本發(fā)明涉及一種熱響應(yīng)性防粘連用組合物及其用途。
背景技術(shù)：
：外科手術(shù)后經(jīng)常發(fā)生的器官和組織粘連只是在受損組織的細(xì)胞增殖和再生過程中發(fā)生的自然現(xiàn)象之一。然而，器官和組織粘連導(dǎo)致患者的持續(xù)不適或功能障礙，并且需要重新手術(shù)用于粘連松解，甚至變得危及生命。這種粘連幾乎發(fā)生在身體的任何部位，例如肌肉、鞏膜、結(jié)膜、Tenon囊、肌間膜等，但是已知臨床上最嚴(yán)重的問題是由腹部手術(shù)后發(fā)生的腹膜粘連或腸粘連所導(dǎo)致的反復(fù)手術(shù)、過度出血，對縫合材料的組織反應(yīng)、手術(shù)中的異物、術(shù)后炎癥等所引起的。因此，為了解決術(shù)后組織粘連問題，在受傷組織和組織之間引入物理屏障是一種可以防止粘連的方法。為了解決手術(shù)后組織粘連問題，已經(jīng)進(jìn)行了許多嘗試以通過使用各種粘連抑制劑來抑制手術(shù)后組織之間的粘連。這些物質(zhì)為膜形式且使用通過使用作為不可降解聚合物的特氟龍而制備的Preclude(W.L.Gore公司)、通過使作為可降解聚合物的纖維素氧化而制備的Interceed(Johnson&JohnsonMedical公司)、通過使透明質(zhì)酸和羧甲基纖維素交聯(lián)而制備的Sephafilm(Genzyme公司)和通過使高分子量的聚環(huán)氧乙烷和羧甲基纖維素交聯(lián)而制備的Oxiplex(FzioMed公司)。然而，不可降解聚合物從根本上分離傷口，表現(xiàn)出優(yōu)異的抗粘連性能，但在手術(shù)后作為異物持續(xù)存在于身體中，從而在周圍組織中引起炎癥或成為組織再生的障礙。因此，在一些情況下，需要在一段時(shí)間后再次手術(shù)以除去不可降解聚合物。生物降解性聚合物的優(yōu)點(diǎn)在于其在一定時(shí)間后從體內(nèi)降解和消除，因此不作為異物存在。然而，可降解聚合物的抗粘連性能仍然比不可降解聚合物低。此外，膜型抗粘連屏障的使用需要使用縫合線與周圍組織縫合，以防止抗粘連屏障在應(yīng)用部位中移動，并且最大的問題是組織粘連經(jīng)常發(fā)生在縫合部位，并且當(dāng)應(yīng)用部位復(fù)雜、微觀或管狀時(shí)，難以引入膜型抗粘連屏障。為了克服這些問題，凝膠型羧甲基纖維素、右旋糖酐70(dextran70)、通過使用聚環(huán)氧乙烷-聚環(huán)氧丙烷共聚物(PluronicF127)制備的Flowgel(Mediventures公司)、基于聚乳酸的Adcon-L(Gliatech公司)、基于透明質(zhì)酸的Intergel(LifecoreBiomedical公司)、使用天然聚合物作為原料的AdbA(Amitie公司)、基于噴霧型聚環(huán)氧乙烷的Spraygel(ConfluentSurgical公司)等已經(jīng)被開發(fā)，其中一些為可商購的。然而，凝膠型粘連抑制劑在傷口愈合之前容易被身體(在水溶液中)降解和吸收，因此它們具有發(fā)揮低的防粘連效果的問題。已知由于這個(gè)問題導(dǎo)致在使用現(xiàn)有的粘連抑制劑時(shí)具有僅約50-70％的防粘連作用(J.M.Becker等,在美國外科醫(yī)師學(xué)會的臨床研討會上提出，新奧爾良，10月22日(1995))。Balazs等人的美國專利第4,141,973號公開了為了防止粘連使用透明質(zhì)酸作為主要成分。然而，由于透明質(zhì)酸在生物體內(nèi)容易降解，其溶解相對良好，并且其在生物體中的半衰期相對較短，即1至3天，因此其不能保留在體內(nèi)所需的時(shí)間以抑制粘連，并且在作為粘連抑制劑的功能方面受到嚴(yán)重限制。美國專利第1593394號(產(chǎn)品名：)公開了通過使用三價(jià)氯化鐵(FeCl3)改善透明質(zhì)酸聚合物的體內(nèi)穩(wěn)定性的方法，但是由于實(shí)際上用作交聯(lián)劑的鐵氯化物在臨床試驗(yàn)中導(dǎo)致炎癥和副作用，F(xiàn)DA已經(jīng)取消了其注冊。在美國專利第5,939,485號中，Bromberg等人描述了已經(jīng)開發(fā)的對環(huán)境刺激(例如pH、溫度和離子強(qiáng)度)具有響應(yīng)性的聚合物網(wǎng)絡(luò)。他們使用作為在生物體內(nèi)不可降解的聚合物的乙烯基聚合物、丙烯酸聚合物和聚氨酯等作為聚合物網(wǎng)絡(luò)的結(jié)構(gòu)成分，并且使用聚氧化烯聚合物和纖維素聚合物作為響應(yīng)性聚合物。然而，如果使用上述不可降解聚合物作為結(jié)構(gòu)成分，則它們可能產(chǎn)生異物反應(yīng)，因?yàn)樗鼈冊谏矬w中不可降解，并且具有低的生物相容性。如上所述，不可降解聚合物在周圍組織中引起炎癥反應(yīng)，因此需要在一定時(shí)間后再次手術(shù)以去除該不可降解聚合物，并且與不可降解聚合物相比，可生物降解聚合物具有相當(dāng)?shù)偷姆勒尺B效果。此外，凝膠型粘連抑制劑在傷口愈合之前容易被身體降解和吸收，并因此它們發(fā)揮低的防粘附效果。因此，需要一種熱響應(yīng)性粘連抑制劑來解決不可降解聚合物和可生物降解聚合物的缺點(diǎn)。泊洛沙姆(Ploxamer)為由BASF公司制造的聚合物，已知為在低溫下以溶液狀態(tài)存在但隨著溫度升高而凝膠化的熱響應(yīng)性材料(參見美國專利第4,188,373號、美國專利第4,478,822號和美國專利第4,474,751號)。Bromberg的美國專利第5,939,485號描述了這些泊洛沙姆為根據(jù)pH、溫度和離子強(qiáng)度的刺激能夠可逆凝膠化的物質(zhì)。此外，Steinleitne等人公開了對具有泊洛沙姆作為基本組成的流體凝膠的抗粘連功效的評價(jià)[Fertilityandsterility57(2):305(1992)]。通常已知的泊洛沙姆具有聚環(huán)氧乙烷(PEO)-聚環(huán)氧丙烷(PPO)-聚環(huán)氧乙烷(PEO)的結(jié)構(gòu)。例如，泊洛沙姆407具有約為25℃的凝膠化溫度，并且其凝膠化受到如泊洛沙姆等級、濃度、pH、添加劑等因素的影響。此外，泊洛沙姆407的熔點(diǎn)為56℃，并且其比重為1.05。然而，該泊洛沙姆具有其在水溶液中形成聚合物凝膠，但容易溶于水的物理性質(zhì)。因此，泊洛沙姆的缺點(diǎn)在于其不能在一個(gè)地方停留足夠的時(shí)間以抑制粘連。韓國專利第0416104B1號和第0565881B1號描述了通過將水溶性藻酸鹽與二價(jià)陽離子(Ca2+，Br2+等)進(jìn)行離子交聯(lián)來提高羧甲基纖維素(用作主要成分)和泊洛沙姆的體內(nèi)穩(wěn)定性的方法。然而，當(dāng)使用該方法時(shí)，體內(nèi)穩(wěn)定性稍微改善，但是實(shí)際上，使用部位的組織粘著性降低，并且使用的溶液從組織流下。由于這個(gè)問題，在作為所有外科手術(shù)部位中最常見的手術(shù)部位(約50％或更多)的腹膜腔/骨盆腔/子宮腔中使用泊洛沙姆存在限制，泊洛沙姆也具有低的防粘連效果。由于這些問題，迄今為止已經(jīng)開發(fā)或商業(yè)化了膜型粘連抑制劑、織物型粘連抑制劑、凝膠型粘連抑制劑等各種粘連抑制劑，并且已經(jīng)在臨床上使用，但是還沒有開發(fā)出在所有外科手術(shù)部位顯示成功的防粘連效果的產(chǎn)品。因此，需要開發(fā)具有優(yōu)異的生物相容性、組織粘著性(tissueadhesive)、生物吸收性、體內(nèi)穩(wěn)定性等并且可以容易地應(yīng)用于所有的手術(shù)部位的理想的粘連抑制劑。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：技術(shù)問題為了解決上述問題，本發(fā)明制備并完成了溫度響應(yīng)性粘連抑制劑，其為含聚環(huán)氧乙烷的嵌段共聚物和一種羧基多糖的混合形式，該嵌段共聚物具有防粘連功效和響應(yīng)于溫度進(jìn)行可逆的溶膠-凝膠相變，該羧基多糖提供粘著性以防止粘連抑制劑從濕潤狀態(tài)的傷口部位流下并且固定該粘連抑制劑。本發(fā)明中使用的一種嵌段共聚物和一種羧基多糖據(jù)報(bào)道均具有防粘連功效，但是當(dāng)使用于人體中復(fù)雜部位(彎曲的組織和器官)時(shí)，它們在傷口愈合之前從傷口部位流下或被體液快速降解和吸收。然而，在本發(fā)明中，通過使用少量作為身體成分之一的一價(jià)陽離子，而不使用有毒的化學(xué)交聯(lián)劑或多價(jià)陽離子，增加兩種聚合物之間的結(jié)合能力，以提高粘著性或體內(nèi)穩(wěn)定性至2周或更長，并解決由使用化學(xué)交聯(lián)劑或多價(jià)陽離子引起的炎癥反應(yīng)或異物反應(yīng)的問題。因此，本發(fā)明的目的為提供最理想的粘連抑制劑，其用于進(jìn)行外科手術(shù)的任何人體部位，而沒有炎癥反應(yīng)和異物反應(yīng)的問題，該粘合抑制劑通過將能夠提供使用方便性、粘著性、體內(nèi)穩(wěn)定性和防粘連功效的含聚環(huán)氧乙烷的嵌段共聚物與羧基多糖組分與一價(jià)陽離子一起混合而制備。技術(shù)方案一方面提供了一種熱響應(yīng)性防粘連用組合物，其包括含聚環(huán)氧乙烷(PEO)的共聚物、羧基多糖和一價(jià)陽離子。如本文所用，術(shù)語“粘連”是指這樣的現(xiàn)象：在諸如炎癥、裂縫、摩擦或手術(shù)切口等傷口愈合過程中纖維組織過度產(chǎn)生或血液流出并凝固，從而使應(yīng)該彼此分離的相鄰器官或組織彼此粘在一起。術(shù)語“防粘連用”是指用于防止相鄰的器官或組織彼此粘在一起的用途。所述組合物可以包括含聚環(huán)氧乙烷的共聚物。所述聚環(huán)氧乙烷為親水的。聚環(huán)氧乙烷為由包含-O-CH2-CH2)-的化合物的重復(fù)單元構(gòu)成的聚合物。聚環(huán)氧乙烷的分子量可以大于約1,000Da。所述共聚物可以包括與聚環(huán)氧乙烷共聚的另一組分。另一組分可以為選自由聚環(huán)氧丙烷(PPO)、聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)、聚己內(nèi)酯(PCL)、聚二氧環(huán)己酮(poly(dioxanone)，PDO)、聚-L-賴氨酸(PLL)、聚乙二醇(PEG)和羥乙基纖維素(HEC)所構(gòu)成的組中的一者或多者，例如可以為兩種或三種。共聚物可以為嵌段共聚物。此外，共聚物可以為泊洛沙姆，例如由聚環(huán)氧乙烷(PEO)-聚環(huán)氧丙烷(PPO)-聚環(huán)氧乙烷(PEO)組成的泊洛沙姆。共聚物可以包括含量為10重量％至90重量％的聚環(huán)氧乙烷。溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度可以通過控制聚環(huán)氧乙烷的含量比來控制。組合物可以為熱響應(yīng)性的。因此，組合物可以響應(yīng)于溫度而發(fā)生可逆的溶膠-凝膠相變。組合物可以從體外的溶膠狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)轶w內(nèi)的凝膠狀態(tài)。因此，組合物可以用作用于防止傷口部位周圍的組織粘連的屏障。因?yàn)榻M合物在室溫下以溶膠狀態(tài)存在，所以可以將其注射到傷口部位中，并且在使用后，組合物凝膠化并定位于傷口部位以改善粘連屏障效果。根據(jù)性能，共聚物的分子量可以在1000g/mol至500000g/mol的范圍內(nèi)。組合物可以包括羧基多糖。當(dāng)將共聚物使用于傷口部位時(shí)，羧基多糖可以提供適當(dāng)?shù)恼扯?、粘著性和體內(nèi)穩(wěn)定性。羧基多糖可以為組合物提供粘著性，以防止組合物從濕潤狀態(tài)的傷口部位向下流動并將組合物固定至傷口部位。因此，組合物在手術(shù)時(shí)被固定至使用組合物的部位，在傷口愈合期間用作物理屏障，并且還保護(hù)傷口，因此顯示防粘連效果。羧基多糖可以為選自透明質(zhì)酸(HA)、藻酸、羧甲基纖維素(CMC)、硫酸角質(zhì)素、殼聚糖、膠原、葡聚糖、明膠、彈性蛋白和纖維蛋白所構(gòu)成的組中的一者或多者。此外，羧基多糖可以選自分子量為100kg/mol至5000kg/mol的材料。羧基多糖的分子量可以為100kg/mol至5000kg/mol、500kg/mol至4000kg/mol、1000kg/mol至3000kg/mol或1500kg/mol至2500kg/mol。組合物可以包括一價(jià)陽離子。一價(jià)陽離子可以誘導(dǎo)在含聚環(huán)氧乙烷的共聚物內(nèi)部的氫鍵、在羧基多糖內(nèi)部的氫鍵和在共聚物與羧基多糖之間的氫鍵。組合物可以由于氫鍵形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，并且由共聚物形成的膠束被包裝，并因此，膠束之間的距離可以縮短。因此可以增加共聚物內(nèi)的聚環(huán)氧乙烷鏈之間的氫鍵。因此，一價(jià)陽離子增加組合物中含聚環(huán)氧乙烷的共聚物和羧基多糖之間的結(jié)合，以提供具有粘度和粘著性的防粘連用組合物。此外，增加共聚物內(nèi)部的氫鍵和羧基多糖內(nèi)部的氫鍵，以提高組合物的穩(wěn)定性，從而延長凝膠的停留時(shí)間。一價(jià)陽離子可以為選自由Li+、Rb+、Fr+、Na+、NO2+、NH4+、H3O+和K+所構(gòu)成的組中的一者或多者。在包括含聚環(huán)氧乙烷的共聚物、羧基多糖和含一價(jià)陽離子的溶液的組合物中，基于1重量％的最終組合物，共聚物的含量可以為0.1重量％至0.4重量％。如果基于1重量％的最終組合物共聚物的含量小于0.1重量％，則不會發(fā)生溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變，并且如果基于1重量％的最終組合物共聚物的含量大于0.4重量％，則可能在室溫下發(fā)生凝膠化。當(dāng)在室溫下發(fā)生凝膠化時(shí)，可能出現(xiàn)內(nèi)容物不能均勻地涂覆在使用部位從而使防粘連功效降低的問題。此外，根據(jù)性能，基于1重量％的最終組合物，羧基多糖的含量可以適當(dāng)?shù)剡x自0.001重量％至0.03重量％的范圍內(nèi)。如果基于1重量％的最終組合物羧基多糖的含量小于0.001重量％，則粘度和粘著性降低，并且結(jié)合力降低，因此不能提供體內(nèi)穩(wěn)定性，如果基于1重量％的最終組合物羧基多糖的含量大于0.03重量％，則由于過高的粘度而難以制備最終組合物，并且難以將組合物均勻地涂覆至傷口部位。根據(jù)性能，基于1重量％的最終組合物，含一價(jià)陽離子的溶液的含量可以適當(dāng)?shù)剡x自0.001重量％至0.02重量％。如果基于1重量％的最終組合物一價(jià)陽離子的含量為0.001重量％以下，則形成弱氫鍵，從而降低最終組合物的穩(wěn)定性，因此，組合物可能在傷口愈合之前被降解和吸收。如果基于1重量％的最終組合物一價(jià)陽離子的含量大于0.02重量％，則形成太強(qiáng)的氫鍵，因此，一部分組合物可能沉淀或懸浮。本發(fā)明的另一方面提供一種用于制備所述防粘連用組合物的方法，該方法包括提供含聚環(huán)氧乙烷(PEO)的共聚物、羧基多糖和陽離子的步驟。組合物可以以液體或薄膜粉末的形式使用。在該方法中，含聚環(huán)氧乙烷的共聚物和羧基多糖與上述相同。在該方法中，陽離子可以為一價(jià)陽離子。一價(jià)陽離子可以為選自由Li+、Rb+、Fr+、Na+、NO2+、NH4+、H3O+和K+所構(gòu)成的組中的一者或多者。此外，在提供陽離子的步驟中，提供含一定重量比的陽離子的溶液，并且基于1重量份的最終組合物，溶液的含量可以為0.001重量份至0.02重量份，例如0.002重量份至0.02重量份、0.003重量份至0.02重量份、0.004重量份至0.02重量份、0.004重量份至0.02重量份、0.005重量份至0.02重量份、0.006重量份至0.02重量份、0.007重量份至0.02重量份、0.008重量份至0.02重量份、0.009重量份至0.02重量份、0.010重量份至0.02、0.011重量份至0.02重量份、0.012重量份至0.02重量份、0.013重量份至0.02重量份，0.014重量份至0.02重量份，或0.015重量份至0.02重量份。此外，基于組合物，提供了特定重量比的共聚物或羧基多糖。基于1重量份的最終組合物，共聚物的含量可以為0.1重量份至0.4重量份。此外，基于1重量份的最終組合物，羧基多糖的含量可以為0.001重量份至0.04重量份。有益效果根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面的熱響應(yīng)性防粘連用組合物，該組合物可以具有可逆的溶膠-凝膠相變的熱響應(yīng)特性，并且易于引入到進(jìn)行外科手術(shù)的任何部位。此外，一種或多種羧基多糖用于增加組合物的粘度和組織粘著性，以防止組合物在使用部位從傷口表面流下，并將組合物堅(jiān)固地固定至使用部位。此外，使用一價(jià)陽離子在組合物中誘導(dǎo)氫鍵以使組合物形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，因此，低分子量共聚物膠束被包裝以縮短膠束之間的距離。因此可以增加聚環(huán)氧乙烷鏈之間的氫鍵，以提高體內(nèi)穩(wěn)定性。此外，該組合物不包括化學(xué)交聯(lián)劑，從而解決了炎癥反應(yīng)的問題，進(jìn)而確保了組合物的體內(nèi)安全性。根據(jù)本發(fā)明的另一方面的熱響應(yīng)性防粘連用組合物的制造方法，可以制備具有穩(wěn)定性、粘度、組織粘著性和安全性的熱響應(yīng)性防粘連用組合物。附圖說明圖1表示使用根據(jù)4級組織粘連嚴(yán)重性(0、1、2或3的數(shù)字越大，粘連越嚴(yán)重)的粘連評價(jià)系統(tǒng)評價(jià)組織粘連的結(jié)果。具體實(shí)施方式在下文中，將參考實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。然而，這些實(shí)施例僅用于說明性目的，并且本發(fā)明的范圍不旨在受這些實(shí)施例的限制。實(shí)施例1-5：熱響應(yīng)性防粘連用組合物的制備使用如下表1中所述的組分和含量作為原料制備熱響應(yīng)性組合物。具體而言，將氯化鈉(NaCl)和透明質(zhì)酸(HA)依次溶解在超純水中，并用均化器攪拌。然后，以預(yù)定的比例和含量向其中加入泊洛沙姆(泊洛沙姆188/泊洛沙姆407，P188/407，重量比為4/6)，并使用均化器在20℃或更低溫度下溶解，以制備包括泊洛沙姆、透明質(zhì)酸和氯化鈉的熱響應(yīng)性組合物溶液。[表1]比較例1-5：熱響應(yīng)性防粘連用組合物的制備以與實(shí)施例1-5相同的方式制備熱響應(yīng)性組合物，除了各組分以如下表2所示的量使用。[表2]比較例6-10：使用多價(jià)離子的熱響應(yīng)性防粘連用組合物的制備以與實(shí)施例1-5相同的方式制備熱響應(yīng)性組合物，除了各組分以如下表3所示的量使用。[表3]實(shí)施例6-9：熱響應(yīng)性防粘連用組合物的制備以與實(shí)施例1-5相同的方式制備熱敏組合物，除了各組分以如下表4所示的量使用。[表4]實(shí)驗(yàn)例1：觀察熱響應(yīng)性防粘連用組合物是否生成沉淀觀察在實(shí)施例1-5和比較例1-5中制備的熱響應(yīng)性防粘連用組合物是否生成沉淀，結(jié)果示于表6。如表3所示，在實(shí)施例3至5的組合物，即包含1重量％、0.5重量％和0.25重量％的NaCl、透明質(zhì)酸和泊洛沙姆的組合物中沒有觀察到沉淀。相反地，在實(shí)施例1和2的組合物，即包含2重量％和1.5重量％的NaCl、透明質(zhì)酸和泊洛沙姆的組合物中觀察到沉淀。這些結(jié)果表明，當(dāng)包含透明質(zhì)酸、泊洛沙姆和NaCl的組合物中NaCl的混合比例大于1.5重量％時(shí)，形成透明質(zhì)酸和泊洛沙姆之間的強(qiáng)氫鍵和透明質(zhì)酸和泊洛沙姆內(nèi)部的強(qiáng)氫鍵，導(dǎo)致一些組合物的沉淀。[表6]存在或不存在沉淀存在或不存在沉淀實(shí)施例1存在比較例1不存在實(shí)施例2存在比較例2不存在實(shí)施例3不存在比較例3不存在實(shí)施例4不存在比較例4不存在實(shí)施例5不存在比較例5不存在實(shí)驗(yàn)例2：凝膠停留時(shí)間的測量將在實(shí)施例1-5和比較例1-5中制備的各組合物放入1ml小瓶中，并向其中加入1ml磷酸鹽緩沖溶液(pH7.4)。然后，在將小瓶儲存在37℃的培養(yǎng)箱中的同時(shí)將凝膠的表面層上的磷酸鹽緩沖溶液在預(yù)定時(shí)間每天除去一次，觀察殘余體積以測量凝膠停留時(shí)間。結(jié)果示于表7中。如表7所示，實(shí)施例3至5的凝膠停留時(shí)間為14天和10天，其比比較例的長。實(shí)施例1和實(shí)施例2由于生成沉淀而從觀察對象中排除。在實(shí)施例3至5的情況下，含一價(jià)陽離子的溶液的重量％分別為1w/w％、0.5w/w％和0.25w/w％。此外，在不含NaCl的比較例1的情況下，凝膠停留時(shí)間為8天，比實(shí)施例3至5的短。因此，發(fā)現(xiàn)含0.1重量％至小于1.5重量％的陽離子的溶液可以改善組合物的凝膠停留時(shí)間。這些結(jié)果表明，具有一定含量的一價(jià)陽離子的含聚環(huán)氧乙烷的共聚物/羧基多糖組合物增加了共聚物內(nèi)部的氫鍵、羧基多糖內(nèi)的氫鍵和共聚物與羧基多糖之間的氫鍵，從而提高了組合物的穩(wěn)定性。此外，參照比較例3和實(shí)施例3至5，證實(shí)了透明質(zhì)酸等羥基多糖的存在進(jìn)一步增加了組合物的凝膠停留時(shí)間。[表7]凝膠停留時(shí)間(天)凝膠停留時(shí)間(天)實(shí)施例1-比較例18實(shí)施例2-比較例22實(shí)施例314比較例36實(shí)施例414比較例41實(shí)施例510比較例55實(shí)驗(yàn)例3：確認(rèn)使用多價(jià)陽離子的熱響應(yīng)性防粘連用組合物是否生成沉淀和凝膠停留時(shí)間檢查在比較例6-10中制備的含多價(jià)陽離子的組合物是否生成沉淀和凝膠停留時(shí)間，結(jié)果示于表8中。如表8所示，觀察到在比較例6至10的組合物，即包含1重量％、0.5重量％、0.1重量％或0.05重量％的CaCl2、透明質(zhì)酸和泊洛沙姆的組合物中生成沉淀。相反地，在比較例10的組合物，即包含0.01重量％的CaCl2、透明質(zhì)酸和泊洛沙姆的組合物中沒有生成沉淀。根據(jù)如實(shí)驗(yàn)例2中的測量凝膠停留時(shí)間的方法觀察不生成沉淀的比較例10的組合物的結(jié)果為，比較例6-10的組合物顯示有與實(shí)施例6中不含一價(jià)陽離子的組合物類似的凝膠停留時(shí)間。這些結(jié)果表明使用二價(jià)陽離子CaCl2未改善凝膠停留時(shí)間。證實(shí)本發(fā)明的一價(jià)陽離子有效地提高含聚環(huán)氧乙烷的共聚物與羧基多糖聚合物之間的結(jié)合能力，從而提高凝膠穩(wěn)定性。[表8]存在或不存在沉淀凝膠停留時(shí)間比較例6存在-比較例7存在-比較例8存在-比較例9存在-比較例10不存在8實(shí)驗(yàn)例4：溶膠-凝膠相變溫度的測量測量實(shí)施例4和6-9中制備的組合物的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度。將各組合物放入小瓶中，將小瓶在約4℃的冰箱中儲存30min，然后將處于溶膠狀態(tài)的各樣品加入到50ml小瓶中。將小瓶放入循環(huán)水浴中，將當(dāng)水浴的溫度緩慢升高時(shí)組合物的粘度快速變化的溫度，即組合物的流動性消失的溫度確定為溶膠-凝膠相變溫度(LCST)。以相同的方式測量實(shí)施例4和6-9中制備的各組合物，結(jié)果示于表9。如表9所示，證實(shí)實(shí)施例6的組合物，即基于1重量％的最終組合物，包含0.09重量％以下的作為含聚環(huán)氧乙烷的共聚物的泊洛沙姆的組合物沒有顯示溶膠-凝膠相變。還證實(shí)實(shí)施例8的組合物，即基于1重量％的最終組合物，包含0.4重量％以上的作為含聚環(huán)氧乙烷的共聚物的泊洛沙姆的組合物在低于室溫的溫度下顯示出溶膠-凝膠相變。基于表9的結(jié)果，可以看出，根據(jù)為具有熱響應(yīng)性的作為含聚環(huán)氧乙烷的共聚物的泊洛沙姆的含量，在特定溫度下發(fā)生溶膠-凝膠相變。[表9]溶膠-凝膠相變溫度(℃)實(shí)施例6-實(shí)施例760實(shí)施例431實(shí)施例810實(shí)施例9-實(shí)驗(yàn)例5：動物中防粘連功效的試驗(yàn)使用給藥實(shí)施例3與比較例1-3和5的每種組合物的實(shí)驗(yàn)組和在傷口部位之間沒有加入材料而進(jìn)行縫合的對照組進(jìn)行動物試驗(yàn)(盲腸/腹壁擦傷大鼠模型)以評價(jià)防組織粘連功效。在動物試驗(yàn)中，使用每組5只SD大鼠(雌性)。首先，將氯胺酮(60-100mg/kg)和賽拉嗪(5-10mg/kg)混合，然后腹腔給藥該混合物以麻醉大鼠。將麻醉的大鼠的腹部剃毛并用聚維酮消毒，進(jìn)行4-5cm長的中線剖腹術(shù)。取出盲腸，并使用骨鉆在盲腸漿膜表面形成1cm×1cm的傷口，直到漿膜表面出血，并且使用15T刀片在相對的腹膜上形成相同大小的傷口，使得表皮剝離。兩個(gè)傷口部位相接，并且在對照組中未進(jìn)行任何處理，并然后連續(xù)地縫合腹膜和皮膚層。在實(shí)驗(yàn)組中，分別將1ml制備的防粘連用組合物(實(shí)施例3，比較例1-3，5)均勻地涂布在盲腸和腹壁的傷口表面，然后依次縫合腹膜和皮膚層。在手術(shù)10天后，檢查組織粘連程度。使用根據(jù)4級的組織粘連嚴(yán)重性(0、1、2、3的數(shù)字越大，粘連越嚴(yán)重)的粘連評價(jià)系統(tǒng)評價(jià)組織粘連的結(jié)果示于圖1中。如圖1所示，與比較例1-3和5相比，實(shí)施例3證實(shí)了顯著優(yōu)異的防粘連功效。此外，如實(shí)驗(yàn)例2的凝膠停留時(shí)間的結(jié)果所示，還證實(shí)了隨著凝膠停留時(shí)間的增加，防粘連效果更優(yōu)異。因此，證實(shí)包含作為含聚環(huán)氧乙烷的共聚物的泊洛沙姆和作為一種羧基多糖的透明質(zhì)酸以及作為一價(jià)陽離子的氯化鈉的組合物顯示10天以上的凝膠停留時(shí)間，并且在動物試驗(yàn)中也具有優(yōu)異的防粘連功效。當(dāng)前第1頁1 2 3