本發(fā)明屬于功能食品制備技術(shù)領(lǐng)域，具體的，涉及一種蓉草甘口服液及其制備的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

免疫力是人體自身的防御機(jī)制，是人體識(shí)別和消滅外來(lái)侵入的任何異物；處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細(xì)胞以及識(shí)別和處理體內(nèi)突變細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的能力。當(dāng)免疫力低下時(shí)，容易罹患疾病，免疫力低下的主要影響因素，一是年齡因素：人生有兩個(gè)免疫能力低下的階段，即兒童階段和老年階段。兒童的免疫系統(tǒng)尚未成熟，功能不健全，免疫力低下；而老年機(jī)體器官功能衰退、獲得營(yíng)養(yǎng)能力下降，再加之免疫器官逐漸萎縮衰退，導(dǎo)致免疫力下降，與此相對(duì)應(yīng)，兒童和老人也是疾病高發(fā)的兩個(gè)階段。二是不良的生活方式和習(xí)慣：精神緊張、營(yíng)養(yǎng)不良、缺乏運(yùn)動(dòng)或睡眠不足，濫用酒精和吸煙等，都可抑制免疫系統(tǒng)，降低機(jī)體免疫力。三是其他因素：環(huán)境中的有毒物質(zhì)、某些藥物、放射治療以及過(guò)量的抗生素也都會(huì)抑制免疫系統(tǒng)。通過(guò)分析導(dǎo)致免疫力低下的主要原因，不難看出老年人及受社會(huì)因素和不良的生活方式影響處于亞健康狀態(tài)的人群是免疫力低下的主要易感人群。

肉蓯蓉為列當(dāng)科植物肉蓯蓉(cistanchedeserticolay.c.ma)或管花肉蓯蓉(cistanchetubulosa(schrenk)wight)的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖。味甘、咸，性溫。歸腎、大腸經(jīng)。具有補(bǔ)腎陽(yáng)，益精血，潤(rùn)腸通便的功效。肉蓯蓉分布于內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅和新疆，素有“沙漠人參”之美譽(yù)，具有極高的藥用價(jià)值，是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材。

冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌(cordycepssinensis(berk.)sacc.)寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的干燥復(fù)合體。味甘、性平，歸肺、腎經(jīng)。具有補(bǔ)腎益肺，止血化痰的功效。冬蟲夏草是極其珍稀名貴的傳統(tǒng)中藥材。

蝙蝠蛾擬青霉作為天然冬蟲夏草的人工培育替代品，是從新鮮冬蟲夏草中分離所得的蟲草菌——蝙蝠蛾擬青霉菌株，通過(guò)深層發(fā)酵培養(yǎng)，將發(fā)酵產(chǎn)物(菌絲體)過(guò)濾干燥制成的粉狀成品。具有增強(qiáng)體質(zhì)、延緩衰老、改善睡眠、提高人體免疫功能等功效。

玫瑰花為薔薇科植物玫瑰的干燥花蕾。味甘、微苦，性溫。歸肝、脾經(jīng)。具有行氣解郁，和血，止痛的功效。玫瑰花有理氣解郁、和血散淤、消腫止痛、美容養(yǎng)顏之功效，能消暑熱、解煩渴、醒脾益胃及止血收斂。玫瑰花作為可供食用的藥物，是正式載入《食物本草》的。玫瑰花富含維生素c、葡萄酒、蔗糖、檸檬酸、蘋果酸，食之味道鮮美。玫瑰花中含富含黃酮類和多酚類化合物、多糖、氨基酸、微量元素等，具有抗氧化、抗腫瘤、降血糖等多種功效。

甘草為豆科植物甘草(glycyrrhizauralensisfisch.)、脹果甘草(glycyrrhizainflatabat.)或光果甘草(glycyrrhizaglabral.)的干燥根和根莖。味甘，性平。歸心、肺、脾、胃經(jīng)。具有補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥的功效。

目前，市場(chǎng)上增強(qiáng)免疫力功能的保健品從原料上主要分如下幾類：一類是中藥類，如黃芪、山藥、枸杞、茯苓、牛膝等。二類是真菌類，如靈芝、香菇、銀耳、蟲草、木耳、猴頭菌等。三類是動(dòng)物源類，如海參、中華鱉、蠶蛹、雄蠶蛾等。四類是益生菌類，如雙岐桿菌、乳酸桿菌等。五類是維生素礦物質(zhì)類，如維生素e、維生素c、β-胡蘿卜素、鋅、硒等。尚未發(fā)現(xiàn)以管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草為主要原料制成的功能食品。因此，需要在現(xiàn)有提高免疫力的功能食品的基礎(chǔ)上進(jìn)行升級(jí)和改造，提供一種能夠明顯提高免疫力的口服液產(chǎn)品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中尚未發(fā)現(xiàn)以管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草為主要原料制成的功能食品的技術(shù)現(xiàn)狀，本發(fā)明旨在于提供一種用于提高免疫力的蓉草甘口服液及其制備方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請(qǐng)以管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草為主要原料，以結(jié)晶麥芽糖醇和殼聚糖作為輔料，四者配伍，相輔相成，共同達(dá)到提高免疫力的功效，對(duì)于食品加工技術(shù)領(lǐng)域具有廣泛的實(shí)用性。

本發(fā)明具體提供的一種用于提高免疫力的蓉草甘口服液，按照重量份計(jì)，包括管花肉蓯蓉16-24份，蝙蝠蛾擬青霉12-15份，玫瑰花5-8份，甘草5-7份，結(jié)晶麥芽糖醇0-15份，殼聚糖1-3份，水1034-1905份。

優(yōu)選的，本發(fā)明提供的一種用于提高免疫力的蓉草甘口服液，按照重量份計(jì)，管花肉蓯蓉24份，蝙蝠蛾擬青霉15份，玫瑰花5份，甘草5份，殼聚糖1份，水1300份。

同時(shí)，本發(fā)明提供的一種用于提高免疫力的蓉草甘口服液制備方法，具體采用如下方法步驟制備：

(1)原料預(yù)處理：選取管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草、殼聚糖和結(jié)晶麥芽糖醇，除殼聚糖和結(jié)晶麥芽糖醇外，將其他原料沖洗干凈后備用。

(2)提取、濃縮：將5-8份玫瑰花和12-15份蝙蝠蛾擬青霉分別用濾袋包裹，與16-24份管花肉蓯蓉、5-7份甘草共同置于提取罐中，再加入1034-1905份水，在料液體積比為11-15：1的條件下提取1-3次，每次1-3小時(shí)，合并3次提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.01-1.05，得到濃縮液。

(3)澄清：將1-3份殼聚糖配制成1％的水溶液，將濃縮液溫度保持在50℃，加入配置好的殼聚糖溶液，攪拌30分鐘，靜置8小時(shí)，過(guò)濾后得到濾液。

(4)調(diào)配：將上述步驟中得到的濾液加入55-70份結(jié)晶麥芽糖醇，攪拌溶解，加純化水定容，控制ph值為4-6，得蓉草甘口服液。

(5)口服液瓶干熱滅菌：將口服液瓶在潔凈區(qū)外用飲用水粗洗，進(jìn)入潔凈區(qū)用純化水進(jìn)行精洗后甩干，然后在溫度250℃、時(shí)間30min的條件下干熱滅菌，備用；將瓶蓋拆去外包裝進(jìn)入潔凈區(qū)，用純化水進(jìn)行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，備用。

(6)灌裝：將上述步驟得到的口服液采用鈉鈣玻璃口服液瓶灌裝。

(7)滅菌：在溫度115℃、時(shí)間30min條件下高溫滅菌，冷卻。

(8)燈檢入庫(kù)：剔除不合格產(chǎn)品，成品檢驗(yàn)合格后包裝入庫(kù)。

本發(fā)明中，步驟(2)提取、濃縮步驟中，在料液體積比為11-15：1的條件下提取3次，第一次2小時(shí)，其余2次每次1小時(shí)，合并3次提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.05。

通過(guò)實(shí)施本發(fā)明具體的發(fā)明內(nèi)容，可以達(dá)到以下效果:

(1)本發(fā)明提供一種用于提高免疫力的蓉草甘口服液及其制備方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請(qǐng)以管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草為主要原料，以結(jié)晶麥芽糖醇和殼聚糖作為輔料，四者配伍，相輔相成，共同達(dá)到提高免疫力的功效，對(duì)于食品加工技術(shù)領(lǐng)域具有廣泛的實(shí)用性。

(2)本發(fā)明制備的口服液與固體制劑相比，其優(yōu)點(diǎn)為：生物利用度高；吸收快，顯效迅速，液體制劑中的藥物分散度大，易吸收；能大批量生產(chǎn)，應(yīng)用方便；服用劑量小，便于保存和服用；加入矯味劑，口感好，易被人們所接受；成品經(jīng)滅菌處理，密封包裝，質(zhì)量穩(wěn)定，不易變質(zhì)。

(3)本發(fā)明提供的用于提高免疫力的蓉甘草口服液中，腺苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量穩(wěn)定，其中，腺苷含量最高為3.90mg/100ml，松果菊苷含量最高為52.37mg/100ml，毛蕊花糖苷含量最高為9.75mg/100ml。

(4)本發(fā)明制備的蓉甘草口服液中菌落總數(shù)小于10cfu/ml，未檢出致病菌，腺苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷等主要成分變動(dòng)幅度不明顯，含量穩(wěn)定；經(jīng)過(guò)12個(gè)月的穩(wěn)定性檢驗(yàn)，本發(fā)明制備的蓉甘草口服液中鉛、砷的含量始終低于0.05mg/l，可溶性固形物保持在10g/100ml，腺苷的含量降低了0.28mg/100ml，松果菊苷的含量降低了1.96mg/100ml，毛蕊花糖苷的含量降低了0.44mg/100ml，主要成分總體穩(wěn)定性較強(qiáng)。

(5)經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，中、高劑量組小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力與對(duì)照組比較顯著提高(p<0.05)，高劑量組小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組比較顯著提高，高劑量組小鼠半數(shù)溶血值(hc50)與對(duì)照組比較顯著提高(p<0.05)，中、高劑量組小鼠nk細(xì)胞活性與對(duì)照組比較顯著提高(p<0.05)。因此，本申請(qǐng)?zhí)峁┑娜夭莞士诜壕哂性鰪?qiáng)免疫力功能。

附圖說(shuō)明

圖1顯示為生產(chǎn)條件中料水比和提取次數(shù)因素之間的等高線圖。

圖2顯示為生產(chǎn)條件中料水比和提取次數(shù)因素之間的響應(yīng)面圖。

圖3顯示為生產(chǎn)條件中料水比和提取時(shí)間因素之間的等高線圖。

圖4顯示為生產(chǎn)條件中料水比和提取時(shí)間因素之間的響應(yīng)面圖。

圖5顯示為生產(chǎn)條件中提取時(shí)間和提取次數(shù)因素之間的等高線圖。

圖6顯示為生產(chǎn)條件中提取時(shí)間和提取次數(shù)因素之間的響應(yīng)面圖。

具體實(shí)施例

本發(fā)明使用的材料：

管花肉蓯蓉(和田秋永霞管花肉蓯蓉有限責(zé)任公司)，蝙蝠蛾擬青霉(浙江萬(wàn)豐企業(yè)集團(tuán)制藥有限公司)，玫瑰花(新疆本草堂中藥飲片有限公司)，甘草(新疆本草堂中藥飲片有限公司)，結(jié)晶麥芽糖醇(山東綠健生物技術(shù)有限公司)，殼聚糖(濰坊海之源生物制品有限公司)。

本發(fā)明使用的儀器：

動(dòng)物臺(tái)秤、分析天平、潔凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、722分光光度計(jì)、恒溫水浴箱、酶標(biāo)儀、顯微鏡等。

實(shí)施例一：

本發(fā)明提供的一種用于提高免疫力的蓉草甘口服液，具體采用如下方法制備獲得：

(1)原料預(yù)處理：選取管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草、殼聚糖和結(jié)晶麥芽糖醇，除殼聚糖和結(jié)晶麥芽糖醇外，將其他原料沖洗干凈后備用。

(2)提取、濃縮：將5-8份玫瑰花和12-15份蝙蝠蛾擬青霉分別用濾袋包裹，與16-24份管花肉蓯蓉、5-7份甘草共同置于提取罐中，，再加入1034-1905份水，在料液體積比為11-15：1的條件下提取1-3次，每次1-3小時(shí)，合并3次提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.01-1.05，得到濃縮液。

(3)澄清：將1-3份殼聚糖配制成1％的水溶液，將濃縮液溫度保持在50℃，加入配置好的殼聚糖溶液，攪拌30分鐘，靜置8小時(shí)，過(guò)濾后得到濾液。

(4)調(diào)配：將上述步驟中得到的濾液加入55-70份結(jié)晶麥芽糖醇，攪拌溶解，加純化水定容，控制ph值為4-6，得蓉草甘口服液。

(5)口服液瓶干熱滅菌：將口服液瓶在潔凈區(qū)外用飲用水粗洗，進(jìn)入潔凈區(qū)用純化水進(jìn)行精洗后甩干，然后在溫度250℃、時(shí)間30min的條件下干熱滅菌，備用；將瓶蓋拆去外包裝進(jìn)入潔凈區(qū)，用純化水進(jìn)行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，備用。

(6)灌裝：上述步驟中得到的口服液采用鈉鈣玻璃口服液瓶灌裝。

(7)滅菌：在溫度115℃、時(shí)間30min條件下高溫滅菌，冷卻。

(8)燈檢入庫(kù)：剔除不合格產(chǎn)品，成品檢驗(yàn)合格后包裝入庫(kù)。

優(yōu)選的，本發(fā)明步驟(2)提取、濃縮步驟中，在料液體積比為11-15：1的條件下提取3次，第一次2小時(shí)，其余2次每次1小時(shí)，合并3次提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.05。

優(yōu)選的，本發(fā)明提供的一種用于提高免疫力的蓉草甘口服液，按照重量份計(jì)，管花肉蓯蓉24份，蝙蝠蛾擬青霉15份，玫瑰花5份，甘草5份，結(jié)晶麥芽糖醇0份，殼聚糖1份，水1300份。

實(shí)施例二：

除殼聚糖和結(jié)晶麥芽糖醇外，將管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草、沖洗干凈后備用。將5份玫瑰花和12份蝙蝠蛾擬青霉分別用濾袋包裹，與16份管花肉蓯蓉、5份甘草共同置于提取罐中，再加入1034份水，在料液比為11：1的條件下提取1次，每次1小時(shí)，合并3次提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.01，得到濃縮液。將1份殼聚糖配制成1％的水溶液，將濃縮液溫度保持在50℃，加入配置好的殼聚糖溶液，攪拌30分鐘，靜置8小時(shí)，過(guò)濾后得到濾液。將上述步驟中得到的濾液加入55份結(jié)晶麥芽糖醇，攪拌溶解，加純化水定容，控制ph值為4，得蓉草甘口服液。將口服液瓶在潔凈區(qū)外用飲用水粗洗，進(jìn)入潔凈區(qū)用純化水進(jìn)行精洗后甩干，然后在溫度250℃、時(shí)間30min的條件下干熱滅菌，備用；將瓶蓋拆去外包裝進(jìn)入潔凈區(qū)，用純化水進(jìn)行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，備用。蓉草甘口服液采用鈉鈣玻璃口服液瓶灌裝。在溫度115℃、時(shí)間30min條件下高溫滅菌，冷卻。剔除不合格產(chǎn)品，成品檢驗(yàn)合格后包裝入庫(kù)。

實(shí)施例三：

除殼聚糖和結(jié)晶麥芽糖醇外，將管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草、沖洗干凈后備用。將7份玫瑰花和14份蝙蝠蛾擬青霉分別用濾袋包裹，與22份管花肉蓯蓉、6份甘草共同置于提取罐中，再加入1800份水，在料液比為1：15的條件下提取2次，每次3小時(shí)，合并3次提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.03，得到濃縮液。將1-3份殼聚糖配制成1％的水溶液，將濃縮液溫度保持在50℃，加入配置好的殼聚糖溶液，攪拌30分鐘，靜置8小時(shí)，過(guò)濾后得到濾液。將上述步驟中得到的濾液加入65份結(jié)晶麥芽糖醇，攪拌溶解，加純化水定容，控制ph值為6，得蓉草甘口服液。將口服液瓶在潔凈區(qū)外用飲用水粗洗，進(jìn)入潔凈區(qū)用純化水進(jìn)行精洗后甩干，然后在溫度250℃、時(shí)間30min的條件下干熱滅菌，備用；將瓶蓋拆去外包裝進(jìn)入潔凈區(qū)，用純化水進(jìn)行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，備用。蓉草甘口服液采用鈉鈣玻璃口服液瓶灌裝。在溫度115℃、時(shí)間30min條件下高溫滅菌，冷卻。剔除不合格產(chǎn)品，成品檢驗(yàn)合格后包裝入庫(kù)。

實(shí)施例四：

除殼聚糖和結(jié)晶麥芽糖醇外，將管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草、沖洗干凈后備用。將6份玫瑰花和13份蝙蝠蛾擬青霉分別用濾袋包裹，與20份管花肉蓯蓉、6份甘草共同置于提取罐中，再加入1580份水，在料液比為1：14的條件下提取3次，每次3小時(shí)，合并3次提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.04，得到濃縮液。將2份殼聚糖配制成1％的水溶液，將濃縮液溫度保持在50℃，加入配置好的殼聚糖溶液，攪拌30分鐘，靜置8小時(shí)，過(guò)濾后得到濾液。將上述步驟中得到的濾液加入62份結(jié)晶麥芽糖醇，攪拌溶解，加純化水定容，控制ph值為4，得蓉草甘口服液。將口服液瓶在潔凈區(qū)外用飲用水粗洗，進(jìn)入潔凈區(qū)用純化水進(jìn)行精洗后甩干，然后在溫度250℃、時(shí)間30min的條件下干熱滅菌，備用；將瓶蓋拆去外包裝進(jìn)入潔凈區(qū)，用純化水進(jìn)行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，備用。蓉草甘口服液采用鈉鈣玻璃口服液瓶灌裝。在溫度115℃、時(shí)間30min條件下高溫滅菌，冷卻。剔除不合格產(chǎn)品，成品檢驗(yàn)合格后包裝入庫(kù)。

實(shí)施例五：

除殼聚糖和結(jié)晶麥芽糖醇外，將管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草、沖洗干凈后備用。將5份玫瑰花和15份蝙蝠蛾擬青霉分別用濾袋包裹，與24份管花肉蓯蓉、5份甘草共同置于提取罐中，再加入1300份水，在料液比為1：13的條件下提取2次，每次2小時(shí)，合并3次提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.05，得到濃縮液。將1份殼聚糖配制成1％的水溶液，將濃縮液溫度保持在50℃，加入配置好的殼聚糖溶液，攪拌30分鐘，靜置8小時(shí)，過(guò)濾后得到濾液。將上述步驟中得到的濾液加入0份結(jié)晶麥芽糖醇，攪拌溶解，加純化水定容，控制ph值為5，得蓉草甘口服液。將口服液瓶在潔凈區(qū)外用飲用水粗洗，進(jìn)入潔凈區(qū)用純化水進(jìn)行精洗后甩干，然后在溫度250℃、時(shí)間30min的條件下干熱滅菌，備用；將瓶蓋拆去外包裝進(jìn)入潔凈區(qū)，用純化水進(jìn)行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，備用。蓉草甘口服液采用鈉鈣玻璃口服液瓶灌裝。在溫度115℃、時(shí)間30min條件下高溫滅菌，冷卻。剔除不合格產(chǎn)品，成品檢驗(yàn)合格后包裝入庫(kù)。

實(shí)施例六：

除殼聚糖和結(jié)晶麥芽糖醇外，將管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草、沖洗干凈后備用。將8份玫瑰花和15份蝙蝠蛾擬青霉分別用濾袋包裹，與24份管花肉蓯蓉、7份甘草共同置于提取罐中，再加入1905份水，在料液比為1：15的條件下提取3次，每次3小時(shí)，合并3次提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.05，得到濃縮液。將3份殼聚糖配制成1％的水溶液，將濃縮液溫度保持在50℃，加入配置好的殼聚糖溶液，攪拌30分鐘，靜置8小時(shí)，過(guò)濾后得到濾液。將上述步驟中得到的濾液加入70份結(jié)晶麥芽糖醇，攪拌溶解，加純化水定容，控制ph值為6，得蓉草甘口服液。將口服液瓶在潔凈區(qū)外用飲用水粗洗，進(jìn)入潔凈區(qū)用純化水進(jìn)行精洗后甩干，然后在溫度250℃、時(shí)間30min的條件下干熱滅菌，備用；將瓶蓋拆去外包裝進(jìn)入潔凈區(qū)，用純化水進(jìn)行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，備用。蓉草甘口服液采用鈉鈣玻璃口服液瓶灌裝。在溫度115℃、時(shí)間30min條件下高溫滅菌，冷卻。剔除不合格產(chǎn)品，成品檢驗(yàn)合格后包裝入庫(kù)。

實(shí)施例七：蓉甘草中試放大試驗(yàn)

口服液是在湯劑、注射劑基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新劑型，是將原材料用水或其他溶劑，采用適宜的方法制成的內(nèi)服液體劑型。將上述本發(fā)明實(shí)施例一至實(shí)施例六得到的口服液進(jìn)行中試放大試驗(yàn)，其中三批中試生產(chǎn)數(shù)據(jù)如下：

表1：蓉甘草口服液的中試放大試驗(yàn)結(jié)果

由表1的中試驗(yàn)證結(jié)果可以看出，工藝切實(shí)可行，從成品率來(lái)看，工藝重現(xiàn)性較好，證明了本發(fā)明提供的蓉甘草口服液制備方法的穩(wěn)定性，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。本發(fā)明制備的口服液與固體制劑相比，其優(yōu)點(diǎn)為：生物利用度高；吸收快，顯效迅速，液體制劑中的藥物分散度大，易吸收；能大批量生產(chǎn)，應(yīng)用方便；服用劑量小，便于保存和服用；加入矯味劑，口感好，易被人們所接受；成品經(jīng)滅菌處理，密封包裝，質(zhì)量穩(wěn)定，不易變質(zhì)。

實(shí)施例八：一種用于提高免疫力的蓉草甘口服液的制備工藝優(yōu)化

在上述系列實(shí)施例的實(shí)施情況下，進(jìn)一步提供優(yōu)化的蓉草甘口服液生產(chǎn)方法。通過(guò)單因素試驗(yàn)進(jìn)一步確定最適料液體積比比范圍為11-15：1，最適提取時(shí)間控制在1h-3h，最適提取次控制在1-3次。

1.正交試驗(yàn)優(yōu)化

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上以l9(33)因素水平表，設(shè)計(jì)優(yōu)化方案，具體參數(shù)設(shè)計(jì)請(qǐng)參見表2；對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行直觀分析，以確定最佳條件，具體結(jié)果及數(shù)據(jù)分析請(qǐng)參見表3。再對(duì)直觀分析所得出的最佳條件進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證。

表2：l9(3³)正交試驗(yàn)因素水平

表3：l9(3³)極差分析表

通過(guò)表3極差分析，可得出各因素影響的主次關(guān)系和最佳配比，生產(chǎn)條件各因素影響主次關(guān)系為：提取時(shí)間＞料液比＝提取次數(shù)。在蓉甘草口服液的生產(chǎn)過(guò)程中，提取時(shí)間的變化對(duì)結(jié)果的影響更為明顯，因此盡可能的控制提取時(shí)間能夠更好地達(dá)到生產(chǎn)目的；而達(dá)到一定的料液比時(shí)，隨著時(shí)間的變化，提取率會(huì)趨于穩(wěn)定，其變化情況相對(duì)緩慢，綜合實(shí)際生產(chǎn)情況考慮，選取提取時(shí)間2h，料液比1:13，提取次數(shù)2次，此條件下的提取率為91％。

2.響應(yīng)面法優(yōu)化試驗(yàn)及結(jié)果分析

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)box-behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，選取料液比(a)、提取時(shí)間(b)、提取次數(shù)(c)進(jìn)行三因素三水平的響應(yīng)面分析方法，試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案請(qǐng)參見表4，試驗(yàn)結(jié)果請(qǐng)參見表5。

表4：響應(yīng)面分析試驗(yàn)設(shè)計(jì)

表5：響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

采用designexpert8.0.6軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，由此可求出影響因素的一次效應(yīng)，二次效應(yīng)及其交互效應(yīng)的關(guān)聯(lián)式，得到回歸方程見式：

y＝91.40+0.87*a-0.05*b+8.63*c-6.00*ab+8.25*ac+6.50*bc

-28.57a²-13.82b²-23.57c²

根據(jù)上述回歸方程及回歸模型方差分析表繪出雙因子效應(yīng)分析圖，請(qǐng)參見附圖1至附圖6。兩因素之間的影響呈現(xiàn)拋物線型關(guān)系，且均有一個(gè)極大值點(diǎn)，變化趨勢(shì)是先增大后減小。

通過(guò)上述分析得到蓉甘草口服液生產(chǎn)的最佳工藝是：提取時(shí)間2h，料液比1:13，提取次數(shù)2次，提取率的預(yù)測(cè)值為91.40％。與正交試驗(yàn)的優(yōu)化結(jié)果一致；對(duì)比兩種分析方法及優(yōu)化結(jié)果，綜合考慮實(shí)際需要，確定最優(yōu)的條件為提取時(shí)間2h，料液比1:13，提取次數(shù)2次。

實(shí)施例九：蓉甘草口服液功效成分檢測(cè)及穩(wěn)定性試驗(yàn)

對(duì)上述實(shí)施例二至實(shí)施例六系列試驗(yàn)制備獲得蓉甘草口服液進(jìn)行功效成分檢測(cè)和穩(wěn)定性試驗(yàn)，各項(xiàng)檢測(cè)方法均采用常規(guī)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。功效成分檢測(cè)結(jié)果參見表7，穩(wěn)定性試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果參見表8。

表7：蓉甘草口服液檢測(cè)結(jié)果

由表7可知，本發(fā)明提供的用于提高免疫力的蓉甘草口服液中，腺苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量穩(wěn)定，其中，腺苷含量最高為3.90mg/100ml，松果菊苷含量最高為52.37mg/100ml，毛蕊花糖苷含量最高為9.75mg/100ml，因此將松果菊苷、毛蕊花糖苷、腺苷定為蓉甘草口服液的標(biāo)志性成分。

表8：蓉甘草口服液穩(wěn)定性試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

由表8可知，經(jīng)過(guò)3個(gè)月穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明制備的蓉甘草口服液中菌落總數(shù)小于10cfu/ml，未檢出致病菌，腺苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷等主要成分變動(dòng)幅度不明顯，含量穩(wěn)定；經(jīng)過(guò)12個(gè)月的穩(wěn)定性檢驗(yàn)，本發(fā)明制備的蓉甘草口服液中鉛、砷的含量始終低于0.05mg/l，可溶性固形物保持在10g/100ml，腺苷的含量降低了0.28mg/100ml，松果菊苷的含量降低了1.96mg/100ml，毛蕊花糖苷的含量降低了0.44mg/100ml，主要成分總體穩(wěn)定性較強(qiáng)。

實(shí)施例十：提高免疫力的動(dòng)物驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

采用上述實(shí)施例一至實(shí)施例六制備的蓉草甘口服液對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃處理，分別測(cè)定本發(fā)明提供的蓉草甘口服液對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響、小鼠半數(shù)溶血值以及小鼠nk細(xì)胞活性的影響，從而驗(yàn)證本發(fā)明提供的蓉草甘口服液具有提高免疫力的效果。

(1)材料與分組：人體口服推薦劑量為每日200ml，體重按60kg計(jì)算，折合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的最佳劑量為3.33ml/kg.bw。選擇spf級(jí)icr種雌性小鼠160只，體重18g-22g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。飼料購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司。每40只小鼠為一大組，共五大組。免疫i組進(jìn)行小鼠nk細(xì)胞的活性測(cè)定；免疫ii組進(jìn)行小鼠nk細(xì)胞的活性測(cè)定；免疫iii組進(jìn)行半數(shù)溶血值(hc5o)的測(cè)定和抗體生成細(xì)胞數(shù)的測(cè)定；免疫iv組，進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)；每大組40只小鼠按體重隨機(jī)分為4小組，即對(duì)照組和低、中、高劑量組，每組10只小鼠。據(jù)人體口服推薦量，設(shè)5倍濃縮液低、中、高劑量分別為3.33ml/kg.bw、6.67ml/kg.bw、20.00ml/kg.bw，分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、30倍。試驗(yàn)時(shí)，低、中劑量分別取5倍濃縮液33.3ml、66.7ml加蒸餾水定容至200ml，高劑量給予5倍濃縮液，對(duì)照組予以等體積的蒸餾水，各組按0.2ml/10g.bw體積給小鼠灌胃，每天一次，連續(xù)灌胃至少30天。

(2)實(shí)驗(yàn)方法：遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(dth)采用足跖增厚法進(jìn)行測(cè)定，同一部位測(cè)量三次，取平均值，以攻擊前后足跖厚度差值(足跖腫脹度)來(lái)表示dth的程度?？贵w生成細(xì)胞檢測(cè)采用jerne改良玻片法進(jìn)行測(cè)定；半數(shù)溶血值的測(cè)定，溶血素的量以半數(shù)溶血值(hc5q)表示，按下式計(jì)算：半數(shù)溶血值(hc5q)＝樣品光密度值/srbc半數(shù)溶血時(shí)的光密度值x稀釋倍數(shù)；nk細(xì)胞活性的測(cè)定采用乳酸脫氫酶測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，按下式計(jì)算：nk細(xì)胞活性＝[(反應(yīng)孔o(hù)d-自然釋放孔o(hù)d)/(最大釋放孔o(hù)d—自然釋放孔o(hù)d)]×100％

(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：蓉草甘口服液對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(dth)的影響結(jié)果見表9，對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響結(jié)果見表10，對(duì)小鼠半數(shù)溶血值(hc50)的影響結(jié)果見表11，對(duì)小鼠nk細(xì)胞活性的影響結(jié)果見表12。

表9：蓉草甘口服液對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(dth)的影響

表10：蓉草甘口服液小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響

表11:蓉草甘口服液對(duì)小鼠半數(shù)溶血值(hc50)的影響

表12：蓉草甘口服液對(duì)小鼠nk細(xì)胞活性的影響

由表9-表11可知，經(jīng)口灌胃給予小鼠3.33ml/kg-bw、6.67ml/kg.bw、20.00ml/kg.bw劑量的蓉草甘口服液5倍濃縮液30天，與對(duì)照組比較，6.67ml/kgbw、20.00ml/kg.bw劑量能顯著提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力、nk細(xì)胞活性，20.00ml/k.bw劑量能顯著提高小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)、半數(shù)溶血值。即中、高劑量組小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力與對(duì)照組比較顯著提高(p<0.05)，高劑量組小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組比較顯著提高，高劑量組小鼠半數(shù)溶血值(hc50)與對(duì)照組比較顯著提高(p<0.05)，中、高劑量組小鼠nk細(xì)胞活性與對(duì)照組比較顯著提高(p<0.05)。因此，本申請(qǐng)?zhí)峁┑娜夭莞士诜壕哂性鰪?qiáng)免疫力功能。

綜上所述，本發(fā)明提供一種用于提高免疫力的蓉草甘口服液及其制備方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請(qǐng)以管花肉蓯蓉、蝙蝠蛾擬青霉、玫瑰花、甘草為主要原料，以結(jié)晶麥芽糖醇和殼聚糖作為輔料，四者配伍，相輔相成，制備的蓉甘草口服液中腺苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量穩(wěn)定，其中，腺苷含量最高為3.90mg/100ml，松果菊苷含量最高為52.37mg/100ml，毛蕊花糖苷含量最高為9.75mg/100ml。

如上所述，即可較好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，上述的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做出的各種改變和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明確定的保護(hù)范圍內(nèi)。