一種抗氧化的組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及保健品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗氧化的組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人體衰老是一個(gè)生物學(xué)變化過(guò)程，由遺傳基因和復(fù)雜的內(nèi)外環(huán)境等多種因素相互 作用引起，是生命周期中按照自然發(fā)展的規(guī)律發(fā)生在人體內(nèi)、器官、組織細(xì)胞的形態(tài)和功能 的變化過(guò)程，表現(xiàn)為一系列隨時(shí)間增齡而顯示的全身整體性、漸進(jìn)性、衰退性和不可逆的集 體變化和功能紊亂。研宄認(rèn)為，機(jī)體的衰老是生理性的，是機(jī)體生理學(xué)和解剖學(xué)方面出現(xiàn)衰 退變化以及對(duì)體內(nèi)外環(huán)境的適應(yīng)能力下降和代償力減退。
[0003] 自由基學(xué)說(shuō)認(rèn)為：機(jī)體氧化衰老的原理之一，機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)中的各種抗氧 化酶和小分子非酶抗氧化劑與自由基的產(chǎn)生在正常情況下處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，研宄發(fā)現(xiàn)機(jī) 體隨年齡的增長(zhǎng)，自由基過(guò)?；蚩寡趸瘎┤狈r(shí)細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸被產(chǎn)生的自由基 損害，引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)并對(duì)生物膜造成極大的破壞，使生物膜不飽和脂肪酸過(guò)氧化和 膜功能受損雙層結(jié)構(gòu)得到破壞以及細(xì)胞器功能產(chǎn)生障礙，繼而損傷蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等生物大 分子。在衰老有氧代謝過(guò)程中，由于自由基水平不斷增加使機(jī)體的抗氧化能力下降，細(xì)胞毒 性不同程度增加造成結(jié)構(gòu)瞬間的不可逆改變損傷，環(huán)境外界刺激及線粒體、脂肪酸均可產(chǎn) 生超氧陰離子、過(guò)氧化氫、羥自由基等各種過(guò)氧化因子，可以觸發(fā)生理性信號(hào)通路，誘導(dǎo)細(xì) 胞內(nèi)過(guò)氧化和細(xì)胞凋亡，加速推進(jìn)衰老進(jìn)程。最終，氧化衰老和細(xì)胞凋亡共同導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生 衰老相關(guān)的退行性疾病。
[0004] 越來(lái)越多的研宄顯示抗氧化是預(yù)防衰老的重要步驟，因?yàn)樽杂苫蜓趸瘎?huì)將細(xì) 胞和組織分解，影響代謝功能，并會(huì)引起不同的健康問(wèn)題。如果能夠消除過(guò)多的氧化自由 基，對(duì)于許多自由基引起的及老化相關(guān)疾病都能夠預(yù)防。例如：醫(yī)學(xué)研宄已經(jīng)發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激 與臨床上許多疾病的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)而與年齡無(wú)關(guān)的漸進(jìn)性退變。例如：常見(jiàn)的癌癥、動(dòng)脈 硬化、糖尿病、白內(nèi)障、心血管病、老年癡呆、關(guān)節(jié)炎等，這些疾病都被認(rèn)為與自由基相關(guān)。
[0005] 現(xiàn)有的抗氧化劑主要有SOD、原花青素等，其中：超氧化物歧化酶 Orgotein (Superoxide Dismutase, SOD)，別名肝蛋白，是一種源于生命體的活性物質(zhì)，能消 除生物體在新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)。對(duì)人體不斷地補(bǔ)充SOD具有抗衰老的特殊效 果。葡萄籽提取物的主要功效成分為"原花青素0PC"，具有良好的抗氧化效果，是維生素C 和維生素E的50~70倍。超強(qiáng)的抗氧化效率具有清除自由基、提高人體免疫力的強(qiáng)力效 果。但是，這些抗氧化劑作為保健品服用后效果卻不甚顯著。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種抗氧化的組合物及其制備方 法。本發(fā)明提供的組合物具有顯著的抗氧化功能。
[0007] 本發(fā)明提供了一種抗氧化組合物，包括蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡 萄籽提取物。
[0008] 其中，蘋(píng)果干細(xì)胞具有良好的抗氧化功能，本發(fā)明將蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物 歧化酶與葡萄籽提取進(jìn)行復(fù)配后能夠具有顯著的抗氧化功能，實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的組 合物的抗氧化效果顯著優(yōu)于單獨(dú)使用超氧化物歧化酶或葡萄籽提取物，經(jīng)為期3個(gè)月的人 體試食試驗(yàn)研宄，使用本發(fā)明組合物的人體內(nèi)過(guò)氧化脂質(zhì)下降4. 96%、谷胱甘肽過(guò)氧化物 酶升高12. 97%，其效果顯著優(yōu)于單獨(dú)使用SOD或葡萄籽提取物。
[0009] 在本發(fā)明實(shí)施例中，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質(zhì)量 比為（10 ~20) : (8 ~15) : (8 ~15)。
[0010] 在一些實(shí)施例中，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質(zhì)量比 為 5 :4 :4〇
[0011] 在一些實(shí)施例中，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質(zhì)量比 為 10 :8 :15〇
[0012] 在一些實(shí)施例中，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質(zhì)量比 為 10 :15 :8〇
[0013] 在一些實(shí)施例中，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質(zhì)量比 為 2 :3 :3〇
[0014] 在一些實(shí)施例中，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質(zhì)量比 為 5 :2 :2〇
[0015] 在一些實(shí)施例中，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質(zhì)量比 為 20 :8 :15。
[0016] 在一些實(shí)施例中，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質(zhì)量比 為 20 :15 :8。
[0017] 在一些實(shí)施例中，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉、超氧化物歧化酶和葡萄籽提取物的質(zhì)量比 為 4 :3 :3〇
[0018] 本發(fā)明采用的葡萄籽提取物可為自制也可為市場(chǎng)直接購(gòu)得，本發(fā)明對(duì)其不做限 定，其實(shí)施皆在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0019] 作為優(yōu)選，葡萄籽提取物中原花青素的含量不低于95%。
[0020] 本發(fā)明采用的蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉可為市場(chǎng)購(gòu)得也可采用本發(fā)明提供的方法制備， 其實(shí)施皆在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。作為優(yōu)選，蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉以本發(fā)明提供的方法制 得，該方法以蘋(píng)果新生枝條為原料，經(jīng)誘導(dǎo)形成愈傷組織后增殖培養(yǎng)并擴(kuò)大培養(yǎng)獲得蘋(píng)果 干細(xì)胞，再凍干后制得。該蘋(píng)果干細(xì)胞凍干后直接用于本發(fā)明提供組合物的制備，該凍干粉 中黃酮和多酚類(lèi)物質(zhì)含量豐富。
[0021] 蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉的制備方法包括以下步驟：
[0022] 步驟1 :蘋(píng)果新生枝條殺菌、去除木質(zhì)部和髓后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)獲 得形成層細(xì)胞；
[0023] 步驟2 :所述形成層細(xì)胞經(jīng)繼代培養(yǎng)，接入增殖培養(yǎng)基，搖床培養(yǎng)獲得單細(xì)胞；
[0024] 步驟3 :將所述單細(xì)胞接種于增殖培養(yǎng)基經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得蘋(píng)果干細(xì)胞；
[0025] 步驟4 :將所述蘋(píng)果干細(xì)胞反復(fù)凍融后凍干、粉碎，獲得蘋(píng)果干細(xì)胞凍干粉；
[0026] 所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為含有NAA、BA和水解酪蛋白的MS固體培養(yǎng)基；
[0027] 所述增殖培養(yǎng)基為含有2, 4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的MS液體培養(yǎng)基。
[0028] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，殺菌包括以下步驟：
[0029] 步驟1 :將蘋(píng)果新生枝條以水沖洗后，以濃度為10~1000mg/L的L-抗壞血酸溶 液浸泡；
[0030] 步驟2 :以體積分?jǐn)?shù)為60 %~95 %的乙醇水溶液浸泡后以無(wú)菌水沖洗；
[0031 ] 步驟3 :以體積分?jǐn)?shù)為10%~100%的過(guò)氧化氫水溶液浸泡后以無(wú)菌水沖洗。
[0032] 作為優(yōu)選，蘋(píng)果新生枝條的長(zhǎng)度為10cm。
[0033] 作為優(yōu)選，L-抗壞血酸的濃度為120mg/L。
[0034] 優(yōu)選的，步驟1中所述浸泡的時(shí)間為Imin。
[0035] 作為優(yōu)選，乙醇水溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為75%。
[0036] 優(yōu)選的，步驟2中所述浸泡的時(shí)間為Imin。
[0037] 作為優(yōu)選，步驟2中無(wú)菌水的體積為2L。
[0038] 作為優(yōu)選，過(guò)氧化氫水溶液中過(guò)氧化氫的體積分?jǐn)?shù)為30%。
[0039] 優(yōu)選的，步驟3中所述浸泡的時(shí)間為20min。
[0040] 優(yōu)選的，步驟3中所述沖洗的時(shí)間為IOmin。
[0041] 以本發(fā)明提供的殺菌方法對(duì)蘋(píng)果新生枝條進(jìn)行殺菌能夠充分的殺除蘋(píng)果新生枝 條上所攜帶的真菌、細(xì)菌或病毒。以便保證蘋(píng)果新生枝條在培養(yǎng)過(guò)程中不被干擾，從而保證 蘋(píng)果新生枝條上的細(xì)胞更加快速的去分化。而實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的方法能夠有效將蘋(píng) 果新生枝條細(xì)胞去分化，經(jīng)誘導(dǎo)和擴(kuò)大培養(yǎng)，48天左右即可獲得大量的蘋(píng)果干細(xì)胞。
[0042] 在本發(fā)明實(shí)施例中，NAA、BA和水解酪蛋白的質(zhì)量比為0.5 :2 :1。
[0043] 優(yōu)選的，誘導(dǎo)培養(yǎng)基中NAA的濃度為0. 5mg/L。
[0044] 優(yōu)選的，誘導(dǎo)培養(yǎng)基中BA的濃度為2. Omg/L。
[0045] 優(yōu)選的，誘導(dǎo)培養(yǎng)基中水解酪蛋白的濃度為1.0 mg/L。
[0046] 作為優(yōu)選，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，其中瓊脂的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%。
[0047] 作為優(yōu)選，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為6. 0。
[0048] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，步驟1中所述的接種為，每g去除木質(zhì)部和髓的蘋(píng)果新生枝 條接種于IOcm 2的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0049] 在一些實(shí)施例中，誘導(dǎo)培養(yǎng)為暗培養(yǎng)；溫度為25°C ;時(shí)間為10天。
[0050] 經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)后，形成層組織為均一生長(zhǎng)的平板狀組織，而其他組織則為不規(guī)則的 聚集生長(zhǎng)物。
[0051] 在一些實(shí)施例中，繼代培養(yǎng)為暗培養(yǎng)；溫度為25°C ;時(shí)間為10天。
[0052] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，繼代培養(yǎng)采用遇到培養(yǎng)基，每g形成層細(xì)胞接種于IOcm2的 誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0053] 經(jīng)10天的繼代培養(yǎng)，形成層細(xì)胞形成愈傷組織，每IOcm2的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上約有愈 傷組織20. 8g。
[0054] -些實(shí)施例中，增殖培養(yǎng)基中，2, 4-D、BA、水解酪蛋白和活性炭的質(zhì)量比為 2:1:1:1〇
[0055] 優(yōu)選的，增殖培養(yǎng)基中2, 4-D的濃度為2. 0mg/L。
[0056] 優(yōu)選的，增殖培養(yǎng)基中BA的濃度為I. 0mg/L。
[0057] 優(yōu)選的，增殖培養(yǎng)基中水解酪蛋白的濃度為I. 0mg/L。
[0058] 優(yōu)選的，增殖培養(yǎng)基中活性炭的濃度為I.Omg/L。
[0059] 作為優(yōu)選，增殖培養(yǎng)基的pH值為6. 0。
[0060] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，每g愈傷組織接入20mL增殖培養(yǎng)基。
[0061] 作為優(yōu)選，搖床培養(yǎng)時(shí)，增殖培養(yǎng)基中還添加經(jīng)滅菌