本發(fā)明涉及一種具有改進的穩(wěn)定性的羅庫溴銨制劑，以及一種用于改進羅庫溴銨制劑的穩(wěn)定性的方法。

背景技術(shù)：

羅庫溴銨(或羅庫溴銨溴化物)被認(rèn)為是麻醉性肌肉松弛劑等的活性成分(非專利文獻1)。

羅庫溴銨在水溶液中是相對熱不穩(wěn)定的，因此，其儲存和/或運輸是麻煩和昂貴的。例如，eslax，已知是一種市售的羅庫溴銨制劑，需要在2～8℃下冷藏(非專利文獻1)。

由于這個原因，已經(jīng)做了嘗試以改進羅庫溴銨在水溶液中的穩(wěn)定性。例如，wo2008/065142(專利文獻1)公開了一種通過在含有羅庫溴銨的水溶液中加入磺基烷基醚-β-環(huán)糊精衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽來穩(wěn)定所述溶液的技術(shù)。

然而，該文件的技術(shù)需要磺基烷基醚-β-環(huán)糊精衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，據(jù)報道磺基烷基醚-β-環(huán)糊精衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽的使用引起腎功能障礙等。所述文件描述了，為了減少注射痛，ph應(yīng)在3.5～7.5的范圍內(nèi)，優(yōu)選5.5～7.5。換言之，在所述文件中，在3.5～7.5的ph范圍內(nèi)注射痛的發(fā)生是公認(rèn)的，沒有考慮將ph降低到3.5以下。

引文列表

專利文獻

專利文獻1：wo2008/065142

非專利文獻

非專利文獻1：eslax靜脈注射25毫克/2.5毫升和eslax靜脈注射50毫克/5.0毫升的藥物訪談表，2010年10月修訂。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

技術(shù)問題

本發(fā)明的一個目的是提供一種具有優(yōu)異的穩(wěn)定性的羅庫溴銨制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種ph變化高度減少的羅庫溴銨制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種在給藥時不引起血管的刺激的羅庫溴銨制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種不引起或引起較少的注射痛的羅庫溴銨制劑。

問題的解決方案

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明人進行了深入的研究并發(fā)現(xiàn)，含有羅庫溴銨和緩沖液并具有遠低于市售產(chǎn)品eslax的ph(ph4.0)的某個范圍內(nèi)的ph的羅庫溴銨制劑令人驚訝地表現(xiàn)出明顯增加或改進的穩(wěn)定性，并且盡管具有低的ph，這種羅庫溴銨制劑不具有生理上有害的效應(yīng)，因此可以在改進或者增加所述制劑的穩(wěn)定性的同時被安全地給藥。根據(jù)該發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人完成了本發(fā)明。

也就是說，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑包含羅庫溴銨和緩沖液，并具有在預(yù)定范圍內(nèi)的ph(例如，3.5以下)。特別地，所述羅庫溴銨制劑的ph可以是約2.5～3.5(例如，2.8～3.2)。

對所述緩沖液沒有特別限制，只要其能實現(xiàn)本發(fā)明需要的ph即可，并且可以是選自甲酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液、鄰苯二甲酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液和甘氨酸緩沖液的至少一種。特別地，所述緩沖液可以是選自檸檬酸-氫氧化鈉緩沖液、酒石酸-氫氧化鈉緩沖液、鄰苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩沖液和甘氨酸-鹽酸緩沖液的至少一種。

典型的羅庫溴銨制劑包括具有2.5～3.5的ph并且含有濃度為0.01m以上(例如，0.015m以上)的甘氨酸-鹽酸緩沖液的羅庫溴銨制劑。

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑的穩(wěn)定性優(yōu)異。例如，在40℃下儲存6個月后，相關(guān)物質(zhì)c的生成率(通過從在每個測量點的相關(guān)物質(zhì)c的面積百分比中減去相關(guān)物質(zhì)c的最初的面積百分比獲得的值)可以是5％以下。

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑可以是注射制劑。除了穩(wěn)定性之外，這種注射制劑具有防止或減少注射痛和血管刺激(血管的刺激)的效果。相應(yīng)地，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑(羅庫溴銨注射制劑)可以是這樣一種羅庫溴銨制劑，其在40℃下儲存6個月后具有5％以下的羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率，并且不引起(或者沒有可能引起)或引起較少的注射痛和/或血管刺激(特別地，注射痛和血管刺激兩者)。

因此，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑具有優(yōu)異的熱穩(wěn)定性，因此，可以是，具體來說能在室溫下儲存的制劑。

在本發(fā)明中，羅庫溴銨制劑的穩(wěn)定性可以通過將羅庫溴銨制劑的ph調(diào)節(jié)到預(yù)定的范圍來增加或改進。在這種情況下，本發(fā)明也包括一種用于增加或改進羅庫溴銨制劑的穩(wěn)定性的方法，所述方法包括將含有羅庫溴銨和緩沖液的羅庫溴銨制劑的ph調(diào)節(jié)到3.5以下(特別地，一種用于增加或改進羅庫溴銨制劑的穩(wěn)定性以使得在40℃下儲存6個月后羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率是5％以下的方法)。

此外，如上所述，本發(fā)明的注射制劑具有防止注射痛和血管刺激的效果。在這種情況下，本發(fā)明還包括一種方法，其用于防止或減少由羅庫溴銨注射制劑引起的注射痛和血管刺激兩者并用于增加或改進羅庫溴銨注射制劑的穩(wěn)定性以使得在40℃下儲存6個月后羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率是5％以下，所述方法包括將含有羅庫溴銨和緩沖液的羅庫溴銨注射制劑的ph調(diào)節(jié)到3.5以下。

在這些方法中，可以制備所述制劑(羅庫溴銨制劑或者羅庫溴銨注射制劑)以便能在室溫下儲存。

發(fā)明的有益效果

在本發(fā)明中，可以通過將ph調(diào)節(jié)到某個范圍來獲得具有優(yōu)異的穩(wěn)定性(尤其是熱穩(wěn)定性)的羅庫溴銨制劑。例如，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑甚至在非冷藏的條件下長期儲存時或者在高溫和高壓條件下處理時幾乎沒有分解。另外，可以嚴(yán)格控制ph變化，因此，羅庫溴銨制劑是極其穩(wěn)定的。相應(yīng)地，羅庫溴銨制劑可以在常溫下儲存，因此是極其實用的。

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑沒有生理上有害的效應(yīng)(或只有微小的有害效應(yīng))，在這點上也是高度實用的。例如，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑不引起血栓、血管周圍炎癥等，并且可以無血管刺激地給藥。此外，在給藥時，所述制劑不引起注射痛或者與商業(yè)產(chǎn)品(eslax)相比引起少得多的注射痛。因此，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑作為一種能夠防止或者減少注射痛和/或血管刺激的制劑也是有效的。另外，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑在沒有專利文獻1中所描述的組分(磺基烷基醚-β-環(huán)糊精衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽)的情況下達到增加的或者改進的穩(wěn)定性。

因此，本發(fā)明的制劑具有優(yōu)異的穩(wěn)定性和安全性兩者，是極其有用的制劑。

如上所述，本發(fā)明的制劑沒有生理上有害的效應(yīng)，鑒于市售的羅庫溴銨制劑(eslax)的ph確定是比本發(fā)明的ph范圍更高的ph水平(4.0)，考慮到生理上有害的效應(yīng)(引用自eslax的審查報告)，這是非常令人驚訝的。

附圖說明

圖1是顯示實施例2、實施例6和比較例2的制劑的基于肌電圖的注射痛評估結(jié)果的圖。

具體實施方式

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑包含羅庫溴銨和緩沖液，并且具有在預(yù)定范圍內(nèi)的ph。所述羅庫溴銨是由下式表示的羅庫溴銨溴化物(化學(xué)名稱：(+)-(17β-乙酰氧基-3α-羥基-2β-嗎啉基-5α-雄甾-16β-基)-1-烯丙基-1-吡咯烷鎓溴化物)。

對所述制劑中羅庫溴銨的百分比沒有特別限制，并且根據(jù)病情、劑型等適當(dāng)?shù)剡x擇。例如，所述百分比可以是約0.1～10％w/v，優(yōu)選約0.5～5％w/v，更優(yōu)選約0.8～3％w/v。

對所述緩沖液沒有特別限制，只要其能實現(xiàn)本發(fā)明所需的ph即可，并且其實例包括羧酸緩沖液(例如，甲酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液、鄰苯二甲酸鹽緩沖液等)、磷酸鹽緩沖液(例如，磷酸鹽緩沖液，檸檬酸-磷酸鹽緩沖液等)、氨基酸緩沖液(例如，甘氨酸緩沖液等)等。為了實現(xiàn)本發(fā)明所需的ph，合適的緩沖液可以是檸檬酸鹽緩沖液(例如，檸檬酸-氫氧化鈉緩沖液等)、酒石酸鹽緩沖液(例如，酒石酸-氫氧化鈉緩沖液等)、鄰苯二甲酸鹽緩沖液(例如，鄰苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩沖液等)和甘氨酸緩沖液(例如，甘氨酸-鹽酸緩沖液等)等。特別地，可以使用甘氨酸-鹽酸緩沖液。這些緩沖液可以單獨使用，或以其兩種以上的組合進行使用。這些緩沖液可以是制備的緩沖液或者市售的產(chǎn)品。

對所述制劑中的緩沖液的濃度沒有特別限制，并且可以根據(jù)緩沖液的類型、所需的ph等適當(dāng)?shù)剡x擇。所述濃度可以選自范圍0.001m以上(例如，0.003～0.8m)、例如0.005m以上(例如，0.008～0.7m)，優(yōu)選0.01m以上(例如，0.015～0.5m)，更優(yōu)選0.02m以上(0.03～0.4m)，特別優(yōu)選0.04m以上(例如，0.05～0.3m)。

特別地，當(dāng)所述緩沖液是甘氨酸-鹽酸緩沖液時，在所述制劑中的濃度可以是例如0.01m以上(例如，0.015～0.8m)，優(yōu)選0.02m以上(例如，0.025～0.6m)，更優(yōu)選0.03m以上(例如，0.04～0.5m)，特別地，約0.05m以上(例如，0.06～0.3m)。

所述緩沖液的更高的濃度導(dǎo)致對所述制劑的ph的改變或變化的更有效的控制。

緩沖液的濃度是指表現(xiàn)出緩沖能力(緩沖作用)的組分的濃度，例如，在甘氨酸-鹽酸緩沖液的情況下的甘氨酸的濃度。

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑的ph可以是3.5以下(例如，1.8～3.5)、優(yōu)選3.4以下(例如，2～3.35)，更優(yōu)選3.3以下(例如，2.2～3.3)。特別地，所述羅庫溴銨制劑的ph可以是例如2～3.5，優(yōu)選2.5～3.5(例如，2.8～3.2)，通常低于3.5(例如，2～3.4)。所述ph可以是在20～30℃的溫度下的值。

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑可以含有按需摻混在其中的其他組分(藥物載體等)。這類其他組分的實例包括溶劑、增溶劑、懸浮劑、等滲劑、舒緩劑等。此外，可以按需使用通常應(yīng)用在制藥領(lǐng)域的任何已知的添加劑和藥學(xué)上可接受的添加劑，例如，防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑和氧化抑制劑。根據(jù)預(yù)期劑型等所適用的，這些添加劑可以單獨使用，或者作為其兩種以上的混合物使用。這些添加劑可以是市售的產(chǎn)品。

對所述溶劑沒有特別限制，其實例包括純凈水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、聚乙二醇(macrogol)、芝麻油、玉米油、橄欖油等。對所述增溶劑沒有特別限制，其實例包括丙二醇、d-甘露醇、苯甲酸芐酯、乙醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉等。對所述懸浮劑沒有特別限制，其實例包括苯扎氯銨，羧甲基纖維素，羥丙基纖維素，丙二醇，聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、甘油單硬脂酸酯、月桂基硫酸鈉、卵磷脂、聚乙烯醇等。對所述等滲劑沒有特別限制，其實例包括葡萄糖、d-山梨醇、氯化鈉、d-甘露醇、甘油等。對所述舒緩劑沒有特別限制，其實例包括苯甲醇等。

對所述防腐劑沒有特別限制，其實例包括對羥基苯甲酸乙酯、氯丁醇、苯甲醇、脫氫乙酸鈉、山梨酸等。對所述抗氧化劑沒有特別限制，其實例包括亞硫酸鈉、抗壞血酸等。對所述穩(wěn)定劑沒有特別限制，其實例包括酪蛋白、酪蛋白酸鈉等。所述氧化抑制劑的實例包括叔丁基氫醌，丁基羥基茴香醚、丁基羥基甲苯、α-生育酚及其衍生物。

本發(fā)明的制劑可以包含專利文獻1中描述的特定組分，即磺基烷基醚-β-環(huán)糊精衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，但通常不需要包含該物質(zhì)。因為在本發(fā)明中不需要這種組分，所以可以提供一種穩(wěn)定化的羅庫溴銨制劑，其是高度安全的并且沒有腎功能障礙等的風(fēng)險。

對本發(fā)明的羅庫溴銨制劑的滲透壓沒有特別限制，例如可以是250～1000mosmol/kg或260～600mosmol/kg。

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑可以通過例如將羅庫溴銨與緩沖液(如果需要的話，以及其他組分)摻混來生產(chǎn)，但生產(chǎn)方法不具體限制于此。

對本發(fā)明的羅庫溴銨制劑的劑型沒有特別限制，但通常是溶液。所述溶液的實例包括胃腸外制劑，例如注射劑(用于靜脈注射、動脈注射、肌內(nèi)注射、皮下注射、皮內(nèi)注射、腹腔注射、椎管內(nèi)注射，或硬膜外注射)、眼用制劑和經(jīng)鼻制劑。

對本發(fā)明的羅庫溴銨制劑的給藥途徑?jīng)]有特別限制，但在使用注射制劑進行胃腸外給藥的情況下，優(yōu)選根據(jù)患者的年齡、病情和/或其他病狀，從包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)和腹腔給藥途徑的優(yōu)選途徑中合適地選擇。

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑的劑量(劑量用法)隨年齡、性別和患者的體重、病情的嚴(yán)重程度等變化，因此沒有特別限制，但一般來說，活性成分(即羅庫溴銨)的每日總劑量通常是約0.01～100毫克，優(yōu)選約10～60毫克/成人。另外，所述劑量和給藥方法隨年齡，性別，和患者的體重，疾病的嚴(yán)重程度等變化，因此沒有特別限制，但一般來說，可以將每日總劑量每天給藥一次或作為多個(例如，2～4個)分劑量給藥。在示例性方法中，羅庫溴銨以0.6毫克/千克的劑量靜脈內(nèi)給藥，并且此外，根據(jù)需要，在手術(shù)過程中以0.1～0.2毫克/千克的劑量通過持續(xù)輸注給藥。

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑優(yōu)選在麻醉下使用，雖然這不是必要條件。對麻醉劑沒有特別限制，其優(yōu)選的實例包括吸入麻醉劑和靜脈麻醉劑。對所述吸入麻醉劑沒有特別限制，其實例包括揮發(fā)性吸入麻醉劑，如氟烷、異氟醚、安氟醚、甲氧氟烷、七氟醚和地氟醚；和氣態(tài)吸入麻醉劑，如乙烯、環(huán)氧丙烷、乙醚、氯仿、一氧化二氮和氙氣。對所述靜脈麻醉劑沒有特別限制，其實例包括異丙酚、咪達唑侖、氯胺酮、噻環(huán)乙胺、硫噴妥鈉、美索比妥和依托咪酯。優(yōu)選丙泊酚、咪達唑侖等。這些麻醉劑可以單獨使用或作為其兩種以上的混合物使用。這些麻醉劑可以是市售的產(chǎn)品。

如上所述，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑具有高穩(wěn)定性。例如，將羅庫溴銨制劑在40℃下儲存3個月后，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率極低，為2.5％以下(例如，0～2.3％)，優(yōu)選2％以下(例如，0.1～1.8％)，更優(yōu)選約1.5％以下(例如，0.2～1.3％)。也可能將羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率降低到1％以下(例如，0.1～0.8％)。

另外，將羅庫溴銨制劑在40℃下儲存6個月后，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率可以是5％以下(例如，0～4.9％)，優(yōu)選4％以下(例如，0.01～3.9％)，更優(yōu)選約3％以下(例如，0.1～2.9％)。

當(dāng)羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為5％以下時，據(jù)判斷所述羅庫溴銨制劑是能在室溫下儲存的藥物產(chǎn)品。此處，室溫是指1～30℃(日本藥典)。

因此，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑具有極其優(yōu)異的穩(wěn)定性，在儲存3個月后羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率可以被降低到遠低于5％的水平，5％是能在室溫下儲存和不能在室溫下儲存的邊界值。甚至在長期(6個月)儲存后，所述生成率仍然可以低于5％，表明所述制劑能在室溫下儲存。

相關(guān)物質(zhì)c是羅庫溴銨的主要分解產(chǎn)物，并且是美國藥典(usp)和歐洲藥典(ep)中描述的物質(zhì)。

將所述羅庫溴銨制劑在121℃下熱處理20分鐘后，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率極低，為0.7％以下(例如，0～0.6％)，優(yōu)選0.5％以下(例如，0.01～0.45％)，更優(yōu)選約0.4％以下(例如，0.05～0.35％)。也可能將羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率降低到0.3％以下(例如，0.01～0.3％)。

在本發(fā)明中，羅庫溴銨制劑的ph變化也可以被最小化。例如，將所述羅庫溴銨制劑在40℃下儲存6個月后，儲存前后的ph差值(或其絕對值)為低至0.25以下(例如，0～0.22)，優(yōu)選0.2以下(例如，0～0.18)，更優(yōu)選約0.15以下(例如，0～0.12)，也可以是0.1以下(例如，0～0.08，優(yōu)選0～0.05，更優(yōu)選0～0.03)。另外，在將所述羅庫溴銨制劑在121℃下熱處理20分鐘的情況下，熱處理前后的ph差值可以選自相似的范圍。

因此，在本發(fā)明中，具有極高的穩(wěn)定性的羅庫溴銨制劑可以通過調(diào)節(jié)ph(以及選擇適當(dāng)類型的緩沖液和調(diào)節(jié)緩沖液的濃度)來獲得。在這種情況下，本發(fā)明還包括一種通過將包含羅庫溴銨和緩沖液的羅庫溴銨制劑的ph調(diào)節(jié)到預(yù)定范圍(例如，3.5以下)來增加或改進羅庫溴銨制劑的穩(wěn)定性的方法。

本發(fā)明的羅庫溴銨制劑具有相對低的ph，但沒有或幾乎沒有生理上有害的效應(yīng)。特別地，本發(fā)明的羅庫溴銨制劑能夠高效地防止或者減少注射痛和/或血管刺激。在這種情況下，本發(fā)明還包括一種用于防止或減少(緩解)由羅庫溴銨引起的(特別是由羅庫溴銨制劑的給藥引起的)注射痛和/或血管刺激(特別地，注射痛和血管刺激兩者)的方法，所述方法包括將包含羅庫溴銨和緩沖液的羅庫溴銨制劑(羅庫溴銨注射制劑)的ph調(diào)節(jié)到預(yù)定范圍(例如，3.5以下)。

本發(fā)明涵蓋將上述各種結(jié)構(gòu)以發(fā)揮本發(fā)明的效果的方式在本發(fā)明的技術(shù)范圍內(nèi)組合的實施方式。

實施例

下文中，本發(fā)明將通過實施例更詳細(xì)地說明，但其不限于此。在本發(fā)明的技術(shù)思路內(nèi)可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員做各種修改。

在所述實施例中，如下測定或評估各種屬性。

ph

按照在日本藥典中的“ph測定”，在20～30℃下進行測量。

相關(guān)物質(zhì)(雜質(zhì))c的生成率

按照用于hplc的usp方法進行測量。

血管刺激

在給藥開始之前，用電動剪毛器去除6只(每組3只)14周齡的雄性jw兔中每一只兔子的給藥部位上的毛。從靠近左耳后靜脈的中部，選擇具有較少的小血管分支的3厘米部分(保留部位)，所述部分的兩端用擦不掉的記號筆進行標(biāo)記，這兩端被稱為中樞和外周止血部位。在給藥當(dāng)天，在七氟醚麻醉下(誘導(dǎo)：5％，維持：3％)，用所述擦不掉的記號筆標(biāo)記所述外周止血部位的外周5mm的一個點，用作注射針插入部位。

在給藥時，將夾鉗連接到所述注射針插入部位外圍的部分以阻止血流，并從所述注射針插入部位朝著中樞側(cè)向外圍止血部位入注射針。注入0.025毫升的量的樣品溶液，并確認(rèn)局部的血管充滿了樣品物質(zhì)。隨后，用夾鉗將中樞止血部位閉合，注入另外0.025毫升的樣品溶液并用夾鉗將外圍止血部位閉合。接下來，立刻從右耳靜脈給藥0.2毫升的2.5％w/v的舒更葡糖鈉(sugammadex)溶液。在保留樣品溶液3分鐘后，移除所述夾鉗，并在確認(rèn)動物的自主呼吸后，移除麻醉。對于樣品溶液的每天給藥來說，盡可能使用相同的保留部位和相同的注射針插入部位。

給藥次數(shù)：每日一次，連續(xù)8天

給藥體積：0.05毫升/部位/天

給藥方法、給藥次數(shù)、給藥期和給藥體積按照府川等人的方法(日本藥理學(xué)雜志71:307-315,1975)選擇。

基于如下所示的肉眼檢查標(biāo)準(zhǔn)，每日一次評估血管刺激。

(血栓)

-：無血栓(0毫米)

+：小血栓(1～4毫米)

++：中型血栓(5～14毫米)

+++：大血栓(15毫米以上)

(血管周圍的炎癥(充血、腫脹))

-：沒變化

+：輕微的炎癥(限于3厘米長的止血部位)

++：中度炎癥(以止血部位為中心的耳廓的1/3)

+++：嚴(yán)重的炎癥(整個耳廓的1/2)

注射痛

以1.1克/千克的劑量將氨基甲酸乙酯腹腔注射給大鼠(8周齡的雄性sd大鼠，每組11只動物)，去除處理區(qū)域周圍的毛，并切開皮膚以暴露股動脈附近的血管。以逆行方式將具有預(yù)先變成錐形的尖端的pfa管導(dǎo)入約2厘米進入尾部的腹壁淺動脈直至其到達股動脈起始的部位。將同軸針電極(26g)插入左后側(cè)的半腱肌。在手術(shù)后，將大鼠保持在37℃下。在給藥開始之前，測量基線值30秒鐘。將每種受試溶液以50μl的量通過pfa管以0.8毫升/分鐘的速度給藥，并從給藥開始進行30秒的肌電圖(emg)測量。每隔1小時以上對每種受試溶液進行重復(fù)給藥。在給藥之前和最后一次給藥之后，向大鼠給藥1％異丙酚“maruishi”(日本產(chǎn)品名稱)，并且在試驗中只用這樣的個體來展示肌肉收縮。使用powerlab(16sp，adinstruments)進行獲得的肌電圖的分析。對原始信號進行整流和積分以產(chǎn)生量化的數(shù)據(jù)(μv·s)。結(jié)果被顯示為相對于作為100％的給藥前的值的百分比值。

實施例1

在注射用水中溶解0.06克甘氨酸、0.67克氯化鈉、30克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為2.0。將所述制劑在40℃下儲存3個月和6個月后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。在這兩種情況下(在儲存3個月和6個月后)ph為2.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為1.24％(在儲存3個月后)和2.52％(在儲存6個月后)。

實施例2

在注射用水中溶解0.55克甘氨酸、0.50克氯化鈉、30克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為3.0。將所述制劑在40℃下儲存3個月和6個月后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。在這兩種情況下(在儲存3個月和6個月后)ph為3.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.77％(在儲存3個月后)和1.58％(在儲存6個月后)。

參考例1

在注射用水中溶解4.58克甘氨酸、30克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為4.0。將所述制劑以與實施例1中相同的方式儲存3個月和6個月后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。在這兩種情況下ph為4.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為2.81％(在儲存3個月后)和5.36％(在儲存6個月后)。

比較例1

以與實施例1中相同的方式制備其組成與市售的羅庫溴銨制劑的組成(乙酸緩沖液，就乙酸離子而言0.15m，ph4.0)相同的羅庫溴銨制劑。將所述制劑以與實施例1中相同的方式儲存3個月和6個月后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。在這兩種情況下ph為4.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為2.53％(在儲存3個月后)和5.46％(在儲存6個月后)。

結(jié)果被概括在表1中。

表1

表1中的結(jié)果清楚地表明，通過將ph調(diào)節(jié)到預(yù)定的范圍，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率明顯降低，并且與ph為4.0的情況相比，穩(wěn)定性增加。

特別地，實施例1、實施例2和參考例1的比較顯示了令人驚訝的表現(xiàn)，即，隨著ph的降低，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率并不是簡單地降低而是轉(zhuǎn)為提高。另外，在實施例中，ph沒有變化，這表明羅庫溴銨制劑是極其穩(wěn)定的。此外，參考例1和比較例1的比較表明，這種穩(wěn)定性不依賴于緩沖液的類型。

實施例3

在注射用水中溶解1.17克甘氨酸、0.37克氯化鈉、45克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為3.0。將所述制劑在121℃下熱處理20分鐘后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為3.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.28％。

實施例4

將實施例2中獲得的制劑(ph3.0)以與實施例3中同樣的方式熱處理，然后測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為3.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.23％。

實施例5

在注射用水中溶解0.18克甘氨酸、0.64克氯化鈉、20克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為3.0。將所述制劑以與實施例3中同樣的方式熱處理后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為3.1，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.23％。

比較例1

將比較例1中獲得的制劑(ph4.0)以與實施例3中同樣的方式熱處理，然后測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為4.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.75％。

結(jié)果被概括在表2中。

表2

表2中的結(jié)果清楚地表明，在ph固定的情況下，不論緩沖液濃度的差異如何，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率明顯降低。甚至在熱處理后，ph也沒有大幅地改變。

參考例2

在注射用水中溶解0.90克氯化鈉、15克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為3.0。將所述制劑以與實施例3中相同的方式熱處理后，測定ph。ph為3.3。

參考例2和實施例5的結(jié)果被概括在表3中。

表3中的結(jié)果清楚地表明，沒有緩沖液時，ph被熱處理大幅地改變。

實施例6

在注射用水中溶解0.55克甘氨酸、0.50克氯化鈉、51克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為2.5。將所述制劑以與實施例3中同樣的方式熱處理后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為2.5，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.10％。

實施例7

在注射用水中溶解0.55克甘氨酸、0.50克氯化鈉、38克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為2.8。將所述制劑以與實施例3中同樣的方式熱處理后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為2.8，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.14％。

實施例8

在注射用水中溶解0.55克甘氨酸、0.50克氯化鈉、27克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為3.2。將所述制劑以與實施例3中同樣的方式熱處理后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為3.2，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.27％。

實施例9

在注射用水中溶解0.55克甘氨酸、0.50克氯化鈉、21克0.1mhcl和1.0克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到100毫升。

獲得的制劑的ph為3.5。將所述制劑以與實施例3中同樣的方式熱處理后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為3.5，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.31％。

結(jié)果被概括在表4中。在表4中，已在表2中示出的實施例4和比較例1的結(jié)果被一起示出以供參照。

表4

表4中的結(jié)果清楚地表明，在ph在預(yù)定的范圍之內(nèi)的情況下，不論ph的差異如何，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率明顯降低。此外，沒有觀察到顯著的ph變化，即，ph變化明顯地減少。

實施例10

在注射用水中溶解15克0.1m鹽酸、0.45克氯化鈉、0.42克鄰苯二甲酸氫鉀和0.50克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到50毫升。

獲得的制劑的ph為3.0。將所述制劑以與實施例3中同樣的方式熱處理后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為3.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.25％。

實施例11

在注射用水中溶解0.45克氯化鈉、0.34克檸檬酸水合物、2.46克0.1m氫氧化鈉溶液和0.50克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到50毫升。

獲得的制劑的ph為3.0。將所述制劑以與實施例3中同樣的方式熱處理后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為3.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.19％。

實施例12

在注射用水中溶解0.45克氯化鈉、0.23克酒石酸、2.50克0.1m氫氧化鈉溶液和0.50克羅庫溴銨溴化物，并且進一步添加注射用水以將體積調(diào)節(jié)到50毫升。

獲得的制劑的ph為3.0。將所述制劑以與實施例3中同樣的方式熱處理后，測定ph和羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率。ph為3.0，羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率為0.28％。

結(jié)果被概括在表5中。在表5中，已在表2中示出的比較例1的結(jié)果被一起示出以供參照。

表5

表5中的結(jié)果清楚地表明，在ph在預(yù)定的范圍之內(nèi)的情況下，不論緩沖液類型的差異如何，在熱處理后羅庫溴銨相關(guān)物質(zhì)c的生成率明顯降低，ph變化也明顯地減少。

血管刺激評估

分開評估在實施例6中獲得的羅庫溴銨制劑(ph2.5)和市售的羅庫溴銨制劑(商品名：eslax(注冊商標(biāo))靜脈注射50毫克/5.0毫升，乙酸鹽緩沖液、就乙酸離子而言0.15m，ph4.0)(比較例2)的血管刺激。

結(jié)果如表6所示。

表6

表6中的結(jié)果清楚地表明，盡管ph低于作為市售產(chǎn)品的比較例2的ph，但沒有觀察到血管刺激。相應(yīng)地，在本發(fā)明中，羅庫溴銨安制劑的穩(wěn)定性增加，而沒有引起血管的刺激。

注射痛評估

分開評估在實施例2中獲得的羅庫溴銨制劑(ph3.0)、在實施例6中獲得的羅庫溴銨制劑(ph2.5)和比較例2的注射痛。

結(jié)果如表7和圖1所示。

表7

表7中的結(jié)果清楚地表明，與市售的產(chǎn)品相比，實施例2和實施例6的羅庫溴銨制劑將注射痛明顯地減少到具有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異的程度。因此，結(jié)果表明本發(fā)明提供了具有增加的穩(wěn)定性并且不引起注射痛的羅庫溴銨制劑。

工業(yè)應(yīng)用

本發(fā)明提供了可用作肌肉松弛劑等的羅庫溴銨制劑的穩(wěn)定性(儲存穩(wěn)定性等)。