本發(fā)明涉及如本文所述和定義的通式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于預(yù)防和/或治療將要、正在或已經(jīng)接受化療藥物治療的對(duì)象中血細(xì)胞減少的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：對(duì)于腫瘤性疾病的治療，已有大量化療藥物被推薦使用。但是，化療藥物往往是非特異性的并且對(duì)正常的細(xì)胞具有毒性?；熕幬镌诮邮芑煹幕颊咧型ǔ．a(chǎn)生各種副作用。骨髓抑制是化療藥物的主要副作用之一。在臨床上，接受化療的患者的骨髓造血系統(tǒng)極易受到損傷，具體表現(xiàn)為諸如外周血白細(xì)胞數(shù)量降低，中性粒細(xì)胞數(shù)量降低和/或血小板減少。目前臨床上采用一些化療保護(hù)劑來(lái)減輕化療藥物的副作用，特別是化療導(dǎo)致的中性粒細(xì)胞減少癥和血小板減少癥。臨床上常見(jiàn)的化療保護(hù)劑包括諸如粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和血小板生成素(TPO)等。但是，G-CSF和GM-CSF可以增大繼發(fā)性骨髓病癥例如白血病和骨髓異常增生的后期風(fēng)險(xiǎn)(在治療后＞2年)。TPO在癌癥患者中可引起血小板數(shù)量的異常升高，致使血栓形成和死亡增加?？紤]到上述方法的這些缺陷，仍然需要開發(fā)新的化療保護(hù)劑，特別是能夠提高接受化療的對(duì)象中血細(xì)胞數(shù)量，諸如白細(xì)胞、血小板和紅細(xì)胞數(shù)量的化療保護(hù)劑。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種能夠提高接受化療的對(duì)象中血細(xì)胞數(shù)量的化合物。本發(fā)明涉及通式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于預(yù)防和/或治療將要、正在或已經(jīng)接受化療藥物治療的對(duì)象中血細(xì)胞減少的藥物中 的用途：其中：R1、R2和R3可以相同或者不同，且分別獨(dú)立地表示H或者C1-C3烷基。在一個(gè)實(shí)施方式中，R1和R3分別獨(dú)立地表示H或甲基；和R2為H。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物選自以下組中：和在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥學(xué)上可接受的鹽選自鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽和銨鹽。在一個(gè)實(shí)施方式中，血細(xì)胞減少為白細(xì)胞減少癥或血小板減少癥。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述白細(xì)胞減少癥為粒細(xì)胞缺乏癥。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述對(duì)象選自患有以下腫瘤的對(duì)象：肺部腫瘤、 胃腸道腫瘤、鼻咽部腫瘤、泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤、頭頸部腫瘤癌、甲狀腺腫瘤、乳腺腫瘤、肉瘤、白血病和淋巴腫瘤。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述對(duì)象選自患有以下疾病的對(duì)象：骨髓增生異常綜合征、骨髓增殖性疾病和自身免疫性疾病。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述化療使用選自以下的化療藥物：美法侖(melphalan)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、氧氮磷雜環(huán)己烯(oxazaphosphorine)、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、沙鉑(satraplatin)、四鉑(tetraplatin)、異丙鉑(iproplatin)、絲裂霉素(mitomycin)、鏈佐星(streptozocin)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、白消安(busulfan)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、鏈佐星(streptozocin)、噻替派(thiotepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氮芥、阿糖胞苷(cytarabine)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、培美曲塞(pemetrexed)、替加氟(tegafur)、尿嘧啶(uracil)、尿嘧啶氮芥(uracilmustard)、氟達(dá)拉濱(fludarabine)、吉西他濱(gemcitabine)、卡培他濱(capecitabine)、巰嘌呤(mercaptopurine)、克拉屈濱(cladribine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、甲氨喋呤(methotrexate)、噴司他丁(pentostatin)、羥基脲(hydroxyurea)、紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)、泰索帝(taxotere)、諾維本(navelbine)、長(zhǎng)春堿(vinblastin)、長(zhǎng)春新堿(vincristin)、長(zhǎng)春地辛(vindesine)、長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)、秋水仙堿(colchicine)、癥登素(maytansine)、柄型菌素(ansamitocin)、根霉素(rhizoxin)、擬莖點(diǎn)霉毒素(phomopsin)、朵拉司他汀(dolastatin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、斯的甘辛(steganacin)、考布他汀(combretastatin)、安非替尼(amphetinile)、丙卡巴肼(procarbazine)、喜樹堿(camptothecin)、依立替康(irinotecan)、干擾素、白介素、瓦他拉尼(vatalanib)、SU-5416、SU-6668、SU-11248、SU-14813、AZD-6474、CI-1033或GW-2016、易瑞沙(iressa)、特羅凱(tarceva)、PKI-166、EKB-569、HKI-272、赫賽汀(herceptin)和阿泊利單抗(apolizumab)。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物通過(guò)皮下注射或肌肉注射施用。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物間隔或連續(xù)施用，每天施用一次或多次，施用劑量為1～100mg/kg/d，優(yōu)選5～40mg/kg/d，例如10mg/kg/d。附圖說(shuō)明圖1rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP對(duì)環(huán)磷酰胺化療小鼠化療后第5天外周血白細(xì)胞生成的影響。圖2rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP對(duì)環(huán)磷酰胺化療小鼠化療后第7天外周血白細(xì)胞生成的影響。圖3rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP對(duì)環(huán)磷酰胺化療小鼠化療后第10天外周血血小板生成的影響。圖4δ-T3HP對(duì)環(huán)磷酰胺化療獼猴外周血白細(xì)胞數(shù)量的影響。圖5δ-T3HP對(duì)環(huán)磷酰胺化療獼猴外周血中性粒細(xì)胞細(xì)胞數(shù)量的影響。圖6δ-T3HP對(duì)環(huán)磷酰胺化療獼猴外周血單核細(xì)胞數(shù)量的影響。圖7δ-T3HP對(duì)環(huán)磷酰胺化療獼猴外周血血小板數(shù)量的影響。圖8δ-T3HP對(duì)環(huán)磷酰胺化療獼猴外周血紅細(xì)胞數(shù)量的影響。圖9δ-T3HP對(duì)環(huán)磷酰胺化療獼猴外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量的影響。具體實(shí)施方式第一方面，本發(fā)明涉及用于預(yù)防和/或治療將要、正在或已經(jīng)接受化療藥物治療的對(duì)象中血細(xì)胞減少的通式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中：R1、R2和R3可以相同或者不同，且分別獨(dú)立地表示H或者C1-C3烷基。在本文中所提及的術(shù)語(yǔ)優(yōu)選具有以下含義：術(shù)語(yǔ)“C1-C3烷基”是指具有1、2或3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的、飽和的一價(jià)烴基，包括甲基、乙基、正丙基和異丙基。特別地，C1-C3烷基選自甲基和乙基，優(yōu)選甲基。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括上文所述的通式(I)的化合物，其中R1和R3分別獨(dú)立地表示H或甲基，且R2為H。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物選自以下組中：和在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括上文所述的通式(I)的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述藥學(xué)上可接受的鹽選自鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽和銨鹽。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥學(xué)上可接受的鹽選自鈉鹽。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明包括下述化合物：本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽具有良好的穩(wěn)定性和水溶性。第二方面，本發(fā)明涉及第一方面的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于預(yù)防和/或治療將要、正在或已經(jīng)接受化療藥物治療的對(duì)象中血細(xì)胞減少的藥物中的用途。術(shù)語(yǔ)“對(duì)象”是指包括人和非人的哺乳動(dòng)物，包括但不限于人、豬、狗、兔子、猴子、貓等。本發(fā)明的對(duì)象選自患有腫瘤的對(duì)象，所述腫瘤的定義及分類可參見(jiàn)如由世界衛(wèi)生組織(WHO)制定的腫瘤組織學(xué)分類第二版 (1989-2000年)。本發(fā)明的對(duì)象還包括患有以下疾病的對(duì)象：包括但不限于骨髓增生異常綜合征(MDS)，如難治性血細(xì)胞減少伴單系病態(tài)造血(RCUD)、難治性貧血(RA)、難治性中性粒細(xì)胞減少(RN)、難治性血小板減少(RT)、難治性貧血伴環(huán)狀鐵粒幼細(xì)胞(RARS)、難治性血細(xì)胞減少伴多系病態(tài)造血(RCMD)、難治性貧血伴原始細(xì)胞增多-1(RAEB-1)、難治性貧血伴原始細(xì)胞增多-2(RAEB-2)、MDS-未分類(MDS-U)、MDS伴單純5q-；骨髓增殖性疾病(MPD)，如真性紅細(xì)胞增多癥、慢性粒細(xì)胞性白血病(CML)、原發(fā)性血小板增多癥、原發(fā)性骨髓纖維化癥；和某些自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎、硬皮病、天皰瘡、皮肌炎、混合性結(jié)締組織病、自身免疫性溶血性貧血、甲狀腺自身免疫病、潰瘍性結(jié)腸炎。在一個(gè)實(shí)施方式中，對(duì)象還包括患有再生障礙性貧血的對(duì)象。術(shù)語(yǔ)“血細(xì)胞”是指血液中紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的統(tǒng)稱。紅細(xì)胞來(lái)源于骨髓的造血多能干細(xì)胞，網(wǎng)織紅細(xì)胞是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，其在周圍血液中的數(shù)值可反映骨髓紅細(xì)胞的生成功能。白細(xì)胞主要包括嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，其中嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞所占的比例較大。健康人群中白細(xì)胞的數(shù)量通常為4.0～10.0×109/L，其中嗜中性粒細(xì)胞的數(shù)量通常為2.0～7.5×109/L，單核細(xì)胞的數(shù)量通常為0.2～0.77×109/L。健康人群中血小板的數(shù)量通常為100～300×109/L。圖1-3分別顯示了本發(fā)明的化合物對(duì)接受環(huán)磷酰胺化療的小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量和血小板數(shù)量的影響。圖4-9分別顯示了本發(fā)明的化合物對(duì)接受環(huán)磷酰胺化療的獼猴外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板、紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量的影響。血細(xì)胞減少(hypocytosis)是化療藥物引用的常見(jiàn)不良反應(yīng)，通常以白細(xì)胞減少和/或血小板減少最為明顯。成人外周血白細(xì)胞數(shù)持續(xù)低于3.5×109/L，稱為白細(xì)胞減少癥；嚴(yán)重的白細(xì)胞減少可導(dǎo)致對(duì)象外周血中性粒細(xì)胞數(shù)量顯著下降，當(dāng)外周血中性粒細(xì)胞絕對(duì)值在成人低于2×109/L時(shí)，可診斷為粒細(xì)胞減少癥；當(dāng)外周血中性粒細(xì)胞絕對(duì)值在成人低于0.5×109/L以下，可診斷為粒細(xì)胞缺乏癥。目前臨床廣泛使用的提高化療后對(duì)象血細(xì)胞，特別是白細(xì)胞數(shù)量的藥物是重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 表明與重組人粒細(xì)胞集落刺激因子相比，本發(fā)明的化合物能夠更顯著增加化療后白細(xì)胞，特別是中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的數(shù)量。同時(shí)，本發(fā)明的化合物對(duì)增加化療后血小板、紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量也有一定的作用。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述血細(xì)胞選自白細(xì)胞、血小板和紅細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述對(duì)象患有化療相關(guān)性白細(xì)胞減少癥或血小板減少癥。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述對(duì)象患有化療相關(guān)性粒細(xì)胞缺乏癥。術(shù)語(yǔ)“化療”是指利用化學(xué)藥物阻止癌細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移，直至最終殺滅癌細(xì)胞的一種治療方式。常用的化療藥物包括但不限于：美法侖(melphalan)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、氧氮磷雜環(huán)己烯(oxazaphosphorine)、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、沙鉑(satraplatin)、四鉑(tetraplatin)、異丙鉑(iproplatin)、絲裂霉素(mitomycin)、鏈佐星(streptozocin)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、白消安(busulfan)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、鏈佐星(streptozocin)、噻替派(thiotepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氮芥、阿糖胞苷(cytarabine)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、培美曲塞(pemetrexed)、替加氟(tegafur)、尿嘧啶(uracil)、尿嘧啶氮芥(uracilmustard)、氟達(dá)拉濱(fludarabine)、吉西他濱(gemcitabine)、卡培他濱(capecitabine)、巰嘌呤(mercaptopurine)、克拉屈濱(cladribine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、甲氨喋呤(methotrexate)、噴司他丁(pentostatin)、羥基脲(hydroxyurea)、紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)、泰索帝(taxotere)、諾維本(navelbine)、長(zhǎng)春堿(vinblastin)、長(zhǎng)春新堿(vincristin)、長(zhǎng)春地辛(vindesine)、長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)、秋水仙堿(colchicine)、癥登素(maytansine)、柄型菌素(ansamitocin)、根霉素(rhizoxin)、擬莖點(diǎn)霉毒素(phomopsin)、朵拉司他汀(dolastatin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、斯的甘辛(steganacin)、考布他汀(combretastatin)、安非替尼(amphetinile)、丙卡巴肼(procarbazine)、喜樹堿(camptothecin)、依立替康(irinotecan)、干擾素、白介素、瓦他拉尼(vatalanib)、SU-5416、SU-6668、SU-11248、SU-14813、AZD-6474、CI-1033或GW-2016、易瑞沙(iressa)、特羅凱(tarceva)、PKI-166、EKB-569、HKI-272、赫賽汀(herceptin)和阿泊利單抗(apolizumab)。放射治療(簡(jiǎn)稱放療)也可以治療腫瘤。放療利用高能量離子照射腫瘤組 織，通過(guò)電離激發(fā)可直接作用于細(xì)胞DNA等靶點(diǎn)或與細(xì)胞內(nèi)水分子等相互作用，產(chǎn)生自由基間接作用于細(xì)胞DNA等靶點(diǎn)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。放療也會(huì)引起以外周血細(xì)胞數(shù)量減少。但是，放療輻射防護(hù)劑的作用機(jī)制與化療保護(hù)劑不同。例如放療輻射防護(hù)劑氨磷汀(WR-2721)等通過(guò)預(yù)防給藥或照后早期給藥來(lái)消除細(xì)胞環(huán)境中的活性自由基，以抑制輻射導(dǎo)致的副作用。術(shù)語(yǔ)“治療”可理解為包括緩解、減輕、逆轉(zhuǎn)和/或消除對(duì)象因接受化療藥物而引起的血細(xì)胞數(shù)量的降低，特別是白細(xì)胞和血小板數(shù)量的降低。治療還可理解為包括預(yù)防性治療。術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明的藥物”可理解為包括本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和適合的藥物賦形劑和/或輔料的藥物組合物。所述藥物賦形劑和/或輔料包括但不限于淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等。第三方面，本發(fā)明還涉及預(yù)防和/或治療將要、正在或已經(jīng)接受化療藥物治療的對(duì)象中血細(xì)胞減少的方法，包括向所需對(duì)象施用治療有效量的通式(I)的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物。本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物通過(guò)皮下注射或肌肉注射施用。因此，本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物可制備為溶液、注射劑或粉劑形式。本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物通過(guò)可間隔或連續(xù)施用，每天施用一次或多次，例如2次至5次，優(yōu)選每天施用一次。本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物可以1～100mg/Kg/天，優(yōu)選5～40mg/kg/d，例如10mg/kg/d或20mg/kg/d的劑量施用，優(yōu)選1次至3次/天，更優(yōu)選1次/天。本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物還可與其它有助于提高化療后對(duì)象血細(xì)胞數(shù)量，特別是白細(xì)胞數(shù)量的藥物例如G-CSF或GM-CSF聯(lián)合使用。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物通過(guò)肌肉注射或皮下注射施用。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物間隔或連續(xù)施用。在另一個(gè)實(shí)施方 式中，本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物每天施用一次或多次，治療期不少于3天。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物每日施用劑量為1～100mg/Kg/d，優(yōu)選5～40mg/kg/d，例如10mg/kg/d或20mg/kg/d。實(shí)施例將參考以下實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。然而，提供以下實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，不應(yīng)被理解為是對(duì)本發(fā)明的范圍和精神的限制。實(shí)施例1：(2,8-二甲基-2R-((3E，7E)-4,8,12-三甲基十三碳-3,7,11-三烯基)苯并二氫吡喃-6-基氧基)磷酸酯的鈉鹽(即δ-生育三烯酚磷酸酯的鈉鹽，簡(jiǎn)稱δ-T3HP)的制備和確認(rèn)結(jié)構(gòu)式：反應(yīng)方程式：步驟a：取15gδ-生育三烯酚于250ml圓底燒瓶中，加入45ml甲苯溶解，后加入6ml吡啶，攪拌冷卻至0～5℃。緩慢滴加4.5ml三氯氧磷。滴加完畢后，移至室溫?cái)嚢?h。步驟b：后將上述反應(yīng)體系冷卻至0℃以下，緩慢加入60ml蒸餾水。滴加完畢后，加熱至回流反應(yīng)4h。步驟c：在上述反應(yīng)液中加入甲苯和蒸餾水各100ml，搖勻靜置分層。有機(jī)層轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)，除去溶劑。剩余物質(zhì)重溶于15ml異丙醇中，加熱攪拌均勻。將溶有2.4g氫氧化鈉的25ml甲醇緩慢加入濾液中，劇烈攪拌至 有沉淀產(chǎn)生。傾出上清液，并用少量甲醇洗滌。過(guò)濾，濾渣重新溶解于400ml甲醇中。過(guò)濾，濾液濃縮至100～150ml，滴入300ml丙酮，直到有白色絮狀沉淀產(chǎn)生，充分?jǐn)嚢韬螅^(guò)濾得白色固體11.3g，產(chǎn)率：59.4％。所得產(chǎn)物的1H-NMR結(jié)果如下：1H-NMR(400MHz；CDCl3)δ＝1.24(s,3H，CH3-2a),1.49～1.81(m,16H,CH2-1`,CH2-2`,CH3-4`a,CH3-8`a,CH3-12`a,CH3-13),1.94～2.13(m,13H,CH2-3,CH2-5`,CH2-6`,CH2-9`,CH2-10`,CH3-8a),2.78(t,J＝6.6Hz,2H,CH2-4),6.61(d，J＝2.8Hz,1H，CH-7)，6.66(d，J＝2.8Hz,1H，CH-5)；MS(ESI，m/s)：C27H39O5P，[M-H+]475.26(計(jì)算值476.25)。實(shí)施例2：2,2-二甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡喃-6-基氧基)磷酸二鈉(即δ-生育酚磷酸酯的鈉鹽，簡(jiǎn)稱δ-THP)制備與確認(rèn)結(jié)構(gòu)式：反應(yīng)方程式：步驟a：取15gδ-生育酚于250ml圓底燒瓶中，加入45ml甲苯溶解，后加入6ml吡啶，攪拌冷卻至0～5℃。緩慢滴加4.5ml三氯氧磷。滴加完畢后，移至室溫?cái)嚢?h。步驟b：后將上述反應(yīng)體系冷卻至0℃以下，緩慢加入60ml蒸餾水。滴加完畢后，加熱至回流反應(yīng)4h。步驟c：在上述反應(yīng)液中加入甲苯和蒸餾水各100ml，搖勻靜置分層。有機(jī)層轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)，除去溶劑。剩余物質(zhì)重溶于15ml異丙醇中，加熱攪拌均勻。將溶有2.4g氫氧化鈉的25ml甲醇緩慢加入濾液中，劇烈攪拌至有沉淀產(chǎn)生。傾出上清液，并用少量甲醇洗滌。過(guò)濾，濾渣重新溶解于400ml 甲醇中。過(guò)濾，濾液濃縮至100～150ml，滴入300ml丙酮，直到有白色絮狀沉淀產(chǎn)生，充分?jǐn)嚢韬?，過(guò)濾得白色固體。干燥，得8.8g，產(chǎn)率44.2％。所得產(chǎn)物的1H-NMR結(jié)果如下：1H-NMR(400MHz；CDCl3)δ：0.85(m，12H，CH3-4`a,CH3-8`a,CH3-12`a,CH3-13a,),1.0-1.6(m，24H，CH1-4`,CH1-8`,CH2-1`,CH2-2`,CH2-3`,CH2-5`,CH2-6`,CH2-7`,CH2-9`,CH2-10`,CH2-11`,CH3-2a`)，1.74(m，2H，CH2-3)，2.13(s,3H,CH3-8a),2.71(t，2H，J＝7.2Hz，CH2-4),6.61(d，J＝2.8Hz，1H，CH-7)，6.66(d，J＝2.8Hz，1H，CH-5)；MS(ESI，m/s)：C27H45O5P[M-H+]481.61(計(jì)算值482.81)。實(shí)施例3：δ-T3HP和δ-THP對(duì)環(huán)磷酰胺化療小鼠外周血象數(shù)量的影響3.1材料與方法3.1.1主要試劑及儀器環(huán)磷酰胺購(gòu)于江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司。MEK-7222K全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及外周血檢測(cè)稀釋液購(gòu)于日本光電工業(yè)株式會(huì)社公司。3.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組實(shí)驗(yàn)采用6～8周齡SPF級(jí)C57BL/6J雄性小鼠，體重(22.6±0.89)g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司。3.1.3化療條件環(huán)磷酰胺用作化療藥物：使用前用0.9％生理鹽水配置成11.25mg/ml溶液，按每只小鼠100mg/Kg，200μl腹腔給藥。3.1.4分組和給藥方法實(shí)驗(yàn)設(shè)rhG-CSF對(duì)照組和治療組、δ-T3HP對(duì)照組和治療組，和δ-THP對(duì)照組和治療組，每組7只小鼠。rhG-CSF250μg/瓶，用生理鹽水配成11μg/ml，按每只小鼠100mg/Kg，200μl皮下給藥。δ-T3HP用生理鹽水配成11mg/ml的溶液，按每只小鼠100mg/Kg，200μl皮下給藥。δ-THP用PEG400配成11mg/ml的溶液，按每只小鼠100mg/Kg，200μl皮下給藥。實(shí)驗(yàn)小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺后2小時(shí)開始皮下給予δ-T3HP(100mg/Kg)和δ-THP(100mg/Kg)，每天1次，連續(xù)3天。實(shí)驗(yàn)小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺后24小時(shí)開始皮下給予rhG-CSF(100μg/Kg)，每天1次，連續(xù)3天?；煂?duì)照組小鼠皮下注射相應(yīng)的溶劑0.2ml/只。3.1.5外周血象檢測(cè)各組動(dòng)物分別于給藥前(0d)和給藥后(1、3、5、7、10、14、18、22d)割尾取血20μl，注入2ml血細(xì)胞分析儀稀釋液中，用MEK-7222K全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周血白細(xì)胞(WBC)和血小板(PLT)數(shù)。3.1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，GraphPadPrism5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。血象檢測(cè)結(jié)果用Studentt檢驗(yàn)分析，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.2結(jié)果如表1和圖1所示，小鼠化療后第5天，rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP對(duì)照組小鼠外周血WBC分別為4.3±1.2×109/L、5.7±1.3×109/L和8.2±1.3×109/L，三組數(shù)值均明顯低于化療前正常值(13.7±2.1×109/L)。在化療后給予rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP治療后，各治療組小鼠外周血WBC值均明顯升高，分別是其相應(yīng)對(duì)照組的1.4、2.8和1.2倍，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示p值分別小于0.01、0.001和0.05，其中以δ-T3HP的療效最好。小鼠化療后第7天，rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP各治療組及其對(duì)照組外周血WBC均明顯回升，其中rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP各治療組外周血WBC分別是其相應(yīng)對(duì)照組的0.7、2.7和1.1倍。同對(duì)照組相比，只有δ-T3HP治療組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p值小于0.001，而rhG-CSF治療組白細(xì)胞反而明顯低于其對(duì)照組。表1:rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP對(duì)環(huán)磷酰胺化療小鼠外周血白細(xì)胞生成的影響如表2和圖2所示，環(huán)磷酰胺化療藥物對(duì)小鼠外周血血小板數(shù)影響不顯著?；熀蟮?0天，rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP各治療組外周血血小板數(shù)分別是其相應(yīng)對(duì)照組的0.95、1.4和1.1倍。同對(duì)照組相比，只有δ-T3HP治療組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p值小于0.001。表2:rhG-CSF、δ-T3HP和δ-THP對(duì)環(huán)磷酰胺化療小鼠外周血血小板生成的影響組別10天外周血PLT數(shù)量rhG-CSF對(duì)照組896±38.7rhG-CSF847.1±66.4δ-T3HP對(duì)照組697.9±47.5δ-T3HP979±76.5δ-THP對(duì)照組786±102.4δ-THP832.1±87.3實(shí)施例4：四種T3HP對(duì)環(huán)磷酰胺化療小鼠外周血象數(shù)量的影響4.1化合物的制備采用前述實(shí)施例1的方法分別制備α-T3HP、β-T3HP和γ-T3HP，區(qū)別在于分別使用α-生育三烯酚、β-生育三烯酚和γ-生育三烯酚作為原料。產(chǎn)物經(jīng)1H-NMR確認(rèn)。4.2分組和給藥方法實(shí)驗(yàn)設(shè)α-T3HP、β-T3HP、γ-T3HP和δ-T3HP治療組，以rhG-CSF作為對(duì)照組，每組7只小鼠。α-T3HP、β-T3HP、γ-T3HP和δ-T3HP治療組用生理鹽水配成11mg/ml的溶液，按每只小鼠100mg/Kg，200μl皮下給藥。rhG-CSF250μg/瓶，用生理鹽水配成11μg/ml，按每只小鼠100mg/Kg，200μl皮下給藥。采用前述實(shí)施例3的方法在實(shí)驗(yàn)小鼠注射環(huán)磷酰胺后分別施用α-T3HP、β-T3HP、γ-T3HP、δ-T3HP和rhG-CSF。4.3外周血象檢測(cè)采用前述實(shí)施例3的方法測(cè)定給藥前和給藥后外周血白細(xì)胞(WBC)和血小板(PLT)數(shù)量。4.4結(jié)果結(jié)果顯示，在分別給予α-T3HP、β-T3HP、γ-T3HP、δ-T3HP和rhG-CSF治療的化療小鼠中，在第5天時(shí)，小鼠外周血WBC值均明顯升高。在α-T3HP、β-T3HP、γ-T3HP、δ-T3HP治療組中，WBC升高的幅度以δ-T3HP的療效最好?；熀蟮?0天，在α-T3HP、β-T3HP、γ-T3HP、δ-T3HP治療組中，外周血血小板數(shù)量升高的幅度以δ-T3HP的療效最好。實(shí)施例5：δ-T3HP對(duì)環(huán)磷酰胺化療獼猴外周血象數(shù)量的影響5.1材料與方法5.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物恒河猴14只，雄性，2周齡，體重5.0±1.0kg。購(gòu)于北京協(xié)爾鑫生物資源研究所。5.1.2實(shí)驗(yàn)藥物δ-T3HP，生理鹽水溶解，100mg/mL，過(guò)濾除菌。rhG-CSF購(gòu)于杭州九源基因工程有限公司。環(huán)磷酰胺購(gòu)于江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司。5.1.3實(shí)驗(yàn)分組14只恒河猴隨機(jī)分為生理鹽水陰性對(duì)照組(5只)、δ-T3HP20mg/Kg組(4只)、δ-T3HP10mg/Kg組(2只)和rhG-CSF陽(yáng)性對(duì)照組(3只)。5.1.4獼猴化療模型環(huán)磷酰胺用作化療藥物，使用0.9％生理鹽水配置，按每只獼猴50mg/Kg緩慢靜脈推注，每日一次，連續(xù)兩天。注意現(xiàn)配現(xiàn)用。5.1.5給藥方法δ-T3HP于最后一次環(huán)磷酰胺化療后2小時(shí)開始肌肉注射δ-T3HP，每日1次，連續(xù)8天。rhG-CSF于環(huán)磷酰胺化療后第一天開始給藥，10μg/Kg皮下注射，每日1次，連續(xù)8天。對(duì)照組給予生理鹽水。5.1.6外周血象檢測(cè)取上肢外周血約1ml于EDTA抗凝試管中，顛倒混勻后使用SYSMEXXE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行外周血象檢測(cè)，包括檢測(cè)白細(xì)胞(WBC)，紅細(xì)胞(RBC)，血紅蛋白(HGB)，血小板(PLT)，中性粒細(xì)胞(NE)和網(wǎng)織紅細(xì)胞(RET)。5.1.7數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，GraphPadPrism5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。血象檢測(cè)結(jié)果用Studentt檢驗(yàn)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)。5.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果5.2.1δ-T3HP對(duì)化療獼猴外周血白細(xì)胞數(shù)量的影響如圖4所示，陰性對(duì)照組獼猴化療后外周血白細(xì)胞進(jìn)行性下降，于化療后5～10天降到最低值，隨后緩慢回升，化療后15天基本恢復(fù)到化療前水平。獼猴化療后給予δ-T3HP20mg/Kg，次日白細(xì)胞顯著升高，之后快速下降，于化療后5天達(dá)到最低值；化療后第6天WBC開始快速回升，8～13天維持在化療前水平的2倍，之后緩慢下降并于化療后20天降到化療前水平。獼猴化療后給予δ-T3HP10mg/Kg，給藥后早期對(duì)白細(xì)胞動(dòng)員作用不明顯，但對(duì)WBC的恢復(fù)也有顯著的促進(jìn)作用，但恢復(fù)效果弱于δ-T3HP20mg/Kg組。獼猴化療后給予rhG-CSF，在給藥后早期對(duì)白細(xì)胞也有明顯動(dòng)員作用，在化療后恢復(fù)期對(duì)白細(xì)胞的也有明顯的促恢復(fù)作用。但是，rhG-CSF陰性對(duì)照組在10天后對(duì)白細(xì)胞的促恢復(fù)作用快速下降。與rhG-CSF陰性對(duì)照組相比，δ-T3HP20mg/Kg給藥組在10天后沒(méi)有明顯的停藥反應(yīng)。5.2.2δ-T3HP對(duì)化療獼猴外周血中性粒細(xì)胞數(shù)量的影響如圖5所示，獼猴化療后中性粒細(xì)胞的變化與白細(xì)胞非常接近。與rhG-CSF陽(yáng)性對(duì)照組相比，δ-T3HP對(duì)中性粒細(xì)胞化療會(huì)恢復(fù)作用更好，并有劑量效應(yīng)。5.2.3δ-T3HP對(duì)化療獼猴外周血中單核細(xì)胞數(shù)量的影響如圖6所示，獼猴化療后分別給予δ-T3HP和rhG-CSF治療，外周血單核細(xì)胞于化療后5～10天有升高，δ-T3HP20mg/Kg治療組最為顯著。5.2.4δ-T3HP對(duì)化療獼猴外周血中血小板數(shù)量的影響如圖7所示，對(duì)照組獼猴化療后外周血血小板緩慢下降，于化療后7 天降到最低值，隨后緩慢回升，化療后10天基本恢復(fù)到化療前水平。獼猴化療后給予δ-T3HP治療，血小板恢復(fù)速度加快，并維持在較高水平，δ-T3HP20mg/Kg組略優(yōu)于10mg/Kg。陽(yáng)性藥rhG-CSF對(duì)化療獼猴血小板恢復(fù)沒(méi)有明顯影響。5.2.5δ-T3HP對(duì)化療獼猴外周血紅細(xì)胞數(shù)量的影響如圖8所示，獼猴化療后外周血紅細(xì)胞沒(méi)有明顯降低，δ-T3HP治療組外周血紅細(xì)胞有明顯降低，于化療后20天恢復(fù)到化療前水平。在5天時(shí)，rhG-CSF陽(yáng)性對(duì)照組中獼猴外周血紅細(xì)胞數(shù)量相比于δ-T3HP治療組降低更多。5.2.6δ-T3HP對(duì)化療獼猴外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量的影響如圖9所示，陰性對(duì)照組獼猴化療后外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞快速降低，化療后第6天開始恢復(fù)。化療獼猴給予δ-T3HP或rhG-CSF治療后，外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞于化療后9～18天明顯高于對(duì)照組，其中δ-T3HP20mg/Kg組最突出。盡管已用于解釋說(shuō)明的目的公開了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可理解，可做出各種改變、增添和替換，而不脫離如后附權(quán)利要求所公開的本發(fā)明的范圍和精神。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3