后，稱量每只小鼠的體重，采取摘眼球方法取血1.5ml，于 35(K)r/min離屯、10分鐘后吸取上層血清，取摘取小鼠的肝、脾、腎、膜腺，用生理鹽水洗凈并 用干凈濾紙吸干后稱重和血清一起立即放在-80°C冰箱中保存，備用。
[0030] 2、對STZ致糖尿病小鼠糖耐量的實驗
[0031] 灌胃處理12周后，各組小鼠均禁食化，采取小鼠尾靜脈取血測得的血糖值作為化 的血糖值，接著按劑量2g/kg灌胃葡萄糖溶液，然后在灌胃后0.5、1、1.5、化尾靜脈取血測定 血糖值。觀察各組在各時間點上血糖濃度的變化。
[0032] 3、各項指標的測定
[0033] 在糖尿病小鼠模型建立成功后每天觀察小鼠的一般情況，如毛發(fā)色澤、活動頻率、 進食進水量、體重等。在灌胃給藥12周內(nèi)每周五早上稱量各組小鼠的體重，并且在禁食12h 后采用尾靜脈取血測定各組小鼠的空腹血糖值。
[0034] 3.1血液標本指標
[0(X3日]去眼球取血，350化/min離屯、IOmin，分離血清，用全自動生化儀測定血糖(GLU)、總 膽固醇(TC)、甘油；醋巧6)、血肌酢(S化）；用酶標儀測定糖化血紅蛋白（GHbAlc)、生物轉(zhuǎn)化 因子 Pi(TGF-Pi)D
[0036] 3.2尿液標本指標
[0037] 實驗結(jié)束前一天收集24h尿，計量后取4ml，3000;r/min離屯、IOmin去除沉渣，取2ml 測定2地尿微量蛋白（mALB)和尿肌酢化化）。
[0038] 4、實驗結(jié)果：
[0039] 4.1復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠空腹血糖的影響見表1:
[0040] 表1復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠空腹血糖的影響（；±s，n = 20)
[0041]
[00創(chuàng)注:各組與空白對照組比較，*p<0.05，**p<0.0 l;各組與模型對照組比較，Ap< 0.05，AAp<0.01。
[0043] 4.2復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠糖耐量的影響見表2:
[0044] 表2復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠糖耐量的影響
[0046] 由表1和表2可知，實驗組的原茶具有明顯的降血糖作用，改善其糖耐量，有效的調(diào) 節(jié)了糖尿病小鼠體內(nèi)的糖代謝。
[0047] 4.3復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠 TCVTG的影響見表3:
[004引表3復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠 TCVTG的影響G±S,n = 20)
[0050] 注:給藥12周后各組與模型對照組比較，Ap<0.05，A Ap<0.0 l。
[0051] 由表3可知，實驗組的復(fù)合原茶能通過降低糖尿病小鼠體內(nèi)過高的膽固醇TC, S酷 甘油TG，增強機體脂質(zhì)代謝的能力，且效果明顯優(yōu)于對照組。
[0化2] 4.4復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠 TGF-執(zhí)、mALB、GHbAlc的影響見表4:
[0化3] 表4復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠 TGF-執(zhí)、mALB、GHbAlc的影響（；± s，n = 20)
[005引注:給藥12周后各組與模型對照組比較，Ap<0.05，A Ap<0.0 l。
[0056] 由表4可知，生物轉(zhuǎn)化因子m是導(dǎo)致糖尿病小鼠腎臟損傷的重要因子，實驗組的復(fù) 合原茶能夠顯著地降低糖尿病小鼠體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化因子m的含量，且效果強于對照組。表明 實驗組對糖尿病小鼠的腎臟具有保護作用，并對糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展起到一定的預(yù)防 作用。
[0057] 實驗組的復(fù)合原茶能明顯降低小鼠體內(nèi)糖化血紅蛋白水平，很大程度上減輕了由 于糖化血紅蛋白水平升高引起的組織缺氧，減輕了糖化血紅蛋白水平升高導(dǎo)致的尤其是發(fā) 生在腎臟末梢微血管豐富的部位微血管病變，進而減輕由此引起組織細胞缺血缺氧和組織 損傷，進而尿微量白蛋白的含量也顯著降低。實驗組的復(fù)合原茶能顯著降低糖尿病小鼠體 內(nèi)尿微量白蛋白和糖化血紅蛋白的含量，對預(yù)防糖尿病腎病有一定的作用，且效果明顯優(yōu) 于對照組。
[0058] 4.5復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠血肌酢(S化)和尿肌酢化化)的影響見表5:
[0059] 表5復(fù)合原茶對STZ致糖尿病小鼠血肌?。⊿Cr)和尿肌酢(UCr)的影響（x±S，n = 20)
[0061 ] 注:給藥12周后各組與空白對照組比較，*p<0.05，**p<0.0 l;各組與模型對照組 比較，Ap<0.05，AAp<0.01。
[0062]由表5可知，血肌酢和尿肌酢都是反映腎臟損傷程度的指標。實驗組復(fù)合原茶能顯 著地降低糖尿病小鼠體內(nèi)血肌酢的含量，并且可W顯著地提高糖尿病小鼠體內(nèi)尿肌酢的含 量，說明實驗組復(fù)合原茶原茶可W有效調(diào)節(jié)二者在糖尿病小鼠體內(nèi)的濃度，從而達到保護 腎臟的作用，且效果明顯優(yōu)于對照組。
[0063]由表1~表5可知，實驗組的復(fù)合原茶能夠通過降低糖尿病小鼠體內(nèi)過高的膽固 醇、=酷甘油，增強機體脂質(zhì)代謝的能力，顯著降低糖尿病小鼠體內(nèi)的血糖水平，改善其糖 耐量，同時還能夠提高糖尿病小鼠血液、尿液中的尿肌酢的含量，降低糖尿病小鼠血液、尿 液中血肌酢、轉(zhuǎn)化生長因子-ei、尿微量白蛋白、糖化血紅蛋白含量的功效，減輕糖尿病腎病 小鼠的腎臟損傷，對預(yù)防糖尿病小鼠腎臟的損傷具有保護作用。
【主權(quán)項】
1. 羅漢果與石崖茶復(fù)合原茶的制備方法，其特征在于:將羅漢果和石崖茶按2~5:1~5 重量比混合，加入60~75v%的乙醇，在超聲波條件下提取，將提取液濃縮，加入乙酸乙酯進 行沉淀，抽濾，取沉淀冷凍干燥，即為復(fù)合原茶。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅漢果與石崖茶復(fù)合原茶的制備方法，其特征在于:所述濃縮 是將提取液濃縮至原體積的1/2~1/5。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的羅漢果與石崖茶復(fù)合原茶的制備方法，其特征在于:所述乙酸 乙酯的加入量為濃縮液體積的2~3倍。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅漢果與石崖茶復(fù)合原茶的制備方法，其特征在于:在超聲波 條件1~3次，每次1~2h;所述超聲波條件為:溫度40~50°C、頻率為250~400Hz。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的羅漢果與石崖茶復(fù)合原茶的制備方法，其特征在于:所述超聲 波頻率為300~400Hz。6. 根據(jù)權(quán)利要求1~6中任一項所述的羅漢果與石崖茶復(fù)合原茶的制備方法，其特征在 于：乙醇的加入量為羅漢果和石崖茶總重的4~10倍。7. 根據(jù)權(quán)利要求1~6中任一項所述的羅漢果與石崖茶復(fù)合原茶的制備方法，其特征在 于:羅漢果與石崖茶的重量比為2:1。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種羅漢果與石崖茶復(fù)合原茶的制備方法，將羅漢果和石崖茶按1～2:1～10重量比混合，加入60～75v％的乙醇，在超聲波條件下提取，將提取液濃縮，加入乙酸乙酯進行沉淀，抽濾，取沉淀冷凍干燥，即為復(fù)合原茶原茶。本發(fā)明制得的復(fù)合原茶不僅在糖尿病降糖方面具有協(xié)同作用，并對改善糖尿病并發(fā)癥脂代謝異常和腎臟損傷具有一定的保護作用。
【IPC分類】A23F3/34
【公開號】CN105475569
【申請?zhí)枴緾N201510973443
【發(fā)明人】程忠泉, 徐寶敏, 溫宇, 吳麗文, 孫顯屏, 楊丹
【申請人】桂林雙象生物科技有限公司
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2015年12月22日