本發(fā)明涉及食品和保健品領(lǐng)域，具體涉及一種營養(yǎng)補充劑。
背景技術(shù)：
隨著人民生活水平的提高，公眾對營養(yǎng)和健康的要求日益強烈，食品中含有多種營養(yǎng)素，但因種類不同，其分布和含量也不相同。此外，在食品的生產(chǎn)、加工和保藏過程中，營養(yǎng)素往往遭受損失。為補充食品中營養(yǎng)素的不足，提高食品的營養(yǎng)價值，適應(yīng)不同人群的需要，可添加營養(yǎng)強化劑。營養(yǎng)強化劑兼有簡化膳食處理、方便攝食和防病保健等作用。特別在當今，食品營養(yǎng)強化已經(jīng)成為許多國家政府提高其國民整體健康水平的重要手段。
目前市售的營養(yǎng)補充劑多為無機小分子化合物，這些化合物主要通過化學(xué)合成獲得。研究人員正在不斷尋找來源天然、功效顯著，特別是具有延緩衰老作用的營養(yǎng)補充劑。
在煙葉眾多成分中，以蛋白質(zhì)含量最為豐富。煙葉中的蛋白質(zhì)分為可溶性蛋白和不溶性蛋白?？扇苄缘鞍字幸话胱笥沂侨~綠體蛋白質(zhì)（Fraction I protein ，F(xiàn)I蛋白）， 另一半為其他可溶性蛋白質(zhì)的復(fù)合物（Fraction II protein ， F II 蛋白）。以前人們大都把注意力集中在提高作物結(jié)實器官的蛋白質(zhì)含量上，較少關(guān)注植物葉蛋白的開發(fā)利用。隨著對葉蛋白研究的不斷深入，人們逐漸認識到植物葉蛋白是世界上最豐富的蛋白資源，是解決當前世界人口日益膨脹問題的一個新的食物蛋白來源。
一些研究結(jié)果表明，植物葉蛋白尤以煙草葉片中可溶性蛋白含量高，F(xiàn)I蛋白中的各種必需氨基酸含量不僅均高于世界糧農(nóng)組織制定的蛋白制品中必需氨基酸含量標準，其中酪氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸和亮氨酸都超過該標準1倍左右，比一些主要糧食作物如水稻、小麥、玉米、大豆蛋白質(zhì)中的必需氨基酸含量都高，表明煙葉中FI蛋白具有較高的營養(yǎng)價值。煙葉蛋白質(zhì)比雞蛋、乳酪和牛奶更適合人體吸收利用，具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值。
早期研究工作者提取的FI蛋白往往帶有顏色和味道，且生產(chǎn)工藝復(fù)雜，投資大，產(chǎn)量低，人們難以接受。后來，許多科研工作者對煙葉中的FI蛋白進行了提純，得到了高純度的FI蛋白，其中Kung和Tso、Lowe對煙葉FI蛋白提純方法的逐步簡化做出了很大的貢獻。然而，這些提取方法都有超速或高速冷凍離心分離步驟，且大多過程均需控制在0-4℃左右；亦有采用等電聚焦、凝膠電泳、超濾等方法提取FI蛋白的。這些方法雖然能獲得純凈的FI蛋白，但成本較高，單位時間提取的產(chǎn)量較低，難以實現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。FII蛋白的提取技術(shù)要比FI蛋白簡單很多，國內(nèi)外也進行了深入研究，并已進入了應(yīng)用階段，如煙葉硒蛋白作為食品添加劑和保健食品在我國食品領(lǐng)域中有著廣泛應(yīng)用。
煙葉蛋白除了具有蛋白質(zhì)的基本功能特性外，還具有許多特殊的功能特性。煙葉蛋白中富含硒，以硒蛋氨酸和硒半胱氨酸或其他形式存在。硒具有廣泛的醫(yī)療保健作用，補充硒能預(yù)防癌癥、肝炎、心血管疾病等，硒對癌癥病人的化療有防止白細胞減少的作用。然而，硒又是營養(yǎng)劑量與毒性劑量范圍很窄的微量元素，因此，發(fā)展具有低毒高效屬性的硒產(chǎn)品，用于預(yù)防與治療相關(guān)疾病意義重大。利用煙葉對無機硒的代謝，可得到蛋白質(zhì)態(tài)硒；無機硒在轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)態(tài)硒的過程中，毒性大大降低，主要表現(xiàn)為急性毒性的大幅下降。已有充分證據(jù)表明，與亞硒酸鈉相比，煙葉硒蛋白具有低毒高效特性，因而煙葉硒蛋白作為新的硒源具有潛在優(yōu)勢。目前，煙葉硒蛋白已被我國衛(wèi)生部批準作為食品添加劑和具有免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老功效的保健食品。煙葉蛋白的燃燒產(chǎn)物對卷煙的吸味產(chǎn)生不利影響，因而從煙葉中提取出煙葉蛋白，將剩下的部分用于卷煙生產(chǎn)，將是煙草綜合利用的發(fā)展方向。
煙葉蛋白經(jīng)酶水解后，得到各種各樣的生物活性肽。這些肽可以是小到只有2個氨基酸的二肽，也可以是復(fù)雜的長鏈或環(huán)狀多肽，并且多半是經(jīng)過糖苷化、磷酸化衍生的產(chǎn)物?，F(xiàn)代生物代謝研究發(fā)現(xiàn)：人類攝取的蛋白質(zhì)經(jīng)過消化道的多種酶水解后，不像以前認為的那樣僅以氨基酸的形式被吸收，更多的是以低肽的形式被直接吸收，而且二肽和三肽的吸收速度比同一組成的氨基酸更快。近年來的研究表明：生物活性肽是一類多功能因子，生物的生長發(fā)育、細胞分化、大腦活動、腫瘤病變、免疫防御、生殖控制、抗衰老、生物鐘規(guī)律及分子進化等均涉及到生物活性肽。如抗菌活性肽，是一類生物活性小肽，一般具有抗細菌或真菌的作用，有些還具有抗原蟲、病毒或腫瘤細胞的功能?？咕木哂袕V譜的抗菌作用，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌均具有抑制作用；還可以殺死動物體內(nèi)的腫瘤細胞，卻不破壞動物體內(nèi)的正常細胞。又如降血壓肽，是天然蛋白水解后具有顯著降血壓活性的一類肽，長期使用也無毒副作用。降血壓肽主要是通過競爭性抑制人體內(nèi)的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性而達到降血壓目的。從煙葉蛋白中提取出來的十三肽，具有抗菌活性和蛋白酶抑制活性，且具有較高的穩(wěn)定性，是一種潛在的蛋白酶抑制劑。
目前，有關(guān)以煙草蛋白為原料生產(chǎn)生物活性肽和氨基酸的研究國內(nèi)鮮有報道，特別是制備生物活性肽方面，國外也很少報道。而從食品和營養(yǎng)的角度講，以生物活性肽為功能因子，可以開發(fā)出低抗原食品、嬰兒食品、運動食品、促鈣吸收食品、降壓食品、醒酒食品等一系列產(chǎn)品。
植物生理學(xué)家認為，煙葉蛋白的質(zhì)量最好，含氨基酸種類多，最易被人體吸收利用；而且每667m2生長良好的煙草，可提取出35kg無色無味的蛋白質(zhì)。煙草蛋白既可稀釋成蛋白清，又可加工成各種美味的糕點、人造奶油和牛奶代用品，如點上鹵，又可變成白嫩的煙葉豆腐。在冰凍條件下，可制成軟的奶油，與目前市場上的動物性奶油相比，這種奶油有兩大突出的優(yōu)點：①含不飽和脂肪多；②產(chǎn)熱量低，多食不會肥胖。另外，煙草蛋白還具有滋潤腸胃和促進血液循環(huán)等功效。
利用內(nèi)外切蛋白復(fù)合酶，將煙葉蛋白進行可控酶解處理，根據(jù)其酶解程度的不同，可以得到一系列生物活性肽和氨基酸。應(yīng)用分級膜分離技術(shù)、分級膜分離與大孔樹脂吸附分離或離子交換樹脂分離聯(lián)用技術(shù)分離純化、濃縮富集目標產(chǎn)物，再經(jīng)相應(yīng)加工處理，可制得一系列功能性食品；將低次煙葉的酶解液與還原糖、醇等發(fā)生Maillard反應(yīng)，可合成具有濃郁果香、堅果香、烤香、醬香、中草藥香或煙草香的煙用和食用香料，這些香料能夠改善煙絲的香氣質(zhì)，增加香氣量，減輕卷煙的雜氣和刺激性，使煙氣醇和飽滿，并能協(xié)調(diào)煙香，改善余味，用于高、中檔卷煙的加香，可強化高、中檔卷煙的優(yōu)良品質(zhì)。
將大豆球蛋白的cDNA轉(zhuǎn)移到煙草基因組Agrobacterium-mediated transformation中，大豆球蛋白在煙草種子中得到了表達，且以一種特殊的方式出現(xiàn)。與大豆中的球蛋白相比，所得到的轉(zhuǎn)基因煙草大豆球蛋白在蛋白質(zhì)表達水平、加工特性、活性功能和積累水平上均沒有明顯區(qū)別。
試驗數(shù)據(jù)表明，煙草是用于生產(chǎn)醫(yī)療和科學(xué)研究方面的膠原質(zhì)重組產(chǎn)品的最有價值的原料。在哺乳動物體中膠原質(zhì)占其總蛋白的30%，其主要成分是纖維狀膠原質(zhì)I-III，這些膠原質(zhì)組成了細胞外矩陣蛋白的交織纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，在人體內(nèi)具有非常重要的作用。將煙草用于生產(chǎn)膠原質(zhì)重組系列產(chǎn)品，不僅能解決醫(yī)藥學(xué)中生產(chǎn)膠原質(zhì)產(chǎn)品的原料難題，還有利于醫(yī)療技術(shù)水平的提高，促進醫(yī)療事業(yè)的進一步發(fā)展。
研究發(fā)現(xiàn)，煙草花的蜜腺內(nèi)有特殊的cDNAs。cDNAs能編碼出特殊的植物蛋白酶，這種蛋白酶具有抵抗微生物侵害的功能，從而保護整個植株免受侵害。目前正在研究怎樣利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，進行這種特殊的cDNAs轉(zhuǎn)基因處理，實現(xiàn)在別的植株內(nèi)進行相應(yīng)的基因表達，那么這種植株就能抵抗相應(yīng)的微生物侵害，增強自身的保護功能，從而降低農(nóng)藥的使用量，降低農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留，同時也減輕對自然環(huán)境的污染。
紫錐菊（Echinacea），又名紫錐菊屬或松果菊屬，為多年生的菊科草本開花植物，原產(chǎn)于北美洲中部及東部。目前，該屬共發(fā)現(xiàn)有9個種及2個變種，其中3種具有藥用價值，即紫錐菊（Echinacea purpurea）、狹葉紫錐菊（Echinacea augustifolia）以及白紫錐菊（Echinacen pallida）。紫錐菊廣泛分布于美國、加拿大和歐洲。近年來，我國成功引種紫錐菊，在陜西、河南、湖南等地均有種植。該植物最早被北美土著人用于治療外傷、牙痛、蛇咬傷和膿毒血癥等，目前則用于防治上呼吸道疾病、皮膚病以及過敏性疾病等病癥。紫錐菊具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、殺菌、抗病毒及抗癌癥等多種高效生物活性，因而備受關(guān)注。
免疫調(diào)節(jié)活性是紫錐菊最重要的，也最受矚目的生物活性，包括以下幾方面：（1）促進免疫器官的生長和發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn)，紫錐菊提取物（Echinacea purpurea extract，EE）能夠顯著提高小鼠脾臟的質(zhì)量。據(jù)文獻報道，復(fù)方紫錐菊能夠顯著提高雞腔上囊、胸腺和脾臟指數(shù)，促進免疫器官發(fā)育。試驗證明，EE顯著提高AA肉仔雞的免疫器官指數(shù)。（2）改善血液的免疫功能和生化指標。EE不僅能夠提高小鼠血清免疫球蛋白水平并降低總膽固醇水平，而且可以提高肉雞的紅細胞RBG-C3bR花環(huán)率和血清白介素-2與腫瘤壞死因子含量，還能夠改善血常規(guī)指標。紫錐菊復(fù)方能夠提高嶺南黃肉雞血漿中總蛋白和白蛋白的含量，降低甘油三酯水平。（3）調(diào)節(jié)免疫細胞的功能與增殖。EE既能夠顯著促進正常小鼠骨髓和脾臟自然殺傷細胞與單核細胞的增殖，也增加白血病小鼠脾臟NK細胞的數(shù)量，還可顯著提高肉雞NK細胞的殺傷能力。研究發(fā)現(xiàn)，EE能夠明顯刺激T淋巴細胞的增殖，并且對外周血單個核細胞的增殖也有促進作用。EE能夠激活巨噬細胞，增強其吞噬能力并刺激其產(chǎn)生IL-1、IL-10和TNF-a等細胞因子以及一氧化氮。（4）增強體液免疫。研究表明，EE能顯著提高肉雞外周血的IBDV與新城疫病毒抗體滴度，且復(fù)方紫錐菊對海藍白公雞的NDV抗體效價也有明顯的增強作用。（5）其他。紫錐菊中的多酸類物質(zhì)對大鼠應(yīng)激性胃潰瘍也有預(yù)防性保護作用，并可能與提高機體免疫力及增強NO合成酶活力有關(guān)。紫錐菊還能提高畜禽的詞料轉(zhuǎn)化率，從而改善生產(chǎn)性能。
研究人員發(fā)現(xiàn)，狹葉紫錐菊的多糖成分具有抗炎活性，其能夠抑制角叉菜膠誘導(dǎo)的小鼠足水腫以及巴豆油誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹。據(jù)報道，紫錐菊中的一種異丁基酰胺-dodecatetraenoic acid，能夠通過抑制脂氧合酶，發(fā)揮抗炎作用。通過體外試驗證明，EE中的烷基酰胺類物質(zhì)能夠抑制環(huán)氧合酶和5-脂氧合酶。EE還能夠抑制小鼠巨噬細胞前列腺素E2的產(chǎn)生。菊苣酸被認為是紫錐菊中最能抑制透明質(zhì)酸酶的物質(zhì)。而透明質(zhì)酸酶會水解透明質(zhì)酸和軟骨素，促進促炎因子穿過基質(zhì)，擴大炎癥反應(yīng)。研究表明，紫錐菊的抑炎作用還與抑制巨唾細胞產(chǎn)生NO和TNF-a有關(guān)。而進一步的研究指出，紫錐菊對NO合成的抑制作用是通過提高精氨酸酶活性，并抑制誘導(dǎo)型NOS表達。
文獻報道，三種藥用紫錐菊（Echinacea purpurea、Echinacea augustifolia、Echinacen pallida）的根提取物對多種自由基均具有清除能力，并能夠抑制人低密度脂蛋白的氧化。通過自由基清除實驗和脂質(zhì)過氧化實驗證實了上述三種藥用紫錐菊葉和根提取物的抗氧化能力。研究發(fā)現(xiàn)，EE中的咖啡酸衍生物具有良好的抗氧化作用，且與EE的其他成分聯(lián)合使用時，抗氧化效果更強。研究結(jié)果顯示，三種方法制備的EE樣品（多酸含量分別為3.76%、6.40%、33.56%）均具有抗氧化作用，且它們的還原能力以及對H2O2的清除作用均強于維生素C。EE不僅自身具有一定的抗氧化作用，而且能夠增強動物機體的抗氧化能力。研究表明，EE能夠增強小鼠和AA肉仔雞的抗氧化能力。
研究發(fā)現(xiàn)，紫錐菊細胞培養(yǎng)上清中的多糖成分能夠增強吞噬細胞的功能，從而在小鼠感染白色念珠菌和單增李斯特菌的過程中起到保護作用?？蒲腥藛T發(fā)現(xiàn)，紫錐菊的正己燒提取物具有抗真菌活性，能夠抑制啤酒酵母和多種念珠菌的生長。研究表明，紫錐菊屬根部提取物對新型隱球菌、白色念珠菌以及多種致病性絲狀真菌，例如毛癬菌、須發(fā)毛癖菌、石膏樣小袍子菌、波氏假阿利什菌均有抗真菌活性。除上述真菌外，EE還對其他多種致病細菌，如化膿性鏈球菌、流感嗜血桿菌、嗜肺軍團菌、艱難梭菌和痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、恥垢分枝桿菌具有抑制作用。
據(jù)報道，EE能夠增加白血病小鼠脾臟NK細胞數(shù)量并延長其壽命。紫錐菊的抗癌作用主要與NK細胞密切相關(guān)：一方面，紫錐菊的烷基酰胺類物質(zhì)能夠通過抑制5-LOX和COX的產(chǎn)生，下調(diào)PG的產(chǎn)生，從而促進NK細胞的增殖；另一方面，紫錐菊多糖成分中的阿拉伯半乳聚糖通過激活巨噬細胞，誘導(dǎo)其分泌IL-1、INF-α、IFN-β等細胞因子，從而增強NK細胞的細胞殺傷能力。EE不但能夠通過NK細胞間接發(fā)揮抗癌作用，其本身也能夠直接殺傷癌細胞。試驗發(fā)現(xiàn)，紫錐菊根的己烷提取物對人胰腺癌MIA PACA-2細胞系和結(jié)腸癌COLO320細胞系均有殺傷作用。
研究表明，紫錐菊的各種生物活性基于其自身不同的化學(xué)成分。目前，EE被液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)鑒定出的活性成分，主要有烷基酰胺類化合物與咖啡酸衍生物兩大類：前者包括十二碳-2E，4E，8Z，10E/Z-四烯酸異丁酰胺、十一碳-2E，4Z-二烯-8，10-二炔酸異丁酰胺、十一碳-2Z，4E-二烯-8，10-二炔酸異丁酰胺、十一碳-2E，4Z-二烯-8，10-二炔酸-2-甲基丁酰胺等；后者包括菊苣酸、單咖啡酰酒石酸、綠原酸、咖唏酸等，而EE中的多糖主要由山梨糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、木糖6種單糖組成。
從紫錐菊Echinacea purpurea的地上部分分離得到具有免疫活性的兩種多糖，PS I和PS II，其結(jié)構(gòu)分別為：4-O-甲基-葡萄糖醛-阿拉伯糖-木聚糖聚糖（平均分子量為35000）和酸性的阿拉伯糖-鼠李半乳糖聚糖（平均分子量為50000）。由于從紫錐菊中提取純化多糖費用高且難于獲得，因此有人用組織培養(yǎng)技術(shù)從組織培養(yǎng)液中進行分離，獲得2個分子量分別為10000、25000的中性多糖及1個分子量為75000的酸性多糖，從組織培養(yǎng)中獲得的多糖主要是培養(yǎng)細胞的初生壁成分，因此與從植物中分離的多糖不同，其活性也有差異。
目前，將煙草蛋白與紫錐菊多糖組合用于營養(yǎng)補充的應(yīng)用尚未見報道。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能有效延緩機體衰老，無毒副作用，活性成分來源天然的營養(yǎng)補充劑。
本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是，提供一種延緩衰老的營養(yǎng)補充劑，補充劑中活性成分由煙草蛋白和紫錐菊多糖組成，其中煙草蛋白占活性成分的重量百分比為80-20%，紫錐菊多糖占活性成分的重量百分比為20-80%。
優(yōu)選的，煙草蛋白占活性成分的重量百分比為80-50%，紫錐菊多糖占活性成分的重量百分比為20-50%。
更優(yōu)選的，煙草蛋白和紫錐菊多糖占活性成分的重量百分比分別為75%和25%。
優(yōu)選的，所述煙草蛋白為煙草FI蛋白（Fraction I protein）。
優(yōu)選的，本發(fā)明的煙草FI蛋白（Fraction I protein）采用以下方法制備：取去中脈的煙草葉子，加入NaCl溶液、陰離子交換樹脂和疏基乙醇，用組織搗碎機高速搗碎，綠色勻漿液用紗布過濾。將濾液于50℃保溫，然后迅速冷卻，棄去沉淀。上清液通過DEAE-纖維素柱，用三氯醋酸檢測蛋白質(zhì)，并收集蛋白部份。向收集的蛋白部份加入Tris-Cl緩沖液，于4℃放置4-6天后析出大量結(jié)晶，即得。
優(yōu)選的，本發(fā)明的紫錐菊多糖采用以下方法制備：取超微粉碎的紫錐菊全草原料，加水煮沸，提取清液；活性炭脫色后濃縮，再用乙醇沉析；離心得沉析物；將沉析物烘干、研磨、過篩，得粗多糖；粗多糖加水充分攪拌，在4℃下過濾，離心后取上清液；加入Sevage試劑去除蛋白，將上層液濃縮，用乙醇沉淀析出多糖，經(jīng)離心獲得沉析物；用乙醇洗滌沉析物，真空干燥，研磨，得到白色粉末狀的物質(zhì)。
優(yōu)選的，所述組合物中進一步包括食品或保健品上可接受的添加劑。
更優(yōu)選的，所述食品上可接受的添加劑選自防腐劑、增稠劑和調(diào)味劑等中的一種或多種。
最優(yōu)選的，所述防腐劑為苯甲酸；增稠劑為果膠或明膠，優(yōu)選為果膠；調(diào)味劑為阿斯巴甜。
本發(fā)明還提供一種上述營養(yǎng)補充劑在制備延緩衰老的食品或保健品中的應(yīng)用。
本發(fā)明具有積極有益的效果：令人驚奇的是，經(jīng)過反復(fù)多次試驗，本發(fā)明意外發(fā)現(xiàn)將煙草蛋白與紫錐菊多糖組合使用對于機體延緩衰老具有協(xié)同增效的效果。與傳統(tǒng)營養(yǎng)補充劑相比，本發(fā)明的補充劑制備方法簡單，配伍合理，兩種活性成分在發(fā)揮各自功效的同時，又能協(xié)同改善機體衰老速度。
具體實施方式
下面結(jié)合實施方式對本發(fā)明作更進一步的說明，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
制備例1、煙草FI蛋白（Fraction I protein）的制備
取130克去中脈的煙草葉子，加入130g 0.1M的NaCl溶液，30克711陰離子交換樹脂和1ml疏基乙醇，用組織搗碎機高速搗碎半分鐘，綠色勻漿液用四層紗布過濾。將濾液于50℃保溫10分鐘，然后迅速冷卻，棄去沉淀。上清液通過DEAE-纖維素柱DE53，流速為1.0ml/min/cm3。用三氯醋酸檢測蛋白質(zhì)，收集流出的蛋白部份。向收集的蛋白部份加入等體積0.025M Tris-Cl，pH 7.4內(nèi)含0.2mM EDTA的緩沖液。于4℃放置6天后析出大量結(jié)晶，即得。經(jīng)換算，結(jié)晶產(chǎn)量約7mg/克鮮重葉子。
制備例2、紫錐菊多糖的制備
取超微粉碎的紫錐菊全草原料，加入20倍量的水，加熱煮沸3小時，濾除雜質(zhì)，提取清液；再經(jīng)活性炭脫色；脫色后液體進行濃縮，再用乙醇沉析；采用離心方法獲取沉析物；再將沉析物烘干、研磨、過60目篩、獲得粗多糖；粗多糖加水充分攪拌，在4℃下過濾，離心后取上清液；加入Sevage試劑去除蛋白，將上層液濃縮，用5倍量乙醇沉淀析出多糖，經(jīng)離心獲得沉析物；再用乙醇洗滌2次，真空干燥，研磨，得到白色粉末狀的物質(zhì)。
下述實施例1-5和試驗例1中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法，使用的原料煙草蛋白和紫錐菊多糖分別為制備例1和2制得的煙草FI蛋白和紫錐菊多糖。
實施例1
稱量3重量份的煙草蛋白和1重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合后倒入攪拌機中攪拌10分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老營養(yǎng)補充劑。
實施例2
稱量30重量份的煙草蛋白和10重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合后與50重量份的明膠、5重量份的阿斯巴甜和5重量份的苯甲酸一同倒入攪拌機中攪拌15分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老的營養(yǎng)補充劑。
實施例3
稱量10重量份的煙草蛋白和30重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合后與50重量份的果膠、5重量份的阿斯巴甜和5重量份的苯甲酸一同倒入攪拌機中攪拌15分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老的營養(yǎng)補充劑。
實施例4
稱量8重量份的煙草蛋白和32重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合后與50重量份的明膠、5重量份的阿斯巴甜和5重量份的苯甲酸一同倒入攪拌機中攪拌15分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老的營養(yǎng)補充劑。
實施例5
稱量32重量份的煙草蛋白和8重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合后與50重量份的果膠、5重量份的阿斯巴甜和5重量份的苯甲酸一同倒入攪拌機中攪拌15分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老的營養(yǎng)補充劑。
試驗例1、含煙草蛋白/紫錐菊多糖的營養(yǎng)補充劑在延緩小鼠衰老中的應(yīng)用
1. 動物分組及給藥
將70只小鼠隨機均分為7組：空白組、模型組和本發(fā)明藥物組A1-A5。標準飼料分籠飼養(yǎng)，自由飲食飲水，飼養(yǎng)1周后進行實驗。藥物組A1-A5以活性成分的生理鹽水溶液灌胃給藥，活性成分的總劑量為1.0g/kg，其中A1組灌胃1.0g/kg煙草蛋白，A2組灌胃1.0g/kg紫錐菊多糖，A3組灌胃0.2g/kg的煙草蛋白和0.8g/kg紫錐菊多糖，A4組灌胃0.5g/kg的煙草蛋白和0.5g/kg紫錐菊多糖，A5組灌胃0.75g/kg的煙草蛋白和0.25g/kg紫錐菊多糖，空白組和模型組用等體積生理鹽水溶液灌胃給藥；給藥同時模型組及藥物組A1-A5按100mg·kg-1造模劑量頸背部皮下注射D-半乳糖，連續(xù)6周?？瞻捉M以等體積生理鹽水注射，灌胃與注射同時進行，連續(xù)42d后進行疲勞測試。
2. 小鼠疲勞實驗及結(jié)果
小鼠灌胃造模6周后，進行轉(zhuǎn)棒儀疲勞實驗，將小鼠放在轉(zhuǎn)棒（轉(zhuǎn)棒直徑30mm，長度60mm）上，轉(zhuǎn)速為10r·min-1，每只小鼠分別訓(xùn)練5min，使其適應(yīng)在轉(zhuǎn)棒的轉(zhuǎn)動。次日，將小鼠放在轉(zhuǎn)棒上，轉(zhuǎn)速調(diào)為30r·min-1，準確記錄小鼠在轉(zhuǎn)棒上的停留時間，最長時間限制為10min，超過10min則記為10min，每批測試前用70%乙醇擦拭轉(zhuǎn)棒及其他部件。
和空白組相比較，D-半乳糖造模衰老小鼠在轉(zhuǎn)棒停留時間明顯縮短，而藥物組A1-A5均可以增加衰老小鼠體力，其中A5組效果最佳，各實驗組之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，具體結(jié)果見表1。
表1 本發(fā)明營養(yǎng)補充劑對小鼠在轉(zhuǎn)棒疲勞儀上停留時間的影響
3. 小鼠疲勞相關(guān)生化指標測定及結(jié)果
給藥結(jié)束后稱量小鼠體重，進行眼眶采血，4000r·min-1離心10min后收集血清待測。血清中BUN 、MDA、NO、NOS等生化指標測定均采用相關(guān)試劑盒提供的方法，嚴格按照試劑盒說明進行操作，測定各生化指標數(shù)值。
與空白組比較，D-半乳糖造模衰老小鼠血清中BUN、MDA、NO和NOS含量顯著增加，而藥物組A1-A5均顯著降低上述生化指標含量，其中A5組效果最佳，具體實驗結(jié)果見表2。
表2 本發(fā)明營養(yǎng)補充劑對小鼠血清中疲勞與抗氧化相關(guān)生化指標的影響
4. 結(jié)論
結(jié)果證明，本發(fā)明藥物組合物可以降低小鼠血清中BUN 、MDA、NO和NOS的含量，提示該藥物組合物可以提高機體的抗氧化能力，清除體內(nèi)過氧化脂質(zhì)，降低D-半乳糖致衰老過程中升高的NO和NOS含量，從而減輕NO增高所致的細胞毒性，起到延緩衰老的作用。
特別是在活性成分總量保持不變的情況下，使用本發(fā)明含煙草蛋白和紫錐菊多糖的營養(yǎng)補充劑較單獨使用含煙草蛋白或紫錐菊多糖的補充劑，小鼠血漿各生化指標含量明顯降低，證明煙草蛋白和紫錐菊多糖的組合使用產(chǎn)生了協(xié)同效果，減少了活性成分的使用量。其中煙草蛋白與紫錐菊多糖重量比為3:1的營養(yǎng)補充劑效果最為突出，產(chǎn)生了難以預(yù)期的優(yōu)異效果。