本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體涉及甲氟喹在制備預防神經(jīng)病理性疼痛的藥物中的應用。

背景技術：
神經(jīng)病理性疼痛(NeuropathicPain，NPP)是由于神經(jīng)機械受損(例如運動、車禍、外科手術)而引發(fā)的一類疾病。它屬于一種慢性疼痛，疼痛表現(xiàn)為自發(fā)性疼痛、痛覺過敏、異常疼痛和感覺異常等臨床特征(Neuron，2012，73，638-652)。據(jù)2009年美國國家科學院醫(yī)學研究所(IOM)報告，美國最少有1.16億成年人遭受慢性疼痛疾病，其中神經(jīng)源性疼痛病人比例高達17.9％，約占美國總人口的3.5％；歐洲成年人中大約5個人中有1個有慢性疼痛，大約25％的糖尿病患者有神經(jīng)病理疼痛。神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機制比較復雜，包括外周神經(jīng)系統(tǒng)、脊髓及大腦均有參與。最近研究發(fā)現(xiàn)NPP與大腦的記憶機制具有相似性(Science，2011，331，87-91)：該病的一個關鍵機制在于大腦的前扣帶回皮層(anteriorcingulatecortex；ACC)內(nèi)部的神經(jīng)連接發(fā)生增強，及長時程突觸增強(long-termpotentiation；LTP)。已有基礎研究表明(Lancet，2010，9，807-819)：在神經(jīng)受損初期的幾天內(nèi)，一些NMDA受體阻斷劑、cAMP抑制劑等可以阻斷ACC的LTP發(fā)生，可有效預防神經(jīng)源性疼痛的發(fā)生。甲氟喹，化學名：(+/-)-α-2-哌啶基-2，8-雙三氟甲基-4-喹啉甲醇，結構式為其商品名Lariam，臨床應用的是其鹽酸鹽，其分子式：C17H17ClF6N2O.HCl，分子量為：414.77，為白色結晶，易溶于水，熔點mp為259-260℃(分解)。臨床應用的甲氟喹(鹽酸鹽)主要用于預防和治療腦型瘧疾(惡性瘧)和間日瘧或控制耐氯喹的腦型瘧疾(惡性瘧)，由Roche、美國軍事醫(yī)學研究機構和WHO合作開發(fā)，于1984年在泰國最先上市，其后分別在瑞土、法國、澳大利亞、西德、英國等多國上市，1989年5月被FDA批準。甲氟喹常用作抗瘧藥，用于治療惡性瘧和間日瘧，對耐氯喹及耐乙胺嘧啶蟲株的原蟲紅細胞內(nèi)期無性體具有較強的殺滅作用，其作用機制尚不清楚，可能與奎寧相似與鐵原卟啉IX中的鐵作用，鐵原卟啉IX是瘧色素的主要成分，因而引起瘧色素凝集，但發(fā)展緩慢，很少形成團塊。然而與奎寧不同之處是它不嵌入瘧原蟲的去氧核糖核酸。血藥濃度18h達高峰，其血漿半衰期較長，但個體差異較大，平均14日，有效水平可維持30日以上。在體內(nèi)代謝為羧酸代謝物，代謝物對瘧原蟲無作用，主要由糞便及膽汁排出體外。目前，甲氟喹廣泛用于瘧疾的預防和治療，尚未見任何報道公開甲氟喹具有預防神經(jīng)病性疼痛的作用。

技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明首次提出了甲氟喹在制備預防神經(jīng)病理性疼痛的藥物中的應用。本發(fā)明提出了甲氟喹作為有效活性成分的新的醫(yī)藥用途。本發(fā)明中，所述神經(jīng)病理性疼痛是指疾病、運動、車禍、外科手術等原因，由機械、化學刺激造成神經(jīng)受損而引發(fā)的一類疼痛，它屬于一種慢性疼痛，疼痛表現(xiàn)為自發(fā)性疼痛、痛覺過敏、異常疼痛和感覺異常等臨床特征。本發(fā)明中，甲氟喹的化學名為(+/-)-α-2-哌啶基-2，8-雙三氟甲基-4-喹啉甲醇，結構式包括：分子式：C17H17ClF6N2O，分子量為：378.31。本發(fā)明中，在預防神經(jīng)病理性疼痛的作用中，甲氟喹在神經(jīng)受損早期，通過抑制前扣帶皮層Cx36蛋白的活動，預防神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生。本發(fā)明中，甲氟喹作為活性成分，可制成溶液或固體狀的劑型，如注射劑、末劑、散劑、片劑、糖衣劑、膠囊劑、顆粒劑、懸浮劑、溶液劑、糖漿劑、滴劑等進行給藥，或采用口服或注射給藥。本發(fā)明還提出一種藥物組合物，應用于預防神經(jīng)病理性疼痛的藥物中，其包括預防有效量的甲氟喹和藥學上可接受的載體或藥學上允許的輔料或添加劑。本發(fā)明藥物組合物中可含有常規(guī)藥學上可接受的輔助物質、穩(wěn)定劑、濕潤劑或其它常用的添加劑，例如，乳糖、檸檬酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸鎂、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、花生油、橄欖油、可可脂、乙二醇、抗壞血酸、甘露醇等。施用本發(fā)明藥物組合物的載體可以是一種及以上的固體、半固體或液體狀的稀釋劑、填充劑和其他處方用的輔料。本發(fā)明可以經(jīng)口服、注射、局部組織給藥等方式，可以采用適合各給藥方式的劑型及用量進行施藥。本發(fā)明藥物組合物可以是藥學上的任意溶液或固體狀的劑型，包括滴劑、軟膏劑、凝膠劑、片劑、水劑、顆粒劑、溶液劑等。藥物組合物可以是固體形式如片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、顆粒劑、軟膏劑、凝膠劑、脂質體、栓劑，或是液體形式如水劑、注射劑、滴眼劑、乳劑等。例如，甲氟喹與有機或無機的固體或液體賦形劑混合。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，甲氟喹能通過血腦屏障，并且一個重要的靶點是神經(jīng)元之間的縫隙連接(也稱電突觸)構成的關鍵蛋白。已有研究提示，縫隙連接對記憶的前期鞏固過程具有重要影響?；谶@類疾病與大腦記憶鞏固的類似機制，本發(fā)明首次提出了一種新的預防神經(jīng)性病理疼痛的機制，將甲氟喹用于神經(jīng)源性疼痛疾病的預防。本發(fā)明研究表明，通過注射甲氟喹有效預防CCI模型大鼠病理性疼痛樣癥狀的發(fā)生；甲氟喹對CCI模型大鼠病理性疼痛樣癥狀產(chǎn)生影響作用的有效給藥時間窗口；前扣帶皮層微量導入甲氟喹，通過阻斷前扣帶皮層Cx36表達，能有效防治神經(jīng)病理性疼痛樣癥狀的發(fā)生；注射甲氟喹能有效防治SNI模型大鼠病理性疼痛樣癥狀的發(fā)生；表明活性成分甲氟喹能廣泛有效地應用于制備預防神經(jīng)病理性疼痛的藥物中。同時，本發(fā)明研究表明，甲氟喹對大鼠運動能力、平衡能力及焦慮狀態(tài)無明顯影響，無毒副作用，具有良好的應用前景。附圖說明圖1是實施例1的腹腔注射不同給藥劑量甲氟喹對CCI模型大鼠的機械痛閾的效果。圖2是實施例1的腹腔注射不同給藥劑量甲氟喹對CCI模型大鼠的熱敏痛閾的效果。圖3是實施例2的不同時間腹腔注射甲氟喹對CCI模型大鼠的機械痛的影響。圖4是實施例2的不同時間腹腔注射甲氟喹對CCI模型大鼠的熱痛的影響。圖5是實施例3的前扣帶回皮層埋管微量注射甲氟喹對CCI手術后大鼠的機械痛的效果。圖6是實施例3的前扣帶回皮層埋管微量注射甲氟喹對CCI手術后大鼠的熱痛的效果。圖7是實施例4的慢病毒干擾起效的基因序列圖8是實施例4的前扣帶回皮層注射慢病毒使該腦區(qū)Cx36蛋白表達下調的免疫印跡圖圖9是實施例4的前扣帶回皮層注射慢病毒使該腦區(qū)Cx36蛋白表達下調的免疫組化圖圖10是實施例4的前扣帶回皮層顯微注射Cx36表達下調病毒后對CCI手術后大鼠機械疼痛的效果圖11是實施例4的前扣帶回皮層顯微注射Cx36表達下調病毒后對CCI手術后大鼠熱痛的效果圖12是實施例5的腹腔注射甲氟喹對于SNI模型大鼠機械痛的效果圖13是實施例6的腹腔注射甲氟喹開場實驗的表現(xiàn)圖14是實施例6的腹腔注射甲氟喹轉棒實驗的表現(xiàn)具體實施方式結合以下具體實施例和附圖，對本發(fā)明作進一步的詳細說明，本發(fā)明的保護內(nèi)容不局限于以下實施例。在不背離發(fā)明構思的精神和范圍下，本領域技術人員能夠想到的變化和優(yōu)點都被包括在本發(fā)明中，并且以所附的權利要求書為保護范圍。實施本發(fā)明的過程、條件、試劑、實驗方法等，除以下專門提及的內(nèi)容之外，均為本領域的普遍知識和公知常識，本發(fā)明沒有特別限制內(nèi)容。本發(fā)明各實施例中，所有動物實驗均在華東師范大學腦功能基因組學研究所SPF(高清潔級)動物房內(nèi)完成，所有動物操作均符合研究所動物管理委員會的規(guī)章制度。CCI手術在300-350g體重的成年SD大鼠上開展。手術參照按照Bennett和Xie于1988年建立、目前廣泛被采用的實驗流程：大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉施行全身麻醉，剪除手術側后肢皮膚、消毒；手術暴露坐骨神經(jīng)并將其與其它組織分離，用鉻制腸線(規(guī)格，5-0)環(huán)繞神經(jīng)干做3個輕度結扎(間距約1mm)；縫合肌肉和皮膚。待動物清醒后，將其放回飼養(yǎng)籠內(nèi)，自由進食。CCI術后的當天開始(含當天)，連續(xù)5天(每天一次)腹腔注射不同劑量(10mg/kg；20mg/kg；30mg/kg)甲氟喹(用藥組)、以及同等體積溶劑(空白對照組，vehicle)。分別在術后7、14天，鑒定大鼠的疼痛閾值。甲氟喹需要溶解于吐溫-80，后用生理鹽水稀釋，因此采用的空白對照溶劑為吐溫--80和生理鹽水的混合液，比例和配置甲氟喹溶液一致。具體地，100毫克甲氟喹先后配置溶解于0.05毫升DMSO、1.5毫升吐溫、3毫升PBS或生理鹽水。實施例1腹腔注射甲氟喹對CCI模型大鼠病理性疼痛樣癥狀發(fā)生的防治一、機械痛域指標測定。參照目前普遍采用的Dixon報道的Up-down法(Pain85(2000)493-502)。檢測前3天，將動物放入底部為金屬網(wǎng)的有機玻璃箱的檢測籠適應環(huán)境，每天一次、每次30分鐘。檢測當天，待動物進入檢測籠后半小時，使用不同彎曲強度(1，1.4，2，4，6，8，10，15g)的vonFray纖維絲刺激接受手術側的后肢足底，測定大鼠對該機械刺激的縮足反應。當大鼠對某一彎曲強度的vonFray纖維絲刺激(直至其彎曲)出現(xiàn)縮足反應，則認定為大鼠出現(xiàn)疼痛樣行為，將該vonFray彎曲強度定義為機械痛的閾值。自CCI手術當天起連續(xù)5天內(nèi)，大鼠腹腔注射10、20、30mg/kg甲氟喹，每天注射一次，在實驗觀察的長期時間范圍(21天)內(nèi)，分別在術后7、14天鑒定大鼠的疼痛閾值，檢測結果如圖1所示，甲氟喹均能使模型鼠的機械痛域值保持較高水平，即機械痛閾值回升。從圖1可見，腹腔注射30mg/kg甲氟喹，機械痛閾值回升效果最佳。實驗表明，CCI手術后腹腔注射甲氟喹，機械痛閾值回升，能有效預防神經(jīng)病理性疼痛樣癥狀的發(fā)生。二、熱痛閾指標鑒定將大鼠置于一有機玻璃箱內(nèi)的玻璃板上。30分鐘后，用熱輻射刺激儀照射大鼠手術側后肢足部表面，記錄大鼠對該熱刺激表現(xiàn)縮足反應的時間，該時間定義為大鼠對該熱刺激的耐受時間，用于衡量對熱刺激的痛敏指標。自CCI手術當天起連續(xù)5天內(nèi)，大鼠內(nèi)腹腔注射10、20、30mg/kg甲氟喹，在所觀察的長期時間范圍(21天)內(nèi)，分別在術后7、14天鑒定大鼠的疼痛閾值，檢測結果如圖2所示，甲氟喹均能夠使模型鼠的熱痛域值保持較高水平，即熱痛閾值回升。從圖2可見，腹腔注射30mg/kg甲氟喹，熱痛閾值回升效果最佳。實驗表明：CCI手術后腹腔注射，熱痛敏閾值回升，能有效預防神經(jīng)病理性疼痛樣癥狀的發(fā)生。實施例2：甲氟喹對CCI模型大鼠病理性疼痛樣癥狀防治作用的有效給藥時間窗口將初始給藥時間分別放在CCI手術的第三天或第四天開始，其余步驟與實施例1相似，即每天一次、連續(xù)五天給藥；采用較佳的給藥劑量30mg/kg甲氟喹；在CCI手術后當天、第14天和第21天分別檢測大鼠的機械痛域值、熱痛閾值。實驗結果如圖3、圖4所示，CCI手術第三天開始給藥的，大鼠的機械痛域值、熱痛閾值有顯著回升。而術后第四天起給藥，大鼠的機械痛域值、熱痛閾值無顯著回升。實驗結果表明，CCI手術后，給藥時間越晚，藥效越弱；術后兩天之內(nèi)給藥的效果較佳。實施例3：前扣帶皮層微量導入甲氟喹對CCI模型大鼠病理性疼痛樣癥狀發(fā)生的防治為鑒定腹腔注射甲氟喹的疾病防治作用是否發(fā)生在大腦前扣帶皮層，本實驗采用局部藥物導入技術，將甲氟喹定點注入前扣帶皮層，并測定機械痛及熱痛閾值。首先將大鼠用戊巴比妥鈉麻醉、頭部固定于立體定位儀，暴露顱骨并在前扣帶皮層上方實施開顱手術。根據(jù)大鼠腦圖譜的前扣帶皮層坐標定位，將一有活動內(nèi)芯的不銹鋼套管埋入前扣帶皮層區(qū)域，牙科水泥固定。術后當天及其后4天，每天導入微量甲氟喹(給藥組)或同等體積溶劑(對照組)。術后3、7、21天，測定機械痛及熱痛閾值。導入微量甲氟喹的用量為100mM。實驗結果如圖5、圖6所示：前扣帶皮層微量導入甲氟喹，在術后3、7、21天所檢測到的機械痛閾值顯著回升、熱痛閾值顯著回升。此外，本實施例中的閾值回升效果與實施例1中腹腔注射產(chǎn)生的閾值回升效果相當，見圖1、圖2。實驗表明：腹腔注射甲氟喹產(chǎn)生的藥效是通過阻斷前扣帶皮層Cx36蛋白起作用的，前扣帶皮層微量甲氟喹能有效防治神經(jīng)病理性疼痛樣癥狀的發(fā)生。實施例4：前扣帶皮層局部干擾Cx36表達對藥物脫靶可能性的鑒定為進一步確認甲氟喹的藥效是通過阻斷前扣帶皮層Cx36蛋白的活動、而非藥物脫靶引起。本實驗采用RNA干擾技術，下調Cx36蛋白，根據(jù)Cx36的基因序列設計干擾序列(序列見圖7)，均包裝到質粒中，并構建慢病毒轉載體系ShRNA-Cx36-GFP。參考文獻PlosOne，2013，8(1)，e55198。將攜帶干擾序列的病毒注入前扣帶皮層。一周后，處死大鼠并提取相關腦區(qū)分別進行蛋白免疫印跡鑒定和熒光免疫組化鑒定，結果分別見圖8、圖9所示，均檢測到Cx36表達的顯著下調，實驗表明前扣帶皮層Cx36蛋白表達量被有效下調。在術后3、7、21天分別測定接受了病毒轉入的大鼠的機械痛及熱痛閾值，實驗結果分別見圖10、圖11，接受病毒轉入的大鼠在術后3、7、21天所表現(xiàn)的機械痛閾值顯著回升、熱痛閾值顯著回升。并且，本實施例中的閾值回升效果與實施例1中腹腔注射產(chǎn)生的閾值回升效果相當。實驗表明，甲氟喹的藥效通過作用于前扣帶皮層的Cx36而發(fā)生作用。前扣帶皮層內(nèi)的Cx36表達下調，可有效防治神經(jīng)病理性疼痛樣癥狀的發(fā)生。實施例5：腹腔注射甲氟喹對SNI模型大鼠病理性疼痛樣癥狀發(fā)生的防治實驗針對另一類常用的神經(jīng)病理性疼痛模型鼠-SNI模型，進一步檢驗甲氟喹對神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生的防治作用。參考Decosterd和woolf報道的方法(Pain，2000，87，149-158.)：切開一側后肢皮膚并分離肌肉，暴露坐骨神經(jīng)主干及其下的分支即脛神經(jīng)、腓總神經(jīng)和腓腸神經(jīng)；結扎并剪斷脛神經(jīng)和腓總神經(jīng)，保留細小的腓腸神經(jīng)；將肌肉、皮膚縫合。采用30mg/kg劑量，在SNI手術的當天及其后4天、每天一次腹腔注射甲氟喹；同等體積溶劑注射作為對照組。在術后3、7、21天，測定機械痛閾值。實驗結果如圖12所示：SNI手術后短期(4天)內(nèi)腹腔注射30mg/kg甲氟喹，在所觀察的長期時間范圍(21天)內(nèi)，均能夠使模型鼠的機械痛域值保持較高水平，即機械痛閾值回升。實驗結果表明：甲氟喹能有效防治SNI模型鼠神經(jīng)病理性疼痛樣癥狀的發(fā)生。實施例6：相關藥物毒理檢測給予正常鼠腹腔注射甲氟喹(30mg/kg)，在當天對藥物毒性作用作鑒定。采用開場實驗測定動物基礎運動量、焦慮水平等是否發(fā)生變化，實驗結果見圖13：將單只大鼠放入四周壁透明、底部灰色的方形敞口觀察箱中心，采用追蹤分析系統(tǒng)通過紅外裝置記錄并分析大鼠的水平穿格次數(shù)。記錄動物行為共計15min；分析運動距離。采用轉棒實驗測定動物運動及平衡能力，實驗結果見圖14：對大鼠進行三天運動訓練：第一天，將大鼠放置在轉棒上，轉棒以每5轉/分鐘轉速開始勻速轉動，訓練5分鐘/次、共2次；第二天，轉速在5分鐘內(nèi)從5轉/分至15轉/分逐步增加，訓練5分鐘/次、共2次；第三天，轉速在5分鐘內(nèi)從8轉/分-15轉/分逐步增加，每只大鼠訓練2次訓練5分鐘/次、共2次。第四天(測試、該天給藥)：轉速在3分鐘內(nèi)由8轉/分增加至25轉/分，記錄大鼠留在轉棒上而不掉落時間；反復3次測量。實驗結果表明：與術接受甲氟喹注射大鼠相比較，接受甲氟喹(30mg/kg)注射的大鼠在開場實驗及轉棒實驗的行為指標未見異常，表明甲氟喹對大鼠運動能力、平衡能力及焦慮狀態(tài)無明顯影響，表明無毒副作用。上述實施例只是舉例說明本發(fā)明技術構思及特點，便于本領域技術人員能夠了解并實施本發(fā)明，但并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡是根據(jù)本發(fā)明實質所作出的等效的變化或修飾，都應涵蓋在本發(fā)明保護范圍內(nèi)。