一種復合富鉻芽孢桿菌制劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及畜牧業(yè)領域，具體設及一種降低雞排泄物中氨氣釋放量和提高肉雞生 產(chǎn)性能的復合富銘芽抱桿菌制劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 近年來，隨著我國畜牧業(yè)生產(chǎn)的高速發(fā)展，其數(shù)量與質(zhì)量、生產(chǎn)與環(huán)境、W及效益 與資源之間的矛盾表現(xiàn)得越來越突出。尤其是畜禽排泄物對環(huán)境所造成的污染日趨嚴重， 大量有害物的排放使畜禽場污物中的BOD(生化需氧量)和COD(化學需氧量)值急劇上升。飼 養(yǎng)過程中產(chǎn)生的有害氣體對大氣環(huán)境的危害日益顯現(xiàn)。在已知的各種臭氣成分中，氨氣被 公認為是對環(huán)境和機體健康影響最大的氣體。肉雞舍空氣中的氨氣主要來自其胃腸道消 化、糞尿分解、飼料殘渣和墊草等有機物腐敗所產(chǎn)生，是一種具有強烈刺激性臭味的無色氣 體，在空氣中達到一定的濃度便會對人畜產(chǎn)生危害。許多研究證明，肉雞飼養(yǎng)過程中引起的 環(huán)境污染成為了一些傳染病發(fā)生和傳播的潛在誘因，因此雞舍氨氣污染已成為目前亟待解 決的問題。因此，如何解決運些矛盾是我國畜牧業(yè)生產(chǎn)能否持續(xù)、高效和穩(wěn)定發(fā)展的關鍵所 在，也是擺在我們面前亟待解決的重大課題。針對畜牧業(yè)生產(chǎn)運一現(xiàn)狀，隨著集約化養(yǎng)殖的 加大，肉雞的生產(chǎn)性能受到很大的影響，另外集約化養(yǎng)殖過程中所產(chǎn)生的氨氣嚴重阻礙了 肉雞的生長。
[0003] 微生態(tài)制劑可W有效降低氨氣的排放，益生菌具有抑制腸道內(nèi)氨及胺等毒性物質(zhì) 的產(chǎn)生，改善環(huán)境衛(wèi)生，當動物腸內(nèi)大腸桿菌等有害菌數(shù)量增多時會導致蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為氨、 膠和其它有害氣體和物質(zhì)，而益生菌制劑中某些菌屬如嗜胺菌可利用消化道內(nèi)游離的氨、 胺和其他有害氣體和物質(zhì)，同時優(yōu)勢菌群可抑制大腸桿菌的活動，扭轉(zhuǎn)蛋白質(zhì)向胺及氨的 轉(zhuǎn)化，從而降低腸內(nèi)容物、血液和糞便中有害物質(zhì)含量。芽抱桿菌作為我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定的飼 用益生菌，現(xiàn)已廣泛用于養(yǎng)殖業(yè)，芽抱桿菌的益生作用主要表現(xiàn)在提高幼畜成活率，降低死 亡率，減少下頻，提高采食量和日增重，提高飼料轉(zhuǎn)化率，改善環(huán)境質(zhì)量等，另外，芽抱桿菌 具有抗逆性強的特點，在環(huán)境惡劣的條件下形成抱子，等環(huán)境適宜后又會萌發(fā)生長，該特點 保證其作為一種有益的菌株被大規(guī)模使用?？莶菅勘U菌可在大腸中產(chǎn)生氨基酸氧化酶、 氨基轉(zhuǎn)移酶及分解硫化物的酶，將硫化物氧化成無臭無味無毒的物質(zhì)，從而降低血液及糞 便中有害氣體的濃度，減少其向外的排放量，進而改善飼養(yǎng)環(huán)境；W實現(xiàn)畜牧生產(chǎn)的生態(tài) 化。芽抱桿菌作為一種益生菌，已經(jīng)被國內(nèi)外用于減少氨氣排放來使用，枯草芽抱桿菌和地 衣芽抱桿菌的有益微生物添加水平在0.05%~0.2%之間時，可降低氨氣的產(chǎn)生量達50%。 學者推測可能的原因是提髙了飼料消化率，改善了動物胃腸道中有益微生物如乳酸菌的生 長狀態(tài)，并降低了排泄物的pH，從而提高機體的消化能力，進而提高飼料的轉(zhuǎn)化率。還有學 者發(fā)現(xiàn)枯草芽抱桿菌可W產(chǎn)生枯草菌素，可抑制胃腸道中可產(chǎn)生脈酶的微生物，而減弱氨 氣的釋放。但目前國內(nèi)外對益生芽抱桿菌的使用規(guī)模較小，對芽抱桿菌降低雞排泄物氨氣 排放的應用較少。
[0004] 銘是人體必需的微量營養(yǎng)元素之一，是機體內(nèi)葡萄糖耐量因子的重要組成成分。 具有調(diào)節(jié)機體肉品質(zhì)、氮代謝的功能，研究發(fā)現(xiàn)銘對蛋白質(zhì)、核酸代謝的調(diào)節(jié)機理可能是銘 具有調(diào)節(jié)氨基酸通過細胞的速率起到作用，另外其對機體的脂肪和糖代謝也具有調(diào)節(jié)作 用。在飼料中添加富銘酵母可有效地降低N出、NO和化O的排出。機體缺銘會產(chǎn)生葡萄糖、月旨 肪、蛋白質(zhì)代謝障礙，引起各種疾病，如動脈粥樣硬化、糖尿病、冠屯、病、末梢神經(jīng)炎、近視眼 等;動物缺銘則表現(xiàn)為膽固醇或血糖升高、生長遲緩、免疫力下降、繁殖能力下降和壽命縮 短等，補銘后，癥狀消失。由于不同形式的銘在組織中的結合程度不同，導致吸收率不同。無 機銘不但毒性大，且吸收水平極低，約為0.14%~3.0 % ;有機銘吸收迅速且安全，吸收率可 達10%~25%。然而，在國內(nèi)有機銘源成本高，難W大面積的補充實行。如何尋找一條即便 宜又能提高吸收率的雙重途徑是亟待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于:提供一種降低雞排泄物中氨氣釋放量和提高肉雞生產(chǎn)性能的 復合富銘芽抱桿菌制劑及其制備方法。
[0006] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術方案：
[0007] -種復合富銘芽抱桿菌制劑，每克復合富銘芽抱桿菌制劑包含W下成分:雞源地 衣芽抱桿菌4.4 X IO8~4.6 X 10化即，枯草芽抱桿菌1.4 X IO8~1.6 X IO8CFU，有機銘28~32 yg，無機銘2.8~3.化邑。
[000引優(yōu)選地，每克復合富銘芽抱桿菌制劑包含W下成分：雞源地衣芽抱桿菌4.5 X 108CFU，枯草芽抱桿菌1.5 X IO8CFU，有機銘3化g，無機銘化g。
[0009] 進一步地，所述的復合富銘芽抱桿菌制劑的制備方法，包括如下步驟：
[0010] (1)菌種的選擇
[0011] 選擇雞源地衣芽抱桿菌、枯草芽胞桿菌在4°C條件下保存?zhèn)溆茫?br>[0012] (2巧米粉-豆椎培養(yǎng)基的制備
[OOU] 首先，稱取〇.512gCrCl3 ? 6此0溶解于IOOmL蒸饋水中，配成1000yg/g的母液，經(jīng)滅 菌后備用；其次，向IL蒸饋水中加入玉米粉18-22克，豆巧粉13-17克，混合均勻后，在120-125°C條件下高壓蒸汽滅菌18-22min備用；向滅菌好的培養(yǎng)基中加入上述母液，每升培養(yǎng)基 中添加3-3.5mL母液；
[0014] (3)菌種的活化與種子液的制備
[0015] 將雞源地衣芽抱桿菌、枯草芽胞桿菌分別接種于斜面營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，溫度為35-40°C，培養(yǎng)18-24h進行活化;連續(xù)活化3~5次后，再接種于牛肉膏蛋白腺液體培養(yǎng)基中，溫 度為35-40°C，培養(yǎng)22-2化，分別得到雞源地衣芽抱桿菌種子液、枯草芽胞桿菌種子液；
[0016] (4)發(fā)酵
[0017] 將雞源地衣芽抱桿菌種子液、枯草芽胞桿菌種子液按3%、1%的接種量接種于玉 米粉-豆巧培養(yǎng)基中，用發(fā)酵罐培養(yǎng)得到發(fā)酵液；
[0018] (5)吸附與分裝
[0019] 將發(fā)酵液用固體吸附劑吸附后，在45-50°C烘干分裝，得到復合富銘芽抱桿菌制 劑。
[0020] 優(yōu)選地，所述的復合富銘芽抱桿菌制劑的制備方法，包括如下步驟：
[0021] (1)菌種的選擇
[0022] 選擇雞源地衣芽抱桿菌、枯草芽抱桿菌在4°C條件下保存?zhèn)溆茫?br>[0023] (2)玉米粉-豆巧培養(yǎng)基的制備
[0024] 首先，稱取0.512g化C13 ?細2〇溶解于IOOmL蒸饋水中，配成1000yg/g的母液，經(jīng)滅 菌后備用；其次，向IL蒸饋水中加入玉米粉20克，豆巧粉15克，混合均勻后，在121°C條件下 高壓蒸汽滅菌20min備用；向滅菌好的培養(yǎng)基中加入上述母液，每升培養(yǎng)基中添加3.25mL母 液；
[0025] (3)菌種的活化與種子液的制備
[0026] 將雞源地衣芽抱桿菌、枯草芽抱桿菌分別接種于斜面營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，溫度為37 °C，培養(yǎng)20h進行活化;連續(xù)活化3~5次后，再接種于牛肉膏蛋白腺液體培養(yǎng)基中，溫度為37 °C，培養(yǎng)24h，分別得到雞源地衣芽抱桿菌種子液、枯草芽抱桿菌種子液；
[0027] (4)發(fā)酵
[0028] 將雞源地衣芽抱桿菌種子液、枯草芽抱桿菌種子液按3%、1%的接種量接種于玉 米粉-豆巧培養(yǎng)基中，用發(fā)酵罐培養(yǎng)得到發(fā)酵液；
[0029] (5)吸附與分裝
[0030] 將發(fā)酵液用固體吸附劑吸附后，在45-50°C烘干分裝，得到復合富銘芽抱桿菌制 劑。
[0031] 優(yōu)選地，所述的步驟(3)中的牛肉膏蛋白腺液體培養(yǎng)基包括牛肉膏、蛋白腺、氯化 鋼，其具體含量為每升培養(yǎng)基含牛肉膏3克、蛋白腺10克、氯化鋼5克。
[0032] 優(yōu)選地，所述的步驟（4)發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度：37°C;通氣量:0.05m3/h;轉(zhuǎn)數(shù)： TOr/min;罐壓:0.04Mpa;發(fā)酵時間：24h。
[0033] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0034] 1、本發(fā)明采用生物轉(zhuǎn)化的方式生產(chǎn)出復合富銘芽抱桿菌制劑，即利用自主分離的 地衣和枯草芽抱桿菌將無機銘(=氯化銘)轉(zhuǎn)化成有機形態(tài)的銘，其中，雞源地衣芽抱桿菌 4.4 X 1〇8~4.6 X 1〇8cFU，枯草芽抱桿菌1.4 X 1〇8~1.6 X 1〇8cFU，有機銘28~3化g，無機銘 2.8~3.化邑。
[0035] 2、本發(fā)明的復合富銘芽抱桿菌制劑綠色環(huán)保，不僅具有促生長的在作用，同時還 具有降低雞排泄物中氨氣釋放的作用，另外，本發(fā)明的復合富銘芽抱桿菌結合了有機銘和 益生芽抱桿菌的雙重功效，比益生芽抱桿菌和微量元素銘的促生長和降低氨氣的能力更 強，起到聯(lián)合作用的功效。
【具體實施方式】
[0036] -、復合富銘芽抱桿菌制劑的制備
[0037] (1)菌種的選擇
[0038] 選擇雞源地衣芽抱桿菌、枯草芽抱桿菌在4°C條件下保存?zhèn)溆茫?br>[0039] (2)玉米粉-豆巧培養(yǎng)基的制備
[0040] 首先，稱取0.512gCrCl3 ?細2〇溶解于IOOmL蒸饋水中，配成1000yg/g的母液，經(jīng)滅 菌后備用；其次，向IL蒸饋水中加入玉米粉20克，豆巧粉15克，混合均勻后，在121°C條件下 高壓蒸汽滅菌20min備用；向滅菌好的培養(yǎng)基中加入上述母液，每升培養(yǎng)基中添加3.25mL母 液。
[0041 ] (3)菌種的活化與種子液的制備
[0042] 將雞源地衣芽抱桿菌、枯草芽抱桿菌分別接種于斜面營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，溫度為37 °C，培養(yǎng)20h進行活化;連續(xù)活化3~5次后，再接種于牛肉膏蛋白腺液體培養(yǎng)基中，溫度為37 °C，培養(yǎng)24h，分別得到雞源地衣芽抱桿菌種子液、枯草芽抱桿菌種子液;其中，牛肉膏蛋白 腺液體培養(yǎng)基包括牛肉膏、蛋白腺、氯化鋼，其具體含量為每升培養(yǎng)基含牛肉膏3克、蛋白腺 10克、氯化鋼5克。
[0043] (4)發(fā)酵
[0044] 將雞源地衣芽抱桿菌種子液、枯草芽抱桿菌種子液按3%、1%的接種量接種于玉 米粉-豆巧培養(yǎng)基中，用發(fā)酵罐培養(yǎng)得到發(fā)酵液;其中，發(fā)酵條件為:發(fā)酵溫度:37°C ;通氣 量:0.0 Sm3A;轉(zhuǎn)數(shù):70;r/min;罐壓:0.04Mpa;發(fā)酵時間：24h。
[0045] (5)吸附與分裝
[0046] 將發(fā)酵液用固體吸附劑吸附后，在45-50°C烘干分裝，得到復合富銘芽抱桿菌制 劑。
[0047]