本發(fā)明涉及一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉及其制備方法。

背景技術(shù)：
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樺褐孔菌Inonotus Obliquus屬于真菌門(mén)、擔(dān)子菌亞門(mén)、層菌綱、無(wú)褐菌目、多孔菌科、纖孔菌屬；在我國(guó)俗稱為白樺茸，歐洲稱之為chaga，具有“西伯利亞靈芝”的美譽(yù)。主要分布在北緯45°-50°之間的俄羅斯、北歐、波蘭、日本（北海道）以及中國(guó)黑龍江等地區(qū)。樺褐孔菌的主要成分有糖類、甾體類化合物、三萜類化合物、鞣質(zhì)類、木質(zhì)素類、酚類化合物、黑色素類、生物堿類、葉酸衍生物以及芳香族的丁香醛、香草醛等。隨著人們對(duì)藥食真菌的研究不斷深入，樺褐孔菌已經(jīng)發(fā)展作為各種飲料、調(diào)味品、餅干等的輔助品；具有巨大的研究和開(kāi)發(fā)價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的是提供一種既保持了豆粉的營(yíng)養(yǎng)與口感，又具有降血壓、降血脂、降血糖的保健功能的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉及其制備方法。

上述的目的通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，其組成包括:速溶豆粉、樺褐孔菌多糖粉末、苦瓜多糖粉末、木耳多糖粉末、南瓜多糖粉末、紅薯多糖粉末、甘草多糖粉末、黃芪多糖粉末、乳化劑、甜味劑、α-環(huán)糊精、大豆磷脂，所述的速溶豆粉粉末的重量份數(shù)為65-89，所述的樺褐孔菌多糖粉末的重量份數(shù)為1-5，所述的苦瓜多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的木耳多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的南瓜多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的紅薯多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的甘草多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的黃芪多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的乳化劑的重量份數(shù)為1-3，所述的甜味劑的重量份數(shù)為1-3，所述的α-環(huán)糊精的重量份數(shù)為1-3，所述大豆磷脂的的重量份數(shù)為1-3。

所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，所述的速溶豆粉粉末的重量份數(shù)為65，所述的樺褐孔菌多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的苦瓜多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的木耳多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的南瓜多糖粉末份的重量數(shù)為1，所述的紅薯多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的甘草多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的黃芪多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的乳化劑的重量份數(shù)為1，所述的甜味劑的重量份數(shù)為1所述的α-環(huán)糊精的重量份數(shù)為1，所述大豆磷脂的的重量份數(shù)為1。

所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，所述的速溶豆粉粉末的重量份數(shù)為89，所述的樺褐孔菌多糖粉末的重量份數(shù)為5，所述的苦瓜多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的木耳多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的南瓜多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的紅薯多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的甘草多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的黃芪多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的乳化劑的重量份數(shù)為3，所述的甜味劑的重量份數(shù)為3，所述的α-環(huán)糊精的重量份數(shù)為3，所述大豆磷脂的的重量份數(shù)為3。

所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，所述的乳化劑由脂肪酸鈉和酪蛋白酸鈉組成；脂肪酸鈉:酪蛋白酸鈉=1:1；所述的甜味劑由甜菊糖、甘草甜素、木糖醇組成；甜菊糖:甘草甜素：木糖醇=1:2:3。

一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，本方法包括五步，第一步將大豆放入14℃-18℃的溫水中浸泡8-10小時(shí)，大豆與水的比例為1:1.5-4，第二步打漿，采用常溫磨漿，磨漿時(shí)的大豆與水的比例為1:8-10，磨漿的過(guò)程中加入0.0005%的維生素C鈉鹽；第三步打漿后通過(guò)150目篩，進(jìn)行過(guò)濾，煮漿滅菌制成漿液；第四步將漿液進(jìn)行噴霧干燥，在噴霧干燥的過(guò)程中進(jìn)口溫度控制在150℃，出口溫度控制在80℃，制成速溶豆粉；第五步通過(guò)風(fēng)機(jī)吹入上述重量份數(shù)的樺褐孔菌多糖粉末、苦瓜多糖粉末、木耳多糖粉末、南瓜多糖粉末、紅薯多糖粉末、甘草多糖粉末、黃芪多糖粉末、乳化劑、α-環(huán)糊精、甜味劑、大豆磷脂、并混合均勻，即得到樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉。

所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第五步所述的樺褐孔菌多糖粉末中的樺褐孔菌經(jīng)過(guò)機(jī)械粉碎，加入重量份數(shù)為88%的乙醇溶液，80℃超聲3次，每次2小時(shí)；然后在5000r/min的離心機(jī)中離心5分鐘，棄去上清液，沉淀；60℃真空、冷凍或噴霧干燥12小時(shí)，得到預(yù)處理的樺褐孔菌菌粉；所述的樺褐孔菌多糖粉末的提取，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的樺褐孔菌菌粉，加入適量的水，在100℃下提取2.5小時(shí)，提取液過(guò)濾離心棄去沉淀，上清液濃縮后加入高濃度乙醇，使乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到80%,靜置24小時(shí)，離心棄去上清液，取沉淀干燥，得到樺褐孔菌多糖；將樺褐孔菌多糖進(jìn)行除水干燥即可得到樺褐孔菌多糖粉末。

所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第五步所述的苦瓜多糖粉末的提取包括以下步驟：將苦瓜浸泡12小時(shí)，熱水煎煮，熱水煎煮的苦瓜與水的比例為1:8,煎煮溫度為100℃，煎煮時(shí)間為3小時(shí)；過(guò)濾，取澄清液，煎煮2次，合并煎煮液，濃縮，待濃縮液冷卻后，加入高濃度乙醇，乙醇濃度為75%,用膜封口，靜置48小時(shí)，虹吸出上清液，對(duì)虹吸剩下的沉淀進(jìn)行離心處理，保留沉淀，然后將沉淀于40℃干燥24小時(shí)，得到苦瓜多糖粉末。

所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第五步所述的黃芪多糖粉末的提取包括以下步驟：取黃芪和蒸餾水按黃芪和蒸餾水的比例為 1:8，浸泡12小時(shí)，水煎煮提取3 次，每次2小時(shí)；合并提取液，濃縮至一定體積，加入乙醇使含醇量達(dá)到70%，靜置24 小時(shí)，上清液回收，下層離心后真空干燥或冷凍干燥或噴霧干燥，得黃芪粗多糖；取黃芪粗多糖加雙蒸水溶解后再次醇沉，上清液回收，下層離心后真空干燥或冷凍干燥或噴霧干燥，得純化后黃芪多糖粉末。

所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第五步所述的木耳多糖粉末、紅薯多糖粉末、南瓜多糖粉末、甘草多糖粉末的提取與黃芪多糖粉末的提取相同。

所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第四步所述的速溶豆粉采用濕法生產(chǎn)，將大豆浸泡后進(jìn)行磨漿，然后進(jìn)行漿渣分離，得到漿液，進(jìn)行煮漿滅菌；浸泡大豆的溫水的pH一般控制在6.5-7.0；用檸檬酸調(diào)節(jié)溫水的pH；煮漿溫度為80℃-85℃，時(shí)間為10-15分鐘，然后進(jìn)行超高溫瞬時(shí)滅菌，溫度控制在135℃-145℃。

有益效果：

1.本發(fā)明以樺褐孔菌多糖粉末為主，苦瓜多糖、木耳多糖、南瓜多糖、紅薯多糖、甘草多糖、黃芪多糖為輔進(jìn)行科學(xué)合理的搭配，組方獨(dú)特、制作方法獨(dú)特、協(xié)同作用明顯，不但具有很好的降血糖、降血脂效果而且具有免疫調(diào)節(jié)功能；

2.本發(fā)明的樺褐孔菌多糖粉末主要從樺褐孔菌細(xì)胞壁中得到；（樺褐孔菌菌絲和菌核中的多糖主要含有β-葡聚糖，蛋白復(fù)合物和雜多糖組成）；樺褐孔菌多糖粉末主要含有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖和木糖；研究發(fā)現(xiàn)，樺褐孔菌多糖具有抗腫瘤、降低血糖血脂及抗氧化作用；但對(duì)多糖的提取工藝不同，多糖的收率也不相同，因此本發(fā)明采用科學(xué)的提取方式方法獨(dú)特、協(xié)同作用明顯，使制成的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉不但具有很好的降血糖、降血脂效果而且具有免疫調(diào)節(jié)功能；同時(shí)，未發(fā)現(xiàn)腹脹、便秘或消化不良等現(xiàn)象，使樺褐孔菌多糖能夠工業(yè)化生產(chǎn)的保證。

本發(fā)明的甘草多糖粉末的甘草GlycyrrhizauralensisFisch,為豆科甘草屬植物甘草、光果甘草、脹果甘草的根及根莖；氣味甘，平，無(wú)毒；主要產(chǎn)于新疆、內(nèi)蒙、山西、甘肅等地。具有補(bǔ)脾益氣、潤(rùn)肺止咳、緩解止痛、緩和藥性、瀉火解毒之功效。甘草多糖是從甘草中提取出的一類雜多糖，其具有抗腫瘤、抗病毒等多種作用；

4.本發(fā)明的黃芪多糖粉末的黃芪多糖Astragalus polysaccharides是從豆科植物蒙古黃芪AstragalusmembranaceusBge. var. mongholicus或膜莢黃芪AstragalusmembranaceusBge.的干燥根，氣味甘，微溫，無(wú)毒；黃芪多糖為黃芪有效成分之一，具有抗腫瘤、抗炎、抗衰老、抗疲勞、控制血糖的作用。

本發(fā)明的速溶豆粉的豆粉具有降脂減肥、抗凝血、抗氧化、抗癌及免疫調(diào)節(jié)的作用，深受中老年人群喜愛(ài)；

6.本發(fā)明的樺褐孔菌多糖、苦瓜多糖、木耳多糖、南瓜多糖、紅薯多糖均具有降血糖、降血脂、防癌抗癌等作用，

糖尿病病人受到飲食低糖、低脂肪等嚴(yán)格限制，因此豆粉成為糖尿病病人的日常飲食、保健等必不可少的營(yíng)養(yǎng)食品；但由于豆粉蛋白含量高，糖尿病病人大都數(shù)為中老年人，一般都伴有脾胃功能虛弱，有的甚至菌群失調(diào)，食用普通豆粉會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重消化不良、便秘或便溏等現(xiàn)象。本發(fā)明樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉未發(fā)現(xiàn)腹脹、便秘或消化不良等現(xiàn)象，具有意想不到的技術(shù)效果。且本豆粉不含蔗糖，特別適合糖尿病、高血壓病人日常保健食用。

本發(fā)明的甜味劑均為非糖類天然甜味劑，甜度適中，熱量低，安全性高，在代謝的過(guò)程中不受胰島素的控制，不會(huì)引發(fā)肥胖、高血糖、高血壓等癥狀；特別適合糖尿病、高血壓病人食用。

本發(fā)明采用的樺褐孔菌多糖為主，苦瓜多糖、木耳多糖、南瓜多糖、紅薯多糖、甘草多糖、黃芪多糖為輔；復(fù)合多糖具有更強(qiáng)的降血壓、降血脂、降血糖、防癌抗癌的作用；協(xié)同作用明顯，不但具有很好的降血糖、降血脂效果而且具有免疫調(diào)節(jié)功能；同時(shí)，本發(fā)明樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉未發(fā)現(xiàn)腹脹、便秘或消化不良等現(xiàn)象；樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉有效的解決了長(zhǎng)期單獨(dú)飲用豆粉會(huì)造成的腹脹及腸道菌群紊亂等問(wèn)題，具有意想不到的效果。

本發(fā)明加工工藝簡(jiǎn)單，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的速溶性較好，日常飲用方便，既保持了豆粉原有的風(fēng)味，又具有保健功能；長(zhǎng)期飲用能夠降低血壓、血糖、血脂，同時(shí)還能扶植腸道有益菌的生長(zhǎng)和增值，本發(fā)明樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉未發(fā)現(xiàn)腹脹、便秘或消化不良等現(xiàn)象；具有很好的保健功能，適合長(zhǎng)期飲用。

本發(fā)明的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，填補(bǔ)了樺褐孔菌多糖在豆粉領(lǐng)域應(yīng)用的空白，充分發(fā)揮了樺褐孔菌多糖的保健作用，同時(shí)克服了脾胃功能虛弱的人群食用普通豆粉會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重消化不良、便秘、便溏等缺點(diǎn)，具有意想不到的技術(shù)效果，豐富了豆粉的多樣化生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明：

附圖1是本發(fā)明的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響圖。

附圖2是本發(fā)明的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響圖。

附圖3是本發(fā)明的雙歧桿菌染色后的實(shí)物圖。

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1：

一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，其組成包括:速溶豆粉、樺褐孔菌多糖粉末、苦瓜多糖粉末、木耳多糖粉末、南瓜多糖粉末、紅薯多糖粉末、甘草多糖粉末、黃芪多糖粉末、乳化劑、甜味劑、α-環(huán)糊精、大豆磷脂，所述的速溶豆粉粉末的重量份數(shù)為65-89，所述的樺褐孔菌多糖粉末的重量份數(shù)為1-5，所述的苦瓜多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的木耳多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的南瓜多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的紅薯多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的甘草多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的黃芪多糖粉末的重量份數(shù)為1-3，所述的乳化劑的重量份數(shù)為1-3，所述的甜味劑的重量份數(shù)為1-3，所述的α-環(huán)糊精的重量份數(shù)為1-3，所述大豆磷脂的的重量份數(shù)為1-3。

實(shí)施例2：

實(shí)施例1所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，所述的速溶豆粉粉末的重量份數(shù)為65，所述的樺褐孔菌多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的苦瓜多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的木耳多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的南瓜多糖粉末份的重量數(shù)為1，所述的紅薯多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的甘草多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的黃芪多糖粉末的重量份數(shù)為1，所述的乳化劑的重量份數(shù)為1，所述的甜味劑的重量份數(shù)為1所述的α-環(huán)糊精的重量份數(shù)為1，所述大豆磷脂的的重量份數(shù)為1。

實(shí)施例3：

實(shí)施例1所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，所述的速溶豆粉粉末的重量份數(shù)為89，所述的樺褐孔菌多糖粉末的重量份數(shù)為5，所述的苦瓜多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的木耳多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的南瓜多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的紅薯多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的甘草多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的黃芪多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的乳化劑的重量份數(shù)為3，所述的甜味劑的重量份數(shù)為3，所述的α-環(huán)糊精的重量份數(shù)為3，所述大豆磷脂的的重量份數(shù)為3。

實(shí)施例4：

實(shí)施例1或2或3所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，所述的乳化劑由脂肪酸鈉和酪蛋白酸鈉組成；脂肪酸鈉：酪蛋白酸鈉=1:1；所述的甜味劑由甜菊糖、甘草甜素、木糖醇組成；甜菊糖:甘草甜素:木糖醇=1:2:3。

實(shí)施例5：

一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，本方法包括五步，第一步將大豆放入14℃-18℃的溫水中浸泡8-10小時(shí)，大豆與水的比例為1:1.5-4，第二步打漿，采用常溫磨漿，磨漿時(shí)的大豆與水的比例為1:8-10，磨漿的過(guò)程中加入0.0005%的維生素C鈉鹽；第三步打漿后通過(guò)150目篩，進(jìn)行過(guò)濾，煮漿滅菌制成漿液；第四步將漿液進(jìn)行噴霧干燥，在噴霧干燥的過(guò)程中進(jìn)口溫度控制在150℃，出口溫度控制在80℃，制成速溶豆粉；第五步通過(guò)風(fēng)機(jī)吹入上述重量份數(shù)的樺褐孔菌多糖粉末、苦瓜多糖粉末、木耳多糖粉末、南瓜多糖粉末、紅薯多糖粉末、甘草多糖粉末、黃芪多糖粉末、乳化劑、α-環(huán)糊精、甜味劑、大豆磷脂、并混合均勻，即得到樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉。

實(shí)施例6：

實(shí)施例5所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第五步所述的樺褐孔菌多糖粉末中的樺褐孔菌經(jīng)過(guò)機(jī)械粉碎，加入重量份數(shù)為88%的乙醇溶液，80℃超聲3次，每次2小時(shí)；然后在5000r/min的離心機(jī)中離心5分鐘，棄去上清液，沉淀；60℃真空、冷凍或噴霧干燥12小時(shí)，得到預(yù)處理的樺褐孔菌菌粉；所述的樺褐孔菌多糖粉末的提取，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的樺褐孔菌菌粉，加入適量的水，在100℃下提取2.5小時(shí)，提取液過(guò)濾離心棄去沉淀，上清液濃縮后加入高濃度乙醇，使乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到80%,靜置24小時(shí)，離心棄去上清液，取沉淀干燥，得到樺褐孔菌多糖；將樺褐孔菌多糖進(jìn)行除水干燥即可得到樺褐孔菌多糖粉末。

實(shí)施例7：

實(shí)施例5所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第五步所述的苦瓜多糖粉末的提取包括以下步驟：將苦瓜浸泡12小時(shí)，熱水煎煮，熱水煎煮的苦瓜與水的比例為1:8,煎煮溫度為100℃，煎煮時(shí)間為3小時(shí)；過(guò)濾，取澄清液，煎煮2次，合并煎煮液，濃縮，待濃縮液冷卻后，加入高濃度乙醇，乙醇濃度為75%,用膜封口，靜置48小時(shí)，虹吸出上清液，對(duì)虹吸剩下的沉淀進(jìn)行離心處理，保留沉淀，然后將沉淀于40℃干燥24小時(shí)，得到苦瓜多糖粉末。

實(shí)施例8：

實(shí)施例5所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第五步所述的黃芪多糖粉末的提取包括以下步驟：取黃芪和蒸餾水按黃芪和蒸餾水的比例為 1:8，浸泡12小時(shí)，水煎煮提取3 次，每次2小時(shí)；合并提取液，濃縮至一定體積，加入乙醇使含醇量達(dá)到70%，靜置24 小時(shí)，上清液回收，下層離心后真空干燥或冷凍干燥或噴霧干燥，得黃芪粗多糖；取黃芪粗多糖加雙蒸水溶解后再次醇沉，上清液回收，下層離心后真空干燥或冷凍干燥或噴霧干燥，得純化后黃芪多糖粉末。

實(shí)施例9：

實(shí)施例5所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第五步所述的木耳多糖粉末、紅薯多糖粉末、南瓜多糖粉末、甘草多糖粉末的提取與黃芪多糖粉末的提取相同。

實(shí)施例10：

實(shí)施例5所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，第四步所述的速溶豆粉采用濕法生產(chǎn)，將大豆浸泡后進(jìn)行磨漿，然后進(jìn)行漿渣分離，得到漿液，進(jìn)行煮漿滅菌；浸泡大豆的溫水的pH一般控制在6.5-7.0；用檸檬酸調(diào)節(jié)溫水的pH；煮漿溫度為80℃-85℃，時(shí)間為10-15分鐘，然后進(jìn)行超高溫瞬時(shí)滅菌，溫度控制在135℃-145℃。

實(shí)施例11：

實(shí)施例1所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，所述的速溶豆粉粉末的重量份數(shù)為70，所述的樺褐孔菌多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的苦瓜多糖粉末的重量份數(shù)為2，所述的木耳多糖粉末的重量份數(shù)為2，所述的南瓜多糖粉末的重量份數(shù)為2，所述的紅薯多糖粉末的重量份數(shù)為2，所述的甘草多糖粉末的重量份數(shù)為2，所述的黃芪多糖粉末的重量份數(shù)為2，所述的乳化劑的重量份數(shù)為2，所述的甜味劑的重量份數(shù)為2，所述的α-環(huán)糊精的重量份數(shù)為2，所述大豆磷脂的的重量份數(shù)為2。

實(shí)施例12：

實(shí)施例1所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，所述的速溶豆粉粉末的重量份數(shù)為65，所述的樺褐孔菌多糖粉末的重量份數(shù)為5，所述的苦瓜多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的木耳多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的南瓜多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的紅薯多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的甘草多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的黃芪多糖粉末的重量份數(shù)為3，所述的乳化劑的重量份數(shù)為3，所述的甜味劑的重量份數(shù)為3，所述的α-環(huán)糊精的重量份數(shù)為3，所述大豆磷脂的的重量份數(shù)為3。

實(shí)施例13：

實(shí)施例5所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，本方法包括五步，第一步將大豆放入14℃的溫水中浸泡8小時(shí)，大豆與水的比例為1:1.5，第二步打漿，采用常溫磨漿，磨漿時(shí)的大豆與水的比例為1:8，磨漿的過(guò)程中加入0.0005%的維生素C鈉鹽；第三步打漿后通過(guò)150目篩，進(jìn)行過(guò)濾，煮漿滅菌制成漿液；第四步將漿液進(jìn)行噴霧干燥，在噴霧干燥的過(guò)程中進(jìn)口溫度控制在150℃，出口溫度控制在80℃，制成速溶豆粉；第五步通過(guò)風(fēng)機(jī)吹入上述重量份數(shù)的樺褐孔菌多糖粉末、苦瓜多糖粉末、木耳多糖粉末、南瓜多糖粉末、紅薯多糖粉末、甘草多糖粉末、黃芪多糖粉末、乳化劑、α-環(huán)糊精、甜味劑、大豆磷脂、并混合均勻，即得到樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉。

實(shí)施例14：

實(shí)施例5所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，本方法包括五步，第一步將大豆放入18℃的溫水中浸泡10小時(shí)，大豆與水的比例為1: 4，第二步打漿，采用常溫磨漿，磨漿時(shí)的大豆與水的比例為1: 10，磨漿的過(guò)程中加入0.0005%的維生素C鈉鹽；第三步打漿后通過(guò)150目篩，進(jìn)行過(guò)濾，煮漿滅菌制成漿液；第四步將漿液進(jìn)行噴霧干燥，在噴霧干燥的過(guò)程中進(jìn)口溫度控制在150℃，出口溫度控制在80℃，制成速溶豆粉；第五步通過(guò)風(fēng)機(jī)吹入上述重量份數(shù)的樺褐孔菌多糖粉末、苦瓜多糖粉末、木耳多糖粉末、南瓜多糖粉末、紅薯多糖粉末、甘草多糖粉末、黃芪多糖粉末、乳化劑、α-環(huán)糊精、甜味劑、大豆磷脂、并混合均勻，即得到樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉。

實(shí)施例15：

實(shí)施例5所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，本方法包括五步，第一步將大豆放入16℃的溫水中浸泡9小時(shí)，大豆與水的比例為1:3，第二步打漿，采用常溫磨漿，磨漿時(shí)的大豆與水的比例為1:9，磨漿的過(guò)程中加入0.0005%的維生素C鈉鹽；第三步打漿后通過(guò)150目篩，進(jìn)行過(guò)濾，煮漿滅菌制成漿液；第四步將漿液進(jìn)行噴霧干燥，在噴霧干燥的過(guò)程中進(jìn)口溫度控制在150℃，出口溫度控制在80℃，制成速溶豆粉；第五步通過(guò)風(fēng)機(jī)吹入上述重量份數(shù)的樺褐孔菌多糖粉末、苦瓜多糖粉末、木耳多糖粉末、南瓜多糖粉末、紅薯多糖粉末、甘草多糖粉末、黃芪多糖粉末、乳化劑、α-環(huán)糊精、甜味劑、大豆磷脂、并混合均勻，即得到樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉。

實(shí)施例16：

上述實(shí)施例所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，制備樺褐孔菌多糖，樺褐孔菌經(jīng)過(guò)機(jī)械粉碎，加入體積分?jǐn)?shù)為88%的乙醇溶液，80℃超聲3次，每次2小時(shí)。然后在5000r/min的離心機(jī)中離心5分鐘，棄去上清液，沉淀。60℃真空、冷凍或噴霧干燥12小時(shí)，得到預(yù)處理的樺褐孔菌菌粉，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的樺褐孔菌菌粉，加入適量的水，在適宜的溫度下提取適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，提取液過(guò)濾離心棄去沉淀，上清液濃縮后加入高濃度乙醇，使乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到80%,靜置24小時(shí)，離心沉淀干燥，得到樺褐孔菌多糖。將樺褐孔菌多糖進(jìn)行除水干燥即可得到樺褐孔菌多糖粉末。

將豆粉65份、樺褐孔菌多糖5份、苦瓜多糖3份、木耳多糖3份、南瓜多糖3份、紅薯多糖3份、甘草多糖3份、黃芪多糖3份，在進(jìn)口溫度的150攝氏度，出口溫度80攝氏度，對(duì)豆粉進(jìn)行噴霧干燥，在干燥的過(guò)程中，通過(guò)風(fēng)機(jī)鼓入樺褐孔菌多糖、苦瓜多糖、木耳多糖、南瓜多糖、紅薯多糖、甘草多糖、黃芪多糖。

實(shí)施例17：

上述實(shí)施例所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，制備苦瓜多糖，將苦瓜浸泡12小時(shí)，熱水煎煮，熱水煎煮的料液比為1:8，煎煮溫度為100℃，煎煮時(shí)間為3小時(shí)。趁熱過(guò)濾，取澄清液，煎煮2次，合并煎煮液，濃縮，待濃縮液冷卻后，加入高濃度乙醇，使醇沉濃度為75%,用膜封口，靜置48小時(shí)，虹吸出上清液，對(duì)虹吸剩下的沉淀進(jìn)行離心處理，保留沉淀，然后將沉淀用烘箱40℃干燥24h，得到苦瓜粗多糖粉末。

取豆粉89份、苦瓜多糖1份、樺褐孔菌多糖1份、木耳多糖1份、南瓜多糖1份、紅薯多糖1份、甘草多糖1份、黃芪多糖1份、乳化劑1份、甜味劑1份、α-環(huán)糊精1份、大豆磷脂1份。

該樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法同實(shí)施例16

實(shí)施例18：

上述實(shí)施例所述的一種樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制備方法，

制備黃芪多糖，取黃芪和蒸餾水按料液比為 1:8，浸泡12小時(shí)，水煎煮提取3 次，每次2小時(shí)。合并提取液，濃縮至一定體積，加乙醇使含醇量達(dá)到70%，靜置24 小時(shí)，上清液回收，下層離心后真空干燥或冷凍干燥或噴霧干燥，得黃芪粗多糖。取黃芪粗多糖加雙蒸水溶解后再次醇沉，上清液回收，下層離心后真空干燥或冷凍干燥或噴霧干燥，得純化后黃芪多糖。

樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉由以下重量比多糖與豆粉均勻混合噴霧干燥制成，樺褐孔菌多糖89份、苦瓜多糖1份、木耳多糖1份、南瓜多糖1份、紅薯多糖1份、甘草多糖1份、黃芪多糖1份。

該樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的制作方法同實(shí)施例16。

下面是本發(fā)明創(chuàng)造所提供的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉中樺褐孔菌多糖的各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果與分析討論。

上述實(shí)施例中不同濃度樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的作用

將配制好的單細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100 μL，每孔細(xì)胞個(gè)數(shù)為103個(gè)，5%CO2、37 ℃培養(yǎng)24 h后，吸出原培養(yǎng)液，每孔加入不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)液100 μL，培養(yǎng)16 h。將細(xì)胞分為空白對(duì)照組、胰島素組（10^-7mmol·L^-1）、二甲雙胍組（10^-3 mmol·L^-1）、復(fù)合豆粉藥物組（終濃度為0.0625、0.125、0.250、0.500、1.00 mg·mL^-1），用移液槍輕吸去原培養(yǎng)液，加入各組所需的培養(yǎng)液，培養(yǎng)24 h后，用葡萄糖試劑盒測(cè)定培養(yǎng)液中葡萄糖含量。計(jì)算各孔細(xì)胞的葡萄糖攝取量。各孔葡萄糖攝取量=空白孔含糖量－其余各孔含糖量。

如表1（不同濃度復(fù)合豆粉對(duì)HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響）所示，與空白對(duì)照組相比，不同濃度的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉均能促進(jìn)HepG2細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液中葡萄糖的攝取，其作用效果表現(xiàn)為當(dāng)復(fù)合豆粉濃度較小（0.0625、0.125、0.25 mg·mL^-1）時(shí)，培養(yǎng)液中的葡萄糖消耗量逐漸增加，隨著樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉濃度逐漸增大（0.5、1.0 mg·mL^-1），培養(yǎng)液中的葡萄糖消耗量降低，當(dāng)樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉濃度為0.25 mg·mL^-1時(shí)，作用效果最好。

表1 不同濃度IOP對(duì)HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響

注：表1中與空白對(duì)照組比較，“*”代表P<0.5，“**”代表P<0.01。

以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉具有一定的降糖作用，其中，以0.25 mg·mL^-1的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉的降糖效果最好。

上述實(shí)施例所述的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)免疫功能調(diào)節(jié)作用的研究。

材料

樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，根據(jù)本發(fā)明所述配方制得。

實(shí)驗(yàn)方法

（2.1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性BALB/c小鼠，體重18~22g，由佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

（2.2）試劑配制方法

完全培養(yǎng)液（含10%胎牛血清和1%雙抗）：89mL RPMI-1640培養(yǎng)液中加入10mL胎牛血清和1mL雙抗，混合均勻，過(guò)0.22μm濾膜除菌后于4℃保存。

·mL^-1ConA溶液：精密稱取ConA1mg，溶于5mL不完全RPMI-1640 培養(yǎng)液中，過(guò)0.22μm濾膜除菌，-20℃避光保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取0.5mL稀釋至10mL。

·mL^-1LPS溶液：精密稱取LPS 1mg，溶于5mL不完全RPMI-1640 培養(yǎng)液中，過(guò)0.22μm濾膜除菌，-20℃避光保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取0.5mL稀釋至5mL。

·mL^-1 MTT溶液：精密稱取MTT250mg溶于50mL PBS溶液中，過(guò)0.22μm濾膜除菌，-20℃避光保存。

·mL^-1樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉溶液：精密稱取樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉 10 mg溶于5 mL不完全RPMI-1640 培養(yǎng)液中，實(shí)驗(yàn)中藥物終濃度為200，400，800 μg·mL^-1。

常規(guī)制備脾淋巴細(xì)胞

取BALB/c小鼠10只，眼球放血后脫頸處死，用75%乙醇消毒。在無(wú)菌條件下取脾，于裝有無(wú)菌PBS液的培養(yǎng)皿中研磨，過(guò)200目篩網(wǎng)后用PBS沖洗三次，離心（1000 r/min，5 min）棄上清；沉淀加6mL紅細(xì)胞裂解液（4℃，3min），離心（1000 r/min，5 min）棄上清；加10mL完全培養(yǎng)液，混勻，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞后調(diào)細(xì)胞濃度為5×107個(gè)·mL^-1。

樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)小鼠脾細(xì)胞體外增殖影響

(2.4.1)對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響

將制備好的脾淋巴細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，分為空白組、模型組和給藥組（每組6個(gè)復(fù)孔），每孔加細(xì)胞懸液100μL，置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，加入ConA使其終濃度為5 μg·mL^-1（空白對(duì)照組除外），置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后各給藥組分別再加入藥物80μL/孔，空白組與模型組加入等體積不完全培養(yǎng)液，37℃、5% CO2培養(yǎng)48h后每孔加入5 mg·mL^-1 MTT 10 μL，孵育4 h，棄去上清，每孔加入二甲亞砜100 μL，振蕩后在酶標(biāo)儀上于492 nm處測(cè)吸光度（OD）值。

抑制率（%）=（1－實(shí)驗(yàn)組/模型對(duì)照組）×100%

(2.4.2)對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響

將制備好的脾淋巴細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，分為空白組、模型組和給藥組（每組6個(gè)復(fù)孔），每孔加細(xì)胞懸液100μL，置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，加入LPS使其終濃度為10 μg·mL^-1（空白組除外），置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后各給藥組分別再加入藥物80μL/孔，空白組與模型組加入等體積不完全培養(yǎng)液，37℃、5% CO2培養(yǎng)48h后每孔加入5mg·mL^-1 MTT 10 μL，孵育4 h，棄去上清，每孔加入二甲亞砜100 μL，振蕩后在酶標(biāo)儀上于492 nm處測(cè)吸光度（OD）值。

增值率（%）=（實(shí)驗(yàn)組/模型對(duì)照組^－1）×100%

(2.5) 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±）表示，應(yīng)用軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間參數(shù)經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05為有顯著差異，P<0.01為有極顯著差異。

結(jié)果與分析

(3.1)樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)小鼠脾細(xì)胞體外增殖影響結(jié)果

(3.1.1) 對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響結(jié)果；

表2樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響。

注：表2 中“*”代表P<0.5，“**”代表P<0.01。

附圖1是本發(fā)明的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響圖。

由表2及附圖1可知，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組相比具有極顯著性差異（P<0.01），造模成功。與模型組相比，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉低劑量組OD值降低，具有顯著性差異（P<0.01或P<0.05），而高中劑量組OD值增高。說(shuō)明樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉高中劑量組對(duì)ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖均有顯著的促進(jìn)作用（P<0.05或P<0.01），而低劑量組對(duì)ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖具有抑制作用。

對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響及附圖2。

注：表3 中“*”代表P<0.5，“**”代表P<0.01。

附圖2是本發(fā)明的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖的影響圖。

由表3及附圖2可知，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組相比具有極顯著性差異（P<0.01），造模成功。與模型組相比，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉低劑量組OD值降低，具有顯著性差異（P<0.01或P<0.05），而高中劑量組OD值增高。說(shuō)明樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉高中劑量組對(duì)LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖均有顯著的促進(jìn)作用（P<0.05或P<0.01），而低劑量組對(duì)LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖有抑制作用。

(3.2)分析

本試驗(yàn)選擇的刀豆蛋白A（ConA）及脂多糖（LPS）均為絲裂原，可與淋巴細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，刺激靜止淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，刀豆蛋白A（ConA）能選擇性激活T（Ts）細(xì)胞，使T細(xì)胞在體外增殖；LPS能直接作用于B淋巴細(xì)胞，增加DNA合成，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞分裂，為B淋巴細(xì)胞的非特異性有絲分裂原，故體外能刺激B淋巴細(xì)胞增殖。

在對(duì)ConA誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖實(shí)驗(yàn)中，與模型組相比，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉低劑量組OD值降低，具有顯著性差異，而高中劑量組OD值增高，說(shuō)明樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉高中劑量組對(duì)ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖均有顯著的促進(jìn)作用，而低劑量組對(duì)ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖具有抑制作用。在對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞體外增殖實(shí)驗(yàn)中，與模型組相比，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉低劑量組OD值降低，具有顯著性差異，而高中劑量組OD值增高。說(shuō)明樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉高中劑量組對(duì)LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖均有顯著的促進(jìn)作用，而低劑量組對(duì)LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖有抑制作用。因此，高中劑量的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉在體外均能促進(jìn)ConA和LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖，說(shuō)明其具有免疫功能調(diào)節(jié)作用。

上述實(shí)施例所述的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)雙歧桿菌的影響

注：與對(duì)照組相比

樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉用藥組與對(duì)照組相比，雙歧桿菌的數(shù)量明顯上升（P<0.05）。

圖3 雙歧桿菌染色后的實(shí)物圖

以上實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象說(shuō)明，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉，具有明顯的扶植雙歧桿菌增殖的作用。

上述實(shí)施例所述的樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用。

表5 樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)腸道菌群調(diào)節(jié)結(jié)果

同一時(shí)間每個(gè)多糖樣品組分別隨著濃度增加，大腸用藥組、雙歧用藥組和大腸雙歧組的E值分別增加；同一濃度每個(gè)多糖樣品組分別隨著時(shí)間的增加，大腸用藥組、雙歧用藥組和大腸雙歧組的E值分別增加；大腸用藥組中，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉樣品均對(duì)大腸桿菌具有抑制作用。雙歧桿菌用藥組中，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉樣品對(duì)雙歧桿菌具有促進(jìn)作用，大腸雙歧用藥組中，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉樣品均對(duì)大腸雙歧混合菌具有促進(jìn)作用。從表中還可以看出大腸雙歧用藥組的每一個(gè)E值都比歧桿菌用藥組相對(duì)應(yīng)的E值高，其是由于雙歧桿菌分別的乙酸等物質(zhì)可以抑制大腸桿菌的增長(zhǎng)。

以上樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉對(duì)腸道菌群的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉樣品能夠不同程度的扶植有益菌抑制有害菌以及對(duì)腸道菌群有益的微生態(tài)調(diào)節(jié)作用；服用樺褐孔菌多糖復(fù)合豆粉未發(fā)現(xiàn)腹脹、便秘或消化不良等現(xiàn)象。

以上實(shí)例是本發(fā)明的技術(shù)方案，并不對(duì)其進(jìn)行限制；本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式均屬于本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)所限定的保護(hù)范圍。