本發(fā)明涉及煙草香料技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種檸檬發(fā)酵型煙用香料及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
檸檬是一種具有很高營養(yǎng)價值的水果，其含有豐富的維生素c，研究表明吸煙的人需要的維生素c是不吸煙者的二倍，另外抽煙者容易生痰，而檸檬可袪痰，且袪痰功效比橙和柑還要強，因此選擇檸檬作為原料，開發(fā)一種新型的煙用發(fā)酵香料。
當前，中式卷煙調(diào)香香料主要采用傳統(tǒng)的有機溶劑萃取技術(shù)獲得，此方法獲得的香料存在很多不足，已經(jīng)不能完全滿足當前卷煙調(diào)香高品質(zhì)的需求，而利用生物技術(shù)處理后得到的香料除自然香韻外，還能增加濃厚的釀香香韻，給予抽吸卷煙特殊的口感。本發(fā)明從廣西梧州產(chǎn)的六堡茶中篩選出一株優(yōu)勢菌株，經(jīng)鑒定為塔賓曲霉。該塔賓曲霉菌株能分泌多種生物酶，在發(fā)酵過程中可以增加檸檬發(fā)酵的香氣，賦予其特別的抽吸口感。
現(xiàn)有技術(shù)中，有以檸檬為原料，制備果汁、發(fā)酵酒的方法，但是還沒有塔賓曲霉發(fā)酵檸檬煙用香料出現(xiàn)，更沒有將其添加到卷煙濾棒中進行卷煙調(diào)香的應(yīng)用報道。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種檸檬發(fā)酵型煙用香料及其制備方法和應(yīng)用。
本發(fā)明利用微生物發(fā)酵技術(shù)處理檸檬，通過一系列的分解、合成、轉(zhuǎn)化等生化反應(yīng)，增加更豐富的釀香香味成分，從而豐富煙香，改善卷煙抽吸口感，開發(fā)出一種新型煙用發(fā)酵香料；本發(fā)明同時提供了所述煙用發(fā)酵香料的制備方法及所述煙用發(fā)酵香料在卷煙調(diào)香中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的一種檸檬發(fā)酵型煙用香料的制備方法，包括以下步驟：
以檸檬為原料，用菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501發(fā)酵，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的1％，在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵8d，發(fā)酵結(jié)束后對其進行真空抽濾、離心分離以及用0.2微米的雙層濾膜過濾提純，即得到所需的發(fā)酵香料；對其發(fā)酵后的香料進行真空抽濾、離心分離以及雙層濾膜過濾三個步驟進行。
所述菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501已于2014年9月17日保藏在位于中國武漢市武昌珞珈山武漢大學的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為cctccno：m2014425。
本發(fā)明提供的一種檸檬發(fā)酵型煙用香料的制備方法，優(yōu)選技術(shù)方案為：
1.培養(yǎng)基配制：將檸檬洗凈，室溫晾干，利用豆?jié){機將檸檬打漿，向檸檬漿中添加10％的蔗糖，制得培養(yǎng)基；
2.培養(yǎng)基滅菌：將培養(yǎng)基在120℃下滅菌20min，冷卻；
3.接種：在無菌條件下，將菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501接種于培養(yǎng)基中，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的0.5％～2.0％；
4.發(fā)酵：在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵4～12d；
5.加熱回流：取發(fā)酵好的物料加入75％的乙醇，加熱回流提取2h，真空抽濾，向濾渣中繼續(xù)加入75％的乙醇，重復(fù)上述操作2次，合并3次濾液，靜置48h，取上層清液；
6.減壓濃縮：將抽濾后的檸檬發(fā)酵沉降液減壓濃縮，得到煙用檸檬浸膏，其中濃縮溫度為65℃，濃縮壓力為0.01個大氣壓；
7.回溶：將其浸膏用無水乙醇充分回溶；
8.分離純化：將其回溶液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下超聲6分鐘，取其清液，用兩層0.2微米濾膜過濾，得到澄清透明的檸檬發(fā)酵香料。
本發(fā)明同時提供了所述煙用發(fā)酵香料應(yīng)用方法：上述檸檬發(fā)酵香料，用于煙用香精的調(diào)配，或者直接進行煙草加香。具體是將所述的檸檬發(fā)酵香料用丙二醇稀釋到(2-6)wt％，然后添加(0.2-1)μl到香煙中，采用的是微型注射器對香煙進行濾棒注射進樣。
本發(fā)明中使用微生物菌株為塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501，其通過如下途徑獲得：將茶葉(約0.5g)剪碎放入裝有200ml2％蔗糖察氏液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在培養(yǎng)溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為180rpm的搖床中，培養(yǎng)42h后可得到中央為棕色的白色菌絲球。
本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明利用塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501生產(chǎn)發(fā)酵型煙用香料，所制備的發(fā)酵型煙用香料其不僅具有檸檬特有的天然香韻，而且還有濃厚的釀香香韻；將該香料進行卷煙嘴棒加香試驗，結(jié)果表明，該香原料能夠豐富煙香，抽吸時口感舒適、余味好，而且煙氣變得柔和細膩。本發(fā)明應(yīng)用微生物發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)發(fā)酵型煙用香料，為新型香原料的開發(fā)提供了一條新途徑。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的有關(guān)技術(shù)問題作進一步詳細的描述。
實施例1
1.培養(yǎng)基配制：將檸檬洗凈，室溫晾干，利用豆?jié){機將其分別打漿，向檸檬漿中添加10％的蔗糖，制得培養(yǎng)基；
2.培養(yǎng)基滅菌：將培養(yǎng)基在120℃下滅菌20min，冷卻；
3.接種：在無菌條件下，將菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501接種于培養(yǎng)基中，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的0.5％；
4.發(fā)酵：在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵4d；
5.加熱回流：取發(fā)酵好的物料加入75％的乙醇，加熱回流提取2h，真空抽濾，向濾渣中繼續(xù)加入75％的乙醇，重復(fù)上述操作2次，合并3次濾液，靜置48h，取上層清液；
6.減壓濃縮：將抽濾后的檸檬發(fā)酵沉降液減壓濃縮，得到煙用檸檬浸膏，其中濃縮溫度為65℃，濃縮壓力為0.01個大氣壓。
7.回溶：將其浸膏用無水乙醇充分回溶
8.分離純化：將其回溶液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下超聲6分鐘，取其清液，用兩層0.2微米濾膜過濾，得到澄清透明的檸檬發(fā)酵香料，嗅香發(fā)現(xiàn)檸檬天然果香味香氣突出，而釀香風味不足。
實施例2
1.培養(yǎng)基配制：將檸檬洗凈，室溫晾干，利用豆?jié){機將其分別打漿，向檸檬漿中添加10％的蔗糖，制得培養(yǎng)基；
2.培養(yǎng)基滅菌：將培養(yǎng)基在120℃下滅菌20min，冷卻；
3.接種：在無菌條件下，將菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501接種于培養(yǎng)基中，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的1％；
4.發(fā)酵：在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵8d，；
5.加熱回流：取發(fā)酵好的物料加入75％的乙醇，加熱回流提取2h，真空抽濾，向濾渣中繼續(xù)加入75％的乙醇，重復(fù)上述操作2次，合并3次濾液，靜置48h，取上層清液；
6.減壓濃縮：將抽濾后的檸檬發(fā)酵沉降液減壓濃縮，得到煙用檸檬浸膏，其中濃縮溫度為65℃，濃縮壓力為0.01個大氣壓；
7.回溶：將其浸膏用無水乙醇充分回溶；
8.分離純化：將其回溶液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下超聲6分鐘，取其清液，用兩層0.2微米濾膜過濾，得到澄清透明的檸檬發(fā)酵香料，嗅香發(fā)現(xiàn)不僅檸檬天然果香味突出，而且釀香風味也明顯爆發(fā)，兩種香味相得益彰。
實施例3
1.培養(yǎng)基配制：將檸檬洗凈，室溫晾干，利用豆?jié){機將其分別打漿，向檸檬漿中添加10％的蔗糖，制得培養(yǎng)基；
2.培養(yǎng)基滅菌：將培養(yǎng)基在120℃下滅菌20min，冷卻；
3.接種：在無菌條件下，將菌株塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501接種于培養(yǎng)基中，接種比例為培養(yǎng)基質(zhì)量的2％；
4.發(fā)酵：在培養(yǎng)溫度為25℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵12d；
5.加熱回流：取發(fā)酵好的物料加入75％的乙醇，加熱回流提取2h，真空抽濾，向濾渣中繼續(xù)加入75％的乙醇，重復(fù)上述操作2次，合并3次濾液，靜置48h，取上層清液；
6.減壓濃縮：將抽濾后的檸檬發(fā)酵沉降液減壓濃縮，得到煙用檸檬浸膏，其中濃縮溫度為65℃，濃縮壓力為0.01個大氣壓；
7.回溶：將其浸膏用無水乙醇充分回溶；
8.分離純化：將其回溶液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下超聲6分鐘，取其清液，用兩層0.2微米濾膜過濾，得到澄清透明的檸檬發(fā)酵香料，嗅香發(fā)現(xiàn)釀香風味顯著，但是少了天然的香氣。
實施例4
塔賓曲霉aspergillustubingensisgyc501獲得：將茶葉(約0.5g)剪碎放入裝有200ml2％蔗糖察氏液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在培養(yǎng)溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為180rpm的搖床中，培養(yǎng)42h后可得到中央為棕色的白色菌絲球。
實施例5
以實施例2中所制備的發(fā)酵型煙用香料為例，進行在卷煙中應(yīng)用研究的說明。將檸檬發(fā)酵型煙用香料用95％乙醇稀釋到3％，靜置兩天；然后用微型注射器對空白香煙嘴棒進行注射進樣0.5μl95％乙醇，標注為a0組；對空白香煙嘴棒進行注射進樣0.5μl發(fā)酵香料，標注為a1組。進樣后的香煙放在密封袋，室溫保存一周，待感官評吸。
6人組成評吸小組，評吸結(jié)果表明，發(fā)酵型煙用香料其不僅具有檸檬特有的天然香韻，而且還有濃厚的釀香香韻；將該香料進行卷煙加香試驗，結(jié)果表明，該香原料能夠豐富煙香，煙氣變得柔和細膩，抽吸時口感舒適，降低了口腔刺辣感，改善了卷煙吸味。