本發(fā)明屬于化妝品領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種新型用于護(hù)膚化妝品的益生菌活性物傳遞系統(tǒng)及其制備方法。

背景技術(shù)：

功能性化妝品的發(fā)展與功能性化妝品原料分不開(kāi)，而原料的開(kāi)發(fā)與生命科學(xué)的發(fā)展緊密相聯(lián)。隨著消費(fèi)者對(duì)護(hù)膚品的要求不斷提高，不僅有清潔、保濕等功能，還希望能祛皺、增強(qiáng)皮膚彈性，化妝品生產(chǎn)商開(kāi)始大量使用天然活性物。天然活性化妝品原料是指通過(guò)精細(xì)化工、生物化學(xué)技術(shù)，將具有獨(dú)特功能和生物活性的化合物從天然原料中提取分離后制成的化妝品原料。多年來(lái)，化妝品一直使用從石油中提煉、合成的原料，相比之下，來(lái)源于微生物發(fā)酵產(chǎn)物的原料不僅具有高安全性和微生物分解性，用很少的能源就可以生產(chǎn)，可以說(shuō)是一環(huán)保型的“可持續(xù)性原料”。不僅如此，這種原料還具有化學(xué)合成所無(wú)法完成的特殊結(jié)構(gòu)，在功能上有其獨(dú)到之處。

益生菌的概念由諾貝爾獎(jiǎng)獲得者伊力亞.梅契尼科夫(Elie Metchnikoff)首次提出的理論發(fā)展而來(lái)。益生菌是指經(jīng)口或其他粘膜途徑攝入，通過(guò)改善粘膜表面微生物或酶的平衡，刺激特異性或非特異性免疫機(jī)制而發(fā)揮作用的微生物制劑。2001年世界糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)也對(duì)益生菌做了如下定義：通過(guò)攝取適當(dāng)?shù)牧俊?duì)食用者的身體健康能發(fā)揮有效作用的活菌。人體內(nèi)對(duì)人有益的細(xì)菌主要有：乳酸菌，雙歧桿菌，酵母菌等。

最近由于益生菌科學(xué)的飛速發(fā)展、益生菌的功效從原有的促進(jìn)消化功能、到醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的防止過(guò)敏、癌癥、感染、改善膽固醇的代謝等。不僅僅通過(guò)改善腸內(nèi)道菌群的平衡來(lái)起到保健作用、而且益生菌對(duì)人或動(dòng)植物的直接作用十分明顯。益生菌不僅可以用在食品上、它的發(fā)酵產(chǎn)物在化妝品上也被廣泛應(yīng)用。

益生菌萃取液是指將益生菌破壁后將其中蛋白質(zhì)、核酸、維生素等抽提，再經(jīng)生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、維生素等天然活性成分的物質(zhì)。其中氨基酸含量30％以上，總蛋白50％以上，核苷酸10％以上。氨基酸是皮膚角質(zhì)層中自然保濕因子(NMF)的主要成分，易被皮膚吸收，使老化的表皮恢復(fù)彈性，延緩皮膚衰老。核酸及核苷酸是人體的主要遺傳物質(zhì)，具有促進(jìn)新陳代謝、提高蛋白質(zhì)合成速度等作用，增強(qiáng)免疫機(jī)能、增強(qiáng)SOD活性，提高皮膚抗自由基能力。此外，產(chǎn)品中少量的維生素和礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)元素還可以為皮膚提供充足的營(yíng)養(yǎng)。它是一種具有良好細(xì)胞賦活作用的獨(dú)特的化妝品原料。簡(jiǎn)單歸納，它具有 以下特點(diǎn)：

●具有抑制酪氨酸酶活性的作用。從而達(dá)到抑制黑色素，美白的效果；

●含有豐富的天然氨基酸中的各種營(yíng)養(yǎng)成分；

●細(xì)胞增殖作用；

●促進(jìn)創(chuàng)傷治愈作用；

●長(zhǎng)效保濕作用；

●換膚效果，加速老化角質(zhì)層細(xì)胞的更新?lián)Q代；

●符合FDA標(biāo)準(zhǔn)，具有良好的安生性和穩(wěn)定性。

益生菌發(fā)酵產(chǎn)物的成份和功能與益生菌種類和發(fā)酵培養(yǎng)基相關(guān)，常用于化妝品的益生菌有酵母、乳酸菌和芽孢桿菌等。牛乳則因?yàn)槠湄S富的營(yíng)養(yǎng)和功能組份，是最為常用的發(fā)酵培養(yǎng)基。為了提高益生菌發(fā)酵提取物的效果通常會(huì)在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加北美圣草等天然活性物成份，通過(guò)發(fā)酵可以將大分子活性物降解成小分子量組分或者轉(zhuǎn)化為活性更高、更有利于吸收的組份。

人體的皮膚有獨(dú)特的屏障功能，不是所有的物質(zhì)都能進(jìn)入皮膚，到達(dá)指定位置，發(fā)揮其作用，所以經(jīng)皮給藥傳遞越來(lái)越受到關(guān)注，也有越來(lái)越多的研究機(jī)構(gòu)在研發(fā)更多、更有效的傳遞活性物質(zhì)的技術(shù)。功能化妝品中具有功效的活性物質(zhì)經(jīng)皮膚吸收，發(fā)揮其作用是經(jīng)皮給藥的一個(gè)典型例子。這些活性物質(zhì)的傳遞需要借助一定的匹配手段，最傳統(tǒng)、最簡(jiǎn)單的方法就是將活性成分直接添加到膏霜、乳液、凝膠和香波等各種化妝品體系當(dāng)中。但采用以上這些傳統(tǒng)的載體，活性物質(zhì)的功效往往難以充分發(fā)揮，而且對(duì)于功效要求更高，且含有不穩(wěn)定的活性成分，如維生素和過(guò)氧化物等，這種簡(jiǎn)單方式也不能滿足要求。隨著人們對(duì)化妝品的安全性以及功效性要求的日益提高，化妝品的研發(fā)技術(shù)也在不斷地改進(jìn)和提高，這促進(jìn)了不同于傳統(tǒng)膏霜的新型化妝品的問(wèn)世。近代一些化學(xué)家借助醫(yī)藥學(xué)一些理論和試驗(yàn)，將最初應(yīng)用于醫(yī)藥學(xué)的載體系統(tǒng)、緩釋理念和包裹技術(shù)應(yīng)用于化妝品。領(lǐng)域，以增強(qiáng)產(chǎn)品的功效性，提高產(chǎn)品的穩(wěn)定性，改善產(chǎn)品外觀。傳遞系統(tǒng)(Delivery System)是傳遞有功效的活性物質(zhì)到皮膚，這些物質(zhì)穿過(guò)脂質(zhì)屏障，到達(dá)其作用的目標(biāo)位置。一個(gè)好的功效產(chǎn)品，其中的活性物能否傳遞成功，關(guān)鍵就在于選擇什么樣的傳遞系統(tǒng)。一個(gè)有效的傳遞系統(tǒng)能幫助提升一個(gè)產(chǎn)品的性能，也可以減少達(dá)到期望結(jié)果的活性物的用量。磷脂分子含有強(qiáng)極性的磷酸基團(tuán)和非極性的長(zhǎng)碳?xì)滏溄Y(jié)構(gòu)，具有兩親性。將其分散于水中時(shí)，會(huì)形成一種由磷脂雙分子膜包裹水相的單層或多層的微囊。磷脂微囊的雙分子膜可包裹脂溶性物質(zhì)，其中心和各雙分子膜之間可分別包裹水溶性成分和脂溶性成份。磷脂微囊可以作為功效物質(zhì)的載體，提高活性物的穩(wěn)定性，并促進(jìn)透皮吸收。由于磷脂微囊的粒徑小，比表面積大，因而表現(xiàn)出獨(dú)特的性能。采用 磷脂微囊技術(shù)對(duì)化妝品進(jìn)行處理，可使活性物質(zhì)功效得到充分發(fā)揮，大大提高化妝品的性能。磷脂微囊能增加角質(zhì)層濕化和水合作用，使角質(zhì)細(xì)胞間結(jié)構(gòu)改變，使其脂質(zhì)雙層中疏水性尾部排列紊亂，活性物通過(guò)擴(kuò)散等作用進(jìn)入細(xì)胞間質(zhì)。磷脂酰膽堿含量高的磷臘微囊深入皮膚后可使皮膚水分增加40％，而水分本身就是很好的促滲劑。磷脂微囊還可經(jīng)皮脂腺、汗腺甚至毛囊直接進(jìn)入皮膚下層，達(dá)到透皮作用。磷脂微囊粒徑在200納米以下，粘附效應(yīng)很強(qiáng)，在皮膚上可形成很好閉合效應(yīng)(Occlusion Effect)，增加皮膚保濕性能，從而起到保濕、祛皺和抗衰老等美容效果。磷脂微囊可以同時(shí)將水溶性和脂溶性活性物包裹在一起，使其發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，提高其功效。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本專利提供的是基于磷脂微囊的一種專用護(hù)膚化妝品的益生菌活性物傳遞系統(tǒng)，主要由前磷脂微囊、益生菌發(fā)酵萃取液以及緩沖液等組份構(gòu)成，通過(guò)特定的工藝制備而成。以公認(rèn)安全(美國(guó)GRAS認(rèn)證)的原材料進(jìn)行磷脂微囊包裹加工處理得到的新型化妝品活性物原料具有良好的生物相容性。

前磷脂微囊主要由磷脂、一元醇、水組成，本發(fā)明所用前磷脂微囊為浦瑞生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司(PuriBio)產(chǎn)品，其中所用磷脂為天然來(lái)源的磷脂酰膽堿。

益生菌活性物由三種益生菌發(fā)酵萃取物按照特定比例組合而成，包括酸乳提取物、啤酒酵母萃取液和乳酸菌北美圣草萃取液，三者比例通常為1∶2∶3，該比例亦可根據(jù)產(chǎn)品需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整優(yōu)化。制備時(shí)將前磷脂微囊、益生菌發(fā)酵萃取液和緩沖液三者在室溫下混合，高速剪切乳化即可得，不需要進(jìn)行加熱處理，可以更好保持益生菌活性物活性。

添加到化妝品可以起到抑制黑色素生成、細(xì)胞增殖、促進(jìn)創(chuàng)傷治愈、長(zhǎng)效保濕和加速老化角質(zhì)層細(xì)胞的更新?lián)Q代等功效。

用本方法制備的益生菌萃取液磷脂微囊具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1.)制備方法簡(jiǎn)便，不需要高溫處理；2.)生物相容性好，無(wú)刺激性，產(chǎn)品安全性高；3.)儲(chǔ)存期間保持穩(wěn)定；4.)產(chǎn)品可以用于膏霜、乳液和啫喱等化妝品中。

益生菌萃取液磷脂微囊中，前磷脂微囊重量體積百分比0.1～30％，益生菌萃取液重量體積百分比0.01～50％。本發(fā)明中，選擇組氨酸緩沖液、磷酸緩沖液、醋酸緩沖液、檸檬酸緩沖液及其組合溶液，或者其他藥物可接受緩沖系統(tǒng)作為緩沖系統(tǒng)，濃度為0.0001mol/L-0.2mol/L，溶液pH控制在3-8。酸堿調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉、鹽酸、醋酸、檸檬酸或其他藥物可接受酸或者堿。

本發(fā)明提供一種益生菌活性物(萃取液)磷脂微囊的制備方法，包括以下步驟：

(1)益生菌活性物溶液的制備：稱取酸乳提取物，用弱酸性緩沖液溶解、過(guò)濾得到上清液，加入準(zhǔn)確稱取的啤酒酵母萃取液和乳酸菌北美圣草萃取液，攪拌使其混合均勻，調(diào)節(jié)pH至5.0～6.5；

(2)緩沖液的制備：準(zhǔn)確稱取所需量緩沖鹽，加入純化水，攪拌，調(diào)節(jié)pH至5.0～6.5，即得；

(3)磷脂微囊制備：按照處方量準(zhǔn)確稱前磷脂微囊和取益生菌活性物溶液，高速剪切攪拌使其混合均勻，然后在高速攪拌下將所得混合液加入處方量所需緩沖液中，高速剪切攪拌，即得粒徑在10-500nm益生菌活性物磷脂微囊。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

準(zhǔn)確稱取乳酸(中糧集團(tuán))155mg，將其溶于適量純水，攪拌溶解完全，調(diào)節(jié)pH6.5，定容至100ml。稱取酸乳提取物(德州昂立達(dá))0.5g，用4.5ml 10mM pH3.5檸檬酸將其溶解，充分?jǐn)嚢瑁秒p層濾紙將其過(guò)濾，取上清液，用檸檬酸鈉溶液將其pH調(diào)制6.5。分別稱取啤酒酵母萃取液(安琪酵母)和乳酸菌北美圣草萃取液(Active Concepts)10g和15g，與酸乳提取物上清混合，高速剪切攪拌均勻，即得益生菌活性物溶液。稱取前磷脂微囊(浦瑞生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，PuriBio)20g，將其與益生菌活性物溶液混合均勻，高速攪拌下緩慢注入50g組氨酸緩沖液中，高速剪切攪拌，即得平均粒徑為100nm的益生菌活性物磷脂微囊。

實(shí)施例2

皮膚刺激性試驗(yàn)

選取健康無(wú)皮膚損傷新西蘭家兔6只，體重2.5±0.3kg，每組3只，在試驗(yàn)前24h給家兔背部中間脊柱兩側(cè)的皮膚脫毛，每側(cè)脫毛區(qū)以2cm×3cm左右為宜，一側(cè)裸露皮膚皮膚涂抗微生物納米組合益生菌活性物磷脂微囊物0.5g，并覆蓋紗布，用膠帶固定；另一側(cè)皮膚涂以等量蒸餾水作對(duì)照，敷藥時(shí)間為4h。涂藥4h后，以溫?zé)嵘睇}水清洗兩側(cè)給藥部位，分別于清除受試物1、24和48h后觀察涂藥部位皮膚反應(yīng)。結(jié)果顯示，各個(gè)觀察期內(nèi)兩側(cè)皮膚均未出現(xiàn)紅斑或水腫，對(duì)皮膚刺激性反應(yīng)積分值為0，表明益生菌活性物磷脂微囊對(duì)皮膚無(wú)刺激作用。