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      一種兼具降血脂、抗氧化作用的組合物的制作方法_3

      文檔序號:9895762閱讀:來源:國知局
      糖的制備方法為: (1) 華山抓多糖的制備: A:取含水率為3%的華山抓干品,粉碎后過篩,取過篩后粒徑為100微米的華山抓粉末用 80°C熱水浸提3次,每次化,然后先后經(jīng)過離屯、、抽濾、合并濾液,再將濾液真空濃縮至原有 體積的1/6,加入乙醇調(diào)節(jié)濾液的含醇量為80%后收集沉淀,最后真空干燥即得華山抓粗多 糖; B:將步驟A得到的華山抓粗多糖加蒸饋水復(fù)溶后經(jīng)過氯仿:正下醇體積比為5:1的試 劑除蛋白,萃取4次,得到華山抓粗多糖溶液; C:將步驟B得到的華山抓粗多糖溶液加入3倍95%乙醇,然后使用無水乙醇、丙酬及乙酸 反復(fù)洗涂,再經(jīng)抽濾、干燥后得到華山抓精制多糖; (2) 取含水率均為4%的何首烏、丹參、山植、草決明和構(gòu)杞子干品分別粉碎后過300篩, 備用; (3) 取含水率均為3%的絞股藍、菊花干品分別粉碎后過150篩,備用; (4) 將步驟(1)備用的華山抓精制多糖和步驟(2)、步驟(3)過篩后備用的原料進行混合 均勻,即可。
      [0036] 實施例4: 一種兼具降血脂、抗氧化作用的組合物,該組合物按照重量份數(shù)比計包括W下原料:華 山抓多糖5份,何首烏5份,丹參5份,山植5份,絞股藍5份,草決明8份,菊花15份和構(gòu)杞子15 份。
      [0037] 將上述組合物按照常規(guī)工藝制成丸劑。
      [0038] 其中,華山抓多糖的制備方法與實施例2相同。
      [0039] 實施例5: 一種兼具降血脂、抗氧化作用的組合物,該組合物按照重量份數(shù)比計包括W下原料:華 山抓多糖10份,何首烏10份,丹參10份,山植10份,絞股藍10份,草決明15份,菊花25份和構(gòu) 杞子25份。
      [0040] 將上述組合物按照常規(guī)工藝制成注射劑。
      [0041] 其中,華山抓多糖的制備方法與實施例3相同。
      [0042] 實施例6: 一、對華山抓多糖的降血脂活性的評價 1.材料與儀器 1.1動物:SPF級昆明小鼠,雌雄各半,體質(zhì)量18-22 g,由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中屯、提 供,生產(chǎn)許可證號:SCXK(桂)2003-0003。
      [0043] 1.2華山抓多糖的提取和純化:取華山抓干品,用粉碎機粉碎并過40目篩,取過篩 后的華山抓粉末放90 °C熱水浸提3次每次2 h,然后先后經(jīng)過離屯、、抽濾、合并濾液,將濾液 真空濃縮至原有體積的1/6,調(diào)節(jié)含醇量為80%溶液靜置過夜,收集沉淀,真空干燥即得華山 抓粗多糖;華山抓粗多糖加蒸饋水復(fù)溶后經(jīng)過Sevag試劑(氯仿:正下醇=5: 1)除蛋白,連 續(xù)操作多次,直到完全脫除蛋白為止;將脫蛋白后的華山抓多糖溶液中加入3倍95%乙醇,用 無水乙醇、丙酬及乙酸反復(fù)洗涂沉淀,最后經(jīng)抽濾、干燥后得到華山抓精制多糖。
      [0044] 1.3 試劑 辛伐他汀;膽固醇;丙基硫氧喀晚;吐溫-80;總膽固醇(TC)測定試劑盒;甘油S醋(TG) 測定試劑盒;低密度脂蛋白膽固醇化DL-C)測定試劑盒;高密度脂蛋白膽固醇(HDkC)測定 試劑盒;丙二醒(MDA)測定試劑盒;超氧化物歧化酶(SOD)測試盒。
      [0045] 1.4 儀器 紫外可見分光光度計(美國Agilent公司);電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公 司);多歧管冷凍干燥機(北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司);電子恒溫水浴鍋(北京泰克儀器 有限公司)。
      [0046] 2.方法 2.1高脂肪乳劑的配制 取豬油22.0 g置燒杯中,在電爐上加熱融化,將12.0 g膽固醇充分研磨后加入豬油中 溶化,再取丙基硫氧喀晚1 g研細加入,再加入吐溫-80 5 mL,充分均勻研磨,最后加熱水 20 mL,均勻研磨即成。冰箱保存,使用時于37 °C水浴中融化。
      [0047] 2.2動物分組及給藥 取90只(體質(zhì)量18-22 g,雌雄兼用)健康小鼠隨機分成6組,每組15只,A組為空白對 照組,B組為高血脂模型組,C為陽性對照組(辛伐他汀片20 mg/kg),D、E、F組依次為華山 抓多糖高劑量組(300mg/kg)、中劑量組(200mg/kg)、低劑量組(lOOmg/kg),每天早上空白 對照組和高血脂模型組ig生理鹽水0.2血/lOg,,其余給藥組ig相應(yīng)藥物,下午空白對照 組繼續(xù)ig生理鹽水0.2mL/10g,其余各組ig高脂肪乳劑(0.2mL/10g),連續(xù)給藥14d。 (ig表示是灌胃,W下同) 2.3指標檢測 末次給藥后1 h,小鼠眼眶后靜脈叢取血,靜置后,3500 r/min離屯、,取血清,按總膽固 醇、甘油=醋、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、超氧化物歧化酶、丙二醒測定試 劑盒說明分別測定血清中總膽固醇、甘油=醋、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、超氧化物歧 化酶、丙二醒含量。
      [004引 2.4統(tǒng)計學(xué)分析 各組數(shù)據(jù)用# 表示,組間均值比較采用t檢驗。
      [0049] 3.結(jié)果 3.1對高脂血癥小鼠血脂的影響見表1。
      [0050] 表1華山抓多糖對各組小鼠血脂的影響
      (注:與模型組比較,沖<0.05,*沖<0.01) 由表1、圖1可見,模型組與空白組比較,模型組小鼠血清的^^6、0)心(:濃度均顯著 高于空白組(P<〇.〇5或P<0.01),皿kC顯著降低(P<0.05),說明高脂血癥小鼠模型造模成 功。與模型組比較,華山抓多糖高、中、低劑量組小鼠血清TC、TG、LDレC水平顯著降低(P< 0.05或口<0.01),表明,華山抓多糖能有效降低高脂血癥小鼠血清中1'(:^6、0)心(:含量;華山 抓多糖高、中、低劑量組小鼠血清中皿kc水平顯著升高(P<0.05),說明華山抓多糖可促進 皿心(:將血中膽固醇運到肝臟,促進轉(zhuǎn)化和排泄,從而使血中膽固醇降低,減少冠屯、病和動 脈粥樣硬化的危險。
      [0051 ] 3.2對高脂血癥小鼠抗氧化作用的影響見表2。
      [0化2] 表2華山抓多糖對各組小鼠 SOD活性和MDA含量的影響
      (注:與模型組比較,沖<0.05,*沖<0.01) 由表2、圖2可見,與空白對照組比較,模型組小鼠 SOD活性明顯降低(P<0.01),MDA含量 明顯增加(P<〇.01),表明模型組小鼠抗氧化能力明顯低于正常對照組。與模型組比較,辛伐 他汀組、華山抓多糖組小鼠 SOD活性顯著升高(P<0.01),MDA含量明顯降低(P<0.01),表明 華山抓多糖能改善高血脂小鼠自由基代謝異常,對預(yù)防高血脂并發(fā)癥發(fā)生具有益處。
      [0053]二、對本申請的組合物制備成的藥劑的降血脂活性的評價 4. 將實施例1制成的片劑、實施例2制成的顆粒劑、實施例3制成的膠囊劑、實施例4制成 的丸劑、實施例5制成的注射劑也按照對華山抓多糖的降血脂活性的評價的流程,動物選 取、試劑及試劑配制、儀器、指標檢測等都相同;不同點為動物分組及給藥(劑量300mg/kg、 200 mg/kg、100 mg/kg表示的是本發(fā)明組合物的有效成分含量): 取120只(體質(zhì)量18-22 g,雌雄兼用)健康小鼠隨機分成8組,每組15只,A組為空白 對照組,B組為高血脂模型組,C為陽性對照組(辛伐他汀片20 mg/kg),D、E、F、G、H組依次 為實施例1制成的片劑組、實施例2制成的顆粒劑組、實施例3制成的膠囊劑組、實施例4制成 的丸劑組、實施例5制成的注射劑組,每天早上空白對照組和高血脂模型組ig生理鹽水 0.21111710肖,,其余給藥組1肖相應(yīng)藥物,下午空白對照組繼續(xù)1肖生理鹽水0.2血/10肖,其 余各組ig高脂肪乳劑(0.2mL/10g),連續(xù)給藥14cL(ig表示是灌胃,
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