菜籽粕微生物發(fā)酵飼料及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種菜籽柏微生物發(fā)酵飼料及其制備 方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著生活水平的提高，膳食結(jié)構(gòu)改變巨大，人們對肉蛋奶的消費逐年增加。中國作 為全世界禽畜養(yǎng)殖大國，人工養(yǎng)殖比例逐年提高，對飼料的需求不斷增加。而全球范圍內(nèi)資 源的衰減，以及現(xiàn)代畜牧業(yè)和飼料工業(yè)的快速發(fā)展等各方面的綜合作用，導(dǎo)致世界性的魚 粉、豆柏等主要的蛋白質(zhì)飼料資源緊缺和價格上漲，給飼料工業(yè)帶來了嚴峻的挑戰(zhàn)。大力開 發(fā)新型高效環(huán)保綠色飼料具有重要的社會意義和經(jīng)濟效益。
[0003] 菜籽柏營養(yǎng)價值高，富含蛋白質(zhì)和氨基酸，是一種來源廣且穩(wěn)定相對廉價的蛋白 質(zhì)飼料資源，利用菜籽柏開發(fā)新型的微生物發(fā)酵飼料，使其不僅能夠降低抗?fàn)I養(yǎng)因子而作 為飼料滿足動物的生存需求，而且能夠成為一種低成本、維護動物的機體健康且提高動物 生長性能的具有保健功效的添加劑，可以極大地提高菜籽柏的利用價值和經(jīng)濟效益，對動 物營養(yǎng)保健方面展現(xiàn)出了廣闊的發(fā)展前景。但是如果將菜籽柏直接應(yīng)用在飼料中會一定程 度上存在著氨基酸不平衡、含有有毒物質(zhì)和抗?fàn)I養(yǎng)因子危害禽畜健康、降低飼料適口性等 問題，影響禽畜對其消化吸收利用，降低養(yǎng)殖的生產(chǎn)效益。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種營養(yǎng)保健，改善禽畜 生長性能，提高飼料適口性的的菜籽柏微生物發(fā)酵飼料，還提供了該菜籽柏微生物發(fā)酵飼 料的制備方法和在提高動物生長性能方面的應(yīng)用，該制備方法非常適合應(yīng)用于現(xiàn)代化飼料 產(chǎn)業(yè)中。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] -種菜籽柏微生物發(fā)酵飼料，所述菜籽柏微生物發(fā)酵飼料以菜籽柏為發(fā)酵原料， 通過納豆芽孢桿菌和鼠李糖乳桿菌發(fā)酵制備得到。
[0007] 上述的菜籽柏微生物發(fā)酵飼料，優(yōu)選的，所述納豆芽孢桿菌為納豆芽孢桿菌 (Baci1lusnatto)L08，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號 為：CGMCCNo. 5769〇
[0008] 上述的菜籽柏微生物發(fā)酵飼料，優(yōu)選的，所述鼠李糖乳桿菌為鼠李糖乳桿菌 (Lactobacillusrhamnosus)Lr.M8,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中 心，保藏編號為：CGMCCNo. 3002。
[0009] 作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供了一種上述菜籽柏微生物發(fā)酵飼料的制備 方法，包括以下步驟：
[0010] S1、將納豆芽孢桿菌培養(yǎng)成納豆芽孢桿菌菌液；
[0011]S2、將鼠李糖乳桿菌培養(yǎng)成鼠李糖乳桿菌菌液；
[0012] S3、將菜籽柏與水混合制成發(fā)酵原料，在所述發(fā)酵原料中接入步驟S1制備得到的 納豆芽孢桿菌菌液進行發(fā)酵48小時；然后接入步驟S2制備得到的鼠李糖乳桿菌菌液繼續(xù) 發(fā)酵至96小時。
[0013] 上述的制備方法，優(yōu)選的，所述步驟S1具體為：將納豆芽孢桿菌以0. 5g/100mL~ lg/100mL的接種量接種于芽孢桿菌富集液體培養(yǎng)基中，以36°C~38°C振蕩培養(yǎng)16小時，震 蕩速度為 120r/min~180r/min。
[0014] 上述的制備方法，優(yōu)選的，所述步驟S2具體為：將納豆芽孢桿菌以0. 5g/100mL~ 1. 2g/100mL的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，以32°C~38°C培養(yǎng)18小時。
[0015] 上述的制備方法，優(yōu)選的，所述步驟S3中，所述納豆芽孢桿菌菌液的接種量為 lwt%~1. 5wt%;所述鼠李糖乳桿菌菌液的接種量為lwt%~1. 5wt%。
[0016] 作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供了一種上述菜籽柏微生物發(fā)酵飼料或上述 制備方法制備得到的微生物發(fā)酵飼料做為動物飼料中的應(yīng)用。
[0017]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：
[0018] (1)本發(fā)明提供了一種菜籽柏微生物發(fā)酵飼料，利用混合微生物發(fā)酵法，先接種納 豆芽孢桿菌，再接入鼠李糖乳桿菌，能夠充分利用菌種的優(yōu)勢使得菜籽柏的營養(yǎng)物質(zhì)產(chǎn)量 得到最大化，營養(yǎng)保健功效多樣且成本低廉，能夠提高動物的生長特性；同時采用原料為菜 籽柏，資源豐富且成本低廉，非常適合現(xiàn)代化飼料產(chǎn)業(yè)。
[0019] (2)目前，對菜籽柏的微生物發(fā)酵主要集中在以脫毒或者單純提高蛋白含量為主； 使其在作為飼料應(yīng)用方面功效較單一；本發(fā)明的菜籽柏微生物發(fā)酵飼料不僅具有脫毒、提 高蛋白質(zhì)的含量的功效，還能夠使其具有溶血栓，抗氧化等保健功效，對動物的生長發(fā)育極 具優(yōu)勢。
[0020] (3)本發(fā)明提供了一種菜籽柏微生物發(fā)酵飼料的制備方法，采用吸水性良好的菜 籽柏為原料，含有多種氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)，可以得到富含高益生菌活菌含量的菜籽柏微生 物發(fā)酵飼料，豐富的活菌能夠在動物的腸道發(fā)揮益生功效，達到對動物的保健效果。
[0021] 納豆芽孢桿菌（Bacillusnatto)L08,于2012年2月17日保藏于中國微生物菌種 保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué) 院微生物研究所，保藏編號為：CGMCCNo.5769。
[0022] 鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus) Lr. M8,于2009年4月7日保藏于中國 微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區(qū)大屯路中國科學(xué) 院微生物研究所，保藏編號為：CGMCC No.3002。
【附圖說明】
[0023] 為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實施例 中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整的描述。
[0024] 圖1為菜籽柏發(fā)酵前后蛋白質(zhì)種類和含量變化的SDS-PAGE電泳檢測圖。
[0025]圖2為不同的接種方法對發(fā)酵菜籽柏中納豆激酶活力的影響的結(jié)果圖。
【具體實施方式】
[0026] 以下結(jié)合說明書附圖和具體優(yōu)選的實施例對本發(fā)明作進一步描述，但并不因此而 限制本發(fā)明的保護范圍。
[0027] 實施例
[0028] 以下實施例中所采用的材料和儀器均為市售。
[0029] 實施例1:
[0030] 本發(fā)明的一種菜籽柏微生物發(fā)酵飼料，其制備方法具體包括以下步驟：
[0031]S1、將納豆芽孢桿菌培養(yǎng)成納豆芽孢桿菌菌液：將納豆芽孢桿菌以lg/100mL的接 種量接種于芽孢桿菌富集液體培養(yǎng)基中（芽孢桿菌富集液體培養(yǎng)基的成分：蛋白胨l〇g、牛 肉粉3g、氯化鈉5g，pH7. 3)，以37°C振蕩培養(yǎng)16個小時，震蕩速度為120r/min。在步驟S1 中，納豆芽孢桿菌為納豆芽孢桿菌（Bacillusnatto)L08,保藏于中國微生物菌種保藏管理 委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCCNo. 5769。
[0032] 納豆芽孢桿菌（Bacillus natto)L08屬于革蘭氏陽性，大小為0. 7 y m~ 0. 8ymX2.0ym~3.0ym，芽孢橢圓形或柱狀，中生或偏中生，有鞭毛，能運動；在營養(yǎng)瓊 芝培養(yǎng)基上生長2天后，菌落為圓形，直徑約為3_左右，邊緣不整齊，突起；生長溫度最高 為45°C~55°C，最低為5°C~20°C。
[0033]S2、將鼠李糖乳桿菌培養(yǎng)成鼠李糖乳桿菌菌液：將納豆芽孢桿菌以1. 0g/100mL 的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基（MRS液體培養(yǎng)基的成分：酪蛋白胨10. 0克、牛肉浸取物 10. 0克、酵母提取液5. 0克、葡萄糖5. 0克、乙酸鈉5. 0克、檸檬酸二胺2. 0克、吐溫801. 0 克、磷酸氫二鉀2. 0克、七水硫酸鎂0. 2克、七水硫酸錳0. 05克、碳酸鈣20. 0克、蒸餾水 1. 0升，pH6. 8)中，以37°C培養(yǎng)18個小時。在步驟S2中，鼠李糖乳桿菌為鼠李糖乳桿菌 (Lactobacillusrhamnosus)Lr.M8,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中 心，保藏編號為：CGMCCNo. 3002。
[0034]鼠李糖乳桿菌（Lactobacillusrhamnosus)Lr.M8 為G+，大小為 0.7lim~l.lum X2. 0ym~3. 8ym，鏈狀，無鞭毛與纖毛，不會移動，在MRS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3天后可形成2~ 4毫米直徑的菌落，菌落呈奶油白色，不透明，邊緣整齊，突起，表面濕潤。最適生長溫度為 30-42°C，最高生長溫度為50°C。
[0035]S3、制備微生物發(fā)酵飼料：
[0036]S3-1:取30g粉碎過40目篩的菜籽柏，置于500mL的三角瓶中，加入31.5mL蒸餾 水，攪拌均勻密封滅菌15min。待冷卻后打散至質(zhì)地蓬松制成發(fā)酵原料。
[0037]S3-2:在發(fā)酵原料中接入1. 53wt%的納豆芽孢桿菌進行發(fā)酵48小時；然后接入 1. 53wt%的鼠李糖乳桿菌，攪拌均勻后置于36. 86°C下繼續(xù)發(fā)酵至96小時，完成菜籽柏微 生物發(fā)酵飼料的制備。
[0038] 實施例2
[0039] 本發(fā)明的一種菜籽柏微生物發(fā)酵飼料，其制備方法具體包括以下步驟：
[0040]S1、將納豆芽孢桿菌培養(yǎng)成納豆芽孢桿菌菌液：將納豆芽孢桿菌以lg/100mL的接 種量接種于芽孢桿菌富集液體培養(yǎng)基中，以37°C振蕩培養(yǎng)16小時，震蕩速度為120r/min。 本實施例步驟S1中的納豆芽孢桿菌與實施例1相同。
[0041]S2、將鼠李糖乳桿菌培養(yǎng)成鼠李糖乳桿菌菌液：將納豆芽孢桿菌以1. 2g/100mL的 接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，以37°C培養(yǎng)18小時。本實施例步驟S2中的鼠李糖乳桿 菌與實施例1相同。
[0042]S3、制備微生物發(fā)酵飼料：
[0043]S3-1 :取30g粉碎過40目篩的菜籽柏、0. 6g麩皮置于500mL的三角瓶中，加入32mL 蒸餾水，攪拌均勻密