本申請(qǐng)要求于2013年12月19日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/918,405的權(quán)益，所述美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)通過(guò)引用并入本文。
背景
病毒疾病對(duì)全世界的家畜具有顯著影響。豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）是特征在于幼豬中的呼吸道病癥和母豬中的繁殖失敗的疾病的致病因素（Benfield等人，1992，J. Vet. Diagn. Invest.， 4:127-133，Collins等人，1992，J. Vet. Diagn. Invest.，4:117–126，Wensvoort等人，1991，Vet. Q.， 13:121-130），并且目前在大多數(shù)國(guó)家地方性流行。所述疾病的特征在于妊娠母豬中的繁殖失敗和所有年齡的豬中的呼吸道問(wèn)題。所述疾病對(duì)養(yǎng)豬業(yè)具有顯著的經(jīng)濟(jì)影響，并且在美國(guó)估計(jì)導(dǎo)致每年$664,000,000的經(jīng)濟(jì)損失（Holtkamp等人，2013，J Swine Health Prod.，21（2）:72-84）。
申請(qǐng)概述
本文提供的是用于治療處于具有由傳染劑（infectious agent）例如病毒引起的感染的風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括給處于具有由傳染劑引起的感染的風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物施用活性IGF，其中與未施用組合物的對(duì)照動(dòng)物相比較，具有感染的風(fēng)險(xiǎn)下降。
本文還提供的是用于治療具有感染的動(dòng)物的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括給具有由傳染劑引起的感染的動(dòng)物施用活性IGF，其中所述組合物包括活性IGF-1，其中施用導(dǎo)致減少動(dòng)物中的傳染劑的量。
本文還提供的是用于治療與感染相關(guān)的癥狀的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括給具有由傳染劑引起的感染的動(dòng)物施用有效量的組合物，其中所述組合物包括活性IGF-1，其中感染的癥狀減少。
在一個(gè)實(shí)施方案中，施用包括活性IGF的經(jīng)口施用，例如通過(guò)給動(dòng)物施用飼料。
在一個(gè)實(shí)施方案中，施用包括每日施用至少0.05納克活性IGF-1/千克動(dòng)物體重/天（ng/kg）、至少0.1 ng/kg、至少2 ng/kg、至少5 ng/kg、或至少10 ng/kg。
在一個(gè)實(shí)施方案中，傳染劑是病毒例如有包膜病毒或無(wú)包膜病毒。有包膜病毒的例子包括動(dòng)脈炎病毒科（Arteriviridae）成員、正粘病毒科（Orthomyxoviridae）成員、以及冠狀病毒科（Coronaviridae）成員。動(dòng)脈炎病毒科成員的例子包括豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、馬動(dòng)脈炎病毒和猴出血熱病毒。正粘病毒科成員的例子包括甲型流感病毒（Influenzavirus A）、乙型流感病毒（Influenzavirus B）和丙型流感病毒（Influenzavirus C）。冠狀病毒科成員的例子包括冠狀病毒、披膜病毒（togovirus）和豬流行性腹瀉病毒。無(wú)包膜病毒的例子包括腺病毒科（Adenoviridae）成員，例如哺乳動(dòng)物腺病毒屬（Mastadenovirus）成員。
在一個(gè)實(shí)施方案中，施用于受試者的IGF-1得自天然來(lái)源，其已進(jìn)行加工以增加活性IGF-1的量。天然來(lái)源可以是血液或血液衍生產(chǎn)物、乳或乳衍生產(chǎn)物、或者初乳或初乳衍生產(chǎn)物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，施用還包括施用失活I(lǐng)GF，其中施用的總IGF-1的至少20%、其中至少30%、或其中至少40%是活性IGF-1。
在一個(gè)實(shí)施方案中，動(dòng)物是脊椎動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物或禽類(lèi)物種。哺乳動(dòng)物的例子包括?？莆锓N、豬科物種、鹿科物種、犬科物種、貓科物種、馬科物種、綿羊科物種和人。在一個(gè)實(shí)施方案中，動(dòng)物是成年，并且在一個(gè)實(shí)施方案中，動(dòng)物處于出生和斷奶之間的年齡。
術(shù)語(yǔ)“和/或”意指所列出元素中的一種或全部或者所列出元素中的任何兩種或更多種的組合。
單詞“優(yōu)選的”和“優(yōu)選地”指在某些情況下，可以提供某些利益的本發(fā)明的實(shí)施方案。然而，在相同或其他情況下，其他實(shí)施方案也可以是優(yōu)選的。此外，一個(gè)或多個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案的敘述并非暗示其他實(shí)施方案并非有用的，并且不預(yù)期從本發(fā)明的范圍內(nèi)排除其他實(shí)施方案。
當(dāng)術(shù)語(yǔ)“包含”及其變化在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中出現(xiàn)時(shí)，這些術(shù)語(yǔ)不具有限制性含義。
除非另有說(shuō)明，否則“一個(gè)”、“一種”、“所述”和“至少一個(gè)/種”可互換使用，并且意指一個(gè)/種或多于一個(gè)/種。
此外，在本文中，通過(guò)終點(diǎn)的數(shù)目范圍敘述包括在該范圍內(nèi)包含的所有數(shù)目（例如1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等）。
對(duì)于包括不連續(xù)步驟的本文公開(kāi)的任何方法，步驟可以任何可行次序進(jìn)行。此外，適當(dāng)時(shí)，兩個(gè)或更多個(gè)步驟的任何組合可以同時(shí)進(jìn)行。
本發(fā)明的上述概述不預(yù)期描述本發(fā)明的每個(gè)公開(kāi)實(shí)施方案或每一種實(shí)現(xiàn)。下述描述更特別地例示舉例說(shuō)明性實(shí)施方案。在申請(qǐng)自始至終的幾個(gè)地方，通過(guò)例子的列表提供了指導(dǎo)，并且此類(lèi)例子可以以各種組合使用。在每種情況下，所敘述的列表僅充當(dāng)代表性組，并且不應(yīng)解釋為詳盡列表。
附圖簡(jiǎn)述
圖1. 定量實(shí)時(shí)PCR。Dpi，接種后天數(shù)。Y軸，log RNA拷貝/ml。
舉例說(shuō)明性實(shí)施方案詳述
本文提供的是關(guān)于使用包括一種或多種蛋白質(zhì)的組合物的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包括胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF），例如IGF-1和/或IGF-2。IGF在正常生理學(xué)的調(diào)節(jié)以及許多病理狀態(tài)包括癌癥中起作用，并且在細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡的抑制中起作用。IGF可以影響不同的生長(zhǎng)階段。胰島素樣生長(zhǎng)因子2（IGF-2）被認(rèn)為是早期發(fā)育所需的主要生長(zhǎng)因子，而胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）表達(dá)是實(shí)現(xiàn)最大生長(zhǎng)所需的。人體中的幾乎每一種細(xì)胞均受IGF-1影響，尤其是肌肉、軟骨、骨、肝、腎、神經(jīng)、皮膚和肺中的細(xì)胞。IGF-1還可以調(diào)節(jié)尤其是在神經(jīng)細(xì)胞中的細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育，以及DNA合成。IGF在物種間是高度保守的，并且來(lái)自不同物種的IGF的氨基酸序列是已知的并且對(duì)于技術(shù)人員是容易獲得的。
蛋白質(zhì)是否是IGF可以通過(guò)技術(shù)人員容易地確定。例如，與IGF-1和/或IGF-2特異性結(jié)合的多克隆和單克隆抗體是商購(gòu)可得的，并且與來(lái)自各個(gè)物種的IGF反應(yīng)，所述物種包括人、馬、犬、牛、豬和禽類(lèi)。這些可容易獲得的抗體缺乏通過(guò)其他緊密相關(guān)蛋白質(zhì)和結(jié)合蛋白的交叉反應(yīng)性和/或干擾。識(shí)別IGF的不同區(qū)域例如N末端、C末端或所述蛋白質(zhì)末端之間存在的氨基酸的單一抗體或一組抗體可以用于確定蛋白質(zhì)是否是IGF蛋白質(zhì)。用于確定IGF蛋白質(zhì)包括IGF-1或IGF-2的活性的方法是本領(lǐng)域已知和常規(guī)的。
IGF是與胰島素具有高序列相似性的蛋白質(zhì)，但與胰島素不同，IGF與血清和其他生物學(xué)流體中存在的不同結(jié)合蛋白相關(guān)（Baxter，2000，Am J Physiol Endocrinol Metab，278: E967–E976；Hwa等人，1999，Endocrine Reviews，20（6）:761-787）。存在于衍生自動(dòng)物的產(chǎn)物（例如但不限于血液和血液衍生產(chǎn)物、乳和乳衍生產(chǎn)物、以及初乳和初乳衍生產(chǎn)物）中的大多數(shù)IGF與結(jié)合蛋白結(jié)合。然而，因?yàn)檫@些結(jié)合蛋白抑制IGF的活性，所以存在于動(dòng)物衍生產(chǎn)物中的大多數(shù)IGF由于其與結(jié)合蛋白結(jié)合而是失活的。例如，血漿中小于1%的IGF-1不與結(jié)合蛋白結(jié)合（Carel等人，Safety of Recombinant Human Growth Hormone，In: Current Indications for Growth Hormone Therapy，第2修訂版本，vol. 編輯: Hindmarsh，Karger，瑞士，第48頁(yè)）。
可用于本文描述的方法的組合物包括活性IGF，并且任選包括失活I(lǐng)GF。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物存在于食品中。如本文使用的，“食品”是可以由受試者攝入的化合物或化合物的混合物。食品可以是固體、半固體或液體。例子包括但不限于固體和半固體乳制品，包括發(fā)酵乳制品，例如酸奶。IGF可以加入其中的飲料包括牛奶、蔬菜汁、果汁、豆?jié){、豆奶、發(fā)酵豆奶和水果風(fēng)味的乳飲料。在一個(gè)實(shí)施方案中，食品是用于動(dòng)物使用的飼料，例如用于飼養(yǎng)馴養(yǎng)動(dòng)物例如伴侶動(dòng)物，包括但不限于犬或貓，以及家畜包括但不限于牛、豬、禽類(lèi)、鹿、犬、貓、馬或綿羊動(dòng)物。加入食品中的適當(dāng)濃度可以由技術(shù)人員確定，所述技術(shù)人員具有組合物中的活性IGF水平、以及待由動(dòng)物每日食用的食品的近似量的知識(shí)。在其中動(dòng)物并非人的那些實(shí)施方案中，技術(shù)人員應(yīng)理解估計(jì)由動(dòng)物食用的飼料量通?；趧?dòng)物群體的平均值。
可用于本文描述的方法的IGF可得自各種來(lái)源。在一個(gè)實(shí)施方案中，來(lái)源是來(lái)自動(dòng)物的生物材料。動(dòng)物的例子包括但不限于脊椎動(dòng)物。脊椎動(dòng)物的例子包括但不限于哺乳動(dòng)物，例如其為牛、豬、鹿、犬、貓、馬、綿羊或人的物種。脊椎動(dòng)物的另一個(gè)例子是禽類(lèi)物種。生物材料的例子包括但不限于血液和血液衍生產(chǎn)物（例如全血、紅血細(xì)胞、血漿及其衍生物）；乳和乳制品（例如液體奶、奶粉、干酪、乳清和乳清產(chǎn)物、凝乳、奶酪、酪蛋白、乳糖及其衍生物）；初乳和初乳衍生產(chǎn)物（例如液體初乳、干燥初乳）；蛋和蛋衍生產(chǎn)物（例如蛋黃、蛋白、蛋膜）、體液（例如唾液、精液）和組織（例如粘膜組織、腸組織、胚胎組織）。血漿的例子包括但不限于干燥血漿和液體血漿及其餾分，例如脂質(zhì)餾分。乳清產(chǎn)物的例子包括但不限于液體乳清、乳清蛋白濃縮物、乳清蛋白分離物、乳清奶油、乳清滲余物、procream、脫蛋白質(zhì)乳清、脫乳糖滲透物。初乳衍生產(chǎn)物的例子包括但不限于液體初乳乳清、初乳乳清蛋白濃縮物、初乳乳清蛋白、初乳乳清奶油、初乳乳清滲余物、初乳procream、初乳脫蛋白質(zhì)乳清、初乳脫乳糖滲透物、初乳酪蛋白、初乳乳糖、初乳凝乳。在一個(gè)實(shí)施方案中，初乳是在后代出生后前6、前12、前24或前48小時(shí)內(nèi)由雌性分泌的初乳。在一個(gè)實(shí)施方案中，可用于本文描述的方法的IGF的天然來(lái)源并非初乳。在一個(gè)實(shí)施方案中，可用于本文描述的方法的IGF使用重組技術(shù)產(chǎn)生，或者化學(xué)或酶促合成。如本文使用的，來(lái)自天然來(lái)源例如血液或血液衍生產(chǎn)物的IGF并非使用重組技術(shù)產(chǎn)生，或者化學(xué)或酶促合成。對(duì)于產(chǎn)生具有活性IGF的組合物有用的生物材料例如血液或血液衍生產(chǎn)物是可容易商購(gòu)獲得的。
生物材料可以對(duì)于存在的總IGF的量進(jìn)行富集。如果與蛋白質(zhì)由其富集的生物材料相比較，它以顯著更高的餾分存在，則蛋白質(zhì)是富集的。更高餾分可以是例如2倍、4倍、6倍、10倍、100倍、1,000倍、或10,000倍的增加。富集可以起因于減少生物材料中存在的其他分子例如蛋白質(zhì)的量。然而，術(shù)語(yǔ)富集的并非暗示不存在其他分子例如蛋白質(zhì)。富集僅意指IGF的相對(duì)量已顯著增加。術(shù)語(yǔ)“顯著的”指示增加水平對(duì)于制備此類(lèi)增加的人員是有用的。IGF的富集是通過(guò)人為干預(yù)提高蛋白質(zhì)比例的結(jié)果。
任選地，IGF可以由生物材料進(jìn)行純化。如果生物材料中存在的至少75%、至少85%、或至少95%其他組分被去除，則蛋白質(zhì)視為純化的。通過(guò)化學(xué)或重組手段產(chǎn)生的蛋白質(zhì)被視為純化的。用于富集和/或純化IGF的方法是技術(shù)人員已知和常規(guī)的。此類(lèi)程序的非限制性例子包括在免疫親和或離子交換柱上的分餾；乙醇沉淀；反相HPLC；在硅膠或離子交換樹(shù)脂例如DEAE上的層析；層析聚焦；SDS-PAGE；硫酸銨沉淀；使用例如交聯(lián)凝膠和/或中空纖維的凝膠過(guò)濾；和配體親和層析。
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物可以包括藥學(xué)可接受的載體。如本文使用的，“藥學(xué)可接受的載體”包括但不限于與藥物施用相容的鹽水、溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等等。
與藥物施用相容的組合物可以通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的方法進(jìn)行制備。一般而言，組合物可以配制為與其預(yù)期的施用途徑相容。制劑可以是固體或液體。施用可以是全身或局部的。在一些方面，局部施用可以具有關(guān)于位點(diǎn)特異性、靶向疾病管理的優(yōu)點(diǎn)。局部施用可以提供直接針對(duì)治療部位的高的臨床有效濃度，具有引起全身副作用的更小可能性。
施用途徑的例子包括腸胃外（例如靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)）、腸內(nèi)（例如經(jīng)口）、和局部（例如表皮、吸入、經(jīng)粘膜）施用。用于本文描述的組合物的腸內(nèi)施用的適當(dāng)劑型包括片劑、膠囊或液體，以及食品。用于腸胃外施用的適當(dāng)劑型可以包括靜脈內(nèi)施用。用于局部施用的適當(dāng)劑型可以包括乳膏、軟膏和皮膚貼片。用于制備包括IGF的藥學(xué)可接受的組合物的方法是技術(shù)人員已知的（Mahler等人，美國(guó)公開(kāi)專(zhuān)利申請(qǐng)20110152188）。
組合物可以包括無(wú)菌水溶液或分散體和用于臨時(shí)制備無(wú)菌溶液或分散體的無(wú)菌粉末。對(duì)于靜脈內(nèi)施用，合適載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM（BASF，Parsippany，N.J.）或磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）。組合物通常為無(wú)菌的，并且當(dāng)適合于可注射使用時(shí)，應(yīng)流動(dòng)至存在容易注射性的程度。它在制造和貯存條件下應(yīng)是穩(wěn)定的，并且針對(duì)微生物例如細(xì)菌和真菌的污染作用進(jìn)行防腐。載體可以是溶劑或含有例如水、乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等等）及其合適混合物的分散介質(zhì)。微生物作用的預(yù)防可以通過(guò)各種抗菌劑和抗真菌劑來(lái)實(shí)現(xiàn)，例如對(duì)羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等等。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包括等滲劑例如糖、多元醇例如甘露醇、山梨糖醇、氯化鈉?？勺⑸浣M合物的延長(zhǎng)吸收可以通過(guò)在組合物包括延遲吸收的試劑來(lái)實(shí)現(xiàn)，所述試劑例如單硬脂酸鋁和明膠。
無(wú)菌溶液可以通過(guò)下述進(jìn)行制備：根據(jù)需要，在適當(dāng)溶劑中摻入以所需量的活性化合物（例如IGF，例如IGF-1）連同成分之一或組合，隨后為過(guò)濾滅菌。一般地，分散體通過(guò)將活性化合物摻入無(wú)菌媒介物內(nèi)進(jìn)行制備，所述無(wú)菌媒介物含有基本分散介質(zhì)和任何其他適當(dāng)成分。在用于制備無(wú)菌可注射溶液的無(wú)菌粉末的情況下，優(yōu)選制備方法包括真空干燥、噴霧干燥和冷凍干燥，以由其先前滅菌溶液獲得活性成分加上任何另外所需成分的粉末。
用于局部施用的組合物可以在許多類(lèi)型的媒介物內(nèi)進(jìn)行配制。合適媒介物的非限制性例子包括乳劑（例如水包油、油包水、水包硅、硅包水、水包油包水、水包油、油包水包油、硅包水包油等）、乳膏、洗劑、溶液（含水和水醇兩者）、無(wú)水堿（例如唇膏和粉末）、凝膠、軟膏或糊劑（Williams，Transdermal and Topical Drug Delivery，Pharmaceutical Press，London，2003）。變化及其他媒介物對(duì)于技術(shù)人員將是顯而易見(jiàn)的，并且對(duì)于在本文描述的方法中使用是適當(dāng)?shù)摹?/p>
還考慮活性化合物可以封裝用于遞送經(jīng)過(guò)反芻動(dòng)物的瘤胃或靶區(qū)域例如皮膚。封裝技術(shù)的非限制性例子包括脂質(zhì)體、囊泡和/或納米顆粒（例如包含聚合物材料的生物可降解和生物不可降解的膠體顆粒，成分在所述聚合物材料中截留、封裝和/或吸附，例子包括納米球和納米膠囊）的使用，其可以用作遞送媒介物，以將此類(lèi)成分遞送至皮膚或消化道。
經(jīng)口組合物一般包括惰性稀釋劑或可食用載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)口組合物包括食品。對(duì)于經(jīng)口治療施用的目的，活性化合物可以與賦形劑一起摻入，并且以片劑、錠劑或膠囊例如明膠膠囊的形式使用。經(jīng)口組合物還可以使用流體載體進(jìn)行制備，用于將液體施用于動(dòng)物，例如在動(dòng)物的水供應(yīng)中包括活性IGF或與經(jīng)口注射器一起使用?？梢园ㄋ帉W(xué)相容的粘合劑和/或佐劑材料作為組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等等可以含有下述成分或相似性質(zhì)的化合物中的任一種：粘合劑如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑例如淀粉或乳糖、崩解劑例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂或Sterotes；助流劑如膠體二氧化硅；甜味劑例如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑例如薄荷、水楊酸甲酯或橙調(diào)味料。
對(duì)于通過(guò)吸入的施用，活性化合物以來(lái)自增壓容器或分配器（其含有合適的推進(jìn)劑例如氣體例如二氧化碳）、或噴霧器的氣溶膠噴霧的形式遞送。
全身施用也可以通過(guò)經(jīng)粘膜或經(jīng)皮手段。對(duì)于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用，對(duì)于待滲透的屏障適當(dāng)?shù)臐B透劑可用于配制中。此類(lèi)滲透劑是本領(lǐng)域一般已知的，并且對(duì)于經(jīng)粘膜施用，包括例如去污劑、膽鹽和梭鏈孢酸衍生物。經(jīng)粘膜施用可以通過(guò)使用鼻噴霧或栓劑來(lái)完成。對(duì)于經(jīng)皮施用，活性化合物配制成如本領(lǐng)域一般已知的軟膏、藥膏、凝膠或乳膏。
活性化合物還可以以用于直腸遞送的栓劑（例如具有常規(guī)的栓劑基質(zhì)，例如可可脂及其他甘油酯）或保留灌腸劑的形式進(jìn)行制備。
藥物施用可以是每天一次或多次至每周一次或多次，包括每隔一天一次。技術(shù)人員應(yīng)了解某些因素可以影響有效治療受試者所需的劑量和時(shí)機(jī)，所述因素包括但不限于感染的嚴(yán)重性、先前治療、受試者的一般健康和/或年齡、以及存在的其他疾病。
得自許多天然來(lái)源的大多數(shù)例如95%至99%的IGF與結(jié)合蛋白相關(guān)，其引起IGF失活。任選地，得自天然來(lái)源的組合物中的活性IGF的量可以增加，例如組合物中的總IGF的量可以不變，但活性IGF的量增加，使得作為總IGF百分比的活性IGF的量增加。用于增加活性的IGF量的方法包括常規(guī)用于活化得自生物材料的功能蛋白質(zhì)的過(guò)程。此類(lèi)過(guò)程包括但不限于使生物材料暴露于熱激、溫度調(diào)節(jié)、醇萃取、pH調(diào)節(jié)、酶添加、離子變化、其他化學(xué)品添加和壓力、或其組合（Daughaday等人，1989，Endocr Rev. 10:68-91；Daughaday等人，1987，J Lab Clin Med. 109:355-363；Breier等人，1991，J Endocrinol. 128:347-357）。不預(yù)期受理論束縛，此類(lèi)方法通常引起結(jié)合蛋白與IGF蛋白質(zhì)的解離。
在一個(gè)實(shí)施方案中，與加工為活性IGF之前的組合物中的活性IGF的量相比較，得自天然來(lái)源的組合物中的活性IGF的量可以增加至少2倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、或至少100倍。在一個(gè)實(shí)施方案中，存在的總IGF的至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或100%是活性的。在一個(gè)實(shí)施方案中，存在的總IGF的不大于80%、不大于70%、不大于60%、不大于50%、不大于40%、不大于30%、不大于20%、不大于10%、或不大于5%是失活的（例如與結(jié)合蛋白結(jié)合）。經(jīng)歷加工的組合物可以是例如來(lái)自動(dòng)物的生物材料，例如血液或血液衍生產(chǎn)物。任選地，生物材料可以是已對(duì)于總IGF進(jìn)行富集的那種。由天然來(lái)源制備且加工以活化IGF的產(chǎn)物可作為產(chǎn)品BETAGRO和IMMUTEIN（GBH Labs，Maple Grove，MN）商購(gòu)獲得。
在其中IGF的來(lái)源是生物來(lái)源的那些實(shí)施方案中，組合物可以任選包括其他組分包括其他蛋白質(zhì)。
如果IGF未與結(jié)合蛋白結(jié)合，則它被視為活性的，并且如果它與結(jié)合蛋白結(jié)合，則被視為失活的。活性IGF通常在本領(lǐng)域中被稱(chēng)為游離、未結(jié)合、生物活性和活性的。用于測(cè)量活性IGF的濃度的方法是技術(shù)人員已知和常規(guī)的。測(cè)定是商購(gòu)可得的，包括固相夾心ELISA測(cè)定，其特異性測(cè)量并未與結(jié)合蛋白結(jié)合的IGF（例如R&D Systems，目錄號(hào)DFG100）。
本文還提供的是關(guān)于使用本文描述的組合物的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括治療動(dòng)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法用于治療動(dòng)物中的感染。所述方法包括給具有感染或處于具有感染的風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物施用有效量的如本文所述包括活性IGF的組合物。任選地，所述方法包括確定引起感染的傳染劑的數(shù)目是否已減少。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“感染”指動(dòng)物體內(nèi)傳染劑試劑的存在，其可以是或不是臨床上明顯的。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法用于治療動(dòng)物中的癥狀。所述方法包括給具有狀況或處于具有狀況的風(fēng)險(xiǎn)中、或者顯示出狀況的癥狀和/或臨床體征的動(dòng)物施用有效量的組合物。任選地，所述方法包括測(cè)定狀況的至少一種癥狀和/或臨床體征是否改變，優(yōu)選減少。
感染、與感染相關(guān)的癥狀和/或臨床體征的治療可以是預(yù)防性的，或可選地，可以在感染發(fā)展后起始。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“癥狀”指由受試者經(jīng)歷且由傳染劑引起的感染的主觀證據(jù)。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“臨床體征”或簡(jiǎn)單的“體征”指由感染引起的疾病或狀況的客觀證據(jù)。與感染相關(guān)的癥狀和/或臨床體征以及此類(lèi)癥狀的評(píng)估根據(jù)傳染劑而改變，并且是本領(lǐng)域常規(guī)且已知的。例如，由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的狀況和/或臨床體征的例子包括母豬的繁殖失敗，例如流產(chǎn)和分娩死胎或木乃伊化胎兒、發(fā)熱、呼吸困難、活動(dòng)性下降、減少進(jìn)食、減少產(chǎn)奶量、以及耳和外陰的紫紺。在新生豬中，所述疾病引起呼吸性窘迫，伴隨呼吸性感染例如革拉澤氏?。℅lasser's disease）的敏感性增加。
其為預(yù)防性的，例如在受試者表現(xiàn)感染的癥狀或體征之前起始的治療在本文中被稱(chēng)為“處于發(fā)展感染的風(fēng)險(xiǎn)中”的受試者治療。因此，通常，“處于發(fā)展感染的風(fēng)險(xiǎn)中”的動(dòng)物是存在于區(qū)域中的動(dòng)物，在所述區(qū)域中，具有狀況的動(dòng)物已診斷出和/或可能暴露于引起狀況的傳染劑，即使動(dòng)物仍未表現(xiàn)由傳染劑引起的任何狀況的癥狀或體征。相應(yīng)地，組合物的施用可以在受試者第一次接觸傳染劑，或者與傳染劑相關(guān)的狀況出現(xiàn)之前、期間或之后執(zhí)行。在受試者第一次接觸傳染劑之前起始的治療可以導(dǎo)致減少由傳染劑的感染，完全去除感染，和/或與組合物未施用于其的動(dòng)物相比較，減少經(jīng)歷臨床顯著感染的可能性。在狀況發(fā)展后起始的治療可以導(dǎo)致減少感染癥狀的嚴(yán)重性，或完全去除癥狀。在一個(gè)實(shí)施方案中，動(dòng)物是免疫受損的，并且在一個(gè)實(shí)施方案中，動(dòng)物不是免疫受損的。
在一個(gè)實(shí)施方案中，施用可以是給動(dòng)物飼喂包括活性IGF的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，活性IGF可以存在于食品中。食品可以天然包括活性IGF，或者食品可以補(bǔ)充有活性IGF。在一個(gè)實(shí)施方案中，活性IGF的添加通過(guò)用生物材料例如血液衍生產(chǎn)物例如血漿補(bǔ)充食品來(lái)完成，所述生物材料已進(jìn)行加工以增加活性IGF的量。通過(guò)在每天基礎(chǔ)上飼喂施用的IGF的量可以是至少0.05 ng/kg、至少0.1 ng/kg、至少0.5 ng/kg、至少2 ng/kg、至少5 ng/kg、至少10 ng/kg、至少20 ng/kg、至少50 ng/kg、或至少100 ng/kg，其中ng指活性IGF的納克，并且kg指動(dòng)物的千克體重。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)在每天基礎(chǔ)上飼喂施用的IGF的量可以不大于150,000 ng /kg、不大于100,000 ng /kg、不大于50,000 ng /kg、或不大于20,000 ng/kg，其中ng指活性IGF的納克，并且kg指動(dòng)物的千克體重。所施用的活性IGF可以是活性IGF-1、活性IGF-2或其組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，所施用的活性IGF是活性IGF-1。在一個(gè)實(shí)施方案中，不存在關(guān)于施用的活性IGF的量的上限。
在一個(gè)實(shí)施方案中，在動(dòng)物顯示出感染的體征和/或癥狀時(shí)，飼料可以提供給動(dòng)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，飼料可以提供給動(dòng)物至少1天、至少4天、至少7天、至少2周、至少3周、至少1個(gè)月、至少2個(gè)月、或至少3個(gè)月。在一個(gè)實(shí)施方案中，飼料可以提供給動(dòng)物不大于3個(gè)月、不大于2個(gè)月、不大于1個(gè)月、不大于3周、或不大于2周。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，時(shí)間段可以是至少1天且不大于三個(gè)月，或者在那些數(shù)目之間選擇的時(shí)間段的任何組合。
在一個(gè)實(shí)施方案中，施用可以是腸胃外或局部的。在本文描述的方法中待通過(guò)腸胃外或局部途徑施用的活性IGF的量可以通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)制藥程序進(jìn)行測(cè)定，例如用于測(cè)定ED50（在50%的群體中治療有效的劑量）。得自細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定和動(dòng)物研究的數(shù)據(jù)可以用于配制用于動(dòng)物中的劑量范圍?；钚訧GF的劑量?jī)?yōu)選位于包括ED50的范圍內(nèi)，伴隨很少的毒性或無(wú)毒性；然而，預(yù)期高水平的活性IGF對(duì)于動(dòng)物將并非有害的。劑量可以在該范圍內(nèi)改變，取決于采用的劑型和利用的施用途徑。對(duì)于在本發(fā)明的方法中使用的化合物，治療有效劑量可以最初由細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定和/或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物進(jìn)行估計(jì)。
動(dòng)物的例子包括但不限于脊椎動(dòng)物。脊椎動(dòng)物的例子包括但不限于哺乳動(dòng)物，例如其為牛（例如馴養(yǎng)牛）、豬（例如家豬，例如母豬）、鹿（例如鹿）、犬（例如馴養(yǎng)犬）、貓（例如家貓）、馬（例如馴養(yǎng)馬）、綿羊或人的物種。脊椎動(dòng)物的另一個(gè)例子是禽類(lèi)物種（例如家禽，例如肉雞、蛋雞、火雞）。動(dòng)物可以處于出生和斷奶之間、斷奶后和成年期之間的年齡，或是成熟（成年）動(dòng)物。動(dòng)物可以是雌性或雄性。
傳染劑的例子包括病毒。病毒可以是有包膜病毒或無(wú)包膜病毒。病毒的例子包括但不限于巢狀病毒目（Nidovirales）成員。所述目的例子包括動(dòng)脈炎病毒科成員和冠狀病毒科成員。動(dòng)脈炎病毒科成員包括動(dòng)脈病毒屬（Arterivirus）成員。動(dòng)脈病毒屬的例子包括豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、馬動(dòng)脈炎病毒和猴出血熱病毒。冠狀病毒科成員的例子包括冠狀病毒和披膜病毒。冠狀病毒的例子包括但不限于豬流行性腹瀉病毒、豬冠狀病毒（傳染性胃腸炎冠狀病毒）、牛冠狀病毒、貓冠狀病毒、犬冠狀病毒和人類(lèi)冠狀病毒。
其他病毒包括正粘病毒科成員。正粘病毒科成員的例子包括甲型流感病毒、乙型流感病毒和丙型流感病毒。流感病毒可以適合一種或多種宿主，包括哺乳動(dòng)物或鳥(niǎo)類(lèi)（禽流感病毒）。哺乳動(dòng)物的例子包括但不限于人（人流感病毒）和豬（豬流感病毒）。
其他病毒包括腺病毒科成員。腺病毒科成員包括哺乳動(dòng)物腺病毒屬成員，其包括人腺病毒。病毒的其他例子包括新城疫病毒和牛病毒性腹瀉病毒。
本文描述的組合物還可以與其他治療化合物組合施用于有此需要的受試者，以增加總體療效。對(duì)于感染治療有用的治療化合物根據(jù)傳染劑而改變，并且此類(lèi)治療化合物是已知和常規(guī)使用的。
本發(fā)明通過(guò)下述實(shí)施例進(jìn)行舉例說(shuō)明。應(yīng)理解特定例子、材料、量和程序根據(jù)如本文闡述的本發(fā)明范圍和精神廣泛地加以解釋。
實(shí)施例1
實(shí)驗(yàn)感染有PRRS的成熟初產(chǎn)母豬顯示對(duì)包括胰島素樣生長(zhǎng)因子的飲食的陽(yáng)性應(yīng)答
進(jìn)行下述試驗(yàn)，以評(píng)估給成熟初產(chǎn)母豬飼喂包括活性IGF-1的組合物對(duì)PRRS攻擊期間的病毒載量和免疫應(yīng)答的作用。
二十只成熟初產(chǎn)母豬（gilt）等分成兩組，對(duì)照組和測(cè)試組。初產(chǎn)母豬為體重至少125千克，并且對(duì)于豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）是陰性的。選擇初產(chǎn)母豬以提供關(guān)于母豬的模型系統(tǒng)，并且得自相同農(nóng)場(chǎng)以使變異達(dá)到最小。試驗(yàn)通過(guò)給測(cè)試組飼喂補(bǔ)充有betaGRO的標(biāo)準(zhǔn)母豬妊娠飲食而開(kāi)始，所述betaGRO是含有活性IGF-1的組合物。母豬妊娠飲食補(bǔ)充有betaGRO，其濃度導(dǎo)致經(jīng)過(guò)43天300 ng活性IGF/kg體重至650 ng活性IGF/kg體重的攝入。標(biāo)準(zhǔn)母豬妊娠飲食補(bǔ)充有以4磅/噸的組合物。對(duì)照組飼喂不含補(bǔ)充的相同標(biāo)準(zhǔn)母豬妊娠飲食。
在試驗(yàn)開(kāi)始后二十八天，所有初產(chǎn)母豬均用PRRSV 1-8-4 USA毒株（1 x 105TCID50的劑量，對(duì)頸部的3 ml肌內(nèi)施用）進(jìn)行接種。在接種的同一天，獲得血樣，并且測(cè)量每只初產(chǎn)母豬的直腸溫度。血樣和直腸溫度還在接種后3天和15天時(shí)獲得。
定量實(shí)時(shí)PCR用于測(cè)量血液中存在的病毒RNA的拷貝數(shù)。結(jié)果顯示測(cè)試飲食使接種后（dpi）15天時(shí)的病毒RNA的拷貝數(shù)較對(duì)照豬減少86%（p值 = 0.02）（圖1）。存在15-dpi時(shí)病毒RNA拷貝數(shù)相對(duì)于在飼喂活性IGF的豬中3-dpi時(shí)的98%減少（p值<0.0001）。這些結(jié)果還在施用組合物的母豬中觀察到。
本文引用的所有專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)和出版物的完全公開(kāi)內(nèi)容，以及可電子獲得的材料（包括例如GenBank和RefSeq中的核苷酸序列提交，以及例如SwissProt、PIR、PRF、PDB中的氨基酸序列提交，以及來(lái)自GenBank和RefSeq中的注釋編碼區(qū)的翻譯）以其整體通過(guò)引用并入。在公開(kāi)中提及的補(bǔ)充材料（例如補(bǔ)充表格、補(bǔ)充附圖、補(bǔ)充材料和方法、和/或補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)）同樣以其整體通過(guò)引用并入。在本申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容和引入本文作為參考的任何文件的公開(kāi)內(nèi)容之間存在任何不一致的情況下，以本申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容為準(zhǔn)。前述詳述和實(shí)施例僅為了清楚理解而給出。由其不應(yīng)理解不必要的限制。本發(fā)明并不限于所示和所述的確切細(xì)節(jié)，因?yàn)閷?duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的變化將包括在由權(quán)利要求限定的本發(fā)明內(nèi)。
除非另有說(shuō)明，否則表示說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中使用的組分?jǐn)?shù)量、分子量等等的所有數(shù)目均應(yīng)理解為在所有情況下由術(shù)語(yǔ)“約”進(jìn)行修飾。因此，除非另有相反說(shuō)明，否則在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中闡述的數(shù)目產(chǎn)生是近似值，其可以根據(jù)尋求通過(guò)本發(fā)明獲得的所需特性而改變。最低限度以及并非作為限制權(quán)利要求范圍的等價(jià)原則的嘗試，每個(gè)數(shù)目參數(shù)應(yīng)至少根據(jù)所報(bào)告的有效數(shù)字且通過(guò)應(yīng)用普通四舍五入技術(shù)加以解釋。
雖然闡述本發(fā)明的廣泛范圍的數(shù)目范圍和參數(shù)是近似值，但具體實(shí)施例中闡述的數(shù)值盡可能精確地報(bào)告。然而，所有數(shù)值固有地含有必然起因于在其各自的測(cè)試測(cè)量中發(fā)現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)差范圍。
所有標(biāo)題均為了讀者方便，并且不應(yīng)用于限制標(biāo)題下的正文的含義，除非如此指明。