性對照以務(wù)必使所有的試劑不被污染，包括無RNase-水。裝載梯度液(Ladder)和樣品,pg.23-于71℃加熱變性樣品和RNA 6000Ladder(梯度液)另外30秒鐘(總共2.5分鐘)。開始Chip Run(芯片運(yùn)行),pg.26-從測定菜單選擇"真核生物總RNA Nano"選項(xiàng)。

Affymetrix Genechip(基因芯片)表達(dá)分析。

基因表達(dá)使用Affymetrix Canine 1(犬科動(dòng)物1)和Canine 2(犬科動(dòng)物2)陣列分析，所述陣列可經(jīng)商業(yè)購自Affymetrix,Inc.,Santa Clara,CA 95051。總RNA被逆轉(zhuǎn)錄至cDNA。cDNA被用于生成cRNA，其被打斷成片段并用作GeneChip雜交的探針。洗滌基因芯片并用Affymetrix激光掃描器測定雜交信號(hào)。然后對雜交數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證和歸一化以用于進(jìn)一步的分析。

材料：Affymetrix提供大多數(shù)試劑和試劑盒。列于Affymetrix手冊中但不在試劑盒中提供的其它試劑可另外獲得(詳細(xì)情況參見基因芯片表達(dá)分析技術(shù)手冊(GeneChip Expression Analysis Technical Manual)(701021Rev.4))，RNase和去離子水。

設(shè)備：Eppcndorf微量離心機(jī)，1.5mL無DNase和RNase/無菌微量離心試管，50mL無DNase和RNase/無菌一次性聚丙烯試管，P1000,P200、P20、P10和P2 Rainin Pipetman移液管，用于P1000,P200,P20,P10和P2移液管的濾器移液管尖，無DNase和RNase/無菌，和Peltier Thermal Cycler PTC-200(Peltie熱循環(huán)控制裝置PTC-200)。

程序：完全按照在基因芯片表達(dá)分析技術(shù)手冊(GeneChip Expression Analysis Technical Manual)(Affymetrix版權(quán)1999-2003)中描述的所有程序。使用5微克總RNA進(jìn)行第一鏈cDNA分析。使用或者Peltier Thermal Cycler PTC-200(Peltie熱循環(huán)控制裝置PTC-200)或者加熱塊對反應(yīng)和探針變性進(jìn)行溫度控制。質(zhì)量控制使用帶有BioAnalycr 2100(生物分析儀2100)的RNA NanoDrop芯片進(jìn)行。使用用于犬科動(dòng)物基因芯片的100Format(格式板)(Midi Array)。

實(shí)施例1

測定取自體重過重和瘦動(dòng)物的脂肪組織樣品之間的差異基因表達(dá)

脂肪組織樣品得自18只(3只瘦的和15只肥胖的)或淋巴細(xì)胞得自44只(12只瘦的和32只肥胖的)使用常規(guī)方法診斷為"肥胖的"或者"瘦的"犬科動(dòng)物。"肥胖"或"瘦"的動(dòng)物使用常規(guī)方法，基于DEXA的測量法或基于5分肥度(body condition)評分系統(tǒng)測定。例如，如果動(dòng)物具有肥度評分2或2.5和/或DEXA總身體脂肪百分率27％或以下，則認(rèn)為該動(dòng)物是瘦的。如果動(dòng)物具有肥度評分4或更高和總身體脂肪百分率30％或更高，則認(rèn)為該動(dòng)物是過重的。所有的固體組織樣品在從動(dòng)物取出后立即在液氮中速凍(snap frozen)。淋巴細(xì)胞使用BDCPT^TM Cell Preparation Tube(細(xì)胞制備試管)，依據(jù)制造商的指示分離并同樣進(jìn)行速凍直至需要時(shí)。樣品均使用Affymetrix犬科動(dòng)物-2GeneChips*，依據(jù)制備商的建議進(jìn)行分析，以確定那種基因與瘦動(dòng)物相比差異地表達(dá)于過重動(dòng)物中。

數(shù)據(jù)使用GS(Partek Inc.,St.Charles,MO)的基因表達(dá)數(shù)據(jù)軟件(Gene Expression Data software)(Partek Incorporated,12747Olive Blvd.,Suite 205,St.Louis,Missouri 63141,U.S.A.http://www.partek.com/partekgs geneexpression)分析。穩(wěn)健多片均數(shù)(Robust Multichip Average)(RMA)算法(Rafael.A.Irizarry,Benjamin M.Bolstad,Francois Collin,Leslie M.Cope,Bridget Hobbs和Terence P.Speed(2003)，Affymetrix GeneChip(基因芯片)探針?biāo)綌?shù)據(jù)概況，nucleic Acids Research(核酸研究)31(4):e15)被用于本底調(diào)節(jié)、歸一化，和樣品的探針-水平概括。進(jìn)行ANOVA分析，發(fā)現(xiàn)任何兩組之間在各個(gè)方向上具有最小FDR對照0.1(或0.1或0.05的p-值，如果冪(power)不足以應(yīng)用FDR)和1.3倍改變的顯著差異地表達(dá)的基因。發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)揭示，犬科動(dòng)物-2GeneChips*具有相關(guān)的背景噪音水平1.3倍。因此，在這一報(bào)告中提出的所有的分析采用+/-1.3倍截止值(cut-off)。然而，選擇虛假的發(fā)現(xiàn)率閾值0.1(意指10％的觀察值歸因于偶然性)作為可接受的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的最低水平，用于包括每組最少12只動(dòng)物的研究。具有較少數(shù)量動(dòng)物的研究不具有足夠的冪供FDR的正確的應(yīng)用。結(jié)果提供于下表中。

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表1與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物脂肪組織中的基因

表2：與瘦動(dòng)物相比，在肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中差異地表達(dá)的基因(allgenelist)FC截止值：1.3；P-值截止值為上調(diào)的

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2:與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2:與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

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表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表2：與瘦動(dòng)物比較，差異地表達(dá)于肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

表3:與瘦動(dòng)物比較，與肥胖動(dòng)物脂肪酸代謝相關(guān)的關(guān)鍵基因

表3:與瘦動(dòng)物比較，與肥胖動(dòng)物脂肪酸代謝相關(guān)的關(guān)鍵基因

實(shí)施例2

測定各種物質(zhì)或組分對犬細(xì)胞系基因表達(dá)的影響

采用Affymetrix犬Canine-1和Canine-2(Canine-2替代Canine-1)測定以下各種受試物質(zhì)或組分對在4種犬細(xì)胞系和適當(dāng)對照物中表達(dá)的基因的影響：例如MCTs、TAGs、ALA、EPA、DHA、亞油酸(LA)、花生四烯酸(ARA)、硬脂酸(SA)、豆蔻酸(MA)、共軛亞油酸(CLA)、GLA、花生四烯酸、卵磷脂、維生素A、維生素D、維生素E、維生素K、核黃素、煙酸、吡哆醇、泛酸、葉酸、生物素、維生素C、兒茶素、槲皮素、茶黃素、泛醌、番茄紅素番茄黃素、白藜蘆醇、α-硫辛酸、L-肉堿、D-檸檬油精、葡糖胺、S-腺苷甲硫氨酸、殼聚糖、包含一種或多種這些化合物的各種材料及其各種組合。每一種組分如同對表6中顯示的所選擇樣品組分闡明的那樣以兩種濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用以兩種濃度中較高者存在的溶劑作為對照組。采用4種犬細(xì)胞系中：CCL34(腎)、CRL1430(胸腺)、CCL183(骨)(得自美國組織培養(yǎng)物保藏中心(American Tissue Culture Collection))和CTAC(甲狀腺)(參見由犬科動(dòng)物外周淋巴細(xì)胞純化的效應(yīng)器細(xì)胞的NK活性的測量(Measurement of NK Activity in Effector Cells Purified from Canine Peripheral Lymphocytes),獸醫(yī)免疫學(xué)和免疫病理學(xué)(Veterinary Immunology and Immunopathology),35(1993)239-251)。以特定濃度的組分進(jìn)行處理的細(xì)胞系被稱為“處理組”，而未處理的樣品稱為“對照組”。詞語“基因”和“探針”在該方法中得到同義使用。對于處理細(xì)胞系和對照組采用Affymetrix芯片提供的指南測量基因表達(dá)。

自這些實(shí)驗(yàn)所得到的數(shù)據(jù)樣本顯示在表5中。表5顯示了探針id、p-值、倍數(shù)變化、top BLAST hit(頂級BLAST標(biāo)的)的注釋、top BLAST hit(頂級BLAST標(biāo)的)索取號(hào)、基因符號(hào)并且最終在最后一欄給出了基因描述。

基于犬科動(dòng)物的生理狀況(診斷為胖的)和來自表1、2、3和5的信息比較，即注意與瘦犬相比較，在超重的犬科動(dòng)物受到受試物質(zhì)或組分影響并且還有差異地表達(dá)的基因，用于選擇和制備用于超重犬科動(dòng)物的食物組合物的營養(yǎng)配方將確信包含一種或多種以以下量存在的以下組分(以毫克/千克體重/每天(mg/kg/天)存在的體內(nèi)量基于自體外采用的量外推)，例如：DHA-自1-30；EPA-自1-30；EPA/DHA Combo(1.5:1比例)-自4/2-30/45；ALA-自10-100；LA-自30-600；ARA-自5-50；SA-自3-60和MA-自3-60。基于這些數(shù)據(jù)，可制備包含一種或多種這些組分的食物組合物及相關(guān)飲食并用于調(diào)節(jié)與瘦動(dòng)物相比較，在超重動(dòng)物有差異地表達(dá)的基因。這樣的調(diào)節(jié)將引起動(dòng)物脂肪組織量的調(diào)節(jié)，并且因此在一個(gè)實(shí)施方案中促進(jìn)轉(zhuǎn)變?yōu)楹虾跣枰蛘?更瘦)的狀況和促使得到更加健康和良好感覺的動(dòng)物。

表4：用犬細(xì)胞系測試的組分

表5:在所列出組分存在下自犬科動(dòng)物細(xì)胞系的表達(dá)結(jié)果概況

表5:在所列出組分存在下自犬科動(dòng)物細(xì)胞系的表達(dá)結(jié)果概況

表5:在所列出組分存在下自犬科動(dòng)物細(xì)胞系的表達(dá)結(jié)果概況

表5:在所列出組分存在下自犬科動(dòng)物細(xì)胞系的表達(dá)結(jié)果概況

表6:差異地表達(dá)于喂飼高蛋白飲食或者含有所加入魚油的相同飲食的肥胖動(dòng)物淋巴細(xì)胞中的基因

包含較高量長鏈脂肪酸的飲食促進(jìn)重量減輕并可用于再次規(guī)劃動(dòng)物的基因表達(dá)，以便反映變瘦和有效地維持精瘦的傾向。

自以上所討論的體外組分篩選得到的數(shù)據(jù)表明，在長鏈脂肪酸中含量高的一些組分(參見表5)可具有影響與脂肪代謝有關(guān)的基因表達(dá)的潛力，這樣的影響是以促進(jìn)動(dòng)物整體變瘦的方式進(jìn)行的。這通過分析自脂肪組織和自以上討論的組分試驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)，采用常規(guī)計(jì)算機(jī)運(yùn)算分析來確定。用于這方面的運(yùn)算代碼是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的并可得到發(fā)展而無需過度的實(shí)驗(yàn)。這樣代碼的一個(gè)實(shí)例在以下得到提供：

SELECT A.PROBE，TO_CHAR(AVG(DECODE(A.EXPTDAY，′D0′，GENE_NORM_INT，null))/AVG(DECODE(A.EXPTDAY，′D14′，GENE_NORM_INT，null))，′99999.99999′)FATLEAN_FC，STATS_T_TEST_INDEPU(A.EXPTDAY，GENE_NORM_INT)P_VALUE，B.TOP_HIT_DEF，

COUNT(DISTINCT C.INGREDIENT)，COUNT(DISTINCTD.INGREDIENT)

FROM GERIATRICS_RNRM2A，TOP_PROBE_ANNOT_2_3B，F(xiàn)ILT_INDIV_CELLS_2C，F(xiàn)ILT_ACROSS_4_CELLS_2D WHERE A.PROBE＝B.PROBE AND A.PROBE＝C.PROBE(+)AND A.PROBE＝D.PROBE(+)AND UPPER(A.PROBE)NOT LIKE′AFFX％′GROUP BY A.PROBE，B.TOP_HIT_DEF HAVING STATS_T_TEST_INDEPU(A.EXPTDAY，GENE_NORM_INT)<＝.01AND AVG(DECODE(A.EXPTDAY，′D0′，GENE_NORM_INT，null))/AVG(DECODE(A.EXPTDAY，′D14′，GENE_NORM_INT，null))>＝5AND SUM(DECODE(PAMCALL，′P′，1，0))＝40ORDER BY PROBE

為證實(shí)在以上表5中概述的結(jié)果，即一些生物活性的食物組分例如如存在于魚油中的EPA/DHA(1.5∶1)通過作用于與脂肪酸代謝有關(guān)的關(guān)鍵基因(如在表3中所示)在造成狗體重減輕方面比其他生物活性的食物組分更加有效，包括未加入長鏈脂肪酸的(膳食A)或被加入亞麻酸(基于100％干物質(zhì)組成計(jì)的約1％，膳食B)，或EPA/DHA(1.5:1，約0.30％:0.20％)(膳食C)的三種高蛋白膳食被開發(fā)用于比較已知引起狗體重減輕的高纖維膳食。在該項(xiàng)研究中，在試驗(yàn)開始之前，45只在臨床上超重的狗全部首先喂養(yǎng)營養(yǎng)完全控制的膳食30天。在初始30天之后，狗被隨機(jī)分為4組。4組中的3組接受其中一種受試膳食并且一組被作為對照組而給予高纖維膳食持續(xù)一設(shè)定的時(shí)間段，例如4個(gè)月。結(jié)果表明3種試驗(yàn)的食物(膳食A、B和C)比高纖維食物具有明顯更高的可消化性。結(jié)果也表明消耗包含EPA/DHA的食物的約38％的狗在90天時(shí)達(dá)到其體重減輕的目標(biāo)。有趣的是，消耗EPA/DHA食物的狗也保持瘦肌肉質(zhì)量和骨礦物質(zhì)含量。結(jié)果也表明，至少在臨床水平上，包含EPA/DHA的膳食在影響體重減輕方面與高纖維飲食一樣有效。

實(shí)施例5

可能的體重減輕保持實(shí)驗(yàn)

基于以上討論的體重減輕實(shí)驗(yàn)結(jié)果，假定喂飼包含EPA/DHA膳食的動(dòng)物將不僅僅體重減輕，而且將比喂飼其它受試膳食和對照的高纖維膳食的動(dòng)物保持體重減輕更長的時(shí)間期。

為了確定膳食A、B和C及高纖維飲食對保持體重減輕的作用，人們可實(shí)施例如以下類型的實(shí)驗(yàn)：

可給超重動(dòng)物喂飼4種不同膳食(如在實(shí)施例中描述)直到它們達(dá)到最佳“瘦”水平。然后可將它們隨機(jī)化分為幾個(gè)亞組，繼續(xù)給它們喂飼其先前喂飼過的相同受試膳食或者轉(zhuǎn)換為營養(yǎng)平衡但是沒有設(shè)計(jì)引起或保持體重減輕并且不包含例如合適量的亞麻酸或EPA/DHA的維持膳食。

然后可觀察動(dòng)物一設(shè)定的時(shí)間段，例如至多3個(gè)月，每天記錄它們的體重，每周確定其肥度評分并且以每月為基準(zhǔn)采用常規(guī)的DEXA技術(shù)測定其身體脂肪百分率。