本發(fā)明涉及一種源自植物的預(yù)防或/和治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物及其制備方法，特別涉及一種預(yù)治療糖尿病合并冠心病的組合物及其制備方法，屬于食品、保健品和藥品領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：糖尿病(diabetesmellitus，DM)是一類(lèi)代謝性疾病，它的特征是血糖長(zhǎng)時(shí)間高于標(biāo)準(zhǔn)值。高血糖會(huì)造成三多一少的癥狀：吃多、喝多、尿多、以及體重下降。如果未經(jīng)治療，糖尿病可能引發(fā)許多并發(fā)癥。急性并發(fā)癥包括糖尿病酮酸血癥與高滲透壓高血糖非酮酸性昏迷；嚴(yán)重的長(zhǎng)程并發(fā)癥則包括心血管疾病、中風(fēng)、慢性腎臟病、糖尿病足、以及視網(wǎng)膜病變等。糖尿病的成因有二：胰臟無(wú)法生產(chǎn)足夠的胰島素，或者是細(xì)胞對(duì)胰島素不敏感。臨床上糖尿病則被分為三類(lèi)：(1)第一型糖尿病是由于身體無(wú)法生產(chǎn)足夠的胰島素，過(guò)去也被叫做胰島素依賴型糖尿病(insulin-dependentdiabetesmellitus,IDDM)或是青少年糖尿病，病因目前不明；(2)第二型糖尿病始于胰島素抵抗(細(xì)胞對(duì)于胰島素的反應(yīng)不正常)，隨著病情進(jìn)展胰島素的分泌亦可能漸漸變得不足。這個(gè)類(lèi)型過(guò)去被稱(chēng)為非胰島素依賴型糖尿病(noninsulin-dependentdiabetesmellitus,NIDDM)或成人型糖尿病，病因是體重過(guò)重或缺乏運(yùn)動(dòng)。也是發(fā)達(dá)國(guó)家的文明病之一，病人數(shù)不斷攀升；(3)妊娠糖尿病也是常見(jiàn)的糖尿病種類(lèi)，它指的是過(guò)去沒(méi)有糖尿病史，但在懷孕期間血糖高于正常值的孕婦身上。糖尿病本身不一定造成危害，但長(zhǎng)期血糖增高，大血管、微血管受損并危及心、腦、腎、周?chē)窠?jīng)、眼睛、足等，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，糖尿病并發(fā)癥高達(dá)100多種，是目前已知并發(fā)癥最多的一種疾病。糖尿病心臟病是糖尿病患者致死的主要原因之一，尤其是在2型糖尿病患者中。廣義的糖尿病心臟病包括冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)，糖尿病心肌病和糖尿病心臟自主神經(jīng)病變等。糖尿病心臟病與非糖尿病患者相比常起病比較早，糖尿病患者伴冠心病常表現(xiàn)為無(wú)痛性心肌梗死，梗死面積比較大，穿壁梗死多，病情多比較嚴(yán)重，預(yù)后比較差，病死率較高。如冠狀動(dòng)脈造影和臨床排除冠狀動(dòng)脈病變，糖尿病患者出現(xiàn)嚴(yán)重的心律失常心臟肥大肺淤血和充血性心力衰竭，尤其是難治性心力衰竭臨床可考慮糖尿病心肌病。糖尿病患者有70％～80％死于心血管并發(fā)癥，與非糖尿病患者相比，男性糖尿病患者心血管疾病死亡和充血性心衰發(fā)生的危險(xiǎn)性增加2倍，女性增高3倍。除了發(fā)生率和病死率增高之外，糖尿病患者冠狀動(dòng)脈損害的程度要明顯嚴(yán)重，冠狀動(dòng)脈造影和尸檢顯示糖尿病患者2～3支血管同時(shí)受損的發(fā)生率明顯高于非糖尿病對(duì)照組，且常呈現(xiàn)彌漫性病變。糖尿病伴有冠心病患者的冠狀動(dòng)脈病變更加嚴(yán)重，表現(xiàn)在病變的范圍更廣范，常為多支血管受累，每支血管彌漫性多處受累；冠狀動(dòng)脈多為嚴(yán)重狹窄，并且患糖尿病的時(shí)間越長(zhǎng)，狹窄程度更高。雖然糖尿病伴有冠心病患者的冠脈病變嚴(yán)重，但是糖尿病患者由于經(jīng)常合并神經(jīng)病變，疼痛的感覺(jué)減弱，所以常常沒(méi)有典型的冠心病心絞痛表現(xiàn)，而更多見(jiàn)無(wú)癥狀的心肌缺血、沒(méi)有征兆的心肌梗死，甚至猝死，對(duì)生命造成巨大的威脅，治療難度大、預(yù)后差。因此，糖尿病患者應(yīng)該警惕在不知不覺(jué)中發(fā)生并進(jìn)展的冠心病，做到早期預(yù)防、早期診斷、合理治療。糖尿病冠心病的預(yù)防通常采用如下方法：1)服用阿司匹林：抗血小板、抗凝、溶栓、擴(kuò)血管藥物治療；2)抗高血壓治療，嚴(yán)格控制血壓水平，努力將血壓控制在130/80mmHg以下；3)調(diào)脂治療，LDL≤2.6mmol/L；HDL>1.1mmol/L；TG≤1.7mmol/L；TC≤4.6mmol/L；4)控制血糖，控制空腹及餐后血糖；5)生活方式干預(yù)，積極改善生活方式，包括飲食、運(yùn)動(dòng)、心理以及戒煙等。目前應(yīng)用較多的治療糖尿病的藥物(口服降糖藥)共有五大類(lèi)，1)磺酰脲類(lèi)(SU)；2)雙胍類(lèi)(MET)；3)a-糖苷酶抑制劑；4)非磺脲類(lèi)促胰島素分泌劑；5)噻唑烷二酮類(lèi)(TZD)。其中：磺酰脲類(lèi)(SU)藥物的主要作用是刺激B細(xì)胞分泌胰島素，改善胰島素相對(duì)不足狀態(tài)。它還有胰外作用，可提高胰島素的敏感性。包括第一代的甲磺丁脲(D860)，第二代的格列苯脲(優(yōu)降糖)，格列比嗪(美吡達(dá))，格列齊特(達(dá)美康)，格列喹酮(糖適平)，第三代的格列美脲(亞莫利)等；雙胍類(lèi)(MET)藥物的主要作用是抑制肝輸出葡萄糖,也可提高胰島素敏感性。同時(shí)抑制腸葡萄糖吸收，他不刺激B細(xì)胞分泌胰島素。常用的有苯乙雙胍(降糖靈)和二甲雙胍(格華止，迪化糖錠)等；a-糖苷酶抑制劑主要作用不是刺激胰島素分泌，也不是增加胰島素的敏感性，而是抑制小腸a-糖苷酶的活性，延緩葡萄糖的吸收，降低餐后血糖，在一定程度上可提高胰島素敏感性。估計(jì)與降低血糖作用有關(guān)。常用的有：阿卡波糖(拜唐蘋(píng))，伏格列波糖(倍欣)等；非磺脲類(lèi)促胰島素分泌劑，又稱(chēng)苯酸衍生物(快速胰島素促泌劑)主要作用是刺激餐后胰島素分泌，不刺激餐前胰島素分泌，對(duì)肝糖輸出沒(méi)有影響，能有效模擬自然，恢復(fù)生理性胰島素分泌。早期(第一)相胰島素釋放的重建是控制餐后高血糖的有效手段。常用的有瑞格列奈(諾和龍)和那格列奈(唐力)；噻唑烷二酮類(lèi)(TZD)是有效和理想的胰島素增敏劑，是一類(lèi)特定作用于胰島素抵抗的抗糖尿病藥。與傳統(tǒng)藥物相比，其優(yōu)勢(shì)在于它能夠全面糾正代謝綜合癥的各種異常狀態(tài)，有效控制2型糖尿病及其心血管并發(fā)癥。常用的有馬來(lái)酸羅格列酮(文迪雅)及吡格列酮(艾汀)；UKPDS(英國(guó)前瞻性糖尿病研究)顯示，接受飲食治療以及接受磺脲類(lèi)或雙胍類(lèi)藥物強(qiáng)化治療的2型糖尿病患者，B細(xì)胞功能在逐漸減退，血糖控制越來(lái)越差。當(dāng)B細(xì)胞功能減退至藥物不能有效刺激其分泌正常量的胰島素時(shí)，應(yīng)及時(shí)使用胰島素治療，以保證其糖代謝狀態(tài)正常，對(duì)冠心病患者更是如此，可選擇的胰島素有三種類(lèi)型，短效胰島素，中效胰島素和長(zhǎng)效胰島素。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的主要目的是針對(duì)上述預(yù)防或/和治療糖尿病合并冠心病的保健品及中藥制劑的現(xiàn)有技術(shù)和產(chǎn)品存在的問(wèn)題，提供一種用于預(yù)防或/和治療糖尿病合并冠心病的藥物組合物及其制備方法。本發(fā)明組合物組方簡(jiǎn)單，使用的藥材，具有提高人體免疫能力，對(duì)糖尿病、冠心病以及糖尿病合并冠心病的預(yù)防、治療效果顯著，同時(shí)具有益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)、化瘀止痛的作用。本發(fā)明預(yù)防或/和治療糖尿病合并冠心病的藥物組合物的制備方法簡(jiǎn)便、生產(chǎn)工藝穩(wěn)定、價(jià)格低廉及便于攜帶和使用。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明一方面提供一種預(yù)防或/和治療糖尿病的組合物，包括如下原料藥：黃芪、地黃、丹參、赤芍、僵蠶。其中，所述原料藥的重量份配比為：黃芪5-40、地黃2-35、丹參5-35、赤芍5-35、僵蠶1-20；優(yōu)選為：生黃芪10-30、熟地黃10-30、丹參10-30、赤芍10-30、僵蠶3-10；進(jìn)一步優(yōu)選為黃芪20、地黃20、丹參20、赤芍20、僵蠶6。特別是，所述地黃選擇熟地黃；所述黃芪選擇生黃芪。本發(fā)明的藥物黃芪、地黃、丹參、赤芍、僵蠶組合使用，使得各藥物功效產(chǎn)生協(xié)同作用，從而能夠更有效地預(yù)防或/和治療糖尿病、冠心病、以及糖尿病并發(fā)癥糖尿病合并冠心病。黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，性溫、味甘，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌的功能，主要用于氣虛乏力，食少便溏，中氣下陷，久瀉脫肛，便血崩漏，表虛自汗，氣虛水腫，癰疽難潰，久潰不斂，血虛痿黃，內(nèi)熱消渴；慢性腎炎蛋白尿，糖尿病等。黃芪的化學(xué)成分為黃酮及黃酮甙：如毛蕊異黃酮、2’,4’二羥基-5，6-二甲氧基異黃酮、3-羥基-9，10-二甲氧基紫檀烷，黃芪皂甙Ⅰ、Ⅴ、Ⅲ；還含有大量的黃芪多糖以及β-谷甾醇、亞油酸、亞麻酸、膽堿、甜菜堿、氨基酸、蔗糖、葡萄糖醛酸及微量的葉酸等。黃芪的功用甚多，例如黃芪能使管狀血管和腎臟血管擴(kuò)張，并使全身末梢血管擴(kuò)張，皮膚循環(huán)暢盛，血壓下降；能加強(qiáng)心臟收縮，對(duì)衰竭的心臟有強(qiáng)心作用；黃芪具有降低血糖和抑菌的作用；能加強(qiáng)正常心臟收縮，對(duì)衰竭的心臟有強(qiáng)心作用；能使管狀血管和腎臟血管擴(kuò)張，并使全身末梢血管擴(kuò)張，皮膚循環(huán)暢盛，使高血壓患者血壓下降；能顯著降低成纖維細(xì)胞膠原合成速率，改善結(jié)締組織增生和血管硬化，增加血管彈性，提高供血量，從而使衰老機(jī)體的動(dòng)脈硬化癥狀得到改善。黃芪中的有效成分可改善充血性心力衰竭的左室構(gòu)型和射血功能，增加缺血心肌大鼠的心臟功能，不會(huì)加重缺血心肌的細(xì)胞損害，顯著增加心肌細(xì)胞膜鈣泵活性，增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而減少心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子的過(guò)多積聚。在對(duì)病毒感染的心肌細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)，黃芪注射液可抑制病毒感染細(xì)胞的L-型鈣通道電流的增加，減輕病毒對(duì)鈉鈣交換電流，并使鈉鈣交換電流的逆轉(zhuǎn)電位負(fù)移。而且黃芪總苷可增加病毒感染心肌細(xì)胞肌質(zhì)網(wǎng)鈣泵的mRNA的表達(dá)，并可提高肌質(zhì)網(wǎng)鈣泵的活力。黃芪多糖能明顯對(duì)抗氯化鋇誘發(fā)的大鼠心率失常和氯仿誘發(fā)的小鼠房顫，減慢心律。地黃為玄參科植物地黃的新鮮或干燥塊根，性寒，味甘、苦，入心、肝、腎經(jīng)。具有清熱涼血，養(yǎng)陰生津之功效，主要用于熱病舌絳煩渴，陰虛內(nèi)熱，骨蒸勞熱，內(nèi)熱消渴，吐血，衄血，發(fā)斑發(fā)疹。生地黃加黃酒蒸至黑潤(rùn)，為熟地黃。熟地黃：為不規(guī)則的塊片、碎塊，大小、厚薄不一。表面烏黑色，有光澤，粘性大。質(zhì)柔軟而帶韌性，不易折斷，端面烏黑色，有光澤。味甜。地黃的化學(xué)成分主要有環(huán)烯醚萜及其甙類(lèi)、糖、氨基酸、有機(jī)酸，甾醇、黃酮及維生素等。其中，甾醇類(lèi)主要有β-谷甾醇、豆甾醇、微量菜油甾醇；黃酮主要有木樨草素、圣草黃素；環(huán)烯醚萜及其甙主要包括梓醇、二氫梓醇、乙酰梓醇、益母草甙、桃葉珊瑚甙、單蜜特力甙、蜜特力甙、甾醇甙、環(huán)烯醚萜A、B、C、D、類(lèi)葉升麻甙、復(fù)合糖質(zhì)、腦苷脂、氯化環(huán)烯醚萜甙、地黃甙A、B、C、地黃苦甙等。熟地黃味甘、性微溫，歸肝、腎經(jīng)，有養(yǎng)血滋陰，補(bǔ)精益髓的功效，適用于肝腎陰虛，腰膝酸軟，骨蒸潮熱，盜汗遺精，內(nèi)熱消渴，血虛萎黃，心悸怔忡，月經(jīng)不調(diào)，崩漏下血，眩暈，耳鳴，須發(fā)早白。熟地為滋補(bǔ)肝腎的重要藥物，不僅能夠養(yǎng)血滋陰，而且能夠生精填髓。熟地黃可單用，或與當(dāng)歸配伍燉雞，用于血虛證或月經(jīng)不調(diào)；配黃芪、山藥、天冬，煎湯飲，用于消渴(糖尿病)；配枸杞子、菟絲子、覆盆子浸酒，用以補(bǔ)虛抗衰。一日可用15～30g。用法與注意與生地黃相似。丹參為唇形科植物丹參的干燥根及根莖，性寒、味苦，歸心、肝經(jīng)。具有活血祛瘀、安神寧心、消痛止痛的功效，主要用于治療心絞痛、月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、癓瘕積聚、胸腹刺痛、熱痹疼痛、肝脾腫大。丹參中含有脂溶性成分：丹參酮Ⅰ、ⅡA、ⅡB、異丹參酮Ⅰ、ⅡA、隱丹參酮、異隱丹參酮、甲基丹參酮、羥基丹參酮ⅡA、丹參新醌A、B、C、二氫異丹參酮Ⅰ、新隱丹參酮、去羥新隱丹參酮等；水溶性的酚性酸化合物：丹參酸A、B、C，丹參酚酸A、B、C、D、E、G，迷迭香酸，迷迭香酸甲酯，紫草酸單甲酯，紫草酸二甲酯，紫草酸乙酯，紫草酸，原兒茶醛，咖啡酸，異阿魏酸等。丹參具有抗腫瘤、抗心肌缺血、抗心梗、抗凝血、激活纖溶、穩(wěn)定紅細(xì)胞膜、抗肝肺纖維化、抗炎、抗菌、抗?jié)兒湍腿毖踝饔?。根?jù)實(shí)驗(yàn)研究證明，丹參能明顯降低尿素氮、肌酐甲基胍、胍基丁二酸的血清濃度，既改善了高磷酸血癥，又改善了血中游離氨基酸的晶型，有效促進(jìn)腎功能恢復(fù)。具有調(diào)整凝血纖溶，血小板系統(tǒng)的狀態(tài)，對(duì)冠狀動(dòng)脈循環(huán)有增加流量和擴(kuò)冠作用并能降低冠脈阻力，對(duì)心梗和心肌缺血有較強(qiáng)的保護(hù)作用，丹參有抑制凝血，激活纖溶，穩(wěn)定紅細(xì)胞膜的作用，并具有抗菌，抗炎和對(duì)臟器組織抗纖維化的作用。實(shí)驗(yàn)研究證明，丹參能明顯降低尿素氮、肌酐甲基胍、胍基丁二酸的血清濃度，既改善了高磷酸血癥，又改善了血中游離氨基酸的晶型，有效促進(jìn)腎功能恢復(fù)。丹參具有強(qiáng)心、擴(kuò)張冠脈和外周血管、抗血栓形成、改善微循環(huán)促進(jìn)組織的修復(fù)與再生作用。赤芍為毛茛科植物芍藥、草芍藥、川赤芍等的根，別稱(chēng)木芍藥、紅芍藥。赤芍性微寒、味酸、苦，歸肝、脾經(jīng)。具有清熱涼血，散瘀止痛的功能，主要用于溫毒發(fā)斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝郁脅痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕腹痛，跌撲損傷，癰腫瘡瘍。赤芍能清血分實(shí)熱，散瘀血留滯。本品功能與丹皮相近，故常與丹皮相須為用。但丹皮清熱涼血的作用較佳，既能清血分實(shí)熱，又能治陰虛發(fā)熱；而赤芍只能用于血分實(shí)熱，以活血散瘀見(jiàn)長(zhǎng)。赤芍主要含有芍藥甙，氧化芍藥甙，苯甲酰芍藥甙，白芍甙，芍藥甙無(wú)酮，沒(méi)食子酰芍藥甙，芍藥新甙，芍藥內(nèi)酯等，還含有β-谷甾醇，胡蘿卜甙，食子?；咸烟?，右旋兒茶精和揮發(fā)油，其中揮發(fā)油主要含苯甲酸，牡丹酚及其他醇類(lèi)和酚類(lèi)成分。芍藥甙在根中含量高，全在根皮部分?，F(xiàn)代藥理研究說(shuō)明赤芍具有如下壓力作用：1)抗血栓的作用，赤芍煎劑15-20g(生藥)/kg給大鼠灌胃,使血栓形成時(shí)間明顯延長(zhǎng),長(zhǎng)度縮短,重量減輕；凝血酶原時(shí)間和白陶土部分凝血活酶時(shí)間延長(zhǎng),優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間縮短,表明對(duì)血凝有顯著抑制作用。赤芍精(d-兒茶精，d-catechin)200mg/只灌服,每日1次,連續(xù)46日,使高脂飼料飼養(yǎng)的大鼠血小板聚集時(shí)間，血小板血栓形成時(shí)間和血栓形成時(shí)間顯著延長(zhǎng)，血栓長(zhǎng)度和濕重顯著低于對(duì)照組。赤芍精對(duì)高粘滯血冠心病患者也有改善血液流變性作用，使中、低切速下全血粘度降低，紅細(xì)胞電泳時(shí)間延長(zhǎng)，血小板聚集性降低；2)抗血小板聚集作用，赤芍提取物在體外對(duì)腎上腺素、二磷酸腺苷(ADP)、烙鐵頭蛇毒(TMVA)和花生四烯酸(AA)誘導(dǎo)的血小板聚集均有顯著抑制作用，并使血小板粘附與血小板第三因子活性降低，血小板內(nèi)cAMP含量升高。3)降血脂和抗動(dòng)脈硬化作用，赤芍浸膏片5g(生藥)/kg，每日服1次，連用10-15星期，使高脂血兔的血漿總膽固醇(Tch),三酰甘油(TG),低密度脂蛋白膽固醇(LDL-Ch)、極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-Ch)顯著降低；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-Ch)及HDL2-Ch顯著高于對(duì)照組；4)對(duì)心血管系統(tǒng)的影響，以0.2％赤芍注射液灌流大鼠離體心臟，使冠脈流量增加28.4％。給麻醉犬動(dòng)脈注射也使冠脈流量增加，靜脈注射除增加冠脈流量外，也使外周阻力降低，血壓下降；赤芍注射液1g/kg肌內(nèi)注射，對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺動(dòng)脈高壓兔有治療和預(yù)防作用，使肺血管擴(kuò)張、肺血流改善、肺動(dòng)脈壓降低，心輸出量增加，心功能改善。赤芍注射液對(duì)肺源性心臟病患者也有擴(kuò)張肺血管，降低肺動(dòng)脈壓和肺血管阻力，增加心輸出量，改善右心功能和血液流變性等作用。5)抗腫瘤作用赤芍正丁醇提取物(赤芍D)1～2g/kg腹腔注射,對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤的抑制率為31％-49％。6)保肝作用，赤芍注射液3.3mg/ml，1.67mg/ml和0.7mg/ml，對(duì)體外培養(yǎng)肝細(xì)胞的DNA合成有明顯促進(jìn)作用，對(duì)肝細(xì)胞再生和肝功能恢復(fù)有良好影響。赤芍注射液3.75g/kg靜脈注射，對(duì)D-半乳糖胺所致大鼠肝損傷有明顯保護(hù)作用，使動(dòng)物存活率增加，肝臟萎縮與丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶明顯低于對(duì)照組，F(xiàn)N(單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的主要調(diào)理素)高于對(duì)照組。保肝機(jī)制可能是提高大鼠血漿纖維聯(lián)結(jié)蛋白(PFN)的水平,從而增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能和加強(qiáng)調(diào)理素活性，以保護(hù)肝細(xì)胞，防止肝臟免疫損傷和促進(jìn)肝細(xì)胞再生。其他還有解痙；降壓、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗驚厥；抗炎、抗?jié)?；抗菌、解熱等藥理作用。僵蠶為蠶蛾科昆蟲(chóng)家蠶BombyxmoriLinnaeus.4～5齡的幼蟲(chóng)感染(或人工接種)白僵菌Beauveriabassiana(Bals.)Vuillant而致死的幼蟲(chóng)干燥體。性平，味咸、辛，歸肝、肺、胃經(jīng)。具有祛風(fēng)定驚，化痰散結(jié)之功效，主要用于驚風(fēng)抽搐，咽喉腫痛，皮膚瘙癢，頜下淋巴結(jié)炎，面神經(jīng)麻痹。僵蠶主要含蛋白質(zhì)，脂肪，還含多種氨基酸以及鐵、鋅、銅、錳、鉻等微量元素。白僵蠶體表的白粉中含草酸銨。僵蠶的醇水浸出液對(duì)小鼠、家兔均有催眠、抗驚厥作用；其提取液在體內(nèi)、外均有較強(qiáng)的抗凝作用；僵蠶粉有較好的降血糖作用；體外試驗(yàn)，對(duì)金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌有輕度的抑菌作用；僵蠶對(duì)移植性小鼠肉瘤S-180的生長(zhǎng)有抑制作用，其醇提取物體外可抑制人體肝癌細(xì)胞的呼吸，可用于直腸瘤型息肉的治療?，F(xiàn)代藥理研究還發(fā)現(xiàn)僵蠶具有抗凝、抗血栓、降糖、降脂等作用。僵蠶抗實(shí)驗(yàn)性靜脈血栓及作用機(jī)理的研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，僵蠶對(duì)凝血系統(tǒng)兩條途徑的凝血酶具有明顯的抑制作用，認(rèn)為僵蠶是通過(guò)抑制血液凝固、促纖溶活性而抑制血栓形成的。本發(fā)明的治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物中黃芪、生地補(bǔ)脾固腎，益氣養(yǎng)陰，一則使脾氣升，散精達(dá)肺，輸布津液以止渴，二則使腎氣固，封藏精微以縮尿，為君藥；赤芍、丹參、活血通絡(luò)，為臣藥；君臣相配，益氣養(yǎng)陰，生津布津(氣旺生津)；潤(rùn)燥止渴，活血通絡(luò)。僵蠶祛風(fēng)定驚，化痰散結(jié)，為佐使藥。本發(fā)明另一方面提供一種治糖尿病合并冠心病的藥物組合物的制備方法，包括如下進(jìn)行的步驟：1)按照以下重量份配比準(zhǔn)備原料藥：黃芪5-40、地黃2-35、丹參5-35、赤芍5-35、僵蠶1-20；2)將原料混合均勻后，對(duì)混合物進(jìn)行加熱提取，收集提取液；3)對(duì)提取液進(jìn)行濃縮處理，制得活性組分。其中，步驟1)中所述原料藥的重量份配比為：生黃芪10-30、熟地黃10-30、丹參10-30、赤芍10-30、僵蠶3-10；優(yōu)選為：黃芪20、地黃20、丹參20、赤芍20、僵蠶6。其中，步驟2)中所述加熱提取按照如下步驟進(jìn)行：A)將混合原料加入水浸泡，加入的水的重量與混合原料的重量之比為6-12：1，浸泡20-90min后進(jìn)行第一次煎煮處理，煎煮溫度為80-100℃，煎煮時(shí)間為2-5小時(shí)；B)將第一次提取液進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液；C)向?yàn)V渣中至少加入水1次，繼續(xù)進(jìn)行至少1次煎煮處理，其中，每次加入的水的重量與混合原料原料的重量之比為1-5：1，煎煮溫度為80-100℃，煎煮時(shí)間為1-3小時(shí)；D)過(guò)濾，將濾液合并，獲得所述的提取液。特別是，步驟A)中所述的浸泡時(shí)間優(yōu)選為30-60min，加入的水的重量與混合原料的重量之比優(yōu)選為6-9：1；步驟C)中加入的水的重量與混合原料的重量之比為1-3：1。其中，步驟3)中所述活性組分為濃縮浸膏。特別是，所述濃縮浸膏的的相對(duì)密度為1.05-1.5。其中，步驟3)中所述濃縮處理將提取液在真空狀態(tài)下進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮，濃縮溫度為80-100℃，優(yōu)選為80℃，濃縮時(shí)的相對(duì)壓力為-0.05～-0.1MPa，優(yōu)選為-0.05～-0.09MPa，進(jìn)一步優(yōu)選為-0.07MPa。本發(fā)明的用于治療或/和預(yù)防糖尿病的中藥組合物可以和藥劑學(xué)上可接受的輔料按傳統(tǒng)或現(xiàn)代生產(chǎn)工藝制成臨床可以接受的口服劑型。如膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、口服液等。所用的藥物輔料可以是選自《藥物賦形劑手冊(cè)》(HandbookofPharmaceuticalexcipients，第2版，由A.Wade和P.J.Weller編輯；AmericanPharmaceuticalAssociation出版，WashingtonandThePharmaceuticalPress,London,1994)等工具書(shū)中藥學(xué)上可接受的載體，例如淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維、明膠、蔗糖、硬脂酸鎂等。臨床上需要長(zhǎng)期用藥，制成固體制劑貯存方便，患者服用便利，也更適應(yīng)市場(chǎng)需求。優(yōu)選的劑型是膠囊劑、顆粒劑、片劑、丸劑、散劑、口服液等。本發(fā)明再一方面提供一種上述任一所述組合物在制備治療或/和預(yù)防糖尿病、冠心病、糖尿病合并冠心病藥物和/或保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的用于預(yù)防或/和治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物使用時(shí)，每天口服1-2次，每次3-6克(生藥)，孕婦禁止服用，用藥期間禁止食用辛辣食物以及飲酒，連續(xù)使用28天后，血糖降低，糖尿病合并冠心病心肌缺血癥狀得到改善，心電圖改善。本發(fā)明的和治療糖尿病并發(fā)癥(糖尿病合并冠心病)的組合物具有如下優(yōu)點(diǎn)：1、本發(fā)明的中藥組合物針對(duì)口渴尿多，困倦氣短，胸悶胸痛、脈虛細(xì)無(wú)力的糖尿病并發(fā)癥(糖尿病合并冠心病)的發(fā)病原因?qū)ΠY治療，本發(fā)明的中藥組合物由多種中藥成分復(fù)合而成，其中的藥物的活性成分，相互協(xié)同作用，直接針病因，針對(duì)糖尿病并發(fā)癥(糖尿病合并冠心病)的形成原因采取多環(huán)節(jié)綜合治療，從糖尿病、冠心病發(fā)病的源頭進(jìn)行醫(yī)治，治療效果快，作用迅速。2、本發(fā)明預(yù)防或/和治療糖尿病并發(fā)癥(糖尿病合并冠心病)組合物組方配伍科學(xué)，療效確切，安全性高，質(zhì)量可控；對(duì)陰津虧損、燥熱內(nèi)生、瘀血阻絡(luò)的糖尿病并發(fā)癥(糖尿病合并冠心病)的臨床療效顯著，降糖作用顯著，能夠明顯改善患者心肌缺血，使壓低的心電圖的ST段恢復(fù)正常，降低糖尿病患者臨床并發(fā)癥的產(chǎn)生。3、本發(fā)明制備的預(yù)防或/和治療糖尿病并發(fā)癥(糖尿病合并冠心病)的中藥組合物無(wú)毒副作用，制備工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定效果明顯，并且使用方便，填補(bǔ)了現(xiàn)有市場(chǎng)上的中成藥市場(chǎng)的不足。4、本發(fā)明用于預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥(糖尿病合并冠心病)的中藥組合物的制備方法簡(jiǎn)單，工藝條件溫和，成本低廉，費(fèi)用低，降低糖尿病并發(fā)癥的治療成本，節(jié)約臨床衛(wèi)生醫(yī)療成本，適宜市場(chǎng)推廣應(yīng)用，使更多患者從中獲益。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明試驗(yàn)大鼠心肌染色圖像(×200)；圖2為本發(fā)明試驗(yàn)例大鼠白細(xì)胞基因組DNA提取后的凝膠電泳圖；圖3為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)大鼠MTHFR基因C677T基因型PCR擴(kuò)增的凝膠電泳圖；圖4為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)大鼠MTHFR基因C677T基因型酶切后的凝膠電泳圖。具體實(shí)施方式以下通過(guò)試驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些試驗(yàn)例包括了本發(fā)明藥物的藥效學(xué)試驗(yàn)。這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的配方思路、用途范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。試驗(yàn)例11、試驗(yàn)材料1-1、藥品與試劑以實(shí)施例1中經(jīng)過(guò)干燥、粉碎并過(guò)篩制得藥物組合物干浸膏干粉進(jìn)行試驗(yàn)。陽(yáng)性對(duì)照藥：降糖舒膠囊(吉林省天泰藥業(yè)股份有限公司；規(guī)格：0.3g*60粒)。以上藥物用蒸餾水溶解，備用。1-2、試劑鏈脲佐菌素(STZ)：美國(guó)Sigma公司。實(shí)驗(yàn)前將鏈脲佐菌素溶于0.05M枸櫞酸冰浴緩沖鹽溶液中(pH＝4.2-4.3)配置成13mg/ml溶液，備用。1-3、試驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠(雄性，體重270.0±4.1g)，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物所。2、試驗(yàn)方法取健康SD大鼠，實(shí)驗(yàn)前禁食18小時(shí)，自由飲水，然后每日喂以大鼠特殊的高脂飼料(每克飼料含58％脂肪,25.6％碳水化合物,16.4％蛋白質(zhì),由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物所提供)，飼養(yǎng)4周后，給每只大鼠腹腔注射40mg/kg體重的鏈脲佐菌素(STZ)溶液。72小時(shí)后，測(cè)空腹血糖，高于11.1mmo1/L的SD大鼠，在潔凈無(wú)菌條件下采用冠脈結(jié)扎方法造模型大鼠，具體如下：用3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)行腹腔注射麻醉后將大鼠四肢及頭部仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部皮膚備皮消毒，胸骨上窩上正中切開(kāi)皮膚0.5cm，向上鈍性分離推開(kāi)下頜下腺，剪除氣管前肌肉，使氣管在沒(méi)有任何拉鉤牽引的情況下能充分顯露，徹底止血后于第2～3氣管環(huán)間行氣管橫行切開(kāi)，切口長(zhǎng)度不超過(guò)氣管周徑的1/3，擦干其內(nèi)分泌物后插入氣管插管，深度為0.5～1cm。連接空氣呼吸機(jī)進(jìn)行人工控制呼吸，呼吸頻率90次/分，潮氣量10～12ml，吸呼比設(shè)為1﹕1。左前胸去毛，消毒鋪巾，順肋間隙方向于胸骨左旁第3～4肋間切開(kāi)皮膚，長(zhǎng)約1cm，逐層分離皮下組織、肌肉，于2～3肋骨間撐開(kāi)進(jìn)胸，向右上方推開(kāi)胸腺，可暴露心臟及大血管根部，切開(kāi)心包，輕擠大鼠胸廓，將心臟擠出，在左心耳下緣與肺動(dòng)脈圓錐間可以看見(jiàn)左冠脈前降支起始部，用6-0Prolene線縫針，進(jìn)針深度控制在0.1cm，寬度為0.1～0.2cm(圖1)；回納心臟入胸廓，待動(dòng)物的數(shù)十次心動(dòng)周期后，收線打結(jié)；觀察數(shù)分鐘后，徹底止血后逐層關(guān)胸?；謴?fù)大鼠自主呼吸，撥出氣管內(nèi)插管，清除氣管內(nèi)分泌物，氣管切口及頸部切口開(kāi)放，不作縫合。術(shù)后肌肉注射青霉素鈉20萬(wàn)單位/d，連續(xù)5天抗感染。隨機(jī)挑選30只糖尿病合并冠心病模型大鼠，分為3組(試驗(yàn)組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組、模型組)，每組10只。其中試驗(yàn)組(即中藥組)的10只SD大鼠每日灌胃給予本發(fā)明藥物“降糖心絡(luò)通”4.5g/Kg；劑量為臨床用量的10倍，連續(xù)給藥8周；陽(yáng)性藥物對(duì)照組的10只SD大鼠每日灌胃給予陽(yáng)性對(duì)照藥物降糖舒膠囊4.5g/Kg；劑量為臨床用量的10倍，連續(xù)給藥8周；模型組的SD大鼠每日灌胃給予等體積生理鹽水，連續(xù)給藥8周。另取10只健康SD大鼠作為空白對(duì)照組(正常組)，空白對(duì)照組大鼠給予普通飼料，正常飲食，自由飲水。在其他SD大鼠造模后給予相應(yīng)藥物的試驗(yàn)階段，同樣每日灌胃給予等體積生理鹽水，連續(xù)8周。于給藥后2、4、6、8周測(cè)量大鼠體重、FBG(禁食4小時(shí)尾部取血,葡萄糖氧化酶法)；在實(shí)驗(yàn)的第0、4、8周末，禁食12小時(shí)，稱(chēng)重后股靜脈采血；喂養(yǎng)8周，并在采血后處死全部大鼠，無(wú)菌條件下取出心臟及主動(dòng)脈，心臟10％福爾馬林固定，主動(dòng)脈在凍存管內(nèi)液氮驟冷，-80℃保存。3、檢測(cè)方法以及檢測(cè)結(jié)果3-1、檢測(cè)對(duì)象①病理染色大鼠心底部橫斷面。②取靜脈血檢測(cè)：血糖及血脂的檢測(cè)，采用酶免法測(cè)定Hcy的濃度；③MTHFR基因型分析；④限制性酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；⑤電泳檢測(cè)。3-2、檢測(cè)方法觀察治療前后亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態(tài)性表達(dá)及血清同型半胱氨酸(Hcy)的變化。3-2-1、基因組DNA的提取選用天根公司的TIANampBloodDNAKit血液基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)提取基因組DNA。1).處理血標(biāo)本：從用EDTA抗凝的血標(biāo)本中吸取500μl抗凝血加入至1.5ml離心管中，往離心管中加入1000μl的細(xì)胞裂解液CL，充分混和均勻，靜置5分鐘，待紅細(xì)胞充分溶解后，11500rpm離心1分鐘，吸去離心管中的上清液，留下白細(xì)胞沉淀。2).重復(fù)上述步驟一次(細(xì)胞裂解液CL為800μl)，完成后，往離心管中收集到的白細(xì)胞沉淀中加200μl的緩沖液GS，振蕩至徹底混勻。3).向離心管中加入20μl的蛋白酶K，混勻。4).再往離心管中加入200μl的緩沖液GB，充分顛倒混勻，56℃水浴鍋放置10分鐘，期間顛倒混勻數(shù)次，直至溶液變清亮為止。5).向離心管中加入200μl的無(wú)水乙醇，可出現(xiàn)絮狀沉淀物，充分混勻。6).將所得的溶液和沉淀物都加入一個(gè)吸附柱CB3中，并將吸附柱CB3放入收集管中，12000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB3放回收集管中。7).向吸附柱CB3中加入500μl的緩沖液GD，12000rpm離心30秒，倒掉廢液，再將吸附柱CB3放回收集管中。8).向吸附柱CB3中加入600μl的漂洗液PW，12000rpm離心30秒，倒掉廢液，再將吸附柱CB3放回收集管中。9).重復(fù)步驟8)一次。10).將吸附柱CB3放入收集管中，12000rpm離心2分鐘，倒掉廢液。11).將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，徹底晾干吸附柱中殘余的漂洗液。12).將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入1.5ml無(wú)菌的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加100μl洗脫緩沖液TB，室溫放置5分鐘，12000rpm離心1分鐘，將溶液收集到離心管中。13).重復(fù)步驟12)一次，將收集到的溶液置于無(wú)菌離心管中，-20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?-2-2、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)3-2-2-1、基因組DNA的鑒定及定量①取用洗脫緩沖液TB溶解基因組DNA4μl加入1ml蒸餾水內(nèi)，充分混勻，加入比色杯。②在紫外分光光度計(jì)上，用蒸餾水作為對(duì)照物，測(cè)定基因DNA在260nm以及280nm處的吸光度，這兩處的波長(zhǎng)吸光度可以反映堿基共軛雙鍵和蛋白質(zhì)的含量。當(dāng)OD260/OD280的比值在1.8～2.0之間說(shuō)明DNA純度較高，樣品合格。當(dāng)比值＜1.8說(shuō)明有蛋白質(zhì)或酚污染，用上述方法進(jìn)行純化處理；比值＞2.0說(shuō)明RNA污染，需要使用RNA酶處理樣品。③含有5μg/ml的雙鏈DNA溶液在波長(zhǎng)為260nm的吸光度為1，因此樣品的實(shí)際DNA濃度為OD260×稀釋倍數(shù)250×50μg/ml。④根據(jù)實(shí)際測(cè)得的樣品DNA濃度，用緩沖液TB溶液將基因組DNA進(jìn)一步稀釋為0.1μg/ml的工作液備用。⑤選取一塊制備好的2.5％含有0.5μg/mlEB瓊脂糖凝膠塊，置于含有0.5×TBE緩沖液的電泳槽中，在凝膠塊加樣孔中加入3μl樣品基因DNA，用入膠前5V/cm，入膠后8V/cm的電壓進(jìn)行電泳，30分鐘后紫外燈下觀察提取的DNA純度和亮度。3-2-2-2、引物的涉及及配制在互聯(lián)網(wǎng)上搜索到的美國(guó)生物技術(shù)信息中心GenBank中的DNA原序列進(jìn)行比對(duì)的方法，來(lái)確保所要擴(kuò)增的目標(biāo)片段的正確無(wú)誤。MTHFR基因一對(duì)引物序列如下正義引物：5，-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3，反義引物：5，-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3，將引物配制成10μM的儲(chǔ)存液，-20℃冷凍保存?zhèn)溆谩CR反應(yīng)體系將0.5ml的Eppendorf管置于冰水浴中，在管中依次加入如下試劑將上述混合液體快速混勻并離心10秒后加入30μl液體石蠟油覆蓋在總反應(yīng)液的表層。在加Taq酶和10×PCRBuffer時(shí)，因?yàn)槔锩婧斜砻婊钚詣瑫?huì)使液體的表面張力增加，所以在每次加樣的時(shí)候均需要更換新的加樣吸液頭。PCR循環(huán)條件將含有混合反應(yīng)液的Eppendorf管置于PCR儀中，按表1所述條件進(jìn)行反應(yīng)：表1MTHFR基因擴(kuò)增的條件PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的基因型鑒定①取預(yù)先制備好的瓊脂糖凝膠，放入裝有0.5×TBE緩沖液的電泳槽中，緩沖液的液面超過(guò)瓊脂糖凝膠塊1mm。②用加液槍取1μl的10×溴酚藍(lán)溶液，滴在一塊平的毛玻璃上，再用加液槍取3μl的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物滴在10×溴酚藍(lán)溶液上，用加液槍反復(fù)混合，直至混勻(至少混合3次)。③用加液槍小心的把混合好的PCR產(chǎn)物加入到瓊脂糖凝膠塊的加樣孔中(注意加樣的時(shí)候，必須把瓊脂糖凝膠塊浸在緩沖液中，以免加樣出現(xiàn)不均勻)。④選擇一個(gè)合適的加樣孔，加入8μl的DNAMarker分子標(biāo)準(zhǔn)尺。⑤蓋上電泳蓋子，先讓加樣孔內(nèi)的樣品自然沉淀10分鐘，再跑電泳。⑥選擇好適合的電壓和電泳時(shí)間，先選用1-5V/cm的電壓(實(shí)際根據(jù)兩極間的距離來(lái)計(jì)算)，通電之后在正確接電極的前提下，電泳槽的負(fù)極會(huì)產(chǎn)生小氣泡，約5分鐘后可見(jiàn)溴酚藍(lán)向正極方向泳動(dòng)，約溴酚藍(lán)泳動(dòng)在瓊脂糖凝膠塊的中間靠正極方向左右的時(shí)候斷電。⑦取出瓊脂糖凝膠塊(注意取出時(shí)要戴好乳膠手套，因?yàn)槟z塊有EB)，將其放入紫外凝膠成像儀下觀察，用100bp的DNA梯度分子量標(biāo)準(zhǔn)物作為參照物。按電泳后的條帶分布情況來(lái)判斷擴(kuò)增產(chǎn)物是否為目標(biāo)產(chǎn)物，并拍照留存圖像。3-2-3、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切反應(yīng)MTHFR基因C677T基因型的酶切反應(yīng)體系：用限制性內(nèi)切酶HinfⅠ對(duì)擴(kuò)增后的MTHFR基因C677T分型進(jìn)行酶切消化。限制性核酸內(nèi)切酶HinfⅠ的酶切位點(diǎn)的選擇：5′…G↓ANTC…3′3′…CTNA↑G…5′選取一個(gè)無(wú)菌的200μl的Eppendorf管，在其中按秩序加入以下反應(yīng)液PCR反應(yīng)產(chǎn)物5μl10×BufferR，1μlHinfⅠ(10U/μl)0.5μl加滅菌雙蒸水8.5μl總體系15μl將混合好的反應(yīng)物在微型離心機(jī)上離心5秒后置于37℃的恒溫水浴鍋中，水浴5h。20液的表層。在加Taq酶和10×PCRBuffer時(shí)，因?yàn)槔锩婧斜砻婊钚詣?，?huì)使液體的表面張力增加，所以在每次加樣的時(shí)候均需要更換新的加樣吸液頭。3-2-4、酶切產(chǎn)物電泳和基因型的確定采用上述鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳的方法，用預(yù)先制備好的含有EB2.5％的瓊脂糖凝膠來(lái)檢測(cè)酶切產(chǎn)物片段，用0.5×TBE的緩沖液，在加樣孔中加入10μl的酶切產(chǎn)物，用100V的電壓進(jìn)行電泳60分鐘，結(jié)果在紫外凝膠成像儀下觀察，用100bp的DNA梯度分子量標(biāo)準(zhǔn)物作為參照物。按照酶切產(chǎn)物在電泳后的條帶分布情況來(lái)判斷各自不同的三種基因型，拍照留存圖像并分別逐個(gè)進(jìn)行標(biāo)記和詳細(xì)記錄。試驗(yàn)結(jié)果按照如下統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：①計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示；②計(jì)量資料均數(shù)的比較均需先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)；③對(duì)于符合正態(tài)分布的計(jì)量資料均數(shù)的兩兩比較用t檢驗(yàn)；三組或以上比較用方差分析。對(duì)于不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，先進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換或者平方根轉(zhuǎn)換基本滿足正態(tài)分布后再使用上述方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。假如還是不能滿足正態(tài)性分布的計(jì)量資料，且樣本量偏少、極性大，則采用非正態(tài)分布樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)來(lái)分析這些計(jì)量資料；④計(jì)數(shù)資料使用四格表或者R×C表的卡方(χ2)檢驗(yàn)。⑤基因型頻率分布和等位基因頻率分布用χ2檢驗(yàn)。⑥研究對(duì)象的基因型頻率分布用Excel表中的Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。⑦采用優(yōu)勢(shì)比評(píng)價(jià)相對(duì)危險(xiǎn)度，使用公式計(jì)算OR值，并通過(guò)卡方檢驗(yàn)和95％；可信區(qū)間(95％CI)評(píng)價(jià)OR的顯著性。以上的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用Excel2003和SPSS17.0等軟件進(jìn)行分析，以P＜0.05作為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。3-3、檢測(cè)結(jié)果3-3-1、大鼠體重變化實(shí)驗(yàn)期間，試驗(yàn)組大鼠體重隨時(shí)間明顯增加，精神狀況良好，毛皮有光澤，反應(yīng)靈敏。模型組大鼠均出現(xiàn)多飲、多食、多尿及消瘦等癥狀，毛皮雜亂、失去光澤，倦怠少動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，模型組有一只大鼠死于糖尿病胃輕癱。中藥組大鼠整體狀況雖不及正常組，但較模型組有所改善。大鼠體重檢測(cè)結(jié)果如表2所示。表2各組大鼠體重的變化結(jié)果注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01，與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01從表1可看出，0周(即未進(jìn)行藥物干預(yù)時(shí))，模型組與空白對(duì)照組、試驗(yàn)組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠體重比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，表示三組體重?zé)o差別；造模后的第4周，模型組與正常組、中藥組與正常組比較，體重均有差別，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，模型組、中藥組大鼠體重均比正常組減輕，且體重增長(zhǎng)幅度減緩；中藥組與模型組比較，體重亦有差別，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，中藥組體重較模型組有所增長(zhǎng)；第8周的趨勢(shì)與第4周基本相同。3-3-2、大鼠生化指標(biāo)的變化大鼠空腹血糖的變化如表3所示；大鼠餐后2h血糖變化如表4所示；大鼠甘油三酯變化如表5所示；大鼠總膽固醇變化如表6所示；大鼠高密度脂蛋白變化如表7所示；大鼠低密度脂蛋白變化如表8所示；大鼠同型半胱氨酸變化如表9所示。表3大鼠空腹血糖的變化結(jié)果注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01，與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01從表3可看出，0周(即造模后72小時(shí)，未進(jìn)行藥物干預(yù)時(shí))測(cè)定血糖，模型組和試驗(yàn)組血糖值均≥16.7mmol/L，符合糖尿病大鼠的診斷標(biāo)準(zhǔn)，兩組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；造模后的第4周，與空白組比較，模型組和試驗(yàn)組均呈高血糖狀態(tài)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，而模型組與試驗(yàn)組比較，血糖水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；第8周的趨勢(shì)與第4周基本相同。表4大鼠餐后2h血糖變化結(jié)果注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01，與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01表5大鼠甘油三酯變化結(jié)果注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01，與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01表6大鼠總膽固醇變化結(jié)果注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01，與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01表7大鼠高密度脂蛋白變化結(jié)果注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01，與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01表8大鼠低密度脂蛋白變化結(jié)果注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01，與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01表9大鼠同型半胱氨酸變化結(jié)果注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01，與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.013-3-3、大鼠心臟病理的變化如圖1A、B所示：空白對(duì)照組(正常組)大鼠心肌組織纖維纖細(xì)，分布比較均勻；模型組大鼠心肌縱切面可見(jiàn)粗大纖維排列紊亂，分布不均，甚至有肌纖維斷裂，并以8周組改變更為顯著，如圖1C、D；而試驗(yàn)組(中藥組)大鼠心肌纖維組織損害有所逆轉(zhuǎn)，如圖1E、F。3-3-4、PCR擴(kuò)增和酶切的結(jié)果(1)基因組DNA的提取結(jié)果對(duì)大鼠周?chē)喊准?xì)胞基因組DNA的提取，提取完成后用2.5％的瓊脂糖凝膠電泳予以證實(shí)提取結(jié)果，結(jié)果顯示提取成功，提取結(jié)果如圖2所示。(2)MTHFR基因C677T基因型PCR擴(kuò)增結(jié)果對(duì)大鼠提取的基因組DNA均進(jìn)行PCR定向擴(kuò)增，擴(kuò)增后用2.5％的瓊脂糖凝膠電泳予以證實(shí)擴(kuò)增結(jié)果，結(jié)果顯示擴(kuò)增成功，可見(jiàn)一條長(zhǎng)度為198bp的SNP條帶，凝膠電泳圖如圖3所示。(3)MTHFR基因C677T基因型酶切結(jié)果MTHFR基因C677T基因型酶切結(jié)果如圖4所示，酶切后用2.5％的瓊脂糖凝膠電泳予以證實(shí)酶切結(jié)果。根據(jù)電泳的結(jié)果，按照條帶分布有三種結(jié)果產(chǎn)生。CC野生純合子型：198bp單一的條帶；CT突變雜合子：一個(gè)198bp的條帶和一個(gè)175bp的條帶，還有一個(gè)23bp的條帶，因?yàn)樘《荒茱@影，但不影響結(jié)果的判斷；TT突變型純合子：175bp單一的條帶。3-3-5、MTHFR基因C677T多態(tài)性的分布空白對(duì)照組中檢出CC、CT和TT三種基因型，各基因型頻率分別為：30.0％、40.0％和30.0％；模型組中檢出CC、CT和TT三種基因型，各基因型頻率分別為：20.0％、40.0％和40.0％，本發(fā)明藥物試驗(yàn)組中檢出CC、CT和TT三種基因型，各基因型頻率分別為：40.0％、30.0％和30.0％。三組基因型頻率分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組CT和TT基因型頻率分布均高于試驗(yàn)組，MTHFR基因C677T多態(tài)性分布檢測(cè)結(jié)果如表10所示。表10MTHFR基因C677T多態(tài)性分布檢測(cè)結(jié)果3-3-6、MTHFR基因C677T等位基因頻率的分布空白對(duì)照組C等位基因的分布頻率為50.0％，T等位基因的分布頻率為50.0％；模型組C等位基因的分布頻率為40.0％，T等位基因的分布頻率為60.0％，試驗(yàn)組C等位基因的分布頻率為60.0％，T等位基因的分布頻率為40.0％。三組等位基因頻率分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，MTHFR基因C677T等位基因頻率的分布檢測(cè)結(jié)果如表11所示。表11MTHFR基因C677T等位基因頻率的分布3-3-7、MTHFR不同基因型血漿同型半胱氨酸平均水平的比較按基因型不同進(jìn)行血漿Hcy平均水平比較，結(jié)果顯示CC、CT和TT型者漿Hcy平均水平分別為(10.86±4.30)μmol/L、(13.44±5.26)μmol/L和(16.22±5.40)μmol/L，三組間血漿Hcy平均水平不等，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。TT基因型者血漿Hcy平均水平顯著高于CC型者和CT型，并且CT型者血漿Hcy平均水平又顯著高于CC型。所有入選者的血漿Hcy平均水平為(13.26±5.07)μmol/L。比較結(jié)果如表12所示。表12MTHFR不同基因型血漿同型半胱氨酸平均水平的比較結(jié)構(gòu)基因型Hcy值(μmol/L)CC組10.86±4.30CT組13.44±5.26TT組16.22±5.40合計(jì)13.26±5.073-3-8、三組相同基因型血漿Hcy水平的比較正常組攜帶CC型血漿Hcy平均水平為(12.24±4.36)μmol/L，模型組血漿Hcy平均水平13.57±6.02μmol/L，中藥組攜帶CC型血漿Hcy平均水平為(10.06±3.90)μmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；正常組攜帶CT型血漿Hcy平均水平為(14.41±5.16)μmol/L，模型組血漿Hcy平均水平的(12.39±4.90)μmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；模型組攜帶TT型血漿Hcy平均水平為(16.71±5.55)μmol/L高于同基因型對(duì)照者血漿Hcy平均水平的(15.43±4.93)μmol/L，但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。比較結(jié)果如表13。表13三組相同基因型血漿Hcy水平的比較結(jié)果試驗(yàn)例2本發(fā)明降低血糖組合物毒理試驗(yàn)(一)急性毒性試驗(yàn)將本發(fā)明的用于治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物顆粒劑對(duì)昆明小鼠灌服1000g(生藥)/kg。未出現(xiàn)任何毒性反應(yīng)，一周內(nèi)無(wú)動(dòng)物死亡。(二)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)將本發(fā)明的用于治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物丸劑對(duì)大鼠進(jìn)行長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，連續(xù)大劑量(成人劑量的100倍)灌胃給藥，給藥時(shí)間長(zhǎng)(90天)，以動(dòng)物給藥前后的一般表現(xiàn)、體重、攝食量、血液學(xué)及血清生化指標(biāo)、尿常規(guī)、骨髓分類(lèi)、臟器重量、臟器系數(shù)為檢測(cè)指標(biāo)，并輔以動(dòng)物各組織臟器的病理學(xué)檢查，綜合評(píng)價(jià)藥物的毒性情況。結(jié)果顯示大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)均正常。病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，大鼠各組織臟器未見(jiàn)異常。綜上所述：本發(fā)明的用于治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物毒性低，安全范圍廣，本發(fā)明用于治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物食用安全可靠。試驗(yàn)例3治療糖尿病合并冠心病的臨床療效觀察1、研究對(duì)象選擇門(mén)診和住院患者100例，隨機(jī)分為兩組。治療組50例，男性36例，女性14例；平均年齡(61.8±9.7)歲。對(duì)照組50例，男性34例，女性16例；平均年齡(60.2±10.3)歲。兩組年齡、性別差異無(wú)顯著性(P>0.05)。2、診斷標(biāo)準(zhǔn)糖尿病采用《實(shí)用內(nèi)科學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)；冠心病采用《臨床冠心病學(xué)》中有關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)：以心電圖或動(dòng)態(tài)心電圖改變(ST段下降0.5mV以上，T波平坦、倒置或抬高，心律失常，QRS間期增寬，Q-T間期延長(zhǎng)，U波倒置等)為主要指標(biāo)。中醫(yī)辨證參照《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》中胸痹心痛的診斷依據(jù)，辨證屬心氣虛弱型、心血瘀阻型。3、治療方法兩組均予合理膳食，適量運(yùn)動(dòng)，控制體重，戒煙限酒等。兩組均給予前期治療，包括糖尿病飲食、心電監(jiān)護(hù)、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、吸氧、抗血小板、抗凝、降壓、降脂等，上述情況基本穩(wěn)定后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，療程為2個(gè)月。對(duì)照組給予格列吡嗪7.5mg/d～30mg/d，分3次口服；二甲雙胍0.5g/d～1.5g/d，分3次口服；復(fù)方丹參片3片，每日3次，飯后服用。治療組服用本發(fā)明實(shí)施例1中制備的顆粒劑，每天3次，每次1袋，每袋顆粒劑內(nèi)含中藥提取物2克(相當(dāng)于8g生藥)，飯后溫開(kāi)水送服。4、觀察指標(biāo)(1)心電圖療效；(2)治療前后空腹血糖、血脂指標(biāo)；(3)不良反應(yīng)狀況。5、療效標(biāo)準(zhǔn)參照《臨床冠心病學(xué)》及《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》擬定。治愈：臨床癥狀基本消失，心電圖基本恢復(fù)正常。好轉(zhuǎn)：臨床癥狀明顯減輕，心電圖改變明顯改善。無(wú)效：臨床癥狀無(wú)明顯改善，心電圖無(wú)改變。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以(平均值±方差)表示，采用t檢驗(yàn)。7、結(jié)果7-1、臨床療效比較臨床療效比較結(jié)果如下：本發(fā)明中藥組合物治療組50例，治愈12例，好轉(zhuǎn)36例，無(wú)效2例，總有效率96％；對(duì)照組50例，治愈6例，好轉(zhuǎn)41例，無(wú)效3例，總有效率94％，兩組療效相類(lèi)似。7-2、兩組治療前后生化指標(biāo)比較兩組治療前后空腹血糖(FBS)、血脂指標(biāo)比較見(jiàn)表l4。結(jié)果顯示治療后治療組、對(duì)照組的各項(xiàng)指標(biāo)均得到改善，且效果優(yōu)于對(duì)照組，使用本發(fā)明的藥物組合物的治療組治療效果優(yōu)異。治療前后生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果如表14。表14兩組治療前后血糖、血脂比較(mmol/L，平均值±方差)8、結(jié)論使用本發(fā)明的藥物組合物治療糖尿病性冠心病，能夠明顯改善患者體內(nèi)的血糖水平，影響TC和TG，同時(shí)升高HDL-C，降低LDL-C。由于糖尿病性冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)與體內(nèi)各項(xiàng)指標(biāo)的狀況密切相關(guān)，使用本發(fā)明的藥物組合物能夠明顯升高HDL-C，降低LDL-C，改善患者血液狀況，從而降低了冠心病的發(fā)病率。實(shí)施例1本發(fā)明降糖心絡(luò)通顆粒制備1)按照以下配比稱(chēng)取原料(單位：×10g)黃芪20、地黃20、丹參20、赤芍20、僵蠶62)將藥材黃芪、地黃、丹參、赤芍、僵蠶漂洗后，置于中藥多功能提取釜中并混合均勻，加入自來(lái)水浸泡30min，其中，加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為9：1；3)開(kāi)啟多功能提取釜電源進(jìn)行加熱，加熱至100℃，保持在此溫度下恒溫提取3h，然后過(guò)濾，得到第一次提取液備用；加熱溫度不限于100℃，其他溫度均適用于本發(fā)明。4)向?yàn)V渣中加入自來(lái)水，加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為5：1，加熱提取，保持加熱溫度為100℃下提取3h，過(guò)濾得到第二次提取液；5)將2次提取液合并后置于真空高能蒸發(fā)濃縮器內(nèi)進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮，制得濃縮浸膏，其中，減壓濃縮的相對(duì)壓力為-0.07MPa(即以一個(gè)大氣壓為0，控制減壓濃縮時(shí)的壓力相對(duì)于一個(gè)大氣壓為-0.07MPa)，濃縮溫度為80℃，將2次提取液濃縮成相對(duì)密度為1.2的浸膏；6)濃縮浸膏于45-50℃下進(jìn)行干燥，粉碎后過(guò)180目篩，得干浸膏粉末；7)將干浸膏粉末與輔料糊精混合，乙醇作黏合劑，制粒，干燥，即制得本發(fā)明用于治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物(降糖心絡(luò)通顆粒)。實(shí)施例2本發(fā)明降糖心絡(luò)通膠囊制備1)按照以下配比稱(chēng)取原料(單位：×10g)黃芪10、地黃30、丹參10、赤芍30、僵蠶102)將藥材黃芪、地黃、丹參、赤芍、僵蠶漂洗后，置于中藥多功能提取釜中并混合均勻，加入自來(lái)水浸泡90min，其中，加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為6：1；3)開(kāi)啟多功能提取釜電源進(jìn)行加熱，加熱至80℃，保持在此溫度下恒溫提取4小時(shí)，然后過(guò)濾，得到第一次提取液備用；4)向?yàn)V渣中加入自來(lái)水，加熱提取1次，加熱提取過(guò)程中加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為5：1，加熱提取，保持加熱溫度為80℃下提取3h，過(guò)濾得到1次提取液；5)將2次提取液合并后置于真空高能蒸發(fā)濃縮器內(nèi)進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮，制得濃縮浸膏，其中，減壓濃縮的相對(duì)壓力為-0.07MPa(即以一個(gè)大氣壓為0，控制減壓濃縮時(shí)的壓力相對(duì)于一個(gè)大氣壓為-0.07MPa)，濃縮溫度為80℃，將3次提取液濃縮成相對(duì)密度為1.1的浸膏；6)將混合濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，并粉碎，制得用于降低血糖的中藥組合物干粉；7)將干浸膏粉末與輔料微晶纖維混合后，裝入明膠硬膠囊，制成本發(fā)明用于治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物(降糖心絡(luò)通膠囊)。實(shí)施例3本發(fā)明降糖心絡(luò)通片制備1)按照以下配比稱(chēng)取原料(單位：×10g)黃芪30、地黃10、丹參30、赤芍10、僵蠶32)將藥材黃芪、地黃、丹參、赤芍、僵蠶漂洗后，置于中藥多功能提取釜中并混合均勻，加入自來(lái)水浸泡20min，其中，加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為12：1；3)開(kāi)啟多功能提取釜電源進(jìn)行加熱，加熱至100℃，保持在此溫度下恒溫提取2小時(shí)，然后過(guò)濾，得到第一次提取液備用；4)向?yàn)V渣中分3次加入自來(lái)水，加熱提取3次，每次加熱提取過(guò)程中加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為1：1，加熱提取溫度為90℃，提取時(shí)間為1小時(shí)，過(guò)濾得到3次提取液；5)將4次提取液合并后置于真空高能蒸發(fā)濃縮器內(nèi)進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮，制得濃縮浸膏，其中，減壓濃縮的相對(duì)壓力為-0.095MPa(即以一個(gè)大氣壓為0，控制減壓濃縮時(shí)的壓力相對(duì)于一個(gè)大氣壓為-0.095MPa)，濃縮溫度為80℃，將3次提取液濃縮成相對(duì)密度為1.5的浸膏；6)濃縮浸膏于45-50℃下進(jìn)行干燥，粉碎后過(guò)100目篩，得干浸膏粉末；7)將干浸膏粉末與輔料糊精混合，乙醇制粒，干燥，壓片機(jī)壓片，即制得本發(fā)明用于治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物(降糖心絡(luò)通片)。實(shí)施例4本發(fā)明降糖心絡(luò)通口服液制備1)按照以下配比稱(chēng)取原料(單位：×10g)黃芪5、地黃2、丹參35、赤芍5、僵蠶202)將藥材黃芪、地黃、丹參、赤芍、僵蠶漂洗后，置于中藥多功能提取釜中并混合均勻，加入自來(lái)水浸泡60min，其中，加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為9：1；3)開(kāi)啟多功能提取釜電源進(jìn)行加熱，加熱至100℃，保持在此溫度下恒溫提取3小時(shí)，然后過(guò)濾，得到第一次提取液備用；4)向?yàn)V渣中分2次加入自來(lái)水，加熱提取2次，每次加熱提取過(guò)程中加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為5：1，加熱提取，保持加熱溫度為100℃下提取3小時(shí)，過(guò)濾得到2次提取液；5)將3次提取液合并后置于真空高能蒸發(fā)濃縮器內(nèi)進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮，制得濃縮浸膏，其中，減壓濃縮的相對(duì)壓力為-0.07Pa(即以一個(gè)大氣壓為0，控制減壓濃縮時(shí)的壓力相對(duì)于一個(gè)大氣壓為-0.07MPa)，濃縮溫度為100℃，將3次提取液濃縮成相對(duì)密度為1.1的浸膏；6)將濃縮液分裝于塑料復(fù)合膜包裝中，制成本發(fā)明用于治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物(降糖心絡(luò)通口服液)。實(shí)施例5本發(fā)明降糖心絡(luò)通丸制備1)按照以下配比稱(chēng)取原料(單位：×10g)黃芪40、地黃35、丹參5、赤芍35、僵蠶12)將藥材黃芪、地黃、丹參、赤芍、僵蠶漂洗后，置于中藥多功能提取釜中并混合均勻，加入自來(lái)水浸泡60min，其中，加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為6：1；3)開(kāi)啟多功能提取釜電源進(jìn)行加熱，加熱至80℃，保持在此溫度下恒溫提取5小時(shí)，然后過(guò)濾，得到第一次提取液備用；4)向?yàn)V渣中分2次加入自來(lái)水，加熱提取2次，每次加熱提取過(guò)程中加入的自來(lái)水的重量與藥材混合物的重量(干重)之比為4：1，加熱提取溫度為80℃，提取時(shí)間2小時(shí)，過(guò)濾得到2次提取液；5)將3次提取液合并后置于真空高能蒸發(fā)濃縮器內(nèi)進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮，制得濃縮浸膏，其中，減壓濃縮的相對(duì)壓力為-0.05MPa(即以一個(gè)大氣壓為0，控制減壓濃縮時(shí)的壓力相對(duì)于一個(gè)大氣壓為-0.05MPa)，濃縮溫度為100℃，將3次提取液濃縮成相對(duì)密度為1.3的浸膏；6)將混合濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，制得用于降糖組合物干浸膏干粉；7)將干浸膏粉末與輔料煉蜜混合，攪拌均勻后置于制丸機(jī)制中進(jìn)行制丸，然后干燥，即得本發(fā)明用于治療糖尿病合并冠心病的中藥組合物(降糖心絡(luò)通濃縮丸)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3