本發(fā)明屬于保健品領(lǐng)域，具體地說，具體涉及一種保健巧克力。

背景技術(shù)：

酒精即乙醇是一種親神經(jīng)性毒物, 具有脂溶性和水溶性，進入體內(nèi)的乙醇 10 min 后即進入大腦，對人的大腦有直接神經(jīng)毒性作用，可使血腦屏障通透性增加致使中樞神經(jīng)嚴(yán)重?fù)p害，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用，當(dāng)酒精進入人神經(jīng)細(xì)胞膜類脂層時，就開始起破壞性作用，經(jīng)細(xì)胞脫水、變性、壞死、缺失，神經(jīng)細(xì)胞體萎縮、樹突減少，從而導(dǎo)致大腦萎縮，特別是對青少年的腦損傷更為嚴(yán)重。

現(xiàn)代社會中，隨著人們生活節(jié)奏的加快，生活壓力的增加，人際交往的增多及精神緊張等引起長期飲酒的人數(shù)越來越多，大量飲酒，特別是烈性酒，會對人體的消化、神經(jīng)、循環(huán)等系統(tǒng)產(chǎn)生嚴(yán)重的損傷，嚴(yán)重者會導(dǎo)致酒精中毒。

酒精中毒帶來的長期和嚴(yán)重的神經(jīng)炎癥所面臨的現(xiàn)實現(xiàn)狀卻是十分令人擔(dān)憂的，因為絕大多數(shù)慢性酒精中毒的患者并沒有對其有足夠的重視，并得到及時的治療。在中國的社會現(xiàn)狀中，“喝多了”只要睡一覺就行了，其背后隱藏的神經(jīng)炎癥和CNS損傷卻給患者的健康帶來了長久的影響。

因此，現(xiàn)有技術(shù)中亟需一種針對飲酒患者神經(jīng)炎癥的保健產(chǎn)品，能夠使得酒精患者脫離宿醉狀態(tài)，同時抑制酒精導(dǎo)致的神經(jīng)炎癥。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的提供一種以葛根、沙棘、甘草、藍(lán)莓、越橘提取物為活性成分和巧克力為基質(zhì)的保健品，能夠有效預(yù)防飲用酒精引發(fā)的神經(jīng)炎癥。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案的內(nèi)容來實現(xiàn)的：

一種保健巧克力，包括活性成分和基質(zhì)，所述的活性成分包括以下重量份數(shù)的組分：葛根素26-33份、槲皮素4-12份、甘草酸1-7份、原花青素4-12份和枳椇皂苷26-33份；所述基質(zhì)為巧克力，重量份數(shù)為50-65份。

進一步的技術(shù)方案，所述的活性成分和基質(zhì)的重量份數(shù)為：葛根素27份、槲皮素5份、甘草酸3份和原花青素6份和枳椇皂苷27份，巧克力為55份。

進一步的技術(shù)方案，所述的巧克力為純可可脂。

進一步的技術(shù)方案，所述的活性成分的純度為98%。

進一步的技術(shù)方案，所述的保健巧克力還包括輔料，所述的輔料根據(jù)的不同劑型的需要添加，劑型為丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊中的一種。

本發(fā)明的保健巧克力在減輕酒精神經(jīng)毒性以及抑制酒精引起的神經(jīng)炎癥方面的用途 。

本發(fā)明作用原理為：酒精慢性處理可以促進神經(jīng)元預(yù)警素的釋放，作用于小膠質(zhì)細(xì)胞上的TLR4受體，導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞激活，ROS大量增加，釋放多種炎癥因子。這在慢性酒精中毒導(dǎo)致神經(jīng)炎癥的過程中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。本發(fā)明中的葛根素、槲皮素、甘草酸、原花青素和枳椇皂苷可以通過阻斷上述環(huán)節(jié)而發(fā)揮解酒和抑制神經(jīng)炎癥現(xiàn)象的發(fā)生的效果。

有益效果：

本發(fā)明一種保健巧克力，其中葛根素、槲皮素、甘草酸、原花青素和枳椇皂苷作為解酒的活性成分能夠抑制酒精導(dǎo)致的神經(jīng)炎癥，大大縮短酒精患者的醉酒時間并抑制酒精對腦的損傷，為長期飲酒的人群提供充分的保護作用。

1.本發(fā)明中葛根素能夠有效在酒精中毒引起的神經(jīng)炎癥中起到好的緩解效果。

2.現(xiàn)有技術(shù)中的原花青素廣泛使用在化妝品和保健品中，主要有美白抗氧化作用，但還沒有研究證明原花青素可以改善酒精中毒引起的神經(jīng)炎癥，而本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)原花青素具備該用途，并且與其他成分協(xié)同使用，效果更佳明顯。

3.本發(fā)明中枳椇皂苷在發(fā)揮保肝解酒作用上有非常明顯的效果，可以顯著改善酒精導(dǎo)致的肝纖維化，降低脂質(zhì)過氧化，加快乙醇代謝的作用。

4.本發(fā)明的甘草酸對HMGB1的激活和釋放具有抑制作用，甘草酸可以作為HMGB1的直接或間接抑制劑起到抑制HMGB1，從而抑制膠質(zhì)細(xì)胞活化的作用。 5.本發(fā)明的槲皮素可以通過抑制HSP70的釋放，降低對小膠質(zhì)細(xì)胞的刺激和激活，從而達(dá)到對神經(jīng)炎癥的抑制作用。

6.由于飲酒后經(jīng)常發(fā)生的低血糖癥，需要及時補充充足葡萄糖，作為基質(zhì)的巧克力能夠及時給酒精中毒患者補充血糖，緩解醉酒狀態(tài)。巧克力優(yōu)選純可可脂，保證不添加任何添加劑，和其他活性成分組合具有協(xié)同作用，更加有利于在胃腸粘膜形成保護層，并且保證產(chǎn)品在胃黏膜均勻散開。

附圖說明

圖1為實施例1灌胃給藥模式下，本發(fā)明活性成分對酒精致小鼠翻正反射消失時間的作用示意圖。

圖2為實施例1灌胃給藥模式下，本發(fā)明活性成分對酒精致小鼠平衡失調(diào)的作用示意圖。

圖3為實施例1本發(fā)明活性成分顯著抑制慢性酒精中毒小鼠腦內(nèi)海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化。

圖4為實施例1本發(fā)明活性成分顯著抑制酒精刺激誘導(dǎo)的神經(jīng)元預(yù)警素HSP70、HMGB1的釋放。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例和附圖對本發(fā)明作進一步詳細(xì)的說明。

實施例1

本發(fā)明按照如下重量份數(shù)的活性成分進行給藥：葛根素27份、槲皮素5份、甘草酸3份和原花青素6份和枳椇皂苷27份，巧克力為55份。配制不同濃度的產(chǎn)品，分為高（80mg/kg）、中(40mg/kg)、低(20mg/kg)三個不同的給藥濃度。另外可以根據(jù)不同劑型添加不同量的巧克力用以配制成不同的保健巧克力。

上述活性成分純度均為98%。無水乙醇，購自南京化學(xué)試劑有限公司。

本實施例采用直接使用乙醇的研究結(jié)果，專業(yè)領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用市售其他酒類重現(xiàn)類似的研究結(jié)果。

實驗1、上述活性成分配方延長小鼠急性醉酒實驗后的清醒時間。

a）試驗動物：

健康雄性ICR小鼠，清潔級，體重為18～22 g。實驗動物飼養(yǎng)于 12h-12h 晝夜交替的獨立環(huán)境中，室溫維持在24±2℃，自由飲水和攝食，在適應(yīng)環(huán)境 1 周后進行實驗。對動物的所有處理均遵循國際疼痛研究協(xié)會倫理委員會的要求。

b）試驗方法：

小鼠灌胃給藥：固定小鼠，使其頭、頸和身體呈一直線，使用12號灌胃針頭，針頭從小鼠的嘴角進入，壓住舌頭，抵住上顎小心的向內(nèi)推進，進入食道后會有一種刺空感即可推藥。

活性成分配方和乙醇給藥劑量和方法：活性成分配方用生理鹽水溶解，乙醇濃度為60%，給藥方式均為灌胃給藥。

小鼠急性醉酒時間測定：將雄性ICR小鼠分為空白對照組、模型組、模型給藥組以及正常給藥組。模型組（急性醉酒模型）：灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；模型加給藥組（高中低劑量）：禁食（不禁水）12小時后，活性成分配方灌胃給藥，20分鐘后灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；正常給藥組：在基礎(chǔ)情況下灌胃給于活性成分配方（80mg/kg）。觀察記錄小鼠60分鐘內(nèi)的清醒只數(shù)隨時間的變化情況（清醒即為具有翻正反射）。

c）試驗結(jié)果描述

如圖1所示：空白組（sham）給于0.2ml生理鹽水；模型組（alcohol）灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；模型加給藥組（高中低劑量）灌胃給藥，20分鐘后灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；單給藥組在基礎(chǔ)情況下灌胃給于活性成分（高劑量）。記錄小鼠60分鐘內(nèi)的清醒只數(shù)隨時間的變化情況（n=8）。

清醒小鼠只數(shù)結(jié)果顯示，本活性成分配方可以延長飲酒后清醒時間。以上結(jié)果表明：本活性成分配方能夠顯著起到醒酒作用。

實驗2、上述活性成分配方改善酒精導(dǎo)致的小鼠平衡失調(diào)。

a）試驗動物：

健康雄性ICR小鼠，清潔級，體重為18～22 g。實驗動物飼養(yǎng)于 12h-12h 晝夜交替的獨立環(huán)境中，室溫維持在24±2℃，自由飲水和攝食，在適應(yīng)環(huán)境 1 周后進行實驗。對動物的所有處理均遵循國際疼痛研究協(xié)會倫理委員會的要求。

b）試驗方法：

小鼠灌胃給藥：固定小鼠，使其頭、頸和身體呈一直線，使用12號灌胃針頭，針頭從小鼠的嘴角進入，壓住舌頭，抵住上顎小心的向內(nèi)推進，進入食道后會有一種刺空感即可推藥。

活性成分配方和乙醇給藥劑量和方法：活性成分配方用生理鹽水溶解，乙醇濃度為60%，給藥方式均為灌胃給藥。

平衡失調(diào)-轉(zhuǎn)棒實驗：將雄性ICR小鼠分為空白對照組、模型組、模型給藥組以及正常給藥組。模型組：灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；模型加給藥組（高中低劑量）：禁食（不禁水）12小時后，活性成分配方灌胃給藥，20分鐘后灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；正常給藥組：在基礎(chǔ)情況下灌胃給于活性成分配方（80mg/kg）。觀察記錄給于乙醇溶液10分鐘后，在3分鐘內(nèi)未從轉(zhuǎn)棒上墜落的小鼠數(shù)。

c）試驗結(jié)果描述

如圖2所示：空白組（sham）給于0.2ml生理鹽水；模型組（alcohol）灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；模型加給藥組（高中低劑量）灌胃給藥，20分鐘后灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；單給藥組在基礎(chǔ)情況下灌胃給于活性成分（高劑量）。記錄給于乙醇溶液10分鐘后，在3分鐘內(nèi)未從轉(zhuǎn)棒上墜落的小鼠數(shù)（與空白對照組相比， **P< 0.01，與模型組相比， #P< 0.05，##P< 0.01，n=8）。

轉(zhuǎn)棒實驗結(jié)果顯示，本活性成分配方和生理鹽水不影響雄性小鼠的平衡感，活性成分配方可以改善醉酒導(dǎo)致的小鼠平衡能力的降低。

實驗3、上述活性成分顯著抑制小鼠醉酒實驗后腦內(nèi)海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化。

a）試驗動物：

健康雄性ICR小鼠，清潔級，體重為18～22 g。實驗動物飼養(yǎng)于 12h-12h 晝夜交替的獨立環(huán)境中，室溫維持在24±2℃，自由飲水和攝食，在適應(yīng)環(huán)境 1 周后進行實驗。對動物的所有處理均遵循國際疼痛研究協(xié)會倫理委員會的要求。

b）試驗方法：

小鼠灌胃給藥：固定小鼠，使其頭、頸和身體呈一直線，使用12號灌胃針頭，針頭從小鼠的嘴角進入，壓住舌頭，抵住上顎小心的向內(nèi)推進，進入食道后會有一種刺空感即可推藥。

活性成分配方和乙醇給藥劑量和方法：活性成分配方用生理鹽水溶解，劑量為40mg/kg，乙醇濃度為60%，給藥方式均為灌胃給藥。

將雄性ICR小鼠分為空白對照組、模型組、模型給藥組以及正常給藥組。模型組：灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；模型加給藥組：禁食（不禁水）12小時后，活性成分配方灌胃給藥，20分鐘后灌胃12ml/kg 60%乙醇溶液；正常給藥組：在基礎(chǔ)情況下灌胃給于活性成分配方。連給7天，第7天給藥后12小時后取小鼠海馬區(qū)樣品。加入含磷酸酶和蛋白酶抑制劑及 PMSF（均為 1:100 加入） 的RIPA 裂解液 300uL。于冰上勻漿，4°C 13000 rpm 離心 15 min 取上清，BCA 法測定樣本中的蛋白濃度，加入蛋白上清體積四分之一的 5×loading buffer，煮沸 5 min。

取上述各組蛋白樣本，進行免疫印跡試驗。每孔上樣20μg總蛋白，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)移至PDVF膜上，6% BSA封閉液室溫封閉2 h，加入Iba-1一抗（1:1000稀釋，CST公司），4 °C搖晃過夜，TBST洗3次，每次10 min，加入相應(yīng)二抗（1:4000稀釋，CST公司），室溫孵育2 h，TBST洗3次，每次10 min，顯色，采用quantity one軟件進行數(shù)據(jù)分析，實驗結(jié)果見圖3。

c）試驗結(jié)果描述

如圖3所示：免疫印跡試驗結(jié)果顯示，本活性成分配方和生理鹽水不會導(dǎo)致小鼠海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的過度激活，活性成分配方可以改善醉酒導(dǎo)致的小鼠海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞激活（圖3）。

實驗4、本發(fā)明顯著抑制酒精刺激誘導(dǎo)的神經(jīng)元預(yù)警素HSP70、HMGB1的釋放。

a）SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)

SH-SY5Y細(xì)胞采用含10%胎牛血清的F12/MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，加入1%的青霉素和鏈霉素雙抗（購自invitrogen公司）。

b）試驗方法：收集生長良好的SH-SY5Y細(xì)胞，計數(shù)后鋪6孔板，每孔細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×10⁶，換為無血清培養(yǎng)基，每孔為一組，分為空白對照組、模型組、模型給藥組（給藥劑量100μM）以及正常給藥組（100μM），給藥后20分鐘后除空白孔外每孔加入無水乙醇，使乙醇終濃度達(dá)到0.8%，空白對照組（sham）不給藥，給予乙醇后24小時后分別收集上清，使用甲醇-氯仿法提取上清中蛋白，加入2×Loading buffer，沸水浴5min煮樣，樣本存于-40℃。

取上述各組蛋白樣本，進行免疫印跡試驗。每孔上樣20μg總蛋白，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)移至PDVF膜上，6% BSA封閉液室溫封閉2 h，加入HSP70、HMGB1一抗（1:1000稀釋，CST公司），4 °C搖晃過夜，TBST洗3次，每次10 min，加入相應(yīng)二抗（1:4000稀釋，CST公司），室溫孵育2 h，TBST洗3次，每次10 min，顯色，采用quantity one軟件進行數(shù)據(jù)分析，實驗結(jié)果見圖4。

c）試驗結(jié)果描述：

圖4表明，與空白對照組（sham）相比，酒精刺激組HSP70、HMGB1水平顯著升高，組方藥物給藥后可顯著降低由酒精刺激引起的HSP70、HMGB1的外排增加（P<0.05），單獨加入藥物不影響細(xì)胞HSP70、HMGB1的外排，提示本組方制劑可以抑制神經(jīng)元內(nèi)由酒精刺激引起的HSP70、HMGB1的外排顯著增加。

實施例2

一種保健巧克力，包括活性成分和基質(zhì)，所述的活性成分包括以下重量份數(shù)的組分：葛根素26份、槲皮素4份、甘草酸1份、原花青素4份和枳椇皂苷26份；所述基質(zhì)為純可可脂，其重量份數(shù)為50份。

實施例3

一種保健巧克力，包括活性成分和基質(zhì)，所述的活性成分包括以下重量份數(shù)的組分：葛根素33份、槲皮素12份、甘草酸7份、原花青素12份和枳椇皂苷33份；所述的基質(zhì)為巧克力，其重量份數(shù)為65份。

以上實施例有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進都屬于本發(fā)明的保護范圍。