本發(fā)明涉及一種方法，其通過(guò)施用含有親脂性營(yíng)養(yǎng)素的組合物來(lái)延緩糖尿病眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成。更具體地，本發(fā)明涉及一種方法，其通過(guò)施用一組合物來(lái)延緩糖尿病眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成，組合物含有葉黃素及其異構(gòu)體、葉黃素酯、玉米黃質(zhì)的異構(gòu)體、姜黃提取物、姜黃素或姜黃素類化合物的一種或其組合，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且作為膳食補(bǔ)充劑對(duì)營(yíng)養(yǎng)和健康促進(jìn)獲益特別有用。發(fā)明背景眼睛經(jīng)骨性眼眶保護(hù)，是人體最重要且復(fù)雜的器官。其分為前段，由角膜、虹膜、晶狀體、睫狀體及鞏膜前段組成。后段以晶狀體作為前屆并延伸至眼球的后部。后段中還含有視網(wǎng)膜視神經(jīng)盤(pán)。光線通路穿過(guò)稱為角膜、房水、晶狀體、瞳孔、玻璃體液的前部達(dá)到眼部的視網(wǎng)膜，該通路被稱為眼部的視軸。晶狀體反射光線并通過(guò)調(diào)焦幫助物體的圖像聚焦至視網(wǎng)膜(中央凹)。糖尿病和糖尿病并發(fā)癥：糖尿病是一種最常見(jiàn)的非傳染性、多樣性、代謝性疾病，其以胰島素產(chǎn)生不足、胰島素抵抗或其二者共同導(dǎo)致的高血糖癥為特征，糖尿病有兩種類型，1型和2型。1型糖尿病是自身免疫介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞破壞，從而導(dǎo)致胰島素的缺乏。2型糖尿病以胰島素抵抗和胰島素相對(duì)(而不是完全)缺乏為特征。根據(jù)最新的世界衛(wèi)生組織(WHO)估計(jì)，目前全世界約有3.66億糖尿病患者，到2030年預(yù)計(jì)會(huì)增加到5.52億，印度約有6200萬(wàn)糖尿病患者。長(zhǎng)時(shí)間暴露于慢性的高血糖中會(huì)導(dǎo)致多種并發(fā)癥，包括血管和非血管并發(fā)癥。血管并發(fā)癥還進(jìn)一步分為大血管和微血管并發(fā)癥。如視網(wǎng)膜、腎臟、外周神經(jīng)和晶狀體之類的組織受糖尿病長(zhǎng)期并發(fā)癥的影響最大，這導(dǎo)致會(huì)相應(yīng)發(fā)展成糖尿病視網(wǎng)膜病變、腎臟病變、神經(jīng)病變和白內(nèi)障。糖尿病性白內(nèi)障：白內(nèi)障以眼球晶狀體的不透明為特征，是全世界主要的致盲性病因。糖尿病患者白內(nèi)障的發(fā)展與非糖尿病者相比，是其2-5倍。此外，糖尿病患者進(jìn)行白內(nèi)障手術(shù)后具有更高的并發(fā)癥率。糖尿病和白內(nèi)障二者造成巨大的健康和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，尤其是在發(fā)展中國(guó)家，糖尿病治療不足且常常做不到白內(nèi)障手術(shù)。據(jù)報(bào)道，有很多對(duì)抗白內(nèi)障(包括糖尿病性白內(nèi)障)的臨床干預(yù)，卻在臨床實(shí)踐中并非完全成功。糖尿病視網(wǎng)膜病變：糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病最常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥之一。DR在70％的患有糖尿病15年以上的患者中出現(xiàn)，且是致盲的最常見(jiàn)病因。DR是視網(wǎng)膜疾病，導(dǎo)致視覺(jué)喪失、黃斑水腫、反復(fù)的玻璃體出血、牽拉性或繼發(fā)性孔源性視網(wǎng)膜脫落等等。自過(guò)去的二十幾年開(kāi)始，在DR藥物治療的新興領(lǐng)域里有了巨大的進(jìn)步。在激光光凝問(wèn)世的三十年里，其對(duì)于大部分病例視覺(jué)喪失的限制都有著確實(shí)的作用，且仍被視為DR治療的金標(biāo)準(zhǔn)療法。然而，類固醇和抗-VEGF藥物已經(jīng)對(duì)新生血管生成的預(yù)防表現(xiàn)出具有潛力的結(jié)果，但由于它們時(shí)效較短，應(yīng)用仍有限制。因此，DR的藥物療法仍作為全視網(wǎng)膜光凝法的輔助。近年來(lái)，類胡蘿卜素的生物活性聚集了大量的注意力。類胡蘿卜素是天然存在的植物葉黃素，其涉及集光反應(yīng)并保護(hù)植物細(xì)胞器防止單線態(tài)氧誘導(dǎo)的損傷。膳食性類胡蘿卜素在組織內(nèi)作為抗氧化劑(ThurnhamDL.類胡蘿卜素：功能和謬誤(Carotenoids:functionandfallacies).ProcNutrSoc1994；53:77-87)并保護(hù)機(jī)體防止氧化損傷。哺乳動(dòng)物類并不合成類胡蘿卜素，因此其必須從膳食來(lái)源中獲取，例如水果和蔬菜和/或膳食補(bǔ)充。大量流行病學(xué)研究支持?jǐn)z入富含類胡蘿卜素水果和蔬菜與退行性疾病發(fā)病率之間強(qiáng)的相反關(guān)系(ColemanH,ChewE.老年性黃斑變性中的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充(Nutritionalsupplementationinage-relatedmaculardegeneration).CurrOpinOphthalmol2007；18(3):220-223)。葉黃素是綠葉蔬菜和蛋黃中存在的最主要的黃葉素之一。已知葉黃素和玉米黃質(zhì)選擇性積聚在人類視網(wǎng)膜黃斑上。它們被認(rèn)為是抗氧化劑和藍(lán)光過(guò)濾器，從而保護(hù)眼睛免遭氧化應(yīng)激，例如煙草的煙霧和陽(yáng)光的暴露，這些會(huì)導(dǎo)致老年性黃斑變性和白內(nèi)障。黃葉素會(huì)表現(xiàn)出光學(xué)(R-和S-立體異構(gòu)體)和幾何異構(gòu)體(反式、E-和順式、Z-)。R-和S-立體異構(gòu)體的構(gòu)型基于光譜的圓二色性(CD)以及手性柱的高效液相色譜(HPLC)研究，而順式和反式異構(gòu)體的構(gòu)型則基于電子、紅外、核磁共振(NMR)、高效液相色譜-質(zhì)譜法(HPLC-MS)和高效液相色譜-核磁共振法(HPLC-NMR)在線光譜研究。眾所周知，當(dāng)有機(jī)分子具有連接四種不同類型原子或基團(tuán)的碳原子時(shí)，則認(rèn)為該碳原子是手性碳原子。手性碳原子造成了兩種不同的空間排布，其導(dǎo)致光學(xué)異構(gòu)體的形成，而多烯鏈的雙鍵數(shù)量、甲基的存在以及位阻的缺失決定了反式和順式異構(gòu)體的數(shù)量。在反式-玉米黃質(zhì)中，兩個(gè)閉合環(huán)上3位和3’位的碳原子均是手性碳原子。因此，基于所連接的第二羥基的位置，反式-玉米黃質(zhì)在C3和C3’碳原子處有兩個(gè)手性中心。故而反式-玉米黃質(zhì)有4個(gè)可能的立體異構(gòu)體，即(3R-3'R)-異構(gòu)體、(3S-3'S)-異構(gòu)體和(3R-3'S)-或(3S-3'R)-異構(gòu)體。在這些異構(gòu)體中，(3R-3'S)-和(3S-3'R)-是相同的。因此反式-玉米黃質(zhì)共有3個(gè)手性異構(gòu)體。按右手方式產(chǎn)生旋轉(zhuǎn)偏振光的異構(gòu)體稱為R-立體異構(gòu)體，導(dǎo)致左手旋轉(zhuǎn)的異構(gòu)體稱為S-立體異構(gòu)體，而具有雙重相對(duì)效果(R,S；無(wú)旋光)的第三個(gè)異構(gòu)體稱為內(nèi)消旋玉米黃質(zhì)。葉黃素和玉米黃質(zhì)的共軛雙鍵有助于區(qū)分各顏料的色彩，并也影響到了其淬滅單線態(tài)氧的能力。由于具有額外的共軛雙鍵，玉米黃質(zhì)被認(rèn)為是比葉黃素更強(qiáng)的抗氧化劑。關(guān)于黃葉素在細(xì)胞水平的作用，它們被報(bào)道結(jié)合于特定的蛋白，即黃葉素結(jié)合蛋白(XBP)。XBP被認(rèn)為參與到了葉黃素和玉米黃質(zhì)從血流中的攝取以及在視網(wǎng)膜中的穩(wěn)定。通過(guò)飛秒瞬態(tài)吸收光譜對(duì)黃葉素和XBP的研究顯示，與(3R,3'R)-玉米黃質(zhì)相比，(3R,3'S)-玉米黃質(zhì)富集的XBP穩(wěn)定性更好，而黃葉素(3R,3'R)-玉米黃質(zhì)和(3R,3'S,內(nèi)消旋)-玉米黃質(zhì)的光物理性質(zhì)基本相同。有可能是內(nèi)消旋-玉米黃質(zhì)與XBP更好結(jié)合，其中蛋白保護(hù)了黃葉素防止其由于自由基而降解。因此，復(fù)合物可能是比游離黃葉素更好的抗氧化劑，有助于更好地保護(hù)眼部組織防止氧化性損傷。(Billsten等,黃葉素在人類視網(wǎng)膜胡蘿卜素蛋白中的光物理特性，光化學(xué)和光生物學(xué)(PhotophysicalPropertiesofXanthophyllsinCarotenoproteinsfromHumanRetina,PhotochemistryandPhotobiology),78,138-145,2003)。流行病學(xué)研究表明，膳食中較高的葉黃素和玉米黃質(zhì)的攝取降低白內(nèi)障和年齡相關(guān)性黃斑變性的風(fēng)險(xiǎn)。以往的研究表明，與單用葉黃素或胰島素的治療相比，采用胰島素和葉黃素聯(lián)合治療的大鼠表現(xiàn)出白內(nèi)障發(fā)展和成熟的延遲。DR患者體內(nèi)的血清葉黃素和玉米黃質(zhì)濃度被發(fā)現(xiàn)顯著低于正常人，而對(duì)其進(jìn)行的攝入也被證明能改善視敏度、對(duì)比靈敏度并減輕黃斑水腫，這表明葉黃素和玉米黃質(zhì)的補(bǔ)充可作為治療DR的潛在治療藥物。姜黃素已被確認(rèn)為是姜黃的有效成分，并表現(xiàn)出具有抗氧化、抗炎、抗微生物以及抗癌活性。姜黃素是來(lái)源于香料姜黃的天然提取物。姜黃來(lái)源于植物姜黃，生姜家族的一員。姜黃素是一種已知的抗氧化劑，其本身具有許多健康益處。姜黃素在人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)出凋亡誘導(dǎo)并在體外減少VEGF釋放入介質(zhì)，它還在抑制了大鼠血清中VEGF水平的糖尿病誘導(dǎo)性升高。高血糖水平和缺氧誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)是視網(wǎng)膜病變的主要特征。一些研究也表明，VEGF還可能在視網(wǎng)膜病變的最早階段的發(fā)展中起到作用。盡管膳食補(bǔ)充劑例如姜黃素、葉黃素、玉米黃質(zhì)等在臨床前研究中已經(jīng)提供了部分益處，但其轉(zhuǎn)化較差，且在臨床試驗(yàn)中所用的劑量較難在現(xiàn)實(shí)實(shí)踐中執(zhí)行。姜黃素在臨床上缺乏成功的一個(gè)主要因素與其廣泛的肝腸代謝生物轉(zhuǎn)化導(dǎo)致的生物利用度低相關(guān)。近期所關(guān)注的是解決補(bǔ)充劑的生物利用度問(wèn)題以改善其療效。如果僅以油混懸劑或者微粒的形式(即目前所用的形式)施用，親脂性營(yíng)養(yǎng)素例如姜黃素、葉黃素、玉米黃質(zhì)、生姜等的吸收較差。吸收差的主要原因是它們?cè)谒械娜芙舛容^差。由于其不溶性，造成生物利用度也非常差。由于在胃腸道內(nèi)的溶解度有限，親脂性營(yíng)養(yǎng)素在體內(nèi)的吸收度也有限。通常，這些營(yíng)養(yǎng)素的生物利用度低于40％。通過(guò)降低粒度可以增加生物利用度，這反過(guò)來(lái)可以提高它們的膠束效率。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在分子水平的分布通常被認(rèn)為是降低粒度的技術(shù)。這樣的分子分布提供營(yíng)養(yǎng)素在水中更高的膠束效率，從而增加生物利用度。因此，興趣在于通過(guò)基因營(yíng)養(yǎng)學(xué)途徑來(lái)研究含有可溶性親脂性營(yíng)養(yǎng)素的組合物在糖尿病大鼠體內(nèi)的效果，關(guān)于其對(duì)視網(wǎng)膜的有益效果，然后將其效果與常規(guī)的親脂性營(yíng)養(yǎng)素作比較。基因營(yíng)養(yǎng)學(xué)是營(yíng)養(yǎng)素和基因之間相互關(guān)系的科學(xué)。這是關(guān)于在你整個(gè)人生中基因表達(dá)如何影響你對(duì)特定營(yíng)養(yǎng)素的需求并幫助維持理想健康狀態(tài)的研究?；驙I(yíng)養(yǎng)學(xué)促進(jìn)更好地理解營(yíng)養(yǎng)如何影響代謝途徑以及穩(wěn)態(tài)控制、這種調(diào)節(jié)如何在膳食相關(guān)的疾病早期受影響、以及哪種個(gè)體敏感性基因型對(duì)特定疾病影響的程度。我們的目標(biāo)是更好地理解植物營(yíng)養(yǎng)素如何影響基因表達(dá)。許多參考文獻(xiàn)也提供了用于預(yù)防/治療糖尿病性眼病的含有類胡蘿卜素的組合物。在Brown等(AmJClinNutr.1999)的文中，膳食抗氧化劑包括類胡蘿卜素，被假設(shè)通過(guò)預(yù)防晶狀體內(nèi)蛋白或脂類氧化以降低年齡相關(guān)性白內(nèi)障的風(fēng)險(xiǎn)。然而，關(guān)于這一現(xiàn)象的前瞻性流行病學(xué)數(shù)據(jù)有限。作者前瞻性地研究了類胡蘿卜素和維生素A攝入與男性白內(nèi)障摘除術(shù)之間的關(guān)聯(lián)性。在該前瞻性隊(duì)列研究中，涵蓋了1986年時(shí)45-75歲的美國(guó)男性健康專業(yè)人士(n＝36644)。隨后達(dá)到45歲的其他人也被包括在內(nèi)。在8年的隨訪中，記錄到840例老年性白內(nèi)障摘除術(shù)。他們觀察到，在其它潛在風(fēng)險(xiǎn)因子(包括年齡和吸煙)被控制之后，攝入葉黃素和玉米黃質(zhì)(而不是其它類胡蘿卜素(α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、番茄紅素和β-玉米黃質(zhì))或維生素A)越高，男性白內(nèi)障摘除術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)適度降低。攝入葉黃素和玉米黃質(zhì)最高的第五名男性相比最低的第五名，白內(nèi)障的風(fēng)險(xiǎn)低了19％(相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)：0.81；95％CI:0.65,1.01；趨勢(shì)P值＝0.03)。在類胡蘿卜素較高的特定食物中，花椰菜和菠菜與低白內(nèi)障風(fēng)險(xiǎn)維持著最持久的相關(guān)性。葉黃素和玉米黃質(zhì)可降低白內(nèi)障嚴(yán)重到需要摘除的風(fēng)險(xiǎn)，雖然這關(guān)系在數(shù)量級(jí)上表現(xiàn)不明顯。該研究是對(duì)于美國(guó)男性人群的隊(duì)列研究。該研究建立了營(yíng)養(yǎng)缺乏和白內(nèi)障發(fā)病之間的聯(lián)系。EP2618832A2涉及一種組合物，其含有選自下組的酶：超氧化物歧化酶(SOD)和SOD模擬物和類似物，其與葉黃素和玉米黃質(zhì)至少一種立體異構(gòu)體結(jié)合。還包括一種藥盒，所述藥盒部分含有這樣一種組合物，其中所述藥盒包括含有酶的第一部分，以及含有葉黃素和至少一種玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的第二部分。所述組合物或藥盒部分可包含在功能性食品、營(yíng)養(yǎng)素組合物或食物或膳食補(bǔ)充劑、藥物或藥物組合物、或獸醫(yī)產(chǎn)品中。該文獻(xiàn)還涉及一種組合物，通過(guò)向由此需要的對(duì)象施用藥物或藥物組合物從而治療、預(yù)防、和/或穩(wěn)定氧化應(yīng)激相關(guān)眼部疾病、病征和/或障礙。然而，該文獻(xiàn)并未采用玉米黃質(zhì)異構(gòu)體。WO2010032267A2涉及一種含有所選印度草藥的提取物的草藥制劑，其用于預(yù)防和治療糖尿病及相關(guān)并發(fā)癥。該文獻(xiàn)涉及用于不同糖尿病相關(guān)并發(fā)癥的相關(guān)制劑，其各自在臨床需求中都是有用的，例如改善腎臟健康、預(yù)防腎臟疾病、預(yù)防糖尿病性腎病、和/或預(yù)防和治療對(duì)心臟和/或血管的氧化損傷。該制劑是通用的，可以加工成提取物/濃縮物并進(jìn)一步藥學(xué)修飾呈片劑或膠囊或顆粒劑或糖漿或健康草藥飲劑或可吸入草藥制劑或眼部制劑或經(jīng)皮吸收制劑例如軟膏/凝膠或注射藥物。這是一種多草藥制劑，且沒(méi)有協(xié)同性數(shù)據(jù)支持其權(quán)利要求。CN102178925A涉及一種保護(hù)視力的葉黃素眼用制劑，其由以下原料制備：5-13份的水溶性葉黃素(基于C40H56O2)，50-80份的?；撬幔?.1-0.5份的硒(基于Se)，10-25份的鋅(基于Zn)，0.5-1.0份的水溶性維生素A，和0.8-2.0份的谷胱甘肽；輔料組成為稀釋劑、潤(rùn)濕劑、等滲調(diào)節(jié)劑、防腐劑、抗氧化劑和注射用水；制劑包括滴眼液、眼洗劑等；葉黃素眼用制劑適用于眼部疾病，例如近視、遠(yuǎn)視、白內(nèi)障、青光眼、視網(wǎng)膜色素變性、黃斑變性等。各種營(yíng)養(yǎng)因子可以適度的兼容，其填補(bǔ)了葉黃素外用制劑的空白，顯著地改善了生物利用度和醫(yī)療效果；并且，通過(guò)300000人的實(shí)際使用，近視、白內(nèi)障以及糖尿病性眼病的總有效率超過(guò)90％，葉黃素眼用制劑具有積極的推廣價(jià)值。該眼用制劑僅包括一種黃斑類胡蘿卜素，即葉黃素，且并未提及玉米黃質(zhì)的使用。在Sasaki等(IOVS，2009年3月，第50卷，第3號(hào))的文中，研究目的是采用小鼠內(nèi)毒素-誘導(dǎo)性葡萄膜炎(EIU)模型以調(diào)查葉黃素對(duì)于炎癥引起的視網(wǎng)膜神經(jīng)損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。腹膜內(nèi)注射脂多糖(LPS)誘導(dǎo)EIU。每只動(dòng)物皮下注射給予葉黃素或載體3次：同時(shí)和LPS注射前后3小時(shí)。在EIU誘導(dǎo)后進(jìn)行24小時(shí)分析。通過(guò)免疫印跡分析視紫紅質(zhì)蛋白和信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT3)活化的水平。對(duì)感光細(xì)胞外節(jié)的長(zhǎng)度進(jìn)行測(cè)定。記錄下暗適應(yīng)全視野視網(wǎng)膜電流圖。采用二氫乙錠和熒光探針對(duì)視網(wǎng)膜內(nèi)的氧化應(yīng)激進(jìn)行分析。采用免疫組化顯示膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá)。葉黃素治療預(yù)防了EIU誘導(dǎo)性視紫紅質(zhì)表達(dá)的下降，隨后外節(jié)縮短且波幅減小。葉黃素降低了STAT3激活、下游炎癥因子信號(hào)以及活性氧(ROS)的水平，其均在EIU時(shí)上調(diào)。Müller膠質(zhì)細(xì)胞的病理性改變(由GFAP表達(dá)所代表)也通過(guò)葉黃素得以預(yù)防。數(shù)據(jù)顯示，抗氧化劑葉黃素在EIU時(shí)具有神經(jīng)保護(hù)作用，這提示了一種在炎癥情況下抑制視網(wǎng)膜神經(jīng)損傷的潛在方法。在該研究中，葉黃素通過(guò)注射施用。每天通過(guò)注射來(lái)補(bǔ)充葉黃素會(huì)引起該對(duì)象的不適并造成痛苦。CA2760932A1涉及眼用制劑，其向(施用)對(duì)象持續(xù)遞送多種治療藥物，包括但不限于雷帕霉素(西羅莫司)、其類似物(雷帕霉素類似物)或其它哺乳動(dòng)物靶向的雷帕霉素(mTOR)抑制劑。所述眼用制劑可置于(施用)對(duì)象的水性介質(zhì)中，包括但不限于眼內(nèi)或眼周施用、或置于對(duì)象的所需治療的病灶或病征位點(diǎn)附近。可采用一種方法，通過(guò)施用治療藥物從而治療或預(yù)防某一對(duì)象的老年性黃斑變性、黃斑水腫、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、葡萄膜炎、干眼癥、或高滲性疾病。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：克服將治療性/預(yù)防性藥物遞送到眼部特定區(qū)域的困難對(duì)大部分眼部疾病治療提出重大的挑戰(zhàn)。由于親脂性營(yíng)養(yǎng)素生物利用度較差，許多重要的潛在治療性/預(yù)防性藥物向眼部的遞送都是困難重重。由上可知，很明顯，有必要提供一種可以克服治療性/預(yù)防性藥物遞送困難的技術(shù)(甚至在降低劑量水平的情況下)，用于糖尿病性眼部并發(fā)癥。提供了一種親脂性營(yíng)養(yǎng)素的分子分散劑，其用于延緩糖尿病眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成，其對(duì)于人食用是安全的，且作為膳食補(bǔ)充劑對(duì)營(yíng)養(yǎng)以及健康促進(jìn)獲益特別有用。在一實(shí)施方式中，提供一種來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂的親脂性營(yíng)養(yǎng)素(例如姜黃素和反式葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，即(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)或反式葉黃素和(R,R)玉米黃質(zhì))在固體或液體親水性載體內(nèi)的分子分散劑，，其用于延緩糖尿病眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成。在一實(shí)施方式中，提供一種組合物的分子分散劑，其含有至少80重量％的總黃葉素，其中反式葉黃素含量為80-95％w/w；(R,R)-玉米黃質(zhì)為14-20％w/w；(R,S)-玉米黃質(zhì)為0.01-1％w/w或反式-葉黃素含量為80-95％w/w；(R,R)-玉米黃質(zhì)為14-20％w/w，以及其它微量的類胡蘿卜素，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂或含有5-95％姜黃素類化合物的姜黃素。在一實(shí)施方式中，提供一種在固體或液體親水性載體內(nèi)黃葉素組合物的分子分散劑，其含有反式-葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，即(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)、或反式葉黃素和(R,R)-玉米黃質(zhì)，其中所述組合物的抗氧化潛能強(qiáng)于游離黃葉素，用于延緩糖尿病眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成。在一實(shí)施方式中，提供一種在固體或液體親水性載體內(nèi)包含姜黃素類化合物的姜黃素組合物的分子分散劑，其用于延緩糖尿病眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成。在一實(shí)施方式中，提供一種具有更高膠束化效率的親脂性營(yíng)養(yǎng)素的分子分散劑，其提高了生物利用度，從而增加了親脂性營(yíng)養(yǎng)素在組織內(nèi)的水平，其中這些分子分散劑在相對(duì)較低的濃度下有效，且用于延緩糖尿病眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成。在一實(shí)施方式中，提供在固體或液體親水性載體中的親脂性營(yíng)養(yǎng)素的分子分散劑，其具有更高的生物利用度。在一些實(shí)施方式中，親脂性營(yíng)養(yǎng)素的分子分散劑由安全的溶劑(GRAS)制備而成，具有最少的溶劑殘留且適用于人食用。本發(fā)明組合物和/或方法的更多優(yōu)點(diǎn)將通過(guò)參考隨后的描述而變得更加顯著。下文中產(chǎn)品、組合物和/或方法的有用之處(在實(shí)施例中闡述)，其無(wú)論如何都不應(yīng)當(dāng)被解釋為對(duì)本發(fā)明范圍任何方式的限制。本文的方法涉及通過(guò)施用含有親脂性營(yíng)養(yǎng)素的組合物從而延緩糖尿病性眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成。更具體地，本文的方法涉及通過(guò)施用含有葉黃素及其異構(gòu)體、葉黃素酯、玉米黃質(zhì)異構(gòu)體、姜黃提取物和/或姜黃素或姜黃素類化合物(來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂)的組合物從而延緩糖尿病性眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成，其對(duì)于人食用是安全的，且對(duì)于作為營(yíng)養(yǎng)素的膳食補(bǔ)充劑以及健康促進(jìn)的獲益特別有用。本文的分子分散劑為粉劑、片劑、膠囊、囊劑、微粒劑、微膠囊粉末、油懸浮液、分散液、丸劑、軟膠囊、咀嚼片或液體制劑的形式。在固體或液體親水性載體內(nèi)的反式-葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，即(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)，或反式葉黃素和(R,R)-玉米黃質(zhì)和/或含有姜黃素類化合物的姜黃素的本文分子分散劑，具有增強(qiáng)的水溶性和生物利用度，有效地幫助了分子的遞送，并在延緩糖尿病眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成中表現(xiàn)出潛力。在先前的文獻(xiàn)中并未報(bào)道使用類胡蘿卜素，即反式葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體能夠以高水溶性的形式獲得更高的生物利用度、具有更高的抗氧化潛能，從而延緩糖尿病眼部相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)展和形成。在一些實(shí)施方式中，本文的組合物為親脂性液體和固體載體的分子分散劑。在一些實(shí)施方式中，制備本文組合物的方法包括將其制成親脂性液體和固體的分子分散劑，其提高了營(yíng)養(yǎng)素的水溶性，該特性有利于進(jìn)一步配置成飲品或軟膠囊或充液膠囊。一些實(shí)施方式中的本文組合物包括水溶性的親脂性營(yíng)養(yǎng)素的分子分散劑，其含有：(a)穩(wěn)定劑；(b)水溶性親水性載體；和(c)和任選的表面活性劑，其用于將油性營(yíng)養(yǎng)素轉(zhuǎn)化為粉末、片劑、膠囊劑、軟膏、糊劑、洗劑、擦劑、漱口劑、囊劑、含漱劑，且其適合摻入飲品。在一些實(shí)施方式中，本文的組合物為親脂性營(yíng)養(yǎng)素(例如葉黃素、玉米黃質(zhì)、β胡蘿卜素和番茄紅素)的自由流動(dòng)水溶性分子分散劑，其在水溶性液體或固體親水性載體內(nèi)，可進(jìn)一步制成飲品或軟膠囊或充液膠囊。在一些實(shí)施方式中，提供了一種制備親脂性營(yíng)養(yǎng)素(例如葉黃素、玉米黃質(zhì)、β胡蘿卜素和番茄紅素)的自由流動(dòng)水溶性分子分散劑的方法，其在水溶性液體或固體親水性載體內(nèi)，可進(jìn)一步制成飲品或軟膠囊或充液膠囊。在一些實(shí)施方式中，在極性或非極性有機(jī)溶劑中的親脂性營(yíng)養(yǎng)素溶液可分散于特定的水溶性親水液體或固體載體系統(tǒng)。通過(guò)真空去除溶劑，所得分散劑保持為均質(zhì)液體或固體分散劑，其適用于填充入軟膠囊或充液膠囊。這種液體或固體分散劑適用于填充入膠囊或制成顆粒劑、片劑，填充入藥囊或制成飲品。在一些實(shí)施方式中，本文的組合物為親脂性營(yíng)養(yǎng)素(例如葉黃素、玉米黃質(zhì)、β胡蘿卜素和番茄紅素)的自由流動(dòng)水溶性分子分散劑，其在水溶性親水液體或固體載體內(nèi)，用于轉(zhuǎn)化為軟膠囊、充液膠囊、軟膏、糊劑、洗劑、擦劑、漱口劑、含漱劑等，其也適合摻入飲品。在一些實(shí)施方式中，提供一種制備親脂性營(yíng)養(yǎng)素的自由流動(dòng)水溶性分子分散劑的方法，其在水溶性親水液體或固體載體內(nèi)，用于轉(zhuǎn)化為軟膠囊、充液膠囊、軟膏、糊劑、洗劑、擦劑、漱口劑、含漱劑等，其也適合摻入飲品，方法包括：(i)將親脂性營(yíng)養(yǎng)素溶解于非極性/極性溶劑或其混合物中從而形成溶液；(ii)過(guò)濾所得溶液從而去除不溶性雜質(zhì)；(iii)將水溶性親水性液體或固體載體、穩(wěn)定劑和任選的表面活性劑分別溶于極性溶劑中從而形成清澈的溶液；(iv)將步驟(i)獲得的溶液和步驟(iii)獲得的溶液混合；(v)加熱所得混合物從而在20-45℃的溫度范圍、500-760mmHg的壓力范圍內(nèi)去除溶劑；(vi)冷卻所得分子分散劑至室溫；和(vii)將步驟(vi)中獲得的冷卻的分子分散劑在合適目徑下過(guò)篩以去除任何團(tuán)塊或結(jié)塊從而產(chǎn)生親脂性營(yíng)養(yǎng)素的自由流動(dòng)水溶性或固體分散劑。術(shù)語(yǔ)“親脂性”雖然是指脂狀，其通常涵蓋了所有水溶性較差的化合物。因此，該術(shù)語(yǔ)的范圍包括水溶性差的氨基酸、蛋白、礦物質(zhì)、草藥提取物如姜黃素、碳水化合物、生物堿、類黃酮和苷類。可使用的親脂性營(yíng)養(yǎng)素包括但不限于：葉黃素、葉黃素酯、玉米黃質(zhì)異構(gòu)體、番茄紅素、β胡蘿卜素、生育酚、蝦青素、ω-3脂肪酸、泛醌、植物甾醇、卵磷脂及其混合物。用于形成分散性溶液的水溶性親水液體或固體載體包括聚乙二醇200、聚乙二醇400、乙二醇、丙二醇、丙三醇、山梨糖醇、葡萄糖漿、玉米漿、甘露醇、聚乙二醇6000、聚乙二醇10000、聚乙二醇20000、聚乙烯吡咯烷酮、羥基丙基甲基纖維素、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、羥基丙基纖維素、聚乙烯醇、可溶性淀粉、水解淀粉及其混合物。在一些實(shí)施方式中，用于制備親脂性營(yíng)養(yǎng)素產(chǎn)品溶液的溶劑可選自：丙酮、己烷、乙酸乙酯、異丙醇、乙醇、二氯甲烷、甲醇等，更優(yōu)選地選自：丙酮、乙醇、二氯甲烷、異丙醇，更優(yōu)選地為二氯甲烷和異丙醇。本方法中可使用的穩(wěn)定劑可選自：抗壞血酸、BHA、BHT、抗壞血酸棕櫚酸酯、迷迭香提取物、混合天然生育酚、α-生育酚乙酸酯、抗壞血酸鈉、蓖麻油衍生物、十二烷基硫酸鈉及其混合物。本方法中可使用的表面活性劑可選自：聚山梨醇酯20、聚山梨酸酯60、聚山梨醇酯80、十二烷基硫酸鈉及其混合物。蒸發(fā)營(yíng)養(yǎng)素分散劑中存在的溶劑的真空加熱步驟可在優(yōu)選為35-45℃的溫度下進(jìn)行。在一些實(shí)施方式中，親脂性營(yíng)養(yǎng)素在分子水平下分散于水溶性親水液體或固體載體中，因此，其溶解度及由此的生物利用度都提高了數(shù)倍。通過(guò)在親水性液體或固體載體中分散親水性營(yíng)養(yǎng)素，所得的營(yíng)養(yǎng)素分散劑的溶解度和生物利用度顯著提高。此外，將親脂性營(yíng)養(yǎng)素分散于親水性液體或固體載體中有助于親脂性營(yíng)養(yǎng)素制劑的劑型例如硬膠囊和軟膠囊。為了達(dá)到分子的分散，需將親脂性營(yíng)養(yǎng)素溶解于極性或非極性溶劑中。基于親脂性營(yíng)養(yǎng)素的化學(xué)特性，可采用極性或非極性或極性和非極性溶劑的混合物。如果需要的話，可以將親脂性營(yíng)養(yǎng)素和溶劑的混合物進(jìn)行加熱從而提高溶解率。很多時(shí)候，需要更多的時(shí)間對(duì)親脂性營(yíng)養(yǎng)素進(jìn)行攪拌從而完成溶解。為了確保溶解完全，必須將所得溶液通過(guò)過(guò)濾介質(zhì)，并僅采用濾液進(jìn)行分子分散。若溶液的粘度較高，還可以采用用于溶解的溶劑來(lái)進(jìn)行稀釋，從而使過(guò)濾步驟更快進(jìn)行。將親水性(水溶性)載體溶于合適的極性溶劑中，例如乙醇、異丙醇、丙酮、甲醇、丙二醇和/或水從而形成清澈的溶液。還可將用于分散劑的親水性水溶性載體與穩(wěn)定劑以及任選的表面活性劑混合。如果需要的話，可在與親水性載體混合之前將穩(wěn)定劑溶于溶劑中。如果所得的混合物并非是清澈的溶液，則可以將所述溶液進(jìn)行過(guò)濾并棄去殘留物。然后將親脂性營(yíng)養(yǎng)素的分散劑與親水性液體或固體載體混合從而獲得均質(zhì)的混合體。為達(dá)此目的，可采用簡(jiǎn)易的磁力攪拌器或電操作攪拌器。也可使用液-液均質(zhì)器或乳化器實(shí)現(xiàn)混合。根據(jù)所得混合物的粘度，得到均質(zhì)混合體所需的時(shí)間范圍可以是15分鐘到1小時(shí)。由于那些營(yíng)養(yǎng)素對(duì)空氣氧化都很敏感，混合步驟可以在惰性氣氛或在抗氧化穩(wěn)定劑的存在下進(jìn)行。對(duì)于那些營(yíng)養(yǎng)素，需要在胃腸道內(nèi)進(jìn)行快速溶解，可以任選地加入食品級(jí)的表面活性劑以提高親脂性營(yíng)養(yǎng)素的溶解度及其生物利用度。然后將由此獲得的均質(zhì)混合體進(jìn)行減壓加熱步驟。由于絕大多數(shù)親脂性營(yíng)養(yǎng)素對(duì)熱、光和氧氣敏感，可能需要在低溫下進(jìn)行加熱，優(yōu)選不超過(guò)45℃。還優(yōu)選采用惰性氣體例如氮?dú)饣驓鍤庠诙栊苑諊逻M(jìn)行加熱。加熱過(guò)程持續(xù)至所得分散劑中的溶劑低于百萬(wàn)分之25。在確保溶劑殘留降低到百萬(wàn)分之25以下后，將所得分子分散劑冷卻到室溫，然后過(guò)100目篩以去除任何團(tuán)塊或結(jié)塊。然后將均質(zhì)的混合體填充入合適的容器中。附圖說(shuō)明圖1顯示了對(duì)于STZ誘導(dǎo)性糖尿病大鼠空腹血糖的治療效果圖。圖2顯示了通過(guò)治療延緩大鼠糖尿病性白內(nèi)障圖。圖3顯示了晶狀體蛋白可溶性部分的SDS-PAGE圖。圖4顯示了晶狀體蛋白可溶性部分的體積排阻色譜圖。圖5顯示了晶狀體山梨醇的熒光光譜測(cè)定圖。圖6顯示了血漿葉黃素水平的HPLC測(cè)定圖。圖7顯示了不同組震蕩電位(OPS)的代表波形和總振幅。圖8顯示了視網(wǎng)膜代表性的組織學(xué)情況。圖9顯示了經(jīng)實(shí)時(shí)PCR(A)和免疫組化(B)獲得的視紫紅質(zhì)的表達(dá)。圖10顯示了經(jīng)實(shí)時(shí)PCR(A)和免疫組化(B)獲得的NGF表達(dá)。圖11顯示了經(jīng)免疫印跡獲得的VEGF表達(dá)。圖12顯示了經(jīng)免疫組化獲得的PDGF表達(dá)。圖13顯示了通過(guò)RP-HPLC測(cè)定的血清葉黃素水平。圖14顯示了不同組中個(gè)體動(dòng)物的震蕩電位(OPS)的代表波形和總振幅。圖15顯示了視網(wǎng)膜代表性的組織學(xué)情況。圖16顯示了經(jīng)實(shí)時(shí)PCR(A)和免疫組化(B)獲得的視紫紅質(zhì)的表達(dá)。圖17顯示了經(jīng)實(shí)時(shí)PCR(A)和免疫組化(B)獲得的NGF表達(dá)。圖18顯示了經(jīng)免疫印跡獲得的VEGF表達(dá)。圖19顯示了經(jīng)免疫組化獲得的PDGF表達(dá)。具體實(shí)施方式糖尿病可引起多種眼部問(wèn)題，最常見(jiàn)的就是糖尿病性視網(wǎng)膜病變(DR)以及糖尿病性白內(nèi)障，也是最常見(jiàn)的致盲性病因?？寡趸瘎┗衔锉徽J(rèn)為在很多人類疾病(例如老年性黃斑變性、白內(nèi)障、糖尿病性眼部并發(fā)癥以及多種其它疾病)的預(yù)防中具有較高的抗氧化潛能。葉黃素是一種在綠葉蔬菜(如菠菜)中天然存在的抗氧化劑。眼部可找到的葉黃素主要存在于黃斑內(nèi)。眾所周知，葉黃素是一種類胡蘿卜素，也是強(qiáng)大的抗氧化劑。其被用作治療白內(nèi)障和黃斑變性(是一種年齡相關(guān)的退行性病變)。葉黃素還在人HepG2細(xì)胞系中表現(xiàn)出保護(hù)性的抗氧化活性。玉米黃質(zhì)是自然界中發(fā)現(xiàn)的最常見(jiàn)的類胡蘿卜醇之一。葉黃素和玉米黃質(zhì)具有相同的化學(xué)式且為異構(gòu)體，但是它們不是立體異構(gòu)體。它們之間唯一的區(qū)別在于其中一個(gè)閉合環(huán)上雙鍵的位置。這一區(qū)別使得葉黃素具有3個(gè)手性中心而玉米黃質(zhì)有2個(gè)。由于對(duì)稱，玉米黃質(zhì)(3R,3'S)和(3S,3'R)立體異構(gòu)體是一樣的。因此，玉米黃質(zhì)僅有三種立體異構(gòu)體形式。(3R,3'S)立體異構(gòu)體被稱為內(nèi)消旋玉米黃質(zhì)。葉黃素和玉米黃質(zhì)的共軛雙鍵有助于區(qū)分各顏料的色彩，并也影響到了其淬滅單線態(tài)氧的能力。由于具有額外的共軛雙鍵，玉米黃質(zhì)被認(rèn)為相比葉黃素而言是更強(qiáng)的抗氧化劑。已經(jīng)證明，葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體復(fù)合物比游離黃葉素抗氧化表現(xiàn)更好，有利于改善保護(hù)氧化造成的損傷。姜黃素，一種來(lái)自于姜黃的黃色顏料，是姜黃的主要成分，通常作為香料和食物著色劑。它也可以用作化妝品和某些藥物制劑。對(duì)姜黃所預(yù)期或推定的治療特性也被認(rèn)為與其抗氧化性和抗炎性質(zhì)相關(guān)。姜黃素被認(rèn)為在多種炎性病理并發(fā)癥，例如癌癥、動(dòng)脈粥樣硬化以及神經(jīng)退行性病變中具有極其重要的作用。若僅以目前常用的油混懸劑或微粒劑形式施用，親脂性營(yíng)養(yǎng)素吸收較差。吸收差的主要原因是其水溶性較差。由于它們水溶性差，它們的生物利用度也很差。分子水平上營(yíng)養(yǎng)素產(chǎn)品的分散提供了營(yíng)養(yǎng)素在水中更高的膠束化效率，從而提高其生物利用度。本文的親脂性營(yíng)養(yǎng)素組合物含有至少8重量％的總黃葉素，其中反式葉黃素含量是80-95％w/w；(R,R)-玉米黃質(zhì)為14-20％w/w；(R,S)-玉米黃質(zhì)為0.01-1％w/w，或反式-葉黃素含量為80-95％w/w；(R,R)-玉米黃質(zhì)為14-20％w/w，以及微量的其它類胡蘿卜素，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂或含有5-95％姜黃素類化合物的姜黃素，其為高水溶性形式，且生物利用度增強(qiáng)，可延緩糖尿病眼部相關(guān)性并發(fā)癥的發(fā)展和形成。本文的組合物含有親脂性營(yíng)養(yǎng)素、穩(wěn)定劑、水溶性親水性載體和任選的表面活性劑。本文的組合物含有至少80重量％的總黃葉素，其中反式葉黃素含量是80-95％w/w；(R,R)-玉米黃質(zhì)為14-20％w/w；(R,S)-玉米黃質(zhì)為0.01-1％w/w或反式-葉黃素含量為80-95％w/w；(R,R)-玉米黃質(zhì)為14-20％w/w，以及微量的其它類胡蘿卜素，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂或含有5-95％姜黃素類化合物的姜黃素。所用的穩(wěn)定劑選自：抗壞血酸、丁基羥基苯甲醚(BHA)、丁基羥基甲苯(BHT)、抗壞血酸棕櫚酸酯、迷迭香提取物、混合天然生育酚、α-生育酚乙酸酯、抗壞血酸鈉、蓖麻油衍生物、十二烷基硫酸鈉及其混合物。所用的載體選自：聚乙二醇200、聚乙二醇400、乙二醇、丙二醇、丙三醇、山梨醇、葡萄糖漿、玉米漿、甘露醇、聚乙二醇6000、聚乙二醇10000、聚乙二醇20000、聚乙烯吡咯烷酮、羥基丙基甲基纖維素、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、羥基丙基纖維素、聚乙烯醇、可溶性淀粉、水解淀粉及其混合物。表面活性劑選自：聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、卵磷脂、蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、十二醇硫酸鈉及其混合物。進(jìn)行大鼠研究從而測(cè)定親脂性營(yíng)養(yǎng)素四個(gè)樣品在糖尿病眼部并發(fā)癥中的活性，即反式葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的水溶性組合物(在售商品名為UltraSolLutemax2020TM)；含有反式葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的濃縮物(在售商品名為)；和含有姜黃素的水溶性組合物(在售商品名為UltraSolCurcuWinTM)以及姜黃素粉。在一些實(shí)施方式中，本文的組合物包括黃葉素組合物，其含有反式葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的黃斑色素，包括(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和健康。在一些實(shí)施方式中，黃葉素組合物含有至少80重量％的總黃葉素，其中反式葉黃素的含量為至少80％(按重量計(jì))，剩余皆為玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，包括(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和保健。在一些實(shí)施方式中，黃葉素組合物含有至少85重量％的總黃葉素，其中反式葉黃素的含量為至少85％(按重量計(jì))，剩余皆為玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，包括(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和保健。在一些實(shí)施方式中，黃葉素組合物含有至少85重量％的總黃葉素，其中至少80％(按重量計(jì))為反式葉黃素，至少6％(按重量計(jì))為(R,R)-玉米黃質(zhì)和至少6％(按重量計(jì))為(R,S)-玉米黃質(zhì)，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和保健。在一些實(shí)施方式中，黃葉素組合物含有至少85％(按重量計(jì))反式葉黃素，至少4％(按重量計(jì))的(R,R)-玉米黃質(zhì)和至少5％(按重量計(jì))的(R,S)-玉米黃質(zhì)，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和保健。在一些實(shí)施方式中，黃葉素組合物含有至少85％(按重量計(jì))的總黃葉素，其中反式葉黃素的含量為至少80％(按重量計(jì))，剩余至少15％(按重量計(jì))為玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，包括(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和保健。在一些實(shí)施方式中，一種制備含有黃斑色素的黃葉素組合物的方法，所述黃斑色素由反式葉黃素、玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，即(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)組成，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和保健，其中：a)皂化步驟，用于將植物提取物/油性樹(shù)脂中的黃葉素酯轉(zhuǎn)化為去酯化形式從而能夠與葉黃素有限的異構(gòu)化結(jié)合以產(chǎn)生黃葉素組合物，其具有更高含量的反式葉黃素，其余皆為玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，包括(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)，以及微量的其它類胡蘿卜素，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和保健康；b)在皂化步驟中，將氫氧化鉀或氫氧化鈉溶解于1-丙醇中，不加水；c)皂化/異構(gòu)化的溫度可介于70-100℃之間，優(yōu)選約為95℃，且皂化的時(shí)長(zhǎng)可以為1-2小時(shí)；和d)如果需要，本方法中所采用的乙酸乙酯可以回收并使用，從而使本方法較經(jīng)濟(jì)。在一些實(shí)施方式中，黃葉素組合物含有黃斑色素，所述黃斑色素由反式葉黃素、玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，包括(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)組成，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和保健，其含有至少80％(按重量計(jì))的總黃葉素，其中反式葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的比例在4:1-6:1的范圍內(nèi)，且玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的比例在80:20-20:80的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方式中，反式葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體之比約為5：1的比例。在一些實(shí)施方式中，黃葉素組合物含有至少85％(按重量計(jì))的總黃葉素，其中反式葉黃素含量為至少85％，且反式葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體之比在4:1-6:1的范圍內(nèi)，且玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的比例在80:20-20:80的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方式中，一種制備含有黃斑色素的黃葉素組合物的方法，所述黃斑色素由反式葉黃素、玉米黃質(zhì)異構(gòu)體，即(R,R)-玉米黃質(zhì)和(R,S)-玉米黃質(zhì)組成，其來(lái)源于含有黃葉素/黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂，其對(duì)于人食用是安全的，且有利于營(yíng)養(yǎng)和保健，方法包括：(a)通過(guò)將提取物/油性樹(shù)脂與1-丙醇的堿性溶液混合，同時(shí)將存在于含有黃葉素酯的植物提取物/油性樹(shù)脂中的黃葉素酯進(jìn)行皂化和部分異構(gòu)化，堿和1-丙醇之比在1:0.5-1：1的范圍內(nèi)(重量/體積)，在70-100℃的溫度范圍內(nèi)加熱所得混合體(優(yōu)選為95℃)1-5小時(shí)，從而獲得經(jīng)皂化/經(jīng)異構(gòu)化的粗濃縮物；(b)將步驟(a)中所得的經(jīng)皂化/經(jīng)異構(gòu)化的粗濃縮物與水混合，所采用的濃縮物和水的比例為1:2-1:3(體積/體積)，從而形成經(jīng)稀釋的油性混合物；(c)用乙酸乙酯對(duì)步驟(b)中獲得的經(jīng)稀釋的油性混合物進(jìn)行提取，所用的經(jīng)稀釋的油性混合物和乙酸乙酯之比在1:1.5-1：2(體積/體積)范圍內(nèi)，從而獲得含有黃葉素組合物的提取物；(d)將步驟(c)中獲得的組合物進(jìn)行蒸發(fā)以去除乙酸乙酯；(e)通過(guò)先采用非極性后采用極性溶劑洗滌并過(guò)濾，將步驟(d)獲得的組合物進(jìn)行純化；(f)在40-45℃的溫度范圍內(nèi)對(duì)所得的組合物進(jìn)行真空干燥，時(shí)長(zhǎng)48-72小時(shí)；(g)如果需要且如果需要再次使用，通過(guò)常規(guī)方法將步驟(c)中的乙酸乙酯進(jìn)行回收；和(h)如果需要，將所得組合物儲(chǔ)存于-20℃下的惰性氣氛中。通過(guò)調(diào)整溫度、時(shí)長(zhǎng)和步驟(a)中的堿和步驟(b)和(c)中的比例，可獲得所需的組合物。應(yīng)當(dāng)注意的是，多葉綠色蔬菜、玉米、水果和/或萬(wàn)壽菊可作為黃葉素油性樹(shù)脂的來(lái)源。但考慮到在大多數(shù)水果中，葉黃素與游離形式的玉米黃質(zhì)共同存在，且相關(guān)的還有大量葉綠素和其它不需要的類胡蘿卜素，盡管根據(jù)本發(fā)明可以采用多葉綠色蔬菜、玉米、水果，但考慮到葉黃素和玉米黃質(zhì)在上述原料里濃度較低且還要不太經(jīng)濟(jì)的純化精制步驟，萬(wàn)壽菊是制備本發(fā)明組合物的原料的優(yōu)先選擇。具體地，可采用市售食品級(jí)的萬(wàn)壽菊油性樹(shù)脂己烷提取物作為原料(Kumar等，黃葉素晶體的制備方法(ProcessforthePreparationofXanthophyllsCrystals),美國(guó)專利號(hào)6,743,953,2004；Kumar美國(guó)專利號(hào)6,737,535,2004)制備含有反式葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的黃葉素組合物。萬(wàn)壽菊花(Tageteserecta)被認(rèn)為可能是最好的反式葉黃素市售來(lái)源，因?yàn)槠浜腥~黃素單-和二酯作為主要的類胡蘿卜素成分。步驟(a)中所用的堿可選自氫氧化鈉或氫氧化鉀。步驟(d)中所用的非極性溶劑可以是碳?xì)浠衔锶軇蛇x自：戊烷、己烷和庚烷等，優(yōu)選為己烷。步驟(e)中所用的極性溶劑可選自低級(jí)脂肪醇。用于儲(chǔ)存所得組合物的惰性氛圍可以保持為惰性氣體，如氮?dú)?。在一些?shí)施方式中，將含有黃葉素酯的提取物與溶解有堿的1-丙醇混合。堿、1-丙醇和植物提取物之間的比例分別是0.5-1:0.5-1.0和1。將混合物攪拌加熱至90℃并維持1-5小時(shí)。反應(yīng)混合物的總黃葉素由分光光度分析測(cè)得(AOAC-16版方法970.64)，而同樣樣本的HPLC分析則提供反式-葉黃素和玉米黃質(zhì)的百分比(Hadden等，J.Agric.Food.Chem,47,4189-494,1999)。提取物/油性樹(shù)脂的皂化造成黃葉素和脂肪酸堿性鹽以游離形式釋放出。異構(gòu)化反應(yīng)將來(lái)自萬(wàn)壽菊的部分葉黃素轉(zhuǎn)化為(R,S)-玉米黃質(zhì)。葉黃素向玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的異構(gòu)化可根據(jù)改變工藝參數(shù)，如堿和溶劑之比、溫度和時(shí)長(zhǎng)而變化。反應(yīng)混合物中的黃葉素組合物的分析通過(guò)提取到己烷：丙酮：乙醇：甲苯(10:7:6:7v/v)然后額外加入己烷和10％硫酸鈉溶液并由HPLC分析上層而得。在達(dá)到所需的異構(gòu)化程度且黃葉素組合物中的反式葉黃素含量基本在85％左右之后，用水稀釋反應(yīng)混合物并在室溫下充分?jǐn)嚢?，從而獲得黃色油性層，其含有游離形式的黃葉素以及脂肪酸、皂類和雜質(zhì)。將該油性層轉(zhuǎn)移至分液漏斗之后，加入乙酸乙酯并萃取黃葉素。用同等體積的去離子水洗滌乙酸乙酯層兩次。因此，脂肪酸和皂類物質(zhì)轉(zhuǎn)移至水中，然后棄去。然后通過(guò)減壓蒸餾出溶劑將乙酸乙酯提取物進(jìn)行濃縮，從而回收乙酸乙酯和黃葉素粗濃縮物。通過(guò)在室溫下與己烷攪拌1小時(shí)后過(guò)濾，將黃葉素濃縮組合物進(jìn)行純化。再用乙醇洗滌黃葉素混合體，在室溫下將所得橘色晶體進(jìn)行真空干燥72小時(shí)。在一些實(shí)施方式中，該組合物是生物利用度增強(qiáng)的水溶性組合物，其包括具有協(xié)同作用的姜黃素、至少一種抗氧化劑、親水性載體和脂肪。在一些實(shí)施方式中，制備姜黃素組合物的方法包括步驟：將姜黃素、至少一種抗氧化劑、親水性載體和脂肪在溶劑中溶解以形成均質(zhì)的混合體；將所得的混合體在25℃-60℃溫度范圍內(nèi)加熱4-8小時(shí)，從而獲得干濕混合體；通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑從而形成干混合體并將干混合體進(jìn)行研磨從而得到細(xì)粉末。在一些實(shí)施方式中，生物利用度增強(qiáng)的、含有姜黃素的水溶性組合物可以是口服施用的形式。在一些實(shí)施方式中，生物利用度增強(qiáng)的、含有姜黃素的水溶性組合物，對(duì)于人食用是安全的且不具有任何明顯的副作用。在一些實(shí)施方式中，描述了生物利用度增強(qiáng)的、含有姜黃素的水溶性組合物的制備方法。在一些實(shí)施方式中，生物利用度增強(qiáng)的水溶性組合物含有具有協(xié)同作用的姜黃素、至少一種抗氧化劑、親水性載體和脂肪。在一些實(shí)施方式中，生物利用度增強(qiáng)的新水溶性組合物的制備方法包括：(i)在溶劑中溶解姜黃素、至少一種抗氧化劑、親水性載體和脂肪從而形成均質(zhì)的混合體；(ii)將所得的混合體在25℃-60℃溫度范圍內(nèi)加熱4-8小時(shí)，從而獲得干濕混合體；(iii)通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑從而形成干混合體；和(iv)將干混合體進(jìn)行研磨從而得到細(xì)粉末。步驟(i)中所用的姜黃素可以是市售的，其含量范圍為85-96％。它還可以是富含姜黃素的姜黃提取物。所加入的姜黃素的量可足以使水溶性姜黃素中含有1-55％的姜黃素。步驟(i)中所用的抗氧化劑可選自：天然生育酚，抗壞血酸棕櫚酸酯，迷迭香提取物，表沒(méi)食子兒茶素，兒茶素，抗壞血酸及其混合物。所采用的抗氧化劑的量的范圍是1-10％。步驟(i)中所用的親水性載體可以選自：可溶性淀粉、羥基丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇200-20000、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、葡萄糖、糖及其混合物。所加入的親水性載體的量的范圍是10-90％。步驟(i)中所用的脂肪可以選自：乳脂肪，中鏈甘油三酯，長(zhǎng)鏈甘油三酯，氫化植物油及其混合物。所用的脂肪的量的范圍是1-25％。步驟(i)中所用的溶劑可選自：異丙醇、丙酮、甲醇、乙醇及其混合物。獲得均質(zhì)混合體所維持的溫度范圍是環(huán)境溫度至70℃，優(yōu)選為25-60℃。步驟(iii)中溶劑的去除可以通過(guò)真空蒸餾或蒸發(fā)技術(shù)、或通過(guò)噴霧干燥技術(shù)進(jìn)行。所得的干燥混合體通過(guò)采用研缽和杵、混合器-粉碎機(jī)、多磨機(jī)、球磨機(jī)、噴磨機(jī)等進(jìn)行研磨。姜黃素的有益效果已經(jīng)眾所周知。然而，將姜黃素通過(guò)口服形式遞送仍有很多生物利用度相關(guān)的問(wèn)題。大部分?jǐn)z入的姜黃素未經(jīng)代謝就通過(guò)糞便排泄掉，吸收掉的小部分則轉(zhuǎn)化成其它代謝物并排出。姜黃素不容易穿透胃腸道，且受制于肝臟和其它腸酶。由于這些酶，體內(nèi)的姜黃素被快速代謝，造成其在體內(nèi)的生物利用度降低。進(jìn)入血流的少量姜黃素被肝臟和腎臟快速代謝。因此，盡管姜黃素高度親脂(且因此容易透過(guò)血腦屏障)，在血清和和腦組織中僅可檢測(cè)到非常小部分口服服用的姜黃素。細(xì)胞色素P450是階段I的代謝同工酶，需要用于代謝有毒的化學(xué)物質(zhì)，例如雜環(huán)胺(其誘導(dǎo)DNA加成物的形成從而導(dǎo)致癌變)。當(dāng)攝入體內(nèi)的姜黃素進(jìn)入胃腸道時(shí)，發(fā)現(xiàn)它抑制了細(xì)胞色素P450。如上所述，有研究將其與胡椒堿一起使用并提高了它的生物利用度。胡椒堿是一種抑制細(xì)胞色素P450的生物增強(qiáng)劑，從而阻止姜黃素在體內(nèi)代謝。本文的組合物在沒(méi)有任何額外生物增強(qiáng)劑存在的情況下提高其生物利用度。姜黃素的水溶性組合物含有抗氧化劑、親水性載體和脂肪。姜黃素和抗氧化劑一起抑制了細(xì)胞色素P450。另一方面，組合物表面脂肪包覆層的存在防止該組合物受到肝臟微粒體或其它腸酶的攻擊，因?yàn)檫@些腸酶僅攻擊水性化合物。因此，抗氧化劑和脂肪在提高姜黃素的生物利用度上至關(guān)重要。早期研究表明，在飲食中延緩了1％大鼠的糖尿病性白內(nèi)障而非是(0.1％)。額外的(1％)僅延緩而未完全預(yù)防糖尿病性白內(nèi)障，因此采用反式-葉黃素和玉米黃素異構(gòu)體水溶性組合物(UltraSolLutemax2020TM)進(jìn)一步測(cè)試組合物對(duì)于糖尿病眼部并發(fā)癥(例如糖尿病性白內(nèi)障和糖尿病性視網(wǎng)膜病變)的預(yù)防/治療效果。通過(guò)示例本發(fā)明創(chuàng)新的方式給出以下實(shí)施例，因此不應(yīng)當(dāng)解釋為對(duì)其范圍的限制。為了將含有反式-葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的水溶性組合物和含有姜黃素的水溶性組合物與含有反式-葉黃素和玉米黃質(zhì)異構(gòu)體的普通組合物和含有姜黃素的普通組合物對(duì)于預(yù)防或延緩糖尿病性白內(nèi)障和糖尿病性視網(wǎng)膜病變的效果進(jìn)行比對(duì)測(cè)定，采用鏈脲霉素(STZ)誘導(dǎo)大鼠糖尿病。實(shí)施例1UltraSolLutemax2020TM和UltraSolCurcuWinTM對(duì)糖尿病性白內(nèi)障的效果實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)從印度海德拉巴國(guó)家營(yíng)養(yǎng)研究所國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)中心取得雄性Wistar品系(WNIN)大鼠(2月齡；平均BW213±14g)。動(dòng)物維持NCLAS、NIN，并在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行2周的環(huán)境適應(yīng)。采用單劑pH4.5的STZ(30mg/kg)0.1M檸檬酸緩沖液對(duì)隔夜禁食的動(dòng)物進(jìn)行腹腔內(nèi)注射。另一組大鼠僅接受載體作為對(duì)照(組I；n＝12)。在STZ注射后72小時(shí)測(cè)定空腹血糖水平。血糖水平＞150mg/dL動(dòng)物被認(rèn)為患有糖尿病，將它們分為5組(組II-VI)。對(duì)照大鼠組(n＝6)單獨(dú)喂食0.01％的可溶性姜黃素(組VII)以及0.5％的可溶性葉黃素(組VIII)。所有動(dòng)物單獨(dú)籠養(yǎng)，其各自的飲食維持12周，整個(gè)研究期間飲用水可自由采食。表1：實(shí)驗(yàn)分組和飲食分組動(dòng)物數(shù)量飲食I對(duì)照12美國(guó)營(yíng)養(yǎng)協(xié)會(huì)(AIN)93II糖尿病14AIN93III糖尿病+SC12AIN93及0.01％可溶性姜黃素(SC)IV糖尿病+RC12AIN93及0.01％普通姜黃素(RC)V糖尿病+SL12AIN93及0.5％可溶性葉黃素(SL)VI糖尿病+RL12AIN93及0.5％普通葉黃素(RL)VII對(duì)照+SC6AIN93及0.01％可溶性姜黃素(SC)VIII對(duì)照+SL6AIN93及0.5％可溶性葉黃素(SL)動(dòng)物護(hù)理：動(dòng)物的護(hù)理和使用按照制度和國(guó)家指南，所有涉及動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)方法均由國(guó)家營(yíng)養(yǎng)研究所的IAEC(研究動(dòng)物倫理委員會(huì))批準(zhǔn)。動(dòng)物均在溫度(22℃)和濕度可控制的房間內(nèi)在單獨(dú)籠內(nèi)飼養(yǎng)，12小時(shí)晝/夜循環(huán)。所有動(dòng)物可自由取食水。食物攝入(日間)和體重(每周)均被監(jiān)測(cè)。裂隙燈檢查和白內(nèi)障分級(jí)：在擴(kuò)瞳的情況下，每周采用裂隙燈生物顯微鏡對(duì)眼部進(jìn)行檢查。將晶狀體混濁的發(fā)生和發(fā)展分為5級(jí)(0-4)。死亡率：在研究期間，組II的3只動(dòng)物和組III-VI的各2只動(dòng)物死于預(yù)期的高血糖癥。血/晶狀體采集和處理：每周從眼球后叢取血一次進(jìn)行血糖和胰島素評(píng)估。在12周末時(shí)，通過(guò)CO2窒息法處死動(dòng)物，通過(guò)后入路解剖晶狀體并于-70℃下保存用于后續(xù)分析。3-5個(gè)晶狀體合并于pH7.4的50mM磷酸緩沖液中制成10％的勻漿。除了晶狀體丙二醛(MDA)(在總勻漿中測(cè)得)，所有生化參數(shù)均在晶狀體勻漿的可溶部分(15,000xg，4℃)中測(cè)得。生化評(píng)估：晶狀體MDA，如硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)蛋白質(zhì)羰基含量是根據(jù)SuryanarayanaP等在研究論文“姜黃素和姜黃延緩大鼠鏈脲霉素誘導(dǎo)的糖尿病白內(nèi)障”(“Curcuminandturmericdelaystreptozotocin-induceddiabeticcataractinrats”,InvestOphthalmolVisSci)中描述的蛋白質(zhì)羰基含量的評(píng)估方法而確定的?？?、可溶性和不可溶性蛋白則通過(guò)采用小牛血清(BSA)Lowry法按標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定。血漿葉黃素水平：血漿葉黃素水平通過(guò)HPLC測(cè)定，其采用連接到DionexUltiMate3000快速分離液相色譜(RSLC)的4.6×150mm、5μm沃特世(waters)C18色譜柱。色譜柱經(jīng)流動(dòng)相乙腈：二氯乙烷：甲醇以70:20:10(v/v)比例的等度溶劑混合物于25℃下以0.5ml/min的流速平衡。2μl的血漿樣本(經(jīng)己烷萃取)上樣至色譜柱，并在300-600nm下檢測(cè)葉黃素。晶狀體蛋白的十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和體積排阻色譜：可溶性蛋白的亞單位形狀和交聯(lián)在還原條件下，在十二烷基硫酸鈉(SDS)存在下在10％聚丙烯酰胺上進(jìn)行分析?？扇苄缘鞍撞糠种械木w分布由體積排阻色譜在600x7.5mmTSK-G4000SW柱(TOSOH公司，日本)上采用HPLC系統(tǒng)進(jìn)行。該柱由含有0.1M氯化鈉的0.1M磷酸鈉緩沖液(pH6.7)以1ml/min的流速平衡。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用單因素方差分析(ANOVA)對(duì)數(shù)據(jù)的組間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異進(jìn)行檢驗(yàn)，而個(gè)體配對(duì)差異則由鄧肯多重比較試驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。方差的異質(zhì)性則由非參數(shù)Mann-Whitney檢驗(yàn)進(jìn)行，其中p＜0.05被認(rèn)為具有顯著差異。結(jié)果空腹血糖：圖1概括了在整個(gè)治療期間不同組動(dòng)物的空腹血糖結(jié)果。實(shí)驗(yàn)期間，糖尿病對(duì)照大鼠的血漿葡萄糖濃度顯著高于非糖尿病對(duì)照大鼠。盡管用SC和SL治療的組觀察到了更低的平均空腹血糖水平，但在糖尿病大鼠的血漿葡萄糖上并未見(jiàn)到顯著的治療效果。圖1：對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠空腹血糖的治療效果。(圖1在伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中示出)。數(shù)據(jù)表示為測(cè)定結(jié)果平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEM)；對(duì)照(非糖尿病對(duì)照)；D(糖尿病對(duì)照)；D+RL(糖尿病+普通葉黃素)；D+SL(糖尿病+可溶性葉黃素)；D+RC(糖尿病+普通姜黃素)；D+SC(糖尿病+可溶性姜黃素)。***＝p＜0.001。白內(nèi)障發(fā)生和進(jìn)展：白內(nèi)障的發(fā)生和進(jìn)展裂隙燈生物顯微鏡按下述進(jìn)行監(jiān)測(cè)：在擴(kuò)瞳的情況下，每周采用裂隙燈生物顯微鏡(KowaSL15，便攜式，日本)對(duì)眼部進(jìn)行檢查。將晶狀體混濁的發(fā)生和發(fā)展分為以下5級(jí)：“清澈”，晶狀體清澈且無(wú)液泡存在；“階段1”，液泡覆蓋前極表面約一半，形成囊下白內(nèi)障；“階段2”，有些液泡消失，且皮質(zhì)出現(xiàn)朦朧的混濁；“階段3”，朦朧皮質(zhì)持續(xù)，并出現(xiàn)致密的核質(zhì)混濁；以及“階段4”，觀察到成熟的白內(nèi)障，皮質(zhì)和核質(zhì)均現(xiàn)致密的混濁(圖2)。圖2：通過(guò)治療延緩大鼠的糖尿病性白內(nèi)障。(圖2在相伴說(shuō)明書(shū)的附圖中示出)。數(shù)據(jù)表示為測(cè)定結(jié)果平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEM)；對(duì)照(非糖尿病對(duì)照)；D(糖尿病對(duì)照)；D+RL(糖尿病+普通葉黃素)；D+SL(糖尿病+可溶性葉黃素)；D+RC(糖尿病+普通姜黃素)；D+SC(糖尿病+可溶性姜黃素)。在注射STZ三周后，在糖尿病動(dòng)物中觀察到由于高血糖引起的白內(nèi)障出現(xiàn)。對(duì)白內(nèi)障的平均發(fā)生率進(jìn)行了計(jì)算并示于圖2。相比于組D，盡管白內(nèi)障的出現(xiàn)沒(méi)有延遲，但是所有的治療組均明確地延遲了白內(nèi)障的發(fā)展和形成。在第十周末，組D的動(dòng)物表現(xiàn)為晶狀體渾濁化(階段IV)，而治療組則表現(xiàn)在階段2.5-3左右。數(shù)據(jù)清楚地表明，與組D相比，從之前的六周開(kāi)始，白內(nèi)障干預(yù)組有明顯的發(fā)展和形成延遲。在十周末，組D+RL(階段3.1)、D+SL(階段2.7)、D+RC(階段3.0)和D+SC(階段3.2)白內(nèi)障的嚴(yán)重程度顯著低于組D(階段4)，這表示任何藥物的干預(yù)都使得由于進(jìn)展緩慢而延遲糖尿病性白內(nèi)障的形成。此外，SL看上去比RL更有效，但SC并沒(méi)有在白內(nèi)障進(jìn)展中比RC表現(xiàn)出更優(yōu)越的效果。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，組C的晶狀體都表現(xiàn)為正常、清澈、無(wú)混濁。晶狀體生化分析：各個(gè)晶狀體經(jīng)稱重，4個(gè)晶狀體合并為一個(gè)集合體，每組形成4-5個(gè)集合體。用50mM磷酸鈉緩沖液(pH7.4)，采用組織勻漿器間歇性時(shí)間(操作)以避免額外的熱量生成，由此制備10％的勻漿。將總勻漿(TH)單獨(dú)分為小份，取250μl用于TBARS試驗(yàn)，150μl用于山梨醇評(píng)估，以及20μl用于蛋白評(píng)估。剩下的勻漿在4℃、10000RPM下離心30分鐘。將上清液分離，裝入帶標(biāo)簽的小瓶中作為總可溶性蛋白(TSP)。晶狀體勻漿中可溶性蛋白百分比測(cè)定：采用Lowry法進(jìn)行晶狀體勻漿和可溶性部分的蛋白評(píng)估。計(jì)算每克晶狀體中蛋白的量。將可溶性蛋白分?jǐn)?shù)乘以一百得到可溶性蛋白的百分比。我們分析了所有實(shí)驗(yàn)組中晶狀體總蛋白和可溶性蛋白的含量。與對(duì)照組相比，組D的總蛋白和可溶性蛋白均有顯著下降。這可能是因?yàn)椴糠值鞍仔孤兜椒克谢虻鞍拙鄯e和不溶。與組D相比，治療組中SL和RC顯著預(yù)防了可溶性蛋白的丟失，而單SL就與組D在可溶性蛋白的百分比上具有顯著差異。SC和RL對(duì)于預(yù)防晶狀體蛋白的不可溶上具有部分有益效果，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上相對(duì)沒(méi)有那么顯著。表2：總晶狀體勻漿及其可溶性部分的蛋白含量。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，n＝6；對(duì)照(非糖尿病對(duì)照)；D(糖尿病對(duì)照)；D+RL(糖尿病+普通葉黃素)；D+SL(糖尿病+可溶性葉黃素)；D+RC(糖尿病+普通姜黃素)；D+SC(糖尿病+可溶性姜黃素)；***＝p＜0.001，**＝P＜0.01，和*＝P＜0.05相對(duì)C；##＝P＜0.01以及#＝P＜0.05相對(duì)D表2SDS-PAGE蛋白譜：將晶狀體蛋白樣本上樣于12％聚丙烯酰胺凝膠，從而觀察蛋白分布圖的區(qū)別。每孔中加入30μg蛋白和分子質(zhì)量標(biāo)記物用于SDS-PAGE(廣譜SDS-PAGE標(biāo)記物，BioRad)。組D對(duì)于組C，可溶性蛋白部分的SDS電泳圖在50kDa處表現(xiàn)出蛋白聚積的條帶，而治療組RL、SL、RC和SC則表現(xiàn)出條帶密度降低。圖3，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示，顯示了晶狀體蛋白可溶性部分的SDS-PAGE圖。體積排阻高效液相色譜法：在TSK-3000HPLC柱上進(jìn)行體積排阻色譜解析晶體狀的晶狀體蛋白。HPLC圖譜表明，組C相比(黑線)，組D(紅線)TSP低分子量區(qū)域的峰面積下降，高分子量蛋白區(qū)域的峰面積升高。這提示在糖尿病狀下出現(xiàn)蛋白聚積現(xiàn)象。除了RL以外的干預(yù)，例如SL、RC和SC均使TSP的圖形正常化。除了RL，其它組合物SL、RC和SC干預(yù)了TSP并使該圖形正常化，然而RL對(duì)TSP水平未表現(xiàn)出任何效果，它們?nèi)缣悄虿顟B(tài)一樣維持非正常。圖4，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示，顯示了晶狀體蛋白可溶性部分體積排阻色譜。山梨醇水平：我們?cè)谒袑?shí)驗(yàn)動(dòng)物的晶狀體中測(cè)定到了山梨醇的聚積，數(shù)據(jù)如圖8所示。與組C相比(山梨醇0.301±0.04微摩爾/gm晶狀體)，組D顯示出山梨醇水平顯著提高(5.877±0.27)。在干預(yù)組中，與組D相比，除了SC以外，持續(xù)的治療并未降低山梨醇的聚積。組SC的山梨醇水平顯著低于組D，但其山梨醇水平顯著高于組C。這可能歸因于姜黃素作為醛糖還原酶抑制劑的額外藥理學(xué)活性。圖5：晶狀體山梨醇的熒光光譜測(cè)定(圖5在伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中示出)。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，n＝6；對(duì)照(非糖尿病對(duì)照)；D(糖尿病對(duì)照)；D+RL(糖尿病+普通葉黃素)；D+SL(糖尿病+可溶性葉黃素)；D+RC(糖尿病+普通姜黃素)；D+SC(糖尿病+可溶性姜黃素)；*＝P<0.05相對(duì)C；#＝P<0.05相對(duì)D。血漿葉黃素水平：血漿葉黃素水平由HPLC測(cè)得。由于嚙齒類動(dòng)物的飲食食物不含有類胡蘿卜素，在對(duì)照和糖尿病大鼠中并未測(cè)到葉黃素。然而，葉黃素可在葉黃素補(bǔ)充組內(nèi)測(cè)得。用普通葉黃素喂食糖尿病大鼠導(dǎo)致測(cè)得0.01微摩爾/L的血漿葉黃素(圖6)。喂食可溶性葉黃素導(dǎo)致血漿葉黃素提升了7倍即0.07微摩爾(圖6)，這提示可溶性葉黃素顯著提高了葉黃素的生物利用度，且可溶性葉黃素可能是比普通葉黃素更具有有益效果的原因。圖6：血漿葉黃素水平的HPLC測(cè)定(圖6在伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中示出)。數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，n＝6；對(duì)照(非糖尿病對(duì)照)；D(糖尿病對(duì)照)；D+RL(糖尿病+普通葉黃素)；D+SL(糖尿病+可溶性葉黃素)。結(jié)論補(bǔ)充姜黃素挽救了P23H視紫紅質(zhì)突變的轉(zhuǎn)基因大鼠的光感受器退化。喂食食用性抗氧化劑姜黃素，主要依靠其抗氧化特性，對(duì)鏈脲霉素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病性白內(nèi)障具有延遲效果。此外，姜黃素抑制了晶狀體醛糖還原酶(AR)以及大鼠視網(wǎng)膜的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的糖尿病誘導(dǎo)性表達(dá)。與普通葉黃素相比，可溶性葉黃素在0.5％飲食劑量下更能有效延緩糖尿病性白內(nèi)障，這表現(xiàn)在與白內(nèi)障發(fā)生相關(guān)的分子分析中。可溶性葉黃素生物利用度的提高，解釋了所觀察到的比普通葉黃素更好的可溶性葉黃素生物效應(yīng)?？扇苄越S素的效果與普通姜黃素相比差不多。實(shí)施例2UltraSolLutemax2020TM-對(duì)于糖尿病性視網(wǎng)膜病變的影響(通過(guò)基因營(yíng)養(yǎng)學(xué)方法)通過(guò)基因營(yíng)養(yǎng)學(xué)方法，測(cè)定可溶性葉黃素(UltraSolLutemax2020TM)對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜的有益效果，并將該效果與普通葉黃素作比較方法學(xué)動(dòng)物模型：鏈脲霉素(STZ)糖尿病大鼠模型是人類糖尿病最常用的模型之一。已知其可以模擬在人類糖尿病中觀察到的多種急性和部分慢性并發(fā)癥。該模型的優(yōu)點(diǎn)在于其高度可復(fù)制性，其多種并發(fā)癥發(fā)展的時(shí)間軸已經(jīng)得到公認(rèn)且為可復(fù)制的?？紤]到人類疾病某些結(jié)構(gòu)性、功能性以及生化異常的相似性，它被認(rèn)為是評(píng)估糖尿病機(jī)制及其潛在治法的合適模型。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：從海德拉巴國(guó)家營(yíng)養(yǎng)研究所國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)中心(NCLAS,NIN)取得雄性Wistar-NIN(WNIN)大鼠(2月齡；平均BW213±14g)。動(dòng)物維持NCLAS、NIN，并在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行2周的環(huán)境適應(yīng)。采用單劑pH4.5的STZ(30mg/kg)0.1M檸檬酸緩沖液對(duì)隔夜禁食的動(dòng)物進(jìn)行腹腔內(nèi)注射。另一隊(duì)大鼠僅接受載體作為對(duì)照(組C；n＝6)。在STZ注射后72小時(shí)測(cè)定空腹血糖水平。血糖水平＞150mg/dL的動(dòng)物被認(rèn)為患有糖尿病，所有動(dòng)物被分為4組，如下表3所示。表3分組動(dòng)物數(shù)飲食I對(duì)照6AIN93II糖尿病9AIN93III糖尿病+可溶性葉黃素(SL)8AIN93及0.5％可溶性葉黃素IV糖尿病+普通葉黃素(RL)6AIN93及0.5％普通葉黃素所有動(dòng)物單獨(dú)籠養(yǎng)，其各自的飲食維持12周，整個(gè)研究期間飲用水可自由采食。記錄每日飲食攝入以及每周體重、空腹血糖水平。在處死之前，進(jìn)行視網(wǎng)膜電流圖測(cè)試并測(cè)定糖化血紅蛋白(HbA1C)。在12周末，將大鼠進(jìn)行安樂(lè)死并取視網(wǎng)膜進(jìn)行組織學(xué)和分子分析(基因和蛋白表達(dá))。視網(wǎng)膜電流圖(ERG)分析：糖尿病性視網(wǎng)膜病變的特征是視網(wǎng)膜功能的失調(diào)。視網(wǎng)膜功能可以通過(guò)視網(wǎng)膜電流圖測(cè)定。糖尿病導(dǎo)致不同視網(wǎng)膜細(xì)胞層的局部缺血和細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致視網(wǎng)膜功能的改變。已有廣泛報(bào)道稱，糖尿病時(shí)震蕩電位(Ops，其中OP代表波，稱為震蕩波，是ERG的主要組成部分)所受的影響大于a-或b-波。OPs代表了視網(wǎng)膜內(nèi)層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)狀層的功能情況。動(dòng)物在暗紅照明下過(guò)夜暗適應(yīng)用于ERG操作。采用阿托品滴眼液對(duì)大鼠進(jìn)行擴(kuò)瞳。接地電極是尾部的皮下針頭，參考電極是耳夾電極?；顒?dòng)接觸的晶狀體電極位于角膜。采用UTAS視覺(jué)診斷系統(tǒng)進(jìn)行記錄。采用交流電耦聯(lián)的UBA-4204放大器分別將反應(yīng)放大1000倍。BigShotTM甘茲菲爾德系統(tǒng)(LKC，蓋瑟斯堡，馬里蘭州，美國(guó))用于發(fā)出-2到8dB的一過(guò)性刺激。從波形中分離出震蕩電位并對(duì)所有的OPs總數(shù)進(jìn)行計(jì)算。定量實(shí)時(shí)PCR：采用Tri試劑，從大鼠視網(wǎng)膜中提取出總RNA。采用RNeasy迷你試劑盒(凱杰公司，Qiagen)進(jìn)一步純化分離的DNA，并通過(guò)ND100分光光度計(jì)(NanoDrop技術(shù)，特拉華州，美國(guó))測(cè)定260和280nm的吸光度進(jìn)行定量。RNA制劑的質(zhì)量由變性瓊脂糖膠電泳測(cè)定。取2μg的總RNA，采用大容量cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)用熱循環(huán)儀(ABI9700)進(jìn)行。采用SYBRGreen(綠)混合劑和特異性引物，取25μg的cDNA模板，一式三份，進(jìn)行實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)(ABI-7500)。采用β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化和驗(yàn)證，根據(jù)比較閾值循環(huán)法(2-ΔΔct)對(duì)樣本間的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。SDS-PAGE和免疫印跡：在含有20mMTris、100mMNaCl、1mM乙二胺四乙酸(EDTA)(TNE緩沖液，pH7.5)(含有1mM二硫蘇糖醇(DTT))、1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)、抑肽酶、兩抑肽酶和胃抑肽酶各1μg/ml的緩沖液中均質(zhì)視網(wǎng)膜。把勻漿在12000xg下離心20分鐘。收集上清液并用于免疫印跡分析。從上清液中取等量的蛋白進(jìn)行12％的SDA-PAGE，將蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜。采用含5％BLOT-快速阻斷試劑(WB57，Calbiochem)的磷酸鹽緩沖鹽水和吐溫(PBST)對(duì)非特異性結(jié)合進(jìn)行阻斷，并用稀釋在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中的一抗在4℃下孵育過(guò)夜。用PBST洗滌后，將膜用偶聯(lián)于辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抗-兔IgG(1:3500)二抗抗體進(jìn)行孵育。用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑(RPN2232，GE醫(yī)療，白金漢郡，英國(guó))進(jìn)行免疫印跡，用影像分析儀(Syngene,G-box)記錄數(shù)碼影像。采用ImageJ軟件對(duì)條帶密度進(jìn)行定量。組織學(xué)：采集所選動(dòng)物的眼球，并分別在帶標(biāo)簽的藥瓶中用4％的多聚甲醛溶液固定。在組織上留有劃痕以便于固定劑滲透入深部組織。將它們?cè)谑覝叵卤４?4-48小時(shí)，然后將固定劑換成20mM的磷酸鹽緩沖液。計(jì)劃將緩沖液每周換成新鮮的緩沖液直到組織病理學(xué)處理(開(kāi)始)。將組織用石蠟包埋并用切片機(jī)切片。有涂層的玻片用于免疫組化和免疫熒光，而未涂層的玻片用于蘇木精和伊紅(H&E)染色。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)表示為平均值±SEM，n＝6；C(非糖尿病對(duì)照)；D(糖尿病對(duì)照)；D+RL(糖尿病+普通葉黃素)；D+SL(糖尿病+可溶性葉黃素)；***＝p<0.001,**＝P<0.01且*＝P<0.05相對(duì)C；##＝P<0.01且#＝P<0.05相對(duì)D。為了將所有的組和對(duì)照組比較，結(jié)果采用單因素方差分析(ANOVA)和Dunnett多重比較檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性進(jìn)行分析。組間顯著性采用雙尾配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果：視網(wǎng)膜電流圖：與正常對(duì)照(C)動(dòng)物相比(498.4μV)，糖尿病大鼠(D)的OP振幅下降(334.2μV)。還注意到組D的OPs潛伏期有所延長(zhǎng)?？侽Ps提示，抗氧化劑葉黃素的吸收造成了OP振幅的下降，RL(442.6)和SL(561.9)。與組D相比，組-SL的總OPs具有顯著的差異，事實(shí)上這比正常的對(duì)照大鼠更好。圖7：顯示了不同組中OPs代表性的波形以及總振幅(圖7在伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中示出)。C，非糖尿病對(duì)照；D，糖尿病對(duì)照；D+RL，糖尿病+普通葉黃素；D+SL，糖尿病+可溶性葉黃素。視網(wǎng)膜形態(tài)：在對(duì)照大鼠C中，視網(wǎng)膜所有的層均是完整的，且具有視網(wǎng)膜的最大厚度，并看得到致密的INL，INL和ONL之間分隔清晰可辨(OPL)。與此相反，糖尿病性視網(wǎng)膜(D)的視網(wǎng)膜總厚度顯著降低，同時(shí)也被標(biāo)記出較低密度的ONL，INL和ONL幾乎融合。用葉黃素治療很大程度上預(yù)防糖尿病性視網(wǎng)膜的大體形態(tài)學(xué)變化。致密的ONL表明(圖8)，葉黃素的可溶性制劑表現(xiàn)的比普通葉黃素更好。圖8，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示，示出視網(wǎng)膜的組織學(xué)(形態(tài))。表4：不同組視網(wǎng)膜層的厚度(μ)代表性的視網(wǎng)膜層厚度(μm)表格通過(guò)采用徠卡應(yīng)用套件(徠卡，瑞士)測(cè)得。C，非糖尿病對(duì)照；D，糖尿病對(duì)照；D+RL，糖尿病+普通葉黃素；D+SL糖尿病+水溶性葉黃素；GCL，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層；IPL，內(nèi)網(wǎng)狀層；INL，內(nèi)核層；OPL，外網(wǎng)狀層；ONL，外核層；PRL，光受體層。實(shí)時(shí)PCR、免疫組化和免疫印跡檢測(cè)的視網(wǎng)膜標(biāo)記物(基因)表達(dá)：視紫紅質(zhì)(RHO)：視紫紅質(zhì)是視網(wǎng)膜感光細(xì)胞中的一種生物色素，其負(fù)責(zé)光感覺(jué)中第一事件。實(shí)時(shí)PCR定量的Rho基因mRNA水平顯示，其在糖尿病動(dòng)物的視網(wǎng)膜中水平下降。采用RL和SL治療預(yù)防了它的下降，而與RC相比，喂食SL具有顯著的效果，甚至優(yōu)于正常大鼠(圖9A，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示)。此外，我們通過(guò)免疫熒光對(duì)Rho的蛋白水平進(jìn)行了定量，這與mRNA水平相吻合。與正常對(duì)照的大鼠視網(wǎng)膜相比，Rho蛋白的免疫熒光圖在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中表現(xiàn)出Rho蛋白表達(dá)的下降。Rho強(qiáng)陽(yáng)性熒光表明采用RL和SL預(yù)防了糖尿病性視網(wǎng)膜中Rho蛋白表達(dá)的丟失。此外，SL被發(fā)現(xiàn)在對(duì)預(yù)防各糖尿病動(dòng)物大鼠視網(wǎng)膜的Rho蛋白表達(dá)丟失上，遠(yuǎn)比RL更有效(圖9B，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示出)。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)：NGF是最具特征的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，已知它在外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)選擇神經(jīng)元的存活和分化中至關(guān)重要。從1950年被發(fā)現(xiàn)開(kāi)始，NGF在神經(jīng)退行性病變進(jìn)展的治療中就表現(xiàn)出了潛力。在動(dòng)物中，已知NGF能夠在缺血、創(chuàng)傷和毒性損傷后促進(jìn)神經(jīng)元末梢生長(zhǎng)和神經(jīng)元恢復(fù)。我們通過(guò)實(shí)時(shí)PCR驗(yàn)證了NGF的基因表達(dá)狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)它在糖尿病動(dòng)物的視網(wǎng)膜中是下調(diào)的。用RL治療并不能預(yù)防它的下降而SL卻能預(yù)防它的下調(diào)(圖10A，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示出)。用免疫熒光測(cè)得的NGF蛋白水平也得出了類似的結(jié)果。NGF蛋白的免疫熒光圖片顯示，與正常的大鼠視網(wǎng)膜相比，它在糖尿病大鼠的視網(wǎng)膜中的表達(dá)下降(圖10B，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示出)。NGF的強(qiáng)陽(yáng)性熒光表明，用SL的治療預(yù)防了NGF蛋白在糖尿病視網(wǎng)膜中的丟失。RL無(wú)法有效預(yù)防NGF蛋白在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中的丟失。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是一種細(xì)胞產(chǎn)生的刺激血管生成和血管新生的信號(hào)蛋白。這是血循環(huán)不足時(shí)向組織重建氧供系統(tǒng)的一部分。當(dāng)VEGF過(guò)表達(dá)時(shí)，它會(huì)導(dǎo)致疾病。VEGF引起廣泛的視網(wǎng)膜血管擴(kuò)張、破壞血-視網(wǎng)膜屏障，并與眼部血管新生相關(guān)。VEGF的蛋白印跡顯示在糖尿病性視網(wǎng)膜中VEGF表達(dá)上調(diào)(圖11，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示出)。RL和SL的治療均抑制了糖尿病誘導(dǎo)的VEGF過(guò)表達(dá)。血小板源生長(zhǎng)因子(PDGF)：PDGF是在血管形成(血管生成)(即從現(xiàn)有的血管組織中生長(zhǎng)血管)中非常重要的生長(zhǎng)因子。多個(gè)研究表明，患有糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者的玻璃體樣本中，PDGF濃度上升。正如VEGF，PDGF在糖尿病性視網(wǎng)膜病變中也可能是一個(gè)促進(jìn)異常血管新生的促血管生長(zhǎng)因子。此外，PDGF可以刺激糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者黃斑前膜的形成和牽拉，導(dǎo)致?tīng)坷缘囊暰W(wǎng)膜剝落。事實(shí)上，針對(duì)抑制病理性視網(wǎng)膜病變PDGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制劑的開(kāi)發(fā)仍然是眼科用藥發(fā)展的活躍區(qū)域。PDGF的免疫組化表明，該蛋白在糖尿病性視網(wǎng)膜中上調(diào)(圖12，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示出)。RL和SL的治療均抑制了糖尿病誘導(dǎo)的PDGF過(guò)表達(dá)。血漿葉黃素：為了理解施用可溶性葉黃素對(duì)生物利用度的影響，采用HPLC法對(duì)類胡蘿卜素的血漿水平進(jìn)行了測(cè)定。數(shù)據(jù)顯示，正常飲食喂食的大鼠(AIN-93)血漿葉黃素水平未測(cè)出。AIN-93飲食與普通葉黃素和可溶性葉黃素混合喂食的大鼠中，血漿葉黃素水平在可檢測(cè)的范圍內(nèi)。更有趣的是，喂食SL飲食的大鼠的葉黃素水平被發(fā)現(xiàn)比喂食RL飲食的大鼠高7倍。這進(jìn)一步確定了本制劑在改善葉黃素生物利用度方面的成功。圖13，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示，顯示了反相(RP)-HPLC測(cè)得的血清葉黃素水平。其值由平均值±SEM(n＝6)表示，$$$<0.001D+SL相對(duì)D+RL。結(jié)論給大鼠施用葉黃素預(yù)防了糖尿病誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜病變。通過(guò)ERG確定，葉黃素保留了糖尿病大鼠所丟失的大鼠視網(wǎng)膜功能。這也經(jīng)H&E染色后的視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)研究所證明。葉黃素預(yù)防了視紫紅質(zhì)和神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)表達(dá)的下降，二者在保持視網(wǎng)膜的健康中起到了關(guān)鍵作用。葉黃素預(yù)防了應(yīng)激和血管生成中涉及的VEGF和PDGF的過(guò)表達(dá)。有趣的是，與普通葉黃素相比，用可溶性葉黃素治療的大鼠表現(xiàn)出重大的獲益，血漿水平的上升表明生物利用度的上升。此外，葉黃素的抗氧化和抗炎潛能可能也有助于它的有益效果。因此，可溶性葉黃素可用于治療和/或預(yù)防糖尿病性視網(wǎng)膜病變。實(shí)施例3UltraSolCurcuWinTM對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病變的效果(基因營(yíng)養(yǎng)學(xué))通過(guò)基因營(yíng)養(yǎng)學(xué)，評(píng)估可溶性姜黃素(UltraSolCurcuWinTM)對(duì)于糖尿病大鼠視網(wǎng)膜的有益效果，并將該效果與普通姜黃素進(jìn)行了比較。方法學(xué)與實(shí)施例2相同。所有動(dòng)物分為四組，如下所示表5視網(wǎng)膜電流圖：相比正常對(duì)照(C)動(dòng)物而言，糖尿病大鼠(D)的OPs振幅有所降低(334.2μV)。應(yīng)注意，組D的OP潛伏期有所增強(qiáng)?？侽Ps、RC(445.7)、SC(455.3)提示，抗氧化劑姜黃素的攝入造成OP振幅下降的減少。SC不僅減少了OPs的下降，還使?jié)摲谡；?。圖14，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示，顯示了不同組各個(gè)動(dòng)物OPs的波形以及總振幅。C，非糖尿病對(duì)照；D，糖尿病對(duì)照；D+RC，糖尿病+普通姜黃素；D+SC，糖尿病+可溶性姜黃素。視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)：在對(duì)照大鼠C中，視網(wǎng)膜所有的層均是完整的，且具有視網(wǎng)膜的最大厚度，并看得到致密的INL，INL和ONL之間分隔清晰可辨(OPL)。與此相反，糖尿病性視網(wǎng)膜(D)的視網(wǎng)膜總厚度顯著降低，同時(shí)也被標(biāo)記出較低密度的ONL，INL和ONL幾乎融合。用姜黃素治療很大程度上預(yù)防糖尿病性視網(wǎng)膜的大體形態(tài)學(xué)變化。致密的ONLs表明，該活性成分的可溶性制劑比普通活性成分表現(xiàn)更好。圖15，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示，顯示了代表性的視網(wǎng)膜組織學(xué)情況。表6：不同組視網(wǎng)膜層的厚度(μ)。代表性的視網(wǎng)膜層厚度(μm)表格通過(guò)采用徠卡應(yīng)用套件(徠卡，瑞士)測(cè)得。C，非糖尿病對(duì)照；D，糖尿病對(duì)照；D+RC，糖尿病+普通姜黃素；D+SC，糖尿病+可溶性姜黃素。GCL，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層；IPL，內(nèi)網(wǎng)狀層；INL，內(nèi)核層；OPL，外網(wǎng)狀層；ONL，外核層；PRL，光受體層。實(shí)時(shí)PCR、免疫組化和免疫印跡檢測(cè)的視網(wǎng)膜標(biāo)記物(基因)表達(dá)：視紫紅質(zhì)(RHO)：視紫紅質(zhì)是視網(wǎng)膜感光細(xì)胞中的一種生物色素，其負(fù)責(zé)光感覺(jué)中的第一事件。實(shí)時(shí)PCR定量的Rho基因mRNA水平顯示，其在糖尿病動(dòng)物的視網(wǎng)膜中水平下降。采用RC和SC治療預(yù)防了它的下降，而與RC相比，SC治療具有更顯著的效果(圖16A，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示)。免疫熒光對(duì)Rho的蛋白水平進(jìn)行的定量與mRNA水平相吻合。與正常對(duì)照的大鼠視網(wǎng)膜相比，Rho蛋白的免疫熒光圖在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中表現(xiàn)出Rho蛋白表達(dá)的下降。。Rho強(qiáng)陽(yáng)性熒光表明采用RC和SC治療預(yù)防了糖尿病性視網(wǎng)膜中Rho蛋白表達(dá)的丟失。此外，SC被發(fā)現(xiàn)在對(duì)于預(yù)防各糖尿病動(dòng)物大鼠視網(wǎng)膜的Rho蛋白表達(dá)丟失上，比RC更有效(圖16B，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示)。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)：NGF是最具特征的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，已知它在外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)選擇神經(jīng)元的存活和分化中至關(guān)重要。從1950年被發(fā)現(xiàn)開(kāi)始，NGF在神經(jīng)退行性病變進(jìn)展的治療中就表現(xiàn)出了潛力。在動(dòng)物中，已知NGF能夠在缺血、創(chuàng)傷和毒性損傷后促進(jìn)神經(jīng)元末梢生長(zhǎng)和神經(jīng)元恢復(fù)。我們通過(guò)實(shí)時(shí)PCR驗(yàn)證了NGF的基因表達(dá)狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)它在糖尿病動(dòng)物的視網(wǎng)膜中是下調(diào)的。采用普通和可溶性姜黃素治療對(duì)于預(yù)防糖尿病狀態(tài)下NGF基因的下調(diào)表現(xiàn)出相同的有益效果(圖17A，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示)。用免疫熒光測(cè)得的NGF蛋白水平也得出了類似的結(jié)果。NGF蛋白的免疫熒光圖片顯示，與正常對(duì)照大鼠視網(wǎng)膜相比，它在糖尿病大鼠的視網(wǎng)膜中的表達(dá)下降(圖17B，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示)。NGF的強(qiáng)陽(yáng)性熒光表明，用SC的治療預(yù)防了NGF蛋白在糖尿病視網(wǎng)膜中的丟失。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是一種細(xì)胞產(chǎn)生的刺激血管生成和血管新生的信號(hào)蛋白。這是血循環(huán)不足時(shí)向組織重建氧供系統(tǒng)的一部分。當(dāng)VEGF過(guò)表達(dá)時(shí)，它會(huì)導(dǎo)致疾病。VEGF引起廣泛的視網(wǎng)膜血管擴(kuò)張、破壞血-視網(wǎng)膜屏障，并與眼部血管新生相關(guān)。VEGF的蛋白印跡顯示在糖尿病性視網(wǎng)膜中VEGF表達(dá)上調(diào)(圖18，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示)。RC和SC的治療均抑制了糖尿病誘導(dǎo)的VEGF過(guò)表達(dá)。血小板源生長(zhǎng)因子(PDGF)：PDGF是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂的生長(zhǎng)因子。具體地，PDGF是在血管形成(血管生成)(即從現(xiàn)有的血管組織中生長(zhǎng)血管)中非常重要的生長(zhǎng)因子。多個(gè)研究表明，患有糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者的玻璃體樣本中，PDGF濃度上升。正如VEGF，PDGF在糖尿病性視網(wǎng)膜病變中也可能是一個(gè)促進(jìn)異常血管新生的促血管生長(zhǎng)因子。此外，PDGF可以刺激糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者黃斑前膜的形成和牽拉，導(dǎo)致?tīng)坷缘囊暰W(wǎng)膜剝落。事實(shí)上，針對(duì)抑制病理性視網(wǎng)膜病變PDGF通路的抑制劑的開(kāi)發(fā)仍然是眼科用藥發(fā)展的活躍區(qū)域。PDGF的免疫組化表明，該蛋白在糖尿病性視網(wǎng)膜中上調(diào)(圖19，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示)。RC和SC的治療均抑制了糖尿病誘導(dǎo)的PDGF過(guò)表達(dá)。可溶性姜黃素比普通姜黃素更有效(圖19，如伴隨說(shuō)明書(shū)的附圖中所示)。結(jié)論給大鼠施用姜黃素預(yù)防了糖尿病誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜病變。通過(guò)ERG確定，姜黃素保留了糖尿病大鼠所丟失的大鼠視網(wǎng)膜功能。這也經(jīng)H&E染色后的視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)研究所證明，其中對(duì)視網(wǎng)膜的多個(gè)層厚度進(jìn)行了測(cè)量。姜黃素預(yù)防了關(guān)鍵物質(zhì)視紫紅質(zhì)和神經(jīng)生長(zhǎng)因子的表達(dá)下降。姜黃素預(yù)防了應(yīng)激和血管生成中涉及的VEGF和PDGF的過(guò)表達(dá)。有趣的是，與普通姜黃素相比，用可溶性葉黃素治療的大鼠表現(xiàn)出重大的獲益，而這有可能歸功于生物利用度的提高。因此，可溶性姜黃素可用于治療或預(yù)防糖尿病視網(wǎng)膜病變。優(yōu)點(diǎn)1.提供了親脂性營(yíng)養(yǎng)素干燥的、自由流動(dòng)的、水溶性/可混合的制劑。2.提供了一種將水難溶性、油性、親脂性營(yíng)養(yǎng)素以顆粒劑、粉劑、片劑、膏劑、貼劑、漱口液、含漱劑、囊劑、膠囊劑或摻入飲品形式遞送的合適方法。3.提供一種水難溶性、油性、親脂性營(yíng)養(yǎng)素的高生物利用度劑型。4.本文的組合物對(duì)調(diào)節(jié)血糖水平有效。5.含有親脂性營(yíng)養(yǎng)素的本文組合物和方法對(duì)調(diào)節(jié)糖尿病視網(wǎng)膜病變中無(wú)軸突細(xì)胞的功能障礙有效。6.本文的組合物有效預(yù)防糖尿病視網(wǎng)膜病變中視網(wǎng)膜層、視紫紅質(zhì)水平以及NGF蛋白水平的丟失。7.本文的組合物有效抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變中糖尿病誘導(dǎo)的PDGF過(guò)表達(dá)。8.本文的組合物有效地預(yù)防了糖尿病性白內(nèi)障中不溶性晶狀體蛋白的聚積。9.本文的組合物有效地預(yù)防了糖尿病性白內(nèi)障中晶狀體山梨醇水平的聚積。10.本文的組合物有效地降低了糖尿病性白內(nèi)障中蛋白積聚并使總可溶性蛋白的圖形正?；?。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3