賽尼克韋羅(Cenicriviroc)(也稱為CVC)是(S,E)-8-(4-(2-丁氧基乙氧基)苯基)-1-(2-甲基丙基)-N-(4-(((1-丙基-1H-咪唑-5-基)甲基)亞磺?；?苯基)-1,2,3,4-四氫苯并[b]吖辛因-5-甲酰胺的通用名稱。賽尼克韋羅甲磺酸鹽的化學結構示于圖1中。賽尼克韋羅結合C-C趨化因子受體2型(CCR2)和C-C趨化因子受體5型(CCR5)受體并抑制它們的活性(24)。這些受體不僅在病毒如人類免疫缺陷病毒(HIV)進入細胞的方面起作用，還對于將免疫細胞招募到損傷部位很重要。這種受體活性的抑制可以具有消炎作用。最近，已經(jīng)調查了炎癥在纖維化的發(fā)展中所起到的作用[30]。已經(jīng)證明C-C趨化因子受體2型(CCR2)和CCR5可以在促進肝纖維化方面發(fā)揮作用[3,4,5,31,32]。發(fā)明概要在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療有需要的受試者中的纖維化或纖維化疾病或病狀的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物。在另一個實施方案中，所述纖維化或纖維化疾病或病狀是肝纖維化或腎纖維化。在又進一步的實施方案中，肝纖維化與非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相關。在又進一步的實施方案中，肝纖維化與非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)相關。在又進一步的實施方案中，肝纖維化與新興肝硬化相關。在又一個實施方案中，肝纖維化包括非肝硬化性肝纖維化。在進一步的實施方案中，所述受試者被人類免疫缺陷病毒(HIV)感染。在進一步的實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物被配制成包含賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物和富馬酸的藥物組合物。在進一步的實施方案中，所述受試者患有選自由酒精性肝病、HIV和HCV共感染、HCV感染、2型糖尿病(T2DM)、代謝綜合征(MS)及其組合所組成的組的疾病或病狀。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療有需要的受試者中的NASH的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物；其中NASH或與NASH相關聯(lián)的肝纖維化與2型糖尿病(T2DM)相關。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療有需要的受試者中的NASH的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物；其中NASH或與NASH相關的肝纖維化與代謝綜合征(MS)相關聯(lián)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療有需要的受試者中的NASH的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物；其中肝纖維化與HIV和HCV共感染相關。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療有需要的受試者中的NASH的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物；其中肝纖維化與HCV感染相關。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療方法，其中賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物被配制成口服組合物。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療方法，其中賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物是每天施用一次或每天施用兩次。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療方法，其中賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物是與一種或多種額外的活性劑共施用。在進一步的實施方案中，一種或多種額外的活性劑是選自由以下所組成的組的一種或多種抗逆轉錄病毒劑：進入抑制劑、核苷逆轉錄酶抑制劑、核苷酸逆轉錄酶抑制劑、非核苷類逆轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、整合酶鏈轉移抑制劑、成熟抑制劑及其組合。在進一步的實施方案中，一種或多種額外的抗逆轉錄病毒劑選自由以下所組成的組：拉米夫定、依法韋侖、雷特格韋、威維康、貝韋立馬、α-干擾素、齊多夫定、阿巴卡韋、洛匹那韋、利托那韋、替諾福韋、替諾福韋二吡呋酯(tenofovirdisoproxil)、替諾福韋前藥、恩曲他濱、埃替格韋、可比司他、地瑞那韋、阿扎那韋、利匹韋林、度魯特韋及其組合。在進一步的實施方案中，一種或多種額外的活性劑是一種或多種免疫系統(tǒng)抑制劑。在進一步的實施方案中，一種或多種額外的活性劑選自由以下所組成的組：環(huán)孢霉素、他克莫司、潑尼松龍、氫化可的松、西羅莫司、依維莫司、硫唑嘌呤、霉酚酸、甲氨蝶呤、巴利昔單抗、達利珠單抗、利妥昔單抗、抗胸腺細胞球蛋白、抗淋巴細胞球蛋白及其組合。在進一步的實施方案中，一種或多種額外的活性劑是一種或多種抗纖維化劑，包括但不限于試劑如N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)以及血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑、ATII拮抗劑、奧貝膽酸(OCA)、GFT505、西妥珠單抗(simtuzumab)或其組合。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療方法，其包括檢測接受纖維化或纖維化疾病或病狀治療的受試者中的一個或多個生物分子的水平，以及基于一個或多個生物分子的水平的增加或減少確定治療方案，其中所述生物分子選自由以下所組成的組：脂多糖(LPS)、LPs結合蛋白(LBP)、16SrDNA、sCD14、腸脂肪酸結合蛋白(I-FABP)、連蛋白-1(zonulin-1)、膠原蛋白1a1和3a1、TGF-β、纖連蛋白-1及其組合。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療方法，其包括檢測接受纖維化或纖維化疾病或病狀治療的受試者中的一個或生物分子的水平，其中一個或多個生物分子的水平相較于預定標準水平的增加或減少預測纖維化或纖維化疾病或病狀的治療功效，其中所述生物分子選自由以下所組成的組：脂多糖(LPS)、LPs結合蛋白(LBP)、16SrDNA、sCD14、腸脂肪酸結合蛋白(I-FABP)、連蛋白-1、膠原蛋白1a1和3a1、TGF-β、纖連蛋白-1及其組合。在進一步的實施方案中，一個或多個生物分子是在來自接受纖維化或纖維化疾病或病狀治療的受試者的生物樣品中進行測量。在又進一步的實施方案中，生物樣品選自血液、皮膚、毛囊、唾液、口腔粘膜、陰道粘膜、汗液、淚液、上皮組織、尿液、精子、精液、精漿、前列腺液、預射精液(考珀液)、排泄物、活檢物、腹水、腦脊液、淋巴、腦以及組織提取物樣品或活檢樣品。附圖簡述圖1是賽尼克韋羅甲磺酸鹽的化學式。圖2是比較混配成口服溶液的賽尼克韋羅甲磺酸鹽與通過濕式制粒制備并與各種酸性增溶劑賦形劑混合的賽尼克韋羅甲磺酸鹽在比格犬中的絕對生物利用度的圖表。圖3是當與干燥劑一起包裝時接受40℃和75％相對濕度下的加速穩(wěn)定性測試的不同賽尼克韋羅制劑的總雜質和降解物含量的圖表。圖4是不同賽尼克韋羅制劑的動態(tài)蒸汽吸附等溫線。圖5示出了在比格犬中，在三種預處理狀態(tài)下，賽尼克韋羅從不同制劑的吸收。圖6示出了組合片劑中的賽尼克韋羅和拉米夫定的比格犬絕對生物利用度。圖7(A-B)示出了研究202中的參與者在第24周的PBMC中的細胞內(nèi)HIVDNA水平。散點圖描繪細胞內(nèi)HIVDNA水平在基線和24周之間的倍數(shù)變化，并按治療組分開。線和誤差棒分別表示平均值和標準誤差測量。使用HIV/GAPDH復合qPCR反應中的ΔΔCT來計算倍數(shù)變化，其中以每個患者的基線樣品作為校準品。A)全長HIVDNA(晚期逆轉錄物)；B)強終止HIVDNA(早期逆轉錄物)圖8(A-B)示出了CVC和MVC對培養(yǎng)液中的R5嗜性病毒RNA和p24的影響。A)對照或經(jīng)CVC或MVC處理的細胞在感染后4小時的培養(yǎng)液中的病毒載量水平。誤差棒表示標準偏差。代表兩個獨立的實驗。B)對照或經(jīng)CVC或MVC處理的細胞在感染后4小時的培養(yǎng)液中的平均p24抗原水平。誤差棒表示標準偏差。代表兩個獨立的實驗。圖9示出了CVC和MVC對R5嗜性細胞內(nèi)HIVDNA水平的影響。經(jīng)CVC或MVC處理的細胞相比于無藥物對照在4小時后的細胞內(nèi)強終止DNA水平的平均倍數(shù)變化。誤差棒表示標準偏差。使用HIV/GAPDH復合qPCR反應中的ΔΔCT來計算倍數(shù)變化，其中以4小時下的無藥物對照作為校準品。代表兩個獨立的實驗。圖10示出了CVC進入CCR5中的多種結合模式。CCR5的坐標是從與結合口袋中的馬拉維諾結合的CCR5晶體結構(PDBID:4MBS)生成。在CVC對接后檢查CVC結合位點。CVC的對接姿態(tài)展示為有色細線。七個跨膜(7TM)a-螺旋結構由螺旋線表示并根據(jù)氨基酸序列的順序(1-7)進行編號。(A)從具有三個圈出的潛在結合位點(位點1(白色)、位點2(黑色)和位點3(淺粉色))的受體的胞外側查看的俯視圖。(B)CCR5跨膜腔內(nèi)的側視圖。胞外環(huán)2(ECL2)被標記。次級結構被表示為卡通結構。使用PyMOL軟件處理所有圖像。圖11示出了CCR5/馬拉維諾和CCR5/賽尼克韋羅之間的配體結合口袋的比較。CCR5的俯視圖展示了CVC(左，有色細線)和MVC(右，黃色棒)在配體結合口袋中的對接姿態(tài)。CCR5示出于分子表面表示中。涉及gp120結合的關鍵殘基Tyr37、Trp86、Trp94、Leu104、Tyr108、Phe109、Phe112、Thr177、Ile198、Trp248、Tyr251、Leu255和Glu283位于口袋深處并且顏色是紅色。圖12示出了在腎纖維化的小鼠UUO模型中評價CVC的研究示意圖。以BID施用媒介物對照和CVC；以QDBID施用抗TGF-β1抗體(化合物1D11，陽性對照)；每天兩次；CVC，賽尼克韋羅；ip，腹膜內(nèi)；PBS，磷酸鹽緩沖鹽水；QD，每天一次；TGF，轉化生長因子；UUO，單側輸尿管梗阻。圖13示出了腎纖維化小鼠UUO模型中的每個治療組中的體重變化(第5天)。圖14示出了腎纖維化小鼠UUO模型中的每個治療組中的膠原容積分數(shù)(CVF；面積％)評分。呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)從CVC20mg/kg/天組中的動物排除異常值，其具有大于比群組中的任何其它動物高2倍標準偏差的CVF值。圖15示出了來自假手術的腎皮質組織的mRNA表達圖16示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物中直到第9周的體重變化。圖17A-C示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物中直到第9周的肝重和體重變化。面板A顯示體重變化，面板B顯示肝重變化，且面板C顯示肝重體重比變化。圖18A-F示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的全血和生物化學。面板A顯示全血葡萄糖，面板B顯示血漿ALT，面板C顯示血漿MCP-1，面板D顯示血漿MIP-1β，面板E顯示肝臟甘油三酯，且面板F顯示肝臟羥脯氨酸。圖19示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的HE染色肝臟切片。圖20示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的NAFLD活性評分。圖21示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的天狼星紅染色肝臟切片的代表性顯微照片。圖22示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的F4/80免疫染色肝臟切片的代表性顯微照片。圖23示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的炎癥區(qū)域的百分比。圖24示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的F4/80和CD206雙重免疫染色肝臟切片的代表性顯微照片。圖25示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的F4/80和CD206雙陽性細胞的百分比。圖26示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的F4/80和CD16/32雙重免疫染色肝臟切片的代表性顯微照片。圖27示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的F4/80陽性細胞的F4/80和CD16/32雙陽性細胞的百分比。圖28示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的M1/M2比。圖29示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的油紅染色肝臟切片的代表性顯微照片。圖30示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的脂肪沉積區(qū)域的百分比。圖31示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的肝臟中的TUNEL陽性細胞的代表性顯微照片。圖32示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的TUNEL陽性細胞的百分比。圖33示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的定量RT-PCR。測量了TNF-α、MCP-1、1型膠原蛋白和TIMP-1的水平。圖34A-F示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第9周的定量RT-PCR的原始數(shù)據(jù)。面板A顯示36B4的水平，面板B顯示TNF-α的水平，面板C顯示TIMP-1的水平，面板D顯示1型膠原蛋白的水平，面板E顯示36B4的水平，且面板f顯示MCP-1的水平。圖35示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物從第6周到第18周的體重變化。圖36示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物從第6周到第18周的生存曲線。圖37A-C示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第18周的體重和肝重。面板A顯示體重，面板B顯示肝重，且面板C顯示肝重體重比。圖38A-C示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第18周的肝臟宏觀外表。面板A顯示僅用媒介物治療的動物的肝臟，面板B顯示用低劑量賽尼克韋羅治療的動物的肝臟，且面板C顯示用高劑量賽尼克韋羅治療的動物的肝臟。圖39示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第18周的可見腫瘤結節(jié)的數(shù)量。圖40示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第18周的可見腫瘤結節(jié)的最大直徑。圖41示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第18周的HE染色肝臟切片的代表性顯微照片。圖42示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第18周的GS免疫染色肝臟切片的代表性顯微照片。圖43示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第18周的CD31免疫染色肝臟切片的代表性顯微照片。圖44示出了經(jīng)賽尼克韋羅(低或高劑量)治療的動物在第18周的CD31陽性區(qū)域的百分比。圖45示出了不同定群和研究日的HIV-1RNA水平從基線變化的中位數(shù)–研究201。圖46是具有HIV-1RNA<50個拷貝/mL的受試者隨時間推移直到第48周的比例–快照算法–ITT–研究202。圖47示出了sCD14水平(106pg/mL)隨時間推移直到第48周的LS平均基線變化-ITT。圖48示出了在基線處、第24周和第48周根據(jù)APRI和FIB-4纖維化指數(shù)評分進行分組的經(jīng)CVC(合并數(shù)據(jù))和EFV治療的受試者。圖49示出了基線APRI變化對基線sCD14變化的散點圖-第48周(ITT)。圖50示出了基線FIB-4變化對基線sCD14變化的散點圖-第48周(ITT)。圖51示出了肌酸磷酸激酶(CPK)隨時間推移直到第48周的平均基線變化-安全性群體。圖52示出了不同嚴重度分級的CPK升高對cavg(ng/mL)的點密度顯示-第48周。圖53示出了不同嚴重度分級的ALT升高對cavg(ng/mL)的點密度顯示-第48周。圖54示出了不同嚴重度分級的AST升高對cavg(ng/mL)的點密度顯示-第48周。圖55示出了不同嚴重度分級的膽紅素升高對cavg(ng/mL)的點密度顯示-第48周。圖56示出了空腹總膽固醇、LDL膽固醇計算值、HDL膽固醇和甘油三酯(mg/dL)隨時間推移直到第48周的平均基線變化。詳細描述應當理解的是，單數(shù)形式如“一”、“一個”和“所述/該”在整個本申請中是為了方便而使用，然而，除非上下文或明確的陳述另外指出，否則單數(shù)形式也意圖包括復數(shù)。此外，應該理解的是，本文中所提到的每個期刊文章、專利、專利申請、出版物等在此通過引用整體并入本文并用于所有目的。所有的數(shù)值范圍應當被理解為包括該數(shù)值范圍內(nèi)的每一個數(shù)值點，并且應該被解釋為單獨地列舉每一個數(shù)值點。涉及相同組分或性質的所有范圍的端點是包含性的并且意圖為可獨立地組合。定義：除了下面所討論的術語，在本申請中使用的所有術語旨在具有本領域技術人員在本發(fā)明的時間下將賦予它們的含義?！凹s”包括具有與參考值大體上相同的效果或提供大體上相同的結果的所有值。因此，由術語“約”涵蓋的范圍將根據(jù)使用該術語的上下文而變化，例如，與參考值相關聯(lián)的參數(shù)。因此，根據(jù)上下文，“約”可以意指例如±15％、±10％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％或±小于1％。重要的是，由術語“約”開頭的參考值的所有列舉旨在也是參考值的單獨列舉。盡管有前述內(nèi)容，但在本申請中，術語“約”具有關于藥代動力學參數(shù)如曲線下面積(包括AUC、AUCt和AUC∞)、Cmax、Tmax等的特殊含義。當與藥代動力學參數(shù)的值關聯(lián)使用時，術語“約”意指參考參數(shù)的80％至125％?！百惸峥隧f羅”是指化合物(S)-8-[4-(2-丁氧基乙氧基)苯基]-1-異丁基-N-(4-{[(1-丙基-1H-咪唑-5-基)甲基]亞磺?；鶀苯基)-1,2,3,4-四氫-1-苯并吖辛因-5-甲酰胺(結構如下所示)。賽尼克韋羅的物質組成的細節(jié)公開于美國專利申請公開號2012/0232028中，該申請出于所有目的在此通過引用整體并入。有關制劑的細節(jié)公開于美國申請?zhí)?1/823,766中，該申請在此通過引用整體并入以供所有目的使用?！氨景l(fā)明的化合物”或“本化合物”是指賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物?！按篌w上類似”意指組合物或制劑的特性和量在很大程度上類似于參照組合物或制劑的組合物或制劑。“藥學上可接受的”是指物質或方法例如在向受試者施用方面用于醫(yī)學或藥學中，包括用于獸醫(yī)目的的。“鹽”和“藥學上可接受的鹽”包括酸加成鹽和堿加成鹽。“酸加成鹽”是指保留游離堿的生物有效性和性質，在生物學上或在其它方面并非不合需要，并且由無機酸和有機酸形成的那些鹽?！皦A加成鹽”是指保留游離酸的生物有效性和性質，在生物學上或在其它方面并非不合需要，并且由無機堿或有機堿加成到游離酸上所制備的那些鹽。藥學上可接受的鹽的實例包括但不限于：堿性殘基諸如胺的無機或有機酸加成鹽；酸性殘基的堿金屬或有機加成鹽；和類似物，或包括前述鹽中的一種或多種的組合。藥學上可接受的鹽包括活性劑的鹽和季銨鹽。例如，酸鹽包括那些由無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等衍生的鹽；其它可接受的無機鹽包括金屬鹽如鈉鹽、鉀鹽、銫鹽等；和堿土金屬鹽如鈣鹽、鎂鹽等，或包括前述鹽中的一種或多種的組合。藥學上可接受的有機鹽包括由有機酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、羥乙酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸、HOOC-(CH2)n-COOH(其中n是0-4)等制備的鹽；有機胺鹽如三乙胺鹽、吡啶鹽、甲基吡啶鹽、乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、二環(huán)己基胺鹽、N,N'-二芐基乙二胺鹽等；以及氨基酸鹽如精氨酸、天冬氨酸鹽、谷氨酸鹽等；或包括前述鹽中的一種或多種的組合。在一個實施方案中，賽尼克韋羅的酸加成鹽是賽尼克韋羅甲磺酸鹽，例如(S)-8-[4-(2-丁氧基乙氧基)苯基]-1-異丁基-N-(4-{[(1-丙基-1H-咪唑-5-基)甲基]亞磺?；鶀苯基)-1,2,3,4-四氫-1-苯并吖辛因-5-甲酰胺單甲磺酸鹽。在一個實施方案中，賽尼克韋羅甲磺酸鹽是結晶材料，諸如淺綠黃色結晶粉末。在一個實施方案中，賽尼克韋羅甲磺酸酯易溶于冰醋酸、甲醇、苯甲醇、二甲亞砜和N,N-二甲基甲酰胺；可溶于吡啶和乙酸酐；以及難溶于99.5％乙醇；微溶于乙腈、1-辛醇和四氫呋喃；并且?guī)缀醪蝗苡谝宜嵋阴ズ鸵颐?。在一個實施方案中，賽尼克韋羅甲磺酸鹽易溶于pH為1至2的水溶液；在pH3下難溶并且在pH4至13下幾乎不溶于水中。“溶劑化物”意指通過溶劑化(溶劑分子與本發(fā)明活性劑的分子或離子的結合)形成的復合物，或由溶質離子或分子(即，本發(fā)明的活性劑)與一個或多個溶劑分子組成的聚集體。在本發(fā)明中，優(yōu)選的溶劑化物是水合物。“藥物組合物”是指本公開的化合物和本領域中普遍接受的用于將生物活性化合物遞送給哺乳動物(例如人類)的介質的制劑。這種介質包括所有藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。“治療”包括改善、緩和以及減輕疾病或病狀的例子，或疾病或病狀的癥狀。“施用”包括任何施用方式，諸如口服、皮下、舌下、經(jīng)粘膜、胃腸外、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、經(jīng)頰、舌下、局部、經(jīng)陰道、經(jīng)直腸、經(jīng)眼、經(jīng)耳、經(jīng)鼻、吸入和經(jīng)皮。“施用”還可以包括開處方或對于包含特定化合物的劑型配處方。“施用”還可以包括提供對實施涉及特定化合物或包含該化合物的劑型的方法的說明書?！爸委熡行Я俊币庵府斒┯媒o受試者用于治療疾病、病癥或其它不希望的醫(yī)學病狀時足以具有針對該疾病、病癥或病狀的有益效果的活性物質的量。治療有效量將根據(jù)活性物質的化學特性和制劑形式、疾病或病狀及其嚴重程度以及待治療的患者的年齡、體重和其它相關特性而變化。確定給定的活性物質的治療有效量是在本領域的一般技術范圍內(nèi)并且通常只需要常規(guī)實驗。纖維化：纖維化是在修復或反應過程中過量纖維結締組織在器官或組織中的形成。這可以是反應性、良性或病理狀態(tài)。結締組織在器官和/或組織中的沉積可以摧毀下面的器官或組織的結構和功能。纖維化是纖維組織的過量沉積的這種病理狀態(tài)，以及在愈合時結締組織沉積的過程。纖維化與疤痕形成過程的相似性在于兩者都涉及位于結締組織下方的刺激細胞，其包括膠原蛋白和糖胺聚糖。介導許多免疫和炎性反應的細胞因子在纖維化的發(fā)展中發(fā)揮作用。由諸如脂肪堆積、病毒病原、過量飲酒、肝毒素的因素導致的肝細胞損傷不可避免地觸發(fā)炎性免疫反應。細胞因子和趨化因子在肝臟中的產(chǎn)量增加導致募集促炎性單核細胞(前體細胞)，它們隨后成熟為促炎性巨噬細胞。促炎性巨噬細胞在性質上是促纖維生成的，并且最終導致肝星狀細胞(HSC)的活化，肝星狀細胞主要負責細胞外基質(ECM)的沉積。導致炎癥的各種免疫細胞群的浸潤是急性和慢性肝損傷后的中央病原特征。慢性肝臟炎癥導致連續(xù)肝細胞損傷，這可以導致纖維化、肝硬化、ESLD和HCC。肝內(nèi)免疫細胞之間的相互作用增加枯否細胞(Kupffercell)和HSC的活化和遷移，并且對于肝纖維化的發(fā)展是關鍵事件。另外，關于CCR2和CCR5在肝纖維化的發(fā)病機制中的作用的證據(jù)越來越多[1-7,9,31]。C-C趨化因子家族的這些成員由促纖維生成細胞表達，所述細胞包括促炎性單核細胞和巨噬細胞、枯否細胞和HSC[1-4]。CCR2信號傳導通過調節(jié)骨髓源性成纖維細胞而在腎纖維化的發(fā)病機制中起重要作用[8]。CCR2陽性和CCR5陽性單核細胞以及CCR5陽性T淋巴細胞被局部釋放的MCP-1和RANTES吸引，并且能夠促進腎臟中的慢性間質性炎癥[10,11]。在嚙齒動物中，CVC在肝臟、腸系膜淋巴結和腸(也被描述為腸-肝軸)中具有高分布。腸道菌群的破壞和其對腸-肝軸的下游效應都在代謝障礙如肥胖、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中起重要作用[16,23]。表1列出了由肝細胞表達的趨化因子[30]。肝星狀細胞(HSC)的活化在肝纖維化的發(fā)病機制中起重要作用。在肝損傷后，肝星狀細胞(HSC)被激活并表達基質金屬蛋白酶(MMP)和其特異性組織抑制劑(TIMP)的組合[32]。在肝損傷的早期階段，HSC瞬時表達MMP-3、MMP-13和尿激酶血纖維蛋白溶酶原活化劑(uPA)并且表現(xiàn)出基質降解表型。細胞外基質的降解似乎不是CCR2或CCR5依賴性的。激活的HSC可以通過誘導單形核白細胞和多形核白細胞的浸潤增強炎癥反應。浸潤性單核細胞和巨噬細胞通過幾種機制(包括增加細胞因子的分泌和產(chǎn)生氧化應激相關產(chǎn)物)參與纖維化的發(fā)展。激活的HSC可以表達CCR2和CCR5并且產(chǎn)生趨化因子，包括MCP-1、MIP-1α、MIP-1β和RANTES。CCR2促進HSC趨化性和肝纖維化的發(fā)展。在人類肝臟疾病中，增加的MCP-1與巨噬細胞募集以及肝纖維化和原發(fā)性膽汁性肝硬化的嚴重程度有關。CCR5刺激HSC遷移和增殖。在肝損傷和HSC活化的后期階段，模式發(fā)生變化且細胞表達具有降解正常肝基質的能力的MMP的組合，同時抑制在肝纖維化中的累積的纖維狀膠原的降解。這種模式的特征為促MMP-2和膜型1(MT1)-MMP表達的組合，其促使活性MMP-2在細胞周圍的產(chǎn)生和正常肝基質的局部降解。另外，TIMP-1的表達顯著增加，導致更全面地抑制間質膠原酶(MMP-1/MMP-13)降解纖維狀肝臟膠原。在與慢性酒精性肝病相關的肝損傷中，TNF-α、IL-1、IL-6以及趨化因子IL-8/CXCL8的產(chǎn)生增加。TNF-α也是非酒精性脂肪肝病的重要介質。這些路徑在肝纖維化的進展中起重要作用。抑制HSC的活化和加快活化HSC的清除可以是用于解決肝纖維化的有效策略。趨化因子家族在炎癥中起著重要的調節(jié)作用。這個家族的成員包括但不限于：CXC受體和配體，包括但不限于：CXCR1、CXCR22、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CXCR7、CXCR8、CXCR9、CXCR10、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16和CXCL17；CC趨化因子和受體，包括但不限于CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCL10、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR和CCR10；C趨化因子，包括但不限于XCL1、XCL2和XCR1；以及CX3C趨化因子，包括但不限于CS3CL1和CX3CR1。這些分子在纖維化器官或組織中可以被上調。在進一步的實施方案中，這些分子在纖維化器官或組織中可以被下調。在進一步的實施方案中，這些趨化因子的信號傳導路徑中的分子可以在纖維化器官或組織中被上調。在進一步的實施方案中，這些趨化因子的信號傳導路徑中的分子可以在纖維化器官或組織中被下調。纖維化可以發(fā)生在身體內(nèi)的許多組織中，包括但不限于肺、肝、骨髓、關節(jié)、皮膚、消化道、淋巴結、血管或心臟并且通常是炎癥或損傷的結果。非限制性實例包括肺纖維化、特發(fā)性肺纖維化、囊性纖維化、肝硬化、心內(nèi)膜心肌纖維化、心肌梗塞、心房纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化、進行性大塊纖維化、塵肺病并發(fā)癥、腎原性系統(tǒng)性纖維化、克羅恩氏病(Crohn'sDisease)、瘢痕疙瘩、硬皮病/系統(tǒng)性硬化癥、關節(jié)纖維化、佩羅尼氏病(Peyronie'sdisease)、掌腱膜攣縮癥(Dupuytren'scontracture)、與動脈粥樣硬化相關的纖維化、淋巴結纖維化和粘連性關節(jié)囊炎。治療效用的實施方案：本發(fā)明提供了治療纖維化的方法。當在肝損傷發(fā)作(TAA)時或不久之后(TAA；HFD)開始CVC治療時，在動物研究中觀察到CVC的抗纖維化效果，但一次也沒有確立肝硬化(TAA)。這表明CVC的抗纖維化效果在具有確立的肝纖維化并處在重大的疾病進展風險下的群體中可能更顯著。這些包括：與2型糖尿病(T2DM)和代謝綜合征(MS)相關的非酒精性肝脂肪變性(NASH)；HIV和HCV共感染，或HCV感染。NASH本發(fā)明的組合物可以用于治療由非酒精性脂肪性肝炎(NASH)引起的肝纖維化，NASH是影響2％至5％的美國人的常見肝臟疾病。雖然由于NASH所導致的肝損傷具有酒精性肝病的一些特點，但是它發(fā)生在很少或根本不飲酒的人中。NASH的主要特征是肝臟中的脂肪，以及炎癥和肝細胞損傷(氣球樣變性)。NASH可以是嚴重的并且可以導致肝硬化，其中肝被永久損傷并結疤，并且不再能夠適當?shù)毓ぷ?。非酒精性脂肪肝?NAFLD)是與肥胖相關性病癥如2型糖尿病和代謝綜合征相關的常見且經(jīng)常“沉默”的肝病，其發(fā)生在很少或根本不飲酒的人中，并且特征是脂肪在肝臟中的積累，沒有其它明顯的原因。[32-43]NAFLD疾病譜的起點是簡單的脂肪變性，其特征是脂肪在肝臟中的累積。無炎癥的肝臟脂肪變性通常是良性和緩慢的或無進展的。NASH是NAFLD的更晚期和嚴重的亞型，其中脂肪變性并發(fā)肝細胞損傷和炎癥，伴有或不伴有纖維化。肥胖相關性病癥的患病率上升已經(jīng)促使NASH的患病率迅速增加。患有NAFLD的受試者的約10％至20％將會進展至NASH[44]。NAFLD是慢性肝病的最常見的原因。[45]大多數(shù)美國研究報告了10％到35％的NAFLD患病率；然而，這些比率隨研究群體和診斷方法而變化。[46]由于美國人口的大約三分之一被認為是肥胖的，因此NAFLD在美國人口中的患病率可能是約30％。[46]一項研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD影響約27％至34％的美國人，或估計8600萬至1.08億名患者。[44]NAFLD不是美國所獨有的。來自世界的其它地方(包括巴西、中國、印度、以色列、意大利、日本、韓國、斯里蘭卡和臺灣)的報告表明，患病率在6％到35％的范圍內(nèi)(20％的中位數(shù))。[46]由澳大利亞胃腸病學會(GastroenterologicalSocietyofAustralia)/澳大利亞肝臟協(xié)會(AustralianLiverAssociation)進行的一項研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD影響估計有550萬澳大利亞人，包括年齡≥50歲的所有成年人的40％。[47]澳大利亞的一項重度肥胖患者的研究發(fā)現(xiàn)，這些患者中的25％患有NASH。[48]需要進行肝活檢來作出NASH的確診。I在美國的一項中年個體研究中，組織學上確認的NASH的患病率為12.2％。[49]目前估計NASH患病率在美國為約900至1500萬(美國人口的3％至5％)，并且在歐盟和中國有類似的患病率。[46,50]NASH在肥胖人群中的患病率是在10％至56％的范圍內(nèi)(33％的中位數(shù))。[46]在來自加拿大的精瘦個體的尸檢系列中，脂肪性肝炎和肝纖維化的患病率分別為3％和7％。[46]NASH的患病率在發(fā)展中地區(qū)也在增加，這被歸因于這些地區(qū)的人們開始采取更久坐的生活方式和由具有高脂肪和高糖/果糖含量的加工食品組成的西化飲食[51]。[52]NASH是由肝脂肪變性和炎癥以及肝細胞損傷的存在確定的嚴重慢性肝病，其伴有或不伴有纖維化。[34]慢性肝臟炎癥是纖維化的前兆，其可以發(fā)展為肝硬化、晚期肝病和肝細胞癌。除了胰島素抗性之外，改變的脂質儲存和代謝、肝內(nèi)膽固醇的累積、導致肝損傷增加的氧化應激和繼發(fā)于腸道菌群破壞(與含高果糖的飲食相關)的細菌易位[34,53-56]都已被暗示為有助于NASH進展的重要輔因素。[57-60]由于肥胖和糖尿病的日益流行，NASH預計將成為晚期肝病的最常見原因以及肝移植的最常見適應癥。[46,61-63]NASH的負擔以及缺乏任何批準的治療性干預代表了未滿足的醫(yī)療需求。在進一步的實施方案中，肝纖維化與新興肝硬化相關聯(lián)。在一些實施方案中，肝硬化與酒精損害有關。在進一步的實施方案中，肝硬化與肝炎感染有關，所述肝炎感染包括但不限于B型肝炎和C型肝炎感染、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎或脂肪肝疾病。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了治療有發(fā)展為肝纖維化或肝硬化的風險的受試者的方法。在另一個實施方案中，纖維化包括非肝硬化性肝纖維化。在另一個進一步的實施方案中，受試者被人類免疫缺陷病毒(HIV)感染。在又一個進一步的實施方案中，受試者感染了肝炎病毒，包括但不限于HCV(C型肝炎病毒)。在進一步的實施方案中，受試者具有糖尿病。在進一步的實施方案中，受試者具有2型糖尿病。在進一步的實施方案中，受試者具有1型糖尿病。在進一步的實施方案中，受試者具有代謝綜合征(MS)。在進一步的實施方案中，受試者具有這些疾病或障礙中的一個或多個。在進一步的實施方案中，受試者有發(fā)展為這些疾病中的一個或多個的風險。在進一步的實施方案中，受試者具有胰島素抗性。在進一步的實施方案中，受試者具有增加的血糖濃度、高血壓、升高的膽固醇水平、升高的甘油三酯水平，或者是肥胖的。在進一步的實施方案中，受試者具有多囊卵巢綜合征。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療方法，其中賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物是與一種或多種額外的活性劑共施用。在進一步的實施方案中，一種或多種額外的活性劑是選自以下的一種或多種抗逆轉錄病毒劑：進入抑制劑、核苷逆轉錄酶抑制劑、核苷酸逆轉錄酶抑制劑、非核苷類逆轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、整合酶鏈轉移抑制劑、成熟抑制劑及其組合。在進一步的實施方案中，一種或多種額外的抗逆轉錄病毒劑選自由以下所組成的組：拉米夫定、依法韋侖、雷特格韋、威維康(vivecon)、貝韋立馬(bevirimat)、α-干擾素、齊多夫定、阿巴卡韋、洛匹那韋、利托那韋、替諾福韋、替諾福韋二吡呋酯(tenofovirdisoproxil)、替諾福韋前藥、恩曲他濱、埃替格韋、可比司他、地瑞那韋、阿扎那韋、利匹韋林、度魯特韋(dolutegravir)及其組合。在進一步的實施方案中，一種或多種額外的活性劑是一種或多種免疫系統(tǒng)抑制劑。在進一步的實施方案中，一種或多種額外的活性劑選自由以下所組成的組：環(huán)孢霉素、他克莫司、潑尼松龍、氫化可的松、西羅莫司、依維莫司、硫唑嘌呤、霉酚酸、甲氨蝶呤、巴利昔單抗、達利珠單抗、利妥昔單抗、抗胸腺細胞球蛋白、抗淋巴細胞球蛋白及其組合。某些實施方案包括用于監(jiān)測和/或預測如本文所述的本治療的治療功效的方法。此類方法包括檢測接受纖維化或纖維化疾病或病狀治療的受試者中(或來自該受試者的生物樣品中)的一個或多個生物分子如(例如)生物標記物的水平，其中一個或多個生物分子的水平相較于預定標準水平的增加或減少指示或預測本治療的治療功效。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療方法，其包括檢測接受纖維化或纖維化疾病或病狀治療的受試者中的一個或多個生物分子的水平，以及基于一個或多個生物分子的水平的增加或減少確定治療方案，其中所述生物分子選自由以下所組成的組：脂多糖(LPS)、LPS結合蛋白(LBP)、16SrDNA、sCD14、腸脂肪酸結合蛋白(I-FABP)、連蛋白-1、膠原蛋白1a1和3a1、TGF-β、纖連蛋白-1、hs-CRP、IL-1β、IL-6、IL-33、纖維蛋白原、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β、RANTES、sCD163、TGF-β、TNF-α、肝細胞凋亡的生物標記物如CK-18(半胱天冬酶裂解型和完整型)、或細菌易位的生物標記物如LPS、LBP、sCD14和I-FABP，或其組合。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療方法，其包括檢測接受纖維化或纖維化疾病或病狀治療的受試者中的一個或多個生物分子的水平，其中一個或多個生物分子的水平相較于預定標準水平的增加或減少預測纖維化或纖維化疾病或病狀的治療功效。在進一步的實施方案中，一個或多個生物分子是在來自接受纖維化或纖維化疾病或病狀治療的受試者的生物樣品中進行測量。在又進一步的實施方案中，生物樣品選自血液、皮膚、毛囊、唾液、口腔粘膜、陰道粘膜、汗液、淚液、上皮組織、尿液、精子、精液、精漿、前列腺液、預射精液(考珀液)、排泄物、活檢物、腹水、腦脊液、淋巴、腦以及組織提取物樣品或活檢樣品。劑量和施用：特定受試者的劑量可以根據(jù)該受試者的年齡、體重、一般健康狀況、性別、膳食、施用時間、施用途徑、排泄速率和待治療的特定疾病狀況的程度通過將這些和其它因素考慮在內(nèi)來確定。本發(fā)明提供一種治療方法，其中賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物被配制成口服組合物。本發(fā)明提供一種治療方法，其中賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物是例如每天施用一次或每天施用兩次。可以施用所述劑型達足以治療纖維化疾病或病狀的持續(xù)時間。在口服施用的情況下，日劑量是在每體重50kg的成人約5至1000mg，優(yōu)選約10至600mg，以及更優(yōu)選約10至300mg，最優(yōu)選約15至200mg活性成分(即作為本發(fā)明的化合物)的范圍內(nèi)，并且藥物可以例如每天施用一次或以2至3個分劑量施用。賽尼克韋羅或其鹽或溶劑化物可以被配制成適合于口服或注射施用的任何劑型。當口服施用該化合物時，它可以被配制成用于口服施用的固體劑型，例如，片劑、膠囊、丸劑、顆粒劑等等。它還可以被配制成用于口服施用的液體劑型，諸如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿等。如本文所用的術語“片劑”指的是通過將化合物和合適的輔料均勻地混合和壓制成為圓形或不規(guī)則的錠劑所制備的那些固體制劑，主要是用于口服施用的普通片劑，還包括口含片劑、舌下片劑、頰晶片、咀嚼片劑、分散片劑、可溶性片劑、泡騰片、緩釋片劑、控釋片劑、腸溶片劑等。如本文所用的術語“膠囊”指的是通過將化合物或化合物與合適的輔料一起填充到空心膠囊中或密封進軟膠囊材料中所制備的那些固體制劑。根據(jù)溶解性和釋放性質，膠囊可以分為硬膠囊(常規(guī)膠囊)、軟膠囊(軟殼膠囊)、緩釋膠囊、控釋膠囊、腸溶膠囊等。如本文所用的術語“丸劑”指的是通過經(jīng)由合適的方法混合化合物和合適的輔料所制備的球形或接近球形的固體制劑，包括滴丸、糖衣丸、小丸等。如本文所用的術語“顆粒劑”是指通過混合化合物和合適的輔料所制備并具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑。顆粒劑可以分為可溶性顆粒劑(通常稱為顆粒劑)、懸浮顆粒劑、泡騰顆粒劑、腸溶顆粒劑、緩釋顆粒劑、控釋顆粒劑等。如本文所用的術語“口服溶液劑”是指通過將化合物溶解在適用于口服施用的溶劑中所制備的沉降液體制劑。如本文所用的術語“口服混懸劑”是指通過將不溶性化合物分散于液體媒介物中所制備的用于口服施用的混懸劑，還包括干燥混懸劑或濃縮混懸劑。如本文所用的術語“糖漿”是指含有化合物的濃縮蔗糖水溶液?？勺⑸鋭┬涂梢酝ㄟ^制劑領域中的常規(guī)方法來生產(chǎn)，并且可以選擇水性溶劑或非水性溶劑。最常用的水性溶劑是注射用水，以及0.9％氯化鈉溶液或其它合適的水溶液。常用的非水性溶劑是植物油，主要是注射用大豆油，以及醇、丙二醇、聚乙二醇等的其它水溶液。在一個實施方案中，提供了一種藥物組合物，其包含賽尼克韋羅或其鹽和富馬酸。在某些實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽是賽尼克韋羅甲磺酸鹽。在進一步的實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽對富馬酸的重量比為約7:10至約10:7，諸如約8:10至約10:8、約9:10至約10:9或約95:100至約100:95。在其它進一步的實施方案中，富馬酸按組合物的重量計是以約15％至約40％，諸如約20％至約30％，或約25％的量存在。在其它進一步的實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽按組合物的重量計是以約15％至約40％，諸如約20％至約30％，或約25％的量存在。在其它進一步的實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽和富馬酸的組合物進一步包含一種或多種填充劑。在更具體的實施方案中，所述一種或多種填充劑選自微晶纖維素、磷酸氫鈣、纖維素、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、淀粉和碳酸鈣。例如，在某些實施方案中，一種或多種填充劑是微晶纖維素。在具體的實施方案中，一種或多種填充劑對賽尼克韋羅或其鹽的重量比是約25:10至約10:8，諸如約20:10至約10:10，或約15:10。在其它具體的實施方案中，一種或多種填充劑按組合物的重量計是以約25％至約55％，諸如約30％至約50％或約40％的量存在。在其它進一步的實施方案中，所述組合物進一步包含一種或多種崩解劑。在更具體的實施方案中，所述一種或多種崩解劑選自交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和羥乙酸淀粉鈉。例如，在某些實施方案中，一種或多種崩解劑是交聯(lián)羧甲基纖維素鈉。在具體的實施方案中，一種或多種崩解劑對賽尼克韋羅或其鹽的重量比是約10:10至約30:100，諸如約25:100。在其它具體的實施方案中，一種或多種崩解劑按組合物的重量計是以約2％至約10％％，諸如約4％至約8％，或約6％的量存在。在其它進一步的實施方案中，所述組合物進一步包含一種或多種潤滑劑。在更具體的實施方案中，所述一種或多種潤滑劑選自滑石、二氧化硅、硬脂精、硬脂酸鎂和硬脂酸。例如，在某些實施方案中，一種或多種潤滑劑是硬脂酸鎂。在具體的實施方案中，一種或多種潤滑劑按組合物的重量計是以約0.25％至約5％，諸如約0.75％至約3％，或約1.25％的量存在。在其它進一步的實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽和富馬酸的組合物大體上類似于表2的組合物。在其它進一步的實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽和富馬酸的組合物大體上類似于表3和4的組合物。在其它進一步的實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽和富馬酸的任何組合物是通過包括干式制粒的方法來生產(chǎn)。在其它進一步的實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽和富馬酸的任何組合物當與干燥劑包裝在一起時，在約75％相對濕度下暴露于約40℃下六周后具有不超過約4重量％的水含量，諸如不超過2重量％。在其它進一步的實施方案中，任何上述組合物當與干燥劑包裝在一起時，在75％相對濕度下暴露于40℃下12周后具有不超過約2.5％的總雜質水平，諸如不超過1.5％。在其它進一步的實施方案中，任何上述組合物的賽尼克韋羅或其鹽在口服施用后具有大體上類似于溶液中的賽尼克韋羅或其鹽在口服施用后的生物利用度的平均絕對生物利用度。在又進一步的實施方案中，賽尼克韋羅或其鹽在比格犬中具有約10％至約50％(如約27％)的絕對生物利用度。在另一個實施方案中，提供了一種藥物制劑，其包含賽尼克韋羅或其鹽和富馬酸的組合物。在進一步的實施方案中，所述制劑中的組合物可以是顆粒的形式。在其它進一步的實施方案中，制劑中的組合物被布置在膠囊殼中。在其它進一步的實施方案中，制劑的組合物被布置在小袋中。在其它進一步的實施方案中，制劑的組合物是片劑或片劑的組分。在其它更進一步的實施方案中，所述制劑的組合物是多層片劑的一個或多個層。在其它進一步的實施方案中，所述制劑包含一種或多種額外的藥學上無活性的成分。在其它進一步的實施方案中，所述制劑大體上類似于表9中的制劑。在其它進一步的實施方案中，提供了具有大體上類似于表9的組成的片劑。在其它進一步的實施方案中，任何上述實施方案是被涂覆的基材。在另一個實施方案中，提供了制備任何上述實施方案的方法。在進一步的實施方案中，所述方法包括摻混賽尼克韋羅或其鹽和富馬酸以形成混合物，并且將該混合物干式制粒。在其它進一步的實施方案中，所述方法進一步包括將一種或多種填充劑與賽尼克韋羅或其鹽以及富馬酸混合以形成混合物。在其它進一步的實施方案中，所述方法進一步包括將一種或多種崩解劑與賽尼克韋羅或其鹽以及富馬酸混合以形成混合物。在其它進一步的實施方案中，所述方法進一步包括將一種或多種潤滑劑與賽尼克韋羅或其鹽以及富馬酸混合以形成混合物。在其它進一步的實施方案中，所述方法進一步包括將干式制粒的混合物壓縮成片劑。在其它進一步的實施方案中，所述方法包括用干式制粒的混合物填充膠囊。此外，本發(fā)明的化合物可以包含在輸血用血或血液衍生物中或與其組合使用。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物可以與清除潛伏HIV儲器并加入輸血用血或血液衍生物中的一種或多種藥劑組合地被包括或使用。通常，輸血用血或血液衍生物是通過混合從多個人員獲得的血液而產(chǎn)生，并且在一些情況下，未感染的細胞被感染HIV病毒的細胞污染。在這樣的情況下，未感染細胞有可能感染HIV病毒。當本發(fā)明的化合物與清除潛伏HIV儲器的一種或多種藥劑一起被加入輸血用血或血液衍生物中時，可以防止或控制病毒的感染和增殖。特別是當儲存血液衍生物時，加入本發(fā)明的化合物能有效地防止或控制病毒的感染和增殖。另外，當將被HIV病毒污染的輸血用血或血液衍生物施用給人時，可以通過將本發(fā)明的化合物與清除潛伏HIV儲器的一種或多種藥劑一起添加到血液或血液衍生物中防止該病毒在人的身體內(nèi)的感染和增殖。例如，通常對于預防通過口服施用使用血液或血液衍生物后的HIV感染性疾病而言，劑量是在每體重約60kg的成人約0.02至50mg/kg，優(yōu)選約0.05至30mg/kg，以及更優(yōu)選約0.1至10mg/kgCCR5/CCR2拮抗劑的范圍內(nèi)，并且藥物可以每天施用一次或以2至3個劑量施用。當然，雖然可以基于分開日劑量所需的單位劑量控制劑量范圍，但如上所述，特定受試者的劑量可以根據(jù)該受試者的年齡、體重、一般健康狀況、性別、膳食、施用時間、施用途徑、排泄速率和待治療的特定疾病狀況的程度通過將這些和其它因素考慮在內(nèi)來確定。在這種情況下，施用途徑也被適當選擇，并且本發(fā)明的用于預防HIV感染性疾病的藥物可以在輸血或使用血液衍生物之前直接添加到輸血用血或血液衍生物中。在這樣的情況下，理想的是將本發(fā)明的藥物在輸血或使用血液衍生物前24小時，優(yōu)選12小時，或更優(yōu)選6小時立即與血液或血液衍生物混合。除了輸血用血或血液衍生物以外，當本發(fā)明的組合物與輸血用血或血液衍生物和/或其它活性劑一起施用時，所述藥物優(yōu)選在輸血或使用血液衍生物的同一時間至1小時前之間施用。更優(yōu)選地，例如，每天施用所述藥物1次至3次，并且持續(xù)施用4周。組合治療：本發(fā)明的化合物可以單獨使用或與一種或多種額外的活性劑組合使用。所述一種或多種額外的活性劑可以是能夠對有需要的受試者施加治療效果的任何化合物、分子或物質。所述一種或多種額外的活性劑可以被“共施用”，即，作為不同的藥物組合物或混合在單一藥物組合物中以配合的方式一起施用給受試者。通過“共施用”，一種或多種額外的活性劑也可以與本發(fā)明化合物同時施用，或與本發(fā)明化合物分開施用，包括在不同時間和以不同的頻率。所述一種或多種額外的活性劑可以通過任何已知的途徑來施用，諸如口服、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、經(jīng)鼻、皮下、陰道內(nèi)、直腸內(nèi)等；且治療劑也可以通過任何常規(guī)途徑施用。在許多實施方案中，一種或多種額外的活性劑中的至少一種和任選兩種可以口服施用。這些一種或多種額外的活性劑包括但不限于：一種或多種抗纖維化劑、抗逆轉錄病毒劑、免疫系統(tǒng)抑制劑以及CCR2和/或CCR5抑制劑或治療。當兩種或更多種藥物組合使用時，每種藥物的劑量通常與該藥物在獨立使用時的劑量相同，但是當一種藥物干擾另一種藥物的代謝時，每種藥物的劑量被適當?shù)卣{節(jié)。每種藥物可以同時或在例如小于12小時、24小時、36小時的時間間隔內(nèi)分開施用。如本文所述的劑型如膠囊可以以適當?shù)拈g隔施用。例如，每天一次、每天兩次、每天三次等等。具體地講，所述劑型是例如每天施用一次或兩次。甚至更具體地講，所述劑型是每天施用一次。在一個實施方案中，一種或多種抗逆轉錄病毒劑包括但不限于：進入抑制劑、核苷逆轉錄酶抑制劑、核苷酸逆轉錄酶抑制劑、非核苷類逆轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、整合酶抑制劑、成熟抑制劑及其組合。在一個實施方案中，一種或多種額外的抗逆轉錄病毒劑包括但不限于：拉米夫定、依法韋侖、雷特格韋、威維康、貝韋立馬、α-干擾素、齊多夫定、阿巴卡韋、洛匹那韋、利托那韋、替諾福韋、替諾福韋二吡呋酯、替諾福韋前藥、恩曲他濱、埃替格韋、可比司他、地瑞那韋、阿扎那韋、利匹韋林、度魯特韋及其組合。在一個實施方案中，一種或多種免疫系統(tǒng)抑制劑包括但不限于：環(huán)孢霉素、他克莫司、潑尼松龍、氫化可的松、西羅莫司、依維莫司、硫唑嘌呤、霉酚酸、甲氨蝶呤、巴利昔單抗、達利珠單抗、利妥昔單抗、抗胸腺細胞球蛋白、抗淋巴細胞球蛋白及其組合。下面的實施例進一步詳細說明本發(fā)明，但不應被解釋為限制其范圍。實施例實施例1–賽尼克韋羅甲磺酸鹽組合物在Key1L筒式制粒機中通過濕式制粒，然后盤式干燥、篩分、混合并在Carver壓機上壓成片劑制備一系列除酸增溶劑不同以外相同的賽尼克韋羅甲磺酸鹽組合物。表2中示出制劑的組合物。表2將片劑施用給小獵犬。還施用口服溶液作為對照。測定制劑和口服溶液的絕對生物利用度，并在圖2中示出。結果顯示，賽尼克韋羅甲磺酸鹽與富馬酸的生物利用度顯著高于測試的任何其它增溶劑。實施例2：賽尼克韋羅甲磺酸鹽組合物賽尼克韋羅甲磺酸鹽、富馬酸、微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和硬脂酸鎂與顆粒外微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和硬脂酸鎂混合、干式制粒、研磨、共混，并壓成硬度大于10kP且脆碎度小于0.8重量/重量％的片劑。所得片劑具有表3中所示組合物。表3.a.相當于150mg賽尼克韋羅游離堿。b.添加在粉末共混物的顆粒外部分中。舉例來說，表4中給出實施例2b(即，實施例2b)中的組分的每片劑濃度百分比和質量。表4組分濃度(重量/重量％)每片劑質量(mg)賽尼克韋羅甲磺酸鹽26.26170.69a富馬酸24.62160.00微晶纖維素41.87272.18交聯(lián)羧甲基纖維素鈉6.0039.00硬脂酸鎂1.258.13總計100.0650.0a相當于150mg賽尼克韋羅游離堿實施例3：賽尼克韋羅甲磺酸鹽組合物賽尼克韋羅甲磺酸鹽、微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和硬脂酸鎂與顆粒外微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、富馬酸、膠體二氧化硅和硬脂酸鎂混合、干式制粒、干燥、研磨、共混，并壓成硬度大于10kP且脆碎度小于0.8重量/重量％的片劑。所得片劑具有表5中所示組合物。表5組分濃度(重量/重量％)每片劑質量(mg)賽尼克韋羅甲磺酸鹽26.2628.45a富馬酸24.6226.67微晶纖維素41.8745.36交聯(lián)羧甲基纖維素鈉6.0039.00硬脂酸鎂1.251.35總計100.0108.3a相當于25mg賽尼克韋羅游離堿值得注意的是，表5的制劑具有與表3b相同的組分比例，且只是用于每個片劑的組分的總量不同。因此，表4示出具有150mg賽尼克韋羅(基于游離堿)的片劑，而表CC-1示出具有25mg賽尼克韋羅(基于游離堿)，組分比例與表4中所示的實施例2b的150mg片劑相同。實施例4–參考如下制備表6的基于檸檬酸的制劑。賽尼克韋羅、羥丙基纖維素、甘露糖醇和交聯(lián)羧甲基纖維素鈉與微晶纖維素,交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、檸檬酸,膠體二氧化硅、滑石和硬脂酸鎂混合、濕式制粒、干燥、研磨和共混。將所得共混物壓成硬度大于10kP且脆碎度小于0.8重量/重量％的片劑。用羥丙基甲基纖維素,聚乙二醇8000、二氧化鈦和黃色氧化鐵涂覆片劑。由此制備的涂覆片劑基本上與那些公開在美國專利申請公開號2008/031942中的相同(參見例如表3)。表6組分mg/片劑重量/重量％賽尼克韋羅甲磺酸鹽28.914.68甘露糖醇341.0956.85微晶纖維素80.0012.94膠體二氧化硅12.002.00無水檸檬酸75.0012.14羥丙基纖維素12.001.94交聯(lián)羧甲基纖維素鈉30.004.85滑石12.001.94硬脂酸鎂9.001.46羥丙基甲基纖維素11.711.89聚乙二醇80002.690.44二氧化鈦3.030.49黃色氧化鐵0.570.09實施例5–參考將賽尼克韋羅和羥丙甲基纖維素乙酸琥珀酸酯溶解在甲醇中并噴霧干燥成含25重量％賽尼克韋羅的細粉(基于賽尼克韋羅游離堿的重量)。所述粉末與膠體二氧化硅、微晶纖維素、甘露糖醇、月桂基硫酸鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和硬脂酸鎂混合。將所述摻加物壓成硬度大于10kP且脆碎度小于0.8重量/重量％的片劑。表7中示出片劑的最終組合物。表7實施例6：CVC制劑的生物利用度將實施例3的片劑在小獵犬中的絕對生物利用度與實施例4和5的片劑，以及賽尼克韋羅甲磺酸鹽的口服溶液和含賽尼克韋羅甲磺酸鹽粉末的明膠膠囊作比較。結果被示出在表8中。表8組分絕對生物利用度(％)口服溶液25.8膠囊中的粉末6.4實施例326.6實施例421.1實施例512.4這個實施例證實，具有富馬酸的干式制粒片劑(實施例3)中賽尼克韋羅的生物利用度基本上類似于口服溶液，且顯著高于具有富馬酸(實施例1b)或檸檬酸(實施例4)的濕式制粒片劑中賽尼克韋羅的生物利用度，且超過具有與HPMC-AS呈噴霧干燥分散體的非晶態(tài)賽尼克韋羅的片劑(實施例5)。這些結果是出乎意料的，因為沒有理由懷疑結晶API的干式制粒相對于濕式制粒和非晶態(tài)噴霧干燥分散體顯著增加生物利用度。因為常使用非晶態(tài)噴霧干燥分散體來增加水溶性差的藥物的生物利用度，所以更是如此。這些結果也是出乎意料的，因為富馬酸的溶解時間比檸檬酸慢，且所使用的酸相對于CVCAPI的質量比例更低(檸檬酸:API3:1對富馬酸:API1.06:1)。因此，出乎意料地，針對CVC，富馬酸被證明是比檸檬酸更有效的增溶劑。實施例7：CVC制劑的加速穩(wěn)定性通過暴露癌75％相對濕度和40℃的環(huán)境下，將實施例2b的片劑的加速穩(wěn)定性與實施例1b、4和5的片劑作比較。在研究期間，將所有片劑與干燥劑一起包裝。如圖3中所示，實施例2b的片劑出乎意料地比其它濕式制粒片劑穩(wěn)定得多，且與噴霧干燥分散體片劑穩(wěn)定性類似。實施例2b與實施例4的片劑間的穩(wěn)定性差異尤其出乎意料，因為只有所述兩者的間的顯著差異才是制備制劑的方法(干式制粒對濕式制粒)。這些結果也是出乎意料的，因為先前并不知道制粒方法能夠對賽尼克韋羅生物利用度和穩(wěn)定性都產(chǎn)生影響。實施例8：CVC制劑的穩(wěn)定性通過將片劑暴露在75％相對濕度和40℃的環(huán)境下六周測試實施例2和3的穩(wěn)定性。在研究期間，所有片劑包裝有干燥劑。結果示于表9中，結果顯示，片劑在這些條件下極為穩(wěn)定。表9時間(周)水含量(％)強度(％)總雜質(％)01.599.11.221.499.21.141.498.01.061.498.61.0實施例9：CVC制劑的穩(wěn)定性25℃下的動態(tài)蒸汽吸附等溫線將實施例3和4的片劑的穩(wěn)定性與賽尼克韋羅甲磺酸鹽的穩(wěn)定性相聯(lián)系。以5％間隔從0％相對濕度至90％相對濕度進行吸附。在每個間隔下，每個樣品平衡不少于10分鐘且不多于30分鐘。當質量增加速率不超過0.03重量/重量％每分鐘時或者30分鐘后(以較短者為準)，停止平衡。出現(xiàn)在圖4中的結果顯示，實施例2b的片劑比實施例4的片劑明顯更穩(wěn)定。這個結果與實施例3相一致，吸濕明顯少于實施例4。實施例4相比于實施例2b的吸濕性增加可以與較高移動水含量相關，較高移動水含量進而可導致實施例4的部分凝膠化和后續(xù)穩(wěn)定性降低。實施例10：CVC制劑的生物利用度在小獵犬的不同胃狀態(tài)下對實施例3的片劑的生物利用度與實施例5和在明膠膠囊中的賽尼克韋羅甲磺酸鹽粉末作比較。在不同預處理狀態(tài)下測試生物利用度，每種預處理狀態(tài)改變胃pH。具體地說，五肽胃泌素預處理提供最低pH，不處理提供中間pH，且法莫替丁(famotidine)處理提供最高pH。出現(xiàn)在圖5中的結果顯示，實施例3的片劑在所有測試條件下具有較高生物利用度。實施例3的生物利用度在五肽胃泌素處理的狗與未處理的狗間的變化較小，而實施例4在未處理的禁食狗(中間胃pH)中與在五肽胃泌素處理的狗(最低胃pH)中相比，生物利用度明顯減損。用法莫替丁(一種H2受體激動劑，抑制胃酸性且提升pH)處理降低所有樣品的生物利用度，然而，實施例3的減少比實施例4少得多。這些結果證實，具有富馬酸的干式制粒賽尼克韋羅組合物的意料不到的額外益處。具體地說，當在全范圍可能的人類胃pH條件下施用時，此類制劑的藥代動力學的變化不及噴霧干燥分散體(實施例4)的大。這個結果是意料不到的且出乎意料的，因為其它弱堿性抗逆轉錄病毒藥物如阿扎那韋的生物利用度受到胃pH的巨大影響。對于此類藥物，胃pH的變化可將生物利用度降至次治療水平，胃pH的變化可以由疾病或醫(yī)療條件(achlorohydric患者)或者共同施用藥物(諸如抗酸劑質子泵抑制劑或H2受體激動劑)所導致。這些結果顯示，實施例3的干式制粒的基于富馬酸的賽尼克韋羅甲磺酸鹽制劑在胃pH變化時較不傾向于生物利用度變化，表面實施例3是較為穩(wěn)健的制劑，可用于具有或有可能具有變化的胃pH水平的患者中。實施例11a-11c：制備賽尼克韋羅甲磺酸鹽和拉米夫定制劑如下制備表10的賽尼克韋羅甲磺酸鹽和拉米夫定的制劑。首先，混合顆粒內(nèi)組分，并干式制粒形成作為干式制粒摻加物的組合物。然后這個干式制粒摻加物進一步與顆粒外組分混合形成混合物。將所述混合物壓成片劑。在小獵犬中測量150mgCVC強度片劑(實施例11b和11c)中賽尼克韋羅(CVC)和拉米夫定(3TC)的絕對生物利用度。結果示于圖6中。表10實施例12：雙重CCR2和CCR5拮抗劑賽尼克韋羅在NASH小鼠模型中的抗纖維變性和抗炎活性背景：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的特征在于脂肪積聚、慢性炎癥(包括促炎性單核細胞和巨噬細胞)，且在存在纖維變性時，可導致硬化癥或肝細胞癌。當前沒有批準用于NASH的療法。證據(jù)表明，2型C-C趨化因子受體(CCR)和它的主要配體單核細胞趨化蛋白-1有助于肝臟中的促炎性單核細胞募集。賽尼克韋羅(CVC)是一種口服強效雙重CCR2/CCR5拮抗劑，在48周2b期研究中，在143名HIV-1感染成人(NCT01338883)中示出有利的安全性和耐受性。在飲食引起的NASH(導致肝細胞癌)的小鼠模型中評估CVC；提供來自模型的第一纖維變性階段的數(shù)據(jù)。方法：通過在出生2天后單次注射200μg鏈脲霉素，隨后從4周大開始高脂肪飲食，在雄性小鼠中誘導NASH(導致血糖控制受損)。從6至9周大開始，3組動物(n＝6/組)通過管飼法每天兩次施用0(媒介物)、20(低劑量)或100(高劑量)mg/kg/天的CVC劑量。在9周大時處死動物，并對肝臟進行生化、基因表達和組織學評估。結果：CVC處理對體重或肝臟重量、全血葡萄糖或肝臟甘油三酯沒有影響。相比于對照，兩個CVC處理組中的平均(±SD)丙氨酸轉氨酶水平都顯著下降(58±12、51±13和133±80U/L分別對應低劑量、高劑量和媒介物；p<0.05)，且處理組中的肝臟羥脯氨酸傾向于下降。借助實時RT-PCR，全肝臟溶解物中1型膠原mRNA用CVC處理時下降27–37％。纖維變性面積(通過天狼星紅染色)的百分比用CVC處理時相對于對照顯著下降(p<0.01)：當包括血管周圍間隙時，0.66％±0.16、0.64％±0.19和1.10％±0.31分別對應20mg/kg/天、100mg/kg/天和對照；當扣除血管周圍間隙時，分別為0.29％±0.14、0.20％±0.06和0.61％±0.23。重要的是，組織學非酒精性脂肪肝病活性評分(在這個模型中，未處理小鼠的評分為0)在用CVC處理時顯著下降(4.0±0.6、3.7±0.8和5.3±0.5分別對應低劑量、高劑量和媒介物；p<0.05)，這主要是因為炎癥和氣球樣變性評分減少。如先前在人類中所示，在小鼠中觀察到血漿單核細胞趨化蛋白-1水平的CVC劑量相關補償性增加(低劑量和高劑量分別對應1.1-和1.5倍增加)，這與CCR2的拮抗作用相一致。結論：這些數(shù)據(jù)表明，CVC(一種當前針對HIV-1進行人類試驗的研究藥物)在NASH小鼠模型中具有抗纖維變性和抗炎活性，批準臨床研究。這些發(fā)現(xiàn)提供氣體證據(jù)，破壞CCR2/單核趨化蛋白-1軸可能是一種NASH的新型治療方法。實施例13：賽尼克韋羅(一種雙重CCR2/CCR5拮抗劑)在硫代乙酰胺-誘導的肝纖維變性和硬化癥大鼠模型中的顯著抗纖維變性活性背景：2和5型C-C趨化因子受體(CCR)在促炎性單核細胞和巨噬細胞、庫普弗細胞和肝星狀細胞(HSC)中表達，它們促進肝中的炎癥和纖維發(fā)生。賽尼克韋羅(CVC；新型強效口服雙重CCR2/CCR5拮抗劑)在48周2b期研究中，在143名HIV-1感染成人(NCT01338883)中示出有利的安全性和耐受性。這項研究評估CVC在出現(xiàn)由于硫代乙酰胺(TAA)-誘導的損傷所引起的肝纖維變性的大鼠中的體內(nèi)抗纖維變性效果和治療干預相對于疾病發(fā)作的時間。方法：在Sprague-Dawley大鼠中通過腹膜內(nèi)施用TAA150mg/kg，3次/周達8周誘導纖維變性。大鼠(n＝4–8/組)在最初8周接受TAA的同時(組1；早期干預)、在完成TAA施用后的4–8周期間(組2；出現(xiàn)纖維變性)或8–12周期間(組3；硬化癥逆轉)接受CVC30mg/kg/天(a)、CVC100mg/kg/天(b)或媒介物對照(c)。對肝臟進行生化、基因表達和組織學評估。結果：當同時以TAA開始時(組1)，30mg(組1a)和100mg(組1b)的CVC顯著減少纖維變性(分別減少49％和38％；p<0.001)，這是通過膠原形態(tài)測定估算。當同時以TAA開始時(組1)，30mg(組1a)和100mg(組1b)的CVC顯著減少纖維變性(分別減少49％和38％；p<0.001)，這是通過膠原形態(tài)測定估算。組1a和1b的1型膠原的蛋白質水平分別減少30％和12％，而α-SMA分別減少17％和22％。在TAA-誘導損傷后開始治療時(組2)，CVC30mg(組2a，膠原減少36％；p<0.001)觀察到統(tǒng)計上顯著的抗纖維變性效果，而CVC100mg(組2b)未觀察到。當在第8周(存在硬化癥)開始治療并繼續(xù)4周(組3)時，CVC對纖維發(fā)生基因表達或纖維變性沒有顯著效果。結論：CVC是一種由于TAA引起的非硬化癥肝纖維變性的強效抗纖維變性藥物。所述藥物在早期干預(組1)和出現(xiàn)纖維變性(組2a)時是有效的，但在已經(jīng)形成硬化癥時(組3)無效。實施例14：賽尼克韋羅在低納摩爾濃度下實現(xiàn)高CCR5受體占用背景：賽尼克韋羅(CVC)是一種每天一次的新型高效CCR5和CCR2拮抗劑，它已經(jīng)在治療初治成人(NCT01338883)中完成治療HIV-1感染的2b期評估。這項研究的目的是評估用CVC、BMS-22(TOCRIS，一種CCR2拮抗劑)和獲批的CCR5拮抗劑馬拉維諾(MVC)治療后的體外受體占用和生物學。方法：來自5名HIV+和5名HIV-受試者的PBMC與CVC、BMS-22或MVC培養(yǎng)，隨后治療或用RANTES(CCR5配體)或MCP-1(CCR2配體)治療。評估每種藥物抑制CCR5或CCR2內(nèi)在化的能力。通過流式細胞術評估CCR5和CCR2的細胞表面表達，并將熒光值轉化為可溶性熒光當量分子(MESF)。結果：CVC和MVC在RANTES不存在時增加CCR5的細胞表面表達。這種效果在HIV-陰性受試者(CD4+和CD8+T細胞)中的程度要大得多。CVC在比MVC更低的有效濃度下預防RANTES-誘導的CCR5內(nèi)在化。對于CVC，CCR5達到飽和時的有效濃度：CD4+為3.1nM，且CD8+T細胞為2.3nM(受體占用分別為～91％和～90％)。對于CD4+和CD8+T細胞，MVC在12.5nM下達到飽和，分別代表～86％和～87％受體占用。CVC和MVC實現(xiàn)CCR5的高但不完全飽和，這種效果可以通過兩種藥物在RANTES不存在時增加CCR5表達的觀測結果放大。在MCP-1不存在時，CVC誘導CCR2內(nèi)在化并減少單核細胞上的細胞表面表達。BMS-22略微增加CCR2細胞表面表達。CVC在比BMS-22更低的濃度下防止MCP-1-誘導的CCR2內(nèi)在化。單核細胞CCR2在6nM的CVC下達到飽和，代表～98％CCR2占用。為達到>80％受體占用，與1.8nMCVC相比，平均需要18nMBMS-22。結論：CVC在體外比MVC更容易防止RANTES-誘導CCR5內(nèi)化(在更低濃度下)，表明CVC可在體內(nèi)比MVC更有效防止通過RANTES進行細胞活化。經(jīng)治療的受試者的基線CCR5表達水平可為CCR5拮抗劑體內(nèi)活性的決定子。CVC在體外在低納摩爾濃度下在單核細胞上實現(xiàn)CCR2的～98％受體占用，并在MCP-1不存在下減少單核細胞上的CCR2表達。通過CVC的CCR2的高飽和伴隨著表達減少可以解釋臨床上觀測到的CVC的強效CCR2阻斷。CVC具有強效體外免疫調節(jié)活性，且在慢性HIV感染中可以是重要組合免疫治療和抗逆轉錄的。實施例15：CVC阻斷HIV進入，但不會像MVC一樣導致進入細胞外空間的HIV重新分布CVC阻斷HIV進入，但不會像MVC一樣導致進入細胞外空間的HIV重新分布背景：在體內(nèi)，CVC已在具有CCR5嗜性病毒7的經(jīng)過治療的個體的單一療法期間示出功效。在IIb期臨床研究(652-2-202；NCT01338883)中，CVC在24周時(初步分析)展示與非核苷逆轉錄酶抑制劑(NNRTI)依法韋侖(EFV)類似的功效，和比非核苷逆轉錄酶抑制劑(NNRTI)依法韋侖(EFV)優(yōu)異的毒性概況，當兩者聯(lián)合恩曲他濱(FTC)和替諾福韋(TDF)施用時分別具有有利的安全性和耐受性。我們假設CVC在研究202(實施例22)中的抗逆轉錄功效可能由于用MVC觀察到的反跳現(xiàn)象而被低估。因此，我們開展了研究202(實施例22)的離體子分析，方式是測量來自30名在研究的第24周達成病毒學成功的受試者的儲存PBMC的細胞內(nèi)HIVDNA下降。我們還進行體外分析，來測定和比較CVC或MVC可能導致的任何無細胞病毒粒子重新分布的程度。我們現(xiàn)在證明，CVC不會引起病毒粒子反跳。實際上，用CVC或EFV治療的個體中看到細胞內(nèi)DNA的可比較降低，表明血漿病毒載量是CVC治療成功的準確量度。結構建模潛在地解釋用MVC和CVC所得結果間的差異。方法：細胞。在37℃、5％CO2下將表達CD4、CCR5和CXCR4的PM-1細胞保持在含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基(R10培養(yǎng)基)中。在37℃、5％CO2下將用于轉染的293T細胞保持在DMEM中，10％FBS、L-谷氨酰胺和抗生素(D10培養(yǎng)基)。病毒原液。通過用質粒pWT/BaL轉染293T細胞產(chǎn)生HIV-1BaL病毒。使用脂質體2000作為轉染劑。在轉染48小時后收集培養(yǎng)上清液，濾過0.45μm孔過濾器，并在37C下用50單位苯佐那酯/ml病毒原液處理20分鐘，以移除受污染的質粒DNA。將病毒原液冷凍在-80C下，以阻止苯佐那酯活性。經(jīng)過苯佐那酯處理的病毒原液在臍血單個核細胞(CBMC)中繁殖。在R10培養(yǎng)基中用植物凝集素(PHA-M)刺激CBMC72h，然后用HIV-1BaL感染。隨后將病毒擴增培養(yǎng)物生長在補充有白介素2(IL-2)的R10中，并在37C、5％CO2下培養(yǎng)。感染：我們在抑制濃度的CVC(20nM)和MVC(50nM)存在下將PM-1細胞暴露至HIV-1BaL。在37℃下將兩種藥物與PM-1細胞培養(yǎng)在一起，然后添加病毒。在1mlR10培養(yǎng)基中每5X105個細胞培養(yǎng)500ngHIV-1BaL的p24抗原。使用只有病毒的對照(在本文中稱為“無細胞”)測定病毒死亡。在無藥物對照中測定病毒吸附，由此在無藥物治療存在下每5X105個在37C下預培養(yǎng)的PM-1細胞添加500ngHIV-1Bal的p24Ag。一式兩份地進行每種藥物治療和對照。根據(jù)制造商說明書利用QIAamp病毒RNA微型試劑盒從140μl上清液流體提取病毒RNA。將樣品儲存在-80C下，直到進行分析。利用定量實時逆轉錄PCR(qRT-PCR)和引物US1SSF(5'-AACTAGGGAACCCACTGCTTAA-3')、US1SSR(5'-TGAGGGATCTCTAGTTACCAGAGTCA-3')和US1SS探針(5’-(FAM)CCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAA)和InvitrogenqRT-PCRSupermix試劑盒測量上清液病毒載量。循環(huán)參數(shù)是：50℃持續(xù)15分鐘，95℃持續(xù)10分鐘，隨后50個循環(huán)的95℃持續(xù)15秒，和60℃持續(xù)1分鐘。所有值都是在2個獨立實驗中重復測試的結果。通過使用pBaL/wt的10倍連續(xù)稀釋液確定RNA拷貝數(shù)，以生成每個分析的標準曲線，并針對來自先前研究的具有已知拷貝數(shù)的樣品進行校準?；颊邩悠罚簭?0名在研究202IIb期臨床試驗中第24周達成病毒學成功的患者(10、13和7分別對應CVC100mg、CVC200mg和EFV)獲得外周血單個核細胞(PBMC)樣品，比較CVC(100mg或200mg)或EFV與恩曲他濱/富馬酸替諾福韋二吡呋酯(FTC/TDF)組合在具有CCR5嗜性病毒的感染HIV-1的治療初治患者中的功效、安全性和耐受性。從具有<100,000但>1,000病毒RNA拷貝/ml的基線病毒載量的參與者獲取基線和24周的樣品，≥200個細胞/μl的CD4計數(shù)隨機指定接受CVC或EFV。細胞內(nèi)DNAqPCR。提取總DNA，定量并儲存在-80C下。用上述US1SS引物/探針組定量細胞內(nèi)強終止DNA水平。用US1FL引物/探針組(正向：5’-AACTAGGGAACCCACTGCTTAA；反向：5’-CGAGTCCTGCGTCGAGAGA；探針：5’-[FAM]-CCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAA)定量細胞內(nèi)全長DNA水平。兩種DNA水平與GAPDH引物/探針組(正向：5’-ACCGGGAAGGAAATGAATGG；反向：5’-GCAGGAGCGCAGGGTTAGT；探針：5’-(VIC)-ACCGGCAGGCTTTCCTAACGGCT)復合以歸一化DNA輸入，并驗證樣品完整性。統(tǒng)計分析：利用Mann-Whitney測試分析所有三個治療組的體外細胞內(nèi)HIVDNA水平。利用Prism5軟件分析所有數(shù)據(jù)。賽尼克韋羅在CCR5中的分子對接通過結構生物信息學研究聯(lián)合實驗室(RCSB)蛋白質數(shù)據(jù)庫獲得CCR5趨化因子受體的晶體結構(蛋白質數(shù)據(jù)庫識別號[PDBID]4MBS)并用作對接目標。從PubChem獲得CCR5-受體接抗體賽尼克韋羅(以前的TAK-652/TBR-652)并用作配體。通過使用UCSFChimera促進使配體對接結構最小化，UCSFChimera準備CCR5和CVC作為DOCK計算的輸入，這預測配體在CCR5七跨膜(7TM)α-螺旋受體腔中的取向。進行對接計算，并使用最大尺寸的柵格箱來將所有可能的對接位點囊括在CCR5中。結合位點由所有來自7TM腔的小于的殘基組成(在殘基Glu283和Tyr10周圍)。處理對接結果以識別分子間相互作用。保持測試的九個姿態(tài)以備進一步分析。為了驗證對接系統(tǒng)的準確性，利用相同方法將MVC對接至CCR5，并測定其相對于晶體結構的取向。利用PyMOL計算的觀測到的晶體結構與從AutoDockVina獲得的預測構型之間的均方根偏差(RMSD)是表明方案是合理的。結果首先，我們定量HIV細胞內(nèi)DNA，以驗證在研究202臨床試驗期間獲得的病毒載量的措施。從這個臨床試驗中參與者分離的PBMC中的全長細胞內(nèi)HIVDNA水平(指示早期逆轉錄)的離體分析在24周時所有組(CVC100mg、CVC200mg、EFV600mg)都類似(圖7A)。從基線的平均倍數(shù)變化：CVC組100mg(n＝10)和CVC200mg(n＝11)分別為0.643和0.787。EFV600mg組(n＝7)在24周時，從基線的平均倍數(shù)變化為0.825。差異不具有統(tǒng)計顯著性。接下來，強終止細胞內(nèi)HIVDNA水平(指示晚期逆轉錄)在24周時與全長水平同時測量(圖7B)。從基線的平均倍數(shù)變化：CVC100mg組為0.49，CVC200mg組為0.63，且EFV600mg組為1.01。平均值并不具有統(tǒng)計顯著性。還在CVC和MVC暴露后進行測量細胞外病毒水平的體外實驗。在感染進入抑制劑暴露細胞4小時后，通過qRT-PCR和P24ELISA定量培養(yǎng)物流體中病毒的水平。4小時后，來自MVC治療細胞的培養(yǎng)物流體與基線相比(基線：1.19X1010拷貝/ml，4小時：1.67X1010拷貝/ml)(圖8A)呈現(xiàn)出比CVC治療細胞更高的RNA水平。(基線：506ng/ml，4小時：520ng/ml)(圖8B)。來自CVC治療細胞的培養(yǎng)物流體中的病毒RNA在4小時后沒有顯著變化(基線：1.19X1010拷貝/ml，4小時：1.26X1010拷貝/ml)(圖8A)。在用CVC治療4小時后，P24水平從基線下降(基線：506ng/ml，4小時：192ng/ml)(圖8B)。無細胞和無藥物對照的病毒RNA下降在4小時后類似，分別為1.14X1010拷貝/ml和1.1X1010拷貝/ml(圖8A)。506ng/ml的基線p24水平后，無細胞對照的p24抗原水平在4小時后為138ng/ml。p24無藥物對照水平為244ng/ml(圖8B)。細胞外病毒水平在CVC和MVC后的這些變化提示我們檢查在用HIV-1BaL感染前1h暴露至CVC或MVC的PM-1細胞中的細胞內(nèi)強終止HIVDNA水平。4h后，從細胞沉淀物提取總DNA。CVC或MVC治療細胞的細胞內(nèi)強終止HIVDNA水平與無藥物對照作比較(圖9)。我們在MVC治療細胞中觀察到與無藥物對照相比的0.02的相對DNA水平，而CVC治療細胞只呈現(xiàn)出0.1的相對細胞內(nèi)DNA水平。MVC與CVC治療細胞的相對DNA水平間的差異顯著。CCR57TM的晶體結構與MVC(PDBID4MBS)復合，且用它生成CVC對接至結合口袋中的CCR5的模型。我們預測了也是通過將MRV重新對接至CCR5中評估的對接姿態(tài)；具有最有利能量的頂部姿態(tài)具有適當取向，并與晶體結構中的構型重疊計算機CCR5對接模擬指示，CVC只結合CCR5結構的疏水口袋，也稱為配體結合口袋(圖10)。只有頂部的9個姿態(tài)繼續(xù)進行進一步分析。有三種CVC后對接至CCR5中的不同構型，且它們聚集成三個位點(圖10A、B)。第一位點(位點1)深入疏水口袋并填充大體積(圖10A)。第二位點(位點2)部分定位在口袋中部，還從TM1與TM7間的CCR5向外凸出(圖10A)。在第三位點(位點3)，極少CVC姿態(tài)定位在受體腔的入口附近。細胞外環(huán)內(nèi)的殘基和CCR5中的跨膜結構域的定點突變已經(jīng)識別了參與gp120結合的關鍵殘基；不同位置的突變完全破壞、損害或影響gp120結合至CCR5。被識別為對gp120結合在CCR5內(nèi)重要的十三個關鍵殘基是Tyr37、Trp86、Trp94、Leu104、Tyr108、Phe109、Phe112、Thr177、Ile198、Trp248、Tyr251、Leu255和Glu283。圖11示出CVC(左邊)和MVC(右邊)在結合口袋中為對接姿態(tài)的CCR5的分子表面表示。CVC和MVC分別具有～1285和(利用PyMOL計算)的分子表面積。MVC占據(jù)結合口袋的中部。所有十三個確定對gp120結合重要的殘基是在距離MVC內(nèi)，由PyMOL測量(這個研究中針對靜電和/或疏水相互作用使用截止距離)。相比之下，對接CVC姿態(tài)占據(jù)相同口袋，但不是在如MVC所見的中部(圖11)。確切地說，CVC向口袋的一側偏移(圖12A/B)，且測得CCR5中的共有殘基在CVC的內(nèi)。即使CVC占據(jù)比MVC更大的表面積，對gp120結合重要的十三個殘基中只有七個在CVC的內(nèi)，即Tyr37、Trp86、Tyr108、Phe109、Ile198、Leu255和Glu283。總之，這些模擬表明，CVC在CCCR5的結合口袋中占據(jù)與MVC類似的區(qū)域。討論：在這項研究中，我們觀察到CVC和MVC(兩種防止HIV進入的CCR5拮抗劑)對細胞外病毒水平具有不同影響。在比較CVC和EFV的IIb期雙盲雙模擬研究中，兩者都在治療初治受試者中具有FTC/TDF，與73％接受CVC200mg的患者和71％接受EFV的患者相比，76％接受CVC100mg的患者在24周達成病毒學成功(HIVRNA<50拷貝/ml)。我們先前證實，MVC可人為地增加病毒載量，因為無細胞病毒粒子可在未能在MVC存在下進入后從目標細胞排出。當前的研究的設計目的是回答CVC是否可能出現(xiàn)相同效果，和在比較進入和逆轉錄酶抑制劑時，細胞內(nèi)DNA測量值是否可能較準確地代表抗病毒功效。事實上，研究202治療組全過程的細胞內(nèi)DNA水平與選定樣品在24周時類似(圖7)，反映了意向治療(ITT)分析期間觀察到的趨勢。所有組在24周時的全長HIV-DNA水平也類似，表明CVC和EFV都具有類似抗病毒功效。CVC和EFV組間觀察到強終止HIVDNA水平存在差異，而兩個CVC組的病毒載量與EFV相比呈現(xiàn)出更陡峭的下降。因為強終止HIVDNA水平受到進入抑制劑的直接影響，可以預測到這個結果。EFV和CVC間關于病毒學成功和細胞內(nèi)HIVDNA水平的相似性表明這種雙重CCR5和CCR2抑制劑的抗病毒效力未被病毒載量測量值掩蓋。我們提出了CVC是否可以導致如MVC在體外所看到的病毒排斥。兩種獨立的病毒定量測量qRT-PCR和p24ELISA證實MVC治療在感染后維持細胞外病毒水平長達4小時。相比之下，用CVC治療導致導致病毒水平在4小時處下降，與無藥物或無細胞對照相當(圖8)。D盡管抗病毒機制表面上類似，似乎CVC與MVC關于無細胞病毒與CCR5間的相互作用間存在差異。細胞內(nèi)強終止DNA體外的進一步檢查顯示，CVC與MVC相比導致水平輕微但顯著增加(圖9)。這可能是由于兩種抑制劑對CCR5的效果不同，這進而影響病毒與受體間的解離速率。這提高了gp120與MVC相比更持久地締合CVC-結合CCR5的可能性。我們還旨在通過檢查CCR5的結合位點理解CVC如何抑制HIV進入目標細胞。工程化人類CCR5構建體先前已經(jīng)與MVC在的分辨率下復合結晶。雖然這不是CCR5的全長晶體結構，但它被用來更好地理解CVC與CCR5在計算機對接分析中的相互作用。所有聲稱為CVC的對接模型暗示藥物深深滲入CCR5的7TM腔，MVC也可以看到。然而，CVC對接姿態(tài)并沒有靠近細胞外環(huán)2，ECL2在對接后仍然可接觸。其它組已經(jīng)報道，CCR5N-末端和ECL2結構域都在HIV-1與CCR5的相互作用中起關鍵作用。此外，據(jù)報道，gp120的V3的桿狀區(qū)域結合至CCR5N-末端，而V3冠狀物與ECL2和結合口袋內(nèi)的殘基相互作用。基于我們的模型，我們假定CVC不會直接干擾gp120V3環(huán)與ECL2的相互作用，因為ECL2似乎暴露在這個模型中?？梢韵氲?，如果CCR5仍處于失活狀態(tài)，CVC可阻斷CCR5激活。已顯示，7TM中的兩個殘基Tyr37和Trp248在結合趨化因子配體時對CCR5激活很重要，且還顯示對MVC結合很重要。類似于MVC，CVC的不同對接姿態(tài)內(nèi)埋在疏水結合位點中。我們的模型顯示，接觸Trp248被CVC阻斷；已顯示，Trp248對CCR5激活很重要，這解釋了趨化因子受體的失活。第二假說是MVC結合至CCR5可導致CCR5經(jīng)歷全方位構型變化，這在CVC存在下時的改變較少?；诒狙芯刻峁┑钠渌M的定點突變實驗和組織培養(yǎng)實驗和對接模擬，我們假設MVC占據(jù)疏水口袋的中部，潛在地導致CCR5中對gp120結合重要的一些殘基不可接觸。這些殘基也可能對gp120通過直接靜電或疏水相互作用和水介導的氫鍵結合很重要。相比之下，CVC占據(jù)結合位點，且有可能gp120在CVC存在下仍可接觸對CCR5結合重要的一些殘基。這種假說受到定點突變研究的支持，表明gp120部分填充受體腔，同時占據(jù)整個ECL2。然而，gp120的V3環(huán)滲入CCR57TM的程度仍不清楚。還報道了，gp120從CCR5的解離速率在MVC存在下加速，因為后者阻礙ECL2與V3環(huán)間的緊密締合?；谶@些研究，CVC對ECL2/V3相互作用具有不同于MVC的效果。CCR5與CVC復合的解離和表面等離振子共振研究和結晶將提供關于這個話題的寶貴信息。需要定點突變和生化研究來說明對CCR5與CVC相互作用重要的殘基。測定CCR5的N末端的近側位置也受到關注。在這項研究中，我們已經(jīng)證實，病毒載量定量準確測量CVC的抗病毒功效，且通過CVC抑制病毒進入不會導致細胞表面的病毒粒子反跳至細胞外環(huán)境。我們的計算機結構建模為CVC與MVC間的功能差異提供可能的解釋。需要進一步研究來理解CVC如何影響gp120結合至CCR5。實施例16：雙重CCR5/CCR2拮抗劑賽尼克韋羅在腎纖維變性小鼠模型中之抗纖維變性活性背景：賽尼克韋羅(CVC)是一種已經(jīng)完成2b期HIV研發(fā)的每天一次的新型口服雙重CCR5/CCR2拮抗劑(研究202；NCT01338883)。CVC在555名已經(jīng)用至少一個劑量治療的受試者中具有安全特性，包括115名在48周持續(xù)時間用CVC治療的HIV-1感染成人。最近，CVC在飲食引起的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的小鼠模型和硫代乙酰胺-誘導的纖維變性的大鼠模型中展示顯著抗纖維變性活性。這里，我們在由單側輸尿管閉塞(UUO)誘導的腎纖維變性的已經(jīng)確立的小鼠模型中評估了CVC。方法：在外科手術前一天(第1天)將測試動物分配成重量匹配的治療組。雄性CD-1小鼠(N＝51；年齡，7–8周)通過無菌剖腹手術經(jīng)歷假手術或右側輸尿管完全結扎即UUO(圖12)。從第0至5天：經(jīng)歷假手術的小鼠通過每天兩次管飼法接收媒介物對照(0.5％甲基纖維素+1％Tween-80)；永久UUO的小鼠通過每天兩次管飼法接收媒介物對照、CVC7mg/kg/天或CVC20mg/kg/天。另一組從第-1至4天以3mg/kg/天接收抗轉化生長因子TGF-β1抗體化合物1D11(陽性對照)，每天一次腹膜內(nèi)注射，并從第0至5天接收媒介物對照。起初將CVC100mg/kg/天組(N＝9)囊括在研究中，但因為瀕死狀態(tài)而提前終止(因為沒有動物達到第5天，所以沒進行分析)。多至2000mg/kg/天的CVC劑量在不涉及外科手術的小鼠毒性研究中耐受性良好。在第5天，麻醉動物，在處死前收集血液和組織。研究終點：研究終點包括：a)體重和腎重量；b)通過苦味酸天狼星紅染色的組織學定量圖像分析(得到十個圖像/深度/腎，并利用光學顯微鏡[200x]，以盲式評估，以取樣60–70％的腎皮質區(qū))評估的阻塞腎中的纖維變性，并通過復合膠原容積分數(shù)(CVF[成像總面積％])評分量化，所述評分表示為來自阻塞腎的三個解剖學上不同(間隔200–250μM)的組織切片或深度的平均陽性染色；c)冷凍腎皮質組織活檢的羥脯氨酸含量，通過生化分析評估；d)促纖維變性和炎癥生物標記物(包括MCP-1、膠原1a1、膠原3a1、TGF-β1、纖連蛋白-1、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和結締組織生長因子-1(CTGF-1)的mRNA表達；通過(LifeTechnologiesTM,Carlsbad,CA,USA)分析評估，將相對表達歸一化至HPRT(黃嘌呤磷酸核糖轉移酶)。統(tǒng)計分析：將數(shù)據(jù)表示為平均值±平均數(shù)標準誤差(SEM)。利用GraphPad(GraphPadSoftware,Inc.,SanDiego,CA,USA)進行統(tǒng)計分析。通過不成對t檢驗分析假手術+媒介物對照與UUO+媒介物對照組之間，和UUO+媒介物對照與UUO+化合物-1D11(陽性對照)組之間的治療差異。通過單因素ANOVA(方差分析)與Dunnett’s檢驗(post-hoc)分析UUO+媒介物對照與CVC-劑量組之間的治療差異。方法：CVC展示顯著抗纖維變性效果，通過腎纖維變性的已經(jīng)確立的UUO模型中的膠原容積分數(shù)或CVF(組織學阻塞腎切片中針對膠原為染色陽性的面積％)的減少確定。阻塞腎中觀察到膠原1a1、膠原3a1、TGF-β1和纖連蛋白-1mRNA表達下降的趨勢，但這些并未達到統(tǒng)計顯著行。綜上，CVC的作用模式、在動物模型(腎和肝)中的抗纖維變性活性和廣泛安全性數(shù)據(jù)庫支持纖維變性疾病的進一步評估。計劃在非HIV感染的NASH和肝纖維變性患者中進行概念驗證研究。還計劃在HIV-1感染患者中進行III期試驗，以評估在與共同施用指南優(yōu)選的第三藥劑時固定劑量組合的CVC/拉米夫定(3TC)作為新型‘基礎(backbone)’相對于富馬酸替諾福韋二吡呋酯/恩曲他濱(TDF/FTC)。結果：體重和阻塞腎重量：CVC7mg/kg/天和化合物1D11(陽性對照)對體重沒影響，而CVC20mg/kg/天導致體重在第5天時相對于UUO+媒介物對照組存在適度但不明顯的下降(5％)(p<0.05)(圖13；體重變化以克[g]計)。阻塞或對側腎重量或腎重量指數(shù)相對于UUO+媒介物對照組(數(shù)據(jù)未顯示)未觀察到顯著治療效果(CVC或化合物1D11[陽性對照])。組織學：CVF的復合測量(針對三種深度求取面積％的平均值[±SEM])在UUO+媒介物對照組中顯著高于假手術組(11.4±1.0倍；p<0.05)(圖14)。CVC7和20mg/kg/天和化合物1D11(陽性對照)相對于UUO+媒介物對照組顯著削弱UUO-誘導的CVF的復合測量(針對三種深度求取的平均值[±SEM])(分別減少28.6±8.8％、31.8±6.8％和50.3±7.3％；p<0.05)。羥脯氨酸含量：來自UUO+媒介物對照組的阻塞腎的羥脯氨酸含量(占蛋白質的％)相對于假手術組顯著增加(0.72％對0.27％；p<0.05)(數(shù)據(jù)未顯示)。相對于UUO+媒介物對照組，測試的任一CVC劑量都不影響UUO-誘導的阻塞腎羥脯氨酸含量增加；然而化合物1D11(陽性對照)組具有顯著更低水平(0.55％對0.72％；p<0.05)(數(shù)據(jù)未顯示)。促纖維化和炎癥生物標記物mRNA表達：對于每種評估的生物標記物(MCP-1、膠原1a1、膠原3a1、TGF-β1、纖連蛋白-1、α-SMA和CTGF-1)，UUO+媒介物對照組中mRNA的表達與假手術組相比顯著增加(p<0.05)(圖15)。CVC7和20mg/kg/天減弱UUO-誘導的膠原1a1、膠原3a1、TGF-β1和纖連蛋白-1mRNA表達增加。然而，這些降低與UUO+媒介物對照組相比沒有達到統(tǒng)計顯著性?；衔?D11(陽性對照)相對于UUO+媒介物對照組顯著減少UUO-誘導的膠原1a1、膠原3a1、TGF-β1和纖連蛋白-1的mRNA表達的增加(p<0.05)。與UUO+媒介物對照組(未顯示α-SMA和CTGF-1mRNA的數(shù)據(jù))相比，CVC7和20mg/kg/天和化合物1D11(陽性對照)對于UUO-誘導的阻塞腎皮質MCP-1、α-SMA和CTGF-1mRNA表達沒有顯著影響。結論：CVC展示顯著抗纖維變性效果，通過腎纖維變性的已經(jīng)確立的UUO模型中的膠原容積分數(shù)或CVF(組織學阻塞腎切片中針對膠原為染色陽性的面積％)的減少確定。阻塞腎中觀察到膠原1a1、膠原3a1、TGF-β1和纖連蛋白-1mRNA表達下降的趨勢，但這些并未達到統(tǒng)計顯著行。綜上，CVC的作用模式、在動物模型(腎和肝)中的抗纖維變性活性和廣泛安全性數(shù)據(jù)庫支持纖維變性疾病的進一步評估。計劃在非HIV感染的NASH和肝纖維變性患者中進行概念驗證研究。還計劃在HIV-1感染患者中進行III期試驗，以評估在與共同施用指南優(yōu)選的第三藥劑時固定劑量組合的CVC/拉米夫定(3TC)作為新型‘基礎(backbone)’相對于富馬酸替諾福韋二吡呋酯/恩曲他濱(TDF/FTC)。實施例17：APRI和FIB-4纖維變性評分的提高與48周內(nèi)接收賽尼克韋羅的HIV-1感染成人中sCD14的降低相關背景和目標：賽尼克韋羅(CVC)(一種每天一次的新穎口服CCR2/CCR5拮抗劑)已經(jīng)在臨床試驗中展示有利安全性和抗HIV活性。CVC在兩種肝病動物模型中展示抗纖維變性活性。在研究202(NCT01338883)中對APRI和FIB-4開展Post-hoc分析。方法：以4:1將具有CCR5嗜性HIV-1,BMI≤35kg/m2且無明顯肝病(即，ALT/AST級別≤2，總膽紅素≤ULN，無HBV、HCV、活性或慢性肝病或硬化癥)的143名患者隨機分配至CVC或依法韋侖(EFV)。計算APRI和FIB-4評分。在無數(shù)據(jù)缺失的患者中評估從基線(BL)到第24和28周的評分類別變化。評估APRI和FIB-4評分從BL開始的變化與MCP-1(CCR2配體)和sCD14(炎癥生物標記物)水平之間的相關性。結果：在BL時，CVC比EFV更多的患者的APRI≥0.5和FIB-4≥1.45；高于這些閾值的CVC患者的比例在第24和48周時下降(表)。在第24周時，觀察到APRI評分的變化與MCP-1水平之間(p＝0.014)，以及FIB-4評分的變化與sCD14水平之間(p＝0.011)具有顯著相關性，且在第48周時觀察到APRI(p＝0.028)和FIB-4評分的變化(p＝0.007)與sCD14水平之間具有顯著相關性。(表11)。表11[表格]結論：在這個沒有明顯肝病的群體中，CVC治療與APRI和FIB-4評分的提高有關，且APRI和FIB-4評分的變化與第48周的sCD14水平之間觀察到相關性。動物模型中得到證實的CCR2/CCR5拮抗性、抗纖維變性效果以及廣泛臨床安全數(shù)據(jù)都支持CVC在肝纖維變性中的臨床研究。實施例18：賽尼克韋羅在非酒精性脂肪性肝炎STAM模型中的體內(nèi)功效研究開展這項體內(nèi)功效研究以檢查賽尼克韋羅在非酒精性脂肪性肝炎的STAMTM小鼠模型中的效果。材料和方法實驗設計和治療研究組組1-媒介物：十八只NASH小鼠從6周大開始以10mL/kg的體積每天兩次(9:00和19:00)口服施用媒介物。組2-賽尼克韋羅20mg/kg(低劑量cvc)：十八只NASH小鼠從6周大開始以10mg/kg的劑量每天兩次(20mg/kg/天)(9:00和19:00)口服施用補充有賽尼克韋羅的媒介物。組3-賽尼克韋羅100mg/kg(高劑量cvc)：十八只NASH小鼠從6周大開始以50mg/kg的劑量每天兩次(100mg/kg/天)(9:00和19:00)口服施用補充有賽尼克韋羅的媒介物。表12匯總了治療計劃表：表12結果第1部分：評估CVC的抗NASH/纖維變性效果的研究直到第9周的體重變化和一般狀態(tài)(圖16)體重在治療期間逐漸增加。媒介物組與低劑量CVC或高劑量CVC組間的平均體重在治療期間無顯著差異。本研究中沒有動物的一般狀態(tài)在治療期間示出劣化。在第9周處死之日的體重(圖17A和表13)媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的平均體重無顯著差異(媒介物：18.9±3.3g，低劑量cvc：19.5±2.0g，高劑量cvc：18.7±0.9g)。表13：第9周的體重和肝重第9周的肝重和肝重體重比(圖17B&C和表13)媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的平均肝重無顯著差異(媒介物：1270±326mg，低劑量cvc：1334±99mg，高劑量cvc：1307±119mg)。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的平均肝重體重比無顯著差異(媒介物：6.6±0.8％，低劑量cvc：6.9±1.0％，高劑量cvc：7.0±0.8％)。第9周的全血和生物化學圖18A-D和表1中示出全血葡萄糖數(shù)據(jù)。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的血液葡萄糖水平無顯著差異(媒介物：590±108mg/dL，低劑量cvc：585±91mg/dL，高劑量cvc：585±91mg/dL)。4.4.2.血漿ALT(圖18B，表14)。低劑量cvc和高劑量cvc組的血漿ALT水平與媒介物組相比示出顯著降低(媒介物：133±80U/L，低劑量cvc：58±12U/L，高劑量cvc：52±13U/L)。表14：第9周的血液和肝生物化學圖18C和表14中示出了血漿MCP-1數(shù)據(jù)。高劑量cvc組的血漿MCP-1水平與媒介物組相比示出顯著增加。媒介物組與低劑量cvc組間的血漿MCP-1水平無顯著差異(媒介物：60±4pg/mL，低劑量cvc：68±16pg/mL，高劑量cvc：91±14pg/mL)。圖18D、表14示出了血漿MIP-1β數(shù)據(jù)。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的血漿MIP-1β水平無顯著差異(媒介物：18±5pg/mL，低劑量cvc：18±2pg/mL，高劑量cvc：20±4pg/mL)。第9周的肝生物化學圖18D和表14中示出了肝臟甘油三酯含量數(shù)據(jù)。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的肝臟甘油三酯含量無顯著差異(媒介物：40.8±20.4mg/g肝低劑量cvc：48.5±16.1mg/g肝高劑量cvc：51.7±14.1mg/g肝)。圖18E和表14中示出了肝羥脯氨酸含量數(shù)據(jù)。與媒介物組相比，肝羥脯氨酸含量在低劑量cvc和高劑量cvc組中傾向于下降(媒介物：0.75±0.18μg/mg，低劑量cvc：0.63±0.05μg/mg，高劑量cvc：0.62±0.09μg/mg)。第9周的組織學分析圖19和20以及表15中示出了HE染色和NAFLD活性評分數(shù)據(jù)。來自媒介物組的肝切片展現(xiàn)出嚴重的小泡性和大泡性脂肪沉積、肝細胞氣球樣變性和炎癥細胞浸潤。與媒介物組相比，低劑量cvc和高劑量cvc組的炎癥細胞浸潤和肝細胞氣球樣變性示出溫和提高，NAS顯著減少(媒介物：5.3±0.5，低劑量cvc：4.0±0.6，高劑量cvc：3.7±0.8)。圖19中示出HE染色切片的代表性顯微照片。表15：第9周的NAFLD活性評分NAS組分的定義圖21、22、23和表16中示出了天狼星紅染色數(shù)據(jù)。來自媒介物組的肝切片在肝小葉的中心周圍區(qū)域中示出膠原沉積。與媒介物組相比，在低劑量cvc和高劑量cvc組中，中心周圍區(qū)域中的膠原沉積大幅減少。與媒介物組相比，在低劑量cvc和高劑量cvc組中，纖維變性面積(天狼星紅陽性面積)顯著減小(媒介物：1.10±0.31％，低劑量cvc：0.66±0.16％，高劑量cvc：0.64±0.19％)。與媒介物組相比，在低劑量cvc和高劑量cvc組中，修正纖維變性面積也顯著減小(媒介物：0.61±0.23％，低劑量cvc：0.29±0.14％，高劑量cvc：0.20±0.06％)。表16：第9周的組織學分析圖21中示出了肝的天狼星紅染色切片的代表性顯微照片。圖22和23以及表16示出了F4/80免疫組織化學數(shù)據(jù)。來自媒介物組的肝切片的F4/80免疫染色證明肝小葉中累積F4/80+細胞。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的F4/80+細胞的數(shù)量和大小以及炎癥面積(F4/80陽性面積)的百分比沒有顯著差異(媒介物：4.99±1.10％，低劑量cvc：4.77±1.02％，高劑量cvc：4.96±0.60％)。圖22中示出了F4/80-免疫染色切片的代表性顯微照片。圖24、25、26、27、28和表16中示出了F4/80+CD206+和F4/80+CD16/32+免疫組織化學數(shù)據(jù)。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的巨噬細胞中的F4/80+CD206+細胞的百分比沒有顯著差異(媒介物：34.3±4.2％，低劑量cvc：34.7±6.3％，高劑量cvc：33.1±3.0％)。媒介物組與低劑量cvc組間的巨噬細胞中的F4/80+CD16/32+細胞的百分比沒有顯著差異。與媒介物相比，F(xiàn)4/80+CD16/32+細胞的百分比在高劑量cvc組中傾向于升高(媒介物：33.5±3.7％，低劑量cvc：38.7±7.6％，高劑量cvc：41.5±8.2％)。媒介物組與低劑量cvc組間的M1/M2比沒有顯著差異。與媒介物相比，在高劑量cvc組中，M1/M2比傾向于升高(媒介物：99.6±20.2％，低劑量cvc：112.3±17.0％，高劑量cvc：125.1±21.9％)。圖24和26中示出F4/80和CD206、F4/80和CD16/32雙免疫染色切片的代表性顯微照片。圖29、圖30和表16中示出了油紅染色數(shù)據(jù)。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的脂肪沉積以及脂肪沉積面積(油陽性面積)的百分比沒有顯著差異(媒介物：9.66±5.02％，低劑量cvc：6.51±3.88％，高劑量cvc：7.23±3.59％)。圖29中示出了油紅染色切片的代表性顯微照片。圖31、32和表16中示出了TUNEL染色數(shù)據(jù)。與媒介物組相比，低劑量cvc組中的TUNEL陽性細胞的百分比顯著升高。媒介物組與高劑量cvc組間的TUNEL陽性細胞的百分比無顯著差異(媒介物：36.0±3.7％，低劑量cvc：43.3±2.9％，高劑量cvc：39.0±5.3％)。圖31中示出了肝臟中TUNEL陽性細胞的代表性顯微照片。圖33和表17-18中示出了第9周的基因表達分析。表17：第9周的基因表達分析表18：第9周的P值TNFα媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的TNFαmRNA表達水平無顯著差異(媒介物：1.00±0.24，低劑量cvc：1.16±0.39，高劑量cvc：1.09±0.23)。MCP-1媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的MCP-1mRNA無顯著差異(媒介物：1.00±0.31，低劑量cvc：1.05±0.50，高劑量cvc：1.00±0.53)。1型膠原與媒介物組相比，低劑量cvc組中1型膠原mRNA表達水平顯著下調。與媒介物組相比，高劑量cvc組中1型膠原mRNA表達水平傾向于下調。(媒介物：1.00±0.42，低劑量cvc：0.63±0.10，高劑量cvc：0.73±0.04)。TIMP-1媒介物組與低劑量cvc和高劑量cvc組間的TIMP-1mRNA表達水平無顯著差異(媒介物：1.00±0.46，低劑量cvc：0.75±0.32，高劑量cvc：0.80±0.20)。第2部分：評估CVC的抗HCC效果的研究直到第18周的體重變化(圖35)體重在治療期間逐漸增加。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的平均體重在治療期間無顯著差異。圖36中示出了存活分析數(shù)據(jù)。在媒介物組中，十二只小鼠中有四只在第59天(ID112)、第75天(ID113、115)和第84天(ID116)死亡(將施用的第一天指定為第0天)。在低劑量cvc組中，十二只小鼠中有六只在第62天(ID209)、第64天(ID217)、第75天(ID212)、第76天(ID213)、第86天(ID215)和第86天(ID208)死亡。在高劑量cvc組中，十二只小鼠中有五只在第62天(ID317)、第65天(ID312)、第70天(ID316)、第78天(ID314)和第85天(ID309)死亡。在死亡動物中，除NASH的典型肝臟病變以外，沒有異常驗尸發(fā)現(xiàn)。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的存活率無顯著差異。按照發(fā)貨人指示，在安排之前的18周大時處死剩余的動物(原本安排在20周大時處死)。圖37A和表19中示出了第18周數(shù)據(jù)的處死之日的體重。與媒介物組相比，高劑量cvc組中的體重傾向于下降。媒介物組與低劑量cvc組間的平均體重無顯著差異(媒介物：23.0±2.3g，低劑量cvc：22.9±3.5g，高劑量cvc：20.8±2.7g)。表19：第18周的體重和肝重圖37B&C和表19中示出了第18周數(shù)據(jù)的肝重和肝重體重比。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的平均肝重無顯著差異(媒介物：1782±558mg，低劑量cvc：1837±410mg，高劑量cvc：1817±446mg)。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的平均肝重體重比無顯著差異(媒介物：7.7±2.2％，低劑量cvc：8.3±2.8％，高劑量cvc：8.8±2.3％)。第18周的肝臟宏觀分析38A-C中示出了肝臟的宏觀外觀。圖39和表20中示出了肝臟表面上形成的可見腫瘤結節(jié)的數(shù)量。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的每個個別小鼠的肝臟腫瘤結節(jié)的數(shù)量沒有顯著差異(媒介物：2.4±4.1，低劑量cvc：1.5±1.9，高劑量cvc：3.6±2.5)。表20：第18周的肝臟宏觀分析圖40和表20中示出肝臟表面上形成的可見腫瘤結節(jié)的最大直徑。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間的腫瘤最大直徑無顯著差異(媒介物：4.0±4.7mm，低劑量CVC：4.8±5.4mm，高劑量CVC：5.3±5.1mm)。第18周的組織學分析圖41中示出了HE染色數(shù)據(jù)。HE染色揭示媒介物組中的炎癥細胞浸潤、大泡性和小泡性脂肪沉積、肝細胞氣球樣變性、焦距改變和結節(jié)病變。媒介物組中八只小鼠中有六只表現(xiàn)出HCC病變。在低劑量cvc組中，六只小鼠中有五只檢測到HCC病變，且在高劑量cvc組中，七只小鼠中有六只檢測到HCC病變。媒介物組與低劑量cvc或高劑量cvc組間未發(fā)現(xiàn)明顯差異。圖41中示出了HE染色切片的代表性顯微照片。圖42中示出了GS免疫組織化學數(shù)據(jù)。在媒介物組中，八只小鼠中有六只檢測到切片中有GS陽性結節(jié)，在低劑量cvc組中，六只小鼠中有五只檢測到切片中有GS陽性結節(jié)，且在高劑量cvc組中，七只小鼠中有七只檢測到切片中有GS陽性結節(jié)。圖42中示出了GS染色切片的代表性顯微照片。圖43和44以及表21示出了CD31免疫組織化學數(shù)據(jù)。與媒介物組相比，低劑量cvc組中的CD31陽性面積傾向于減小。與媒介物組相比，高劑量cvc組中的CD31陽性面積傾向于增加(媒介物：2.71±1.36％，低劑量cvc：1.47±1.10％，高劑量cvc：3.68±1.37％)。圖43中示出CD31染色切片的代表性顯微照片。表21：第18周的組織學分析表22：第18周的P值總結與討論在第9周的分析中，用低和高劑量CVC治療以劑量依賴性方式顯著減少纖維變性面積，證實CVC在本研究中具有抗纖維變性效果。用低和高劑量CVC治療還降低1型膠原和肝羥脯氨酸含量的mRNA表達水平，這支持了它的抗纖維變性性質。與媒介物組相比，CVC治療組以劑量依賴性方式顯著降低血漿ALT水平和NAS。NAS的改善可歸因于小葉炎癥和肝細胞氣球樣變性的減少。因為肝細胞氣球樣變性來自氧化應激誘導的肝細胞損傷，且與NASH的疾病進展有關[26；27]，這強烈地暗示CVC通過抑制肝細胞損傷和氣球樣變性改善NASH病理學。總之，CVC在本研究中具有潛在的抗NASH和保肝效果。如人類中所示，血漿MCP-1水平在本研究中通過用CVC治療而增加，表明CVC對CCR2具有劑量依賴性拮抗性，而血漿MIP-1β水平不因所述治療而示出任何顯著變化。為了研究CVC的作用機制，我們評估了CVC對巨噬細胞群體的作用。初步結果證實，與媒介物組相比，CVC展示高M1/M2比傾向性，這暗示CVC可能通過調節(jié)發(fā)炎肝臟中的巨噬細胞亞群的平衡來抑制纖維發(fā)生。未來將對此進行進一步研究。在第18周的分析中，CVC治療組中未觀察到對NASH衍生的HCC的作用。總之，CVC在本研究中示出抗NASH、保肝和抗纖維變性效果。實施例19：CVC和代謝物的受體結合性質CVC作為CCR2拮抗劑具有獨特的體外性質，50％抑制濃度(IC50)為5.9nmol/L。CVC以劑量依賴方式抑制RANTES、MIP-1α和MIP-1β結合至表達CCR5的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，IC50分別為3.1、2.3和2.3nmol/L。在人類中，在3.1nM的CD4+離體濃度和2.3nM的CD8+T-細胞離體濃度下，CVC針對CCR5達到≥90％受體占用[4]。CVC抑制MCP-1結合至CCR2b，IC50為5.9nmol/L。CVC在體外在6nM下在單核細胞上實現(xiàn)CCR2的～98％受體占用，并在MCP-1不存在下減少單核細胞上的CCR2表達。CVC只微弱地抑制配體結合至CCR3和CCR4。CVC不抑制配體結合至CCR1或CCR7。CVC阻斷RANTES-誘導的Ca2+轉移。動物研究中檢測到CVC的兩種代謝物(M-I和M-II)(參見例如20)；M-II在猴和狗中是主要代謝物，M-I在所有物種中都是微量代謝物。M-I抑制RANTES結合至CCR5-表達細胞，IC50為6.5nmol/L，這大約是CVC的IC50的2倍。M-II對抑制RANTES無效果。實施例20：鑒定代謝物以3mg/kg大劑量口服施用[14C]-CVC來喂養(yǎng)動物后，未變化的CVC是大鼠和狗的血漿中檢測到的主要組分，CVC對14C的AUC0-24比分別為58.9％和47.4％[44]。在猴中，這個比例只有12.9％，但是檢測到相對大量的代謝物M-II，M-II對14C的AUC0-24比為34.3％。特別在狗和猴中，M-II在口服施用后的量比IV施用后明顯更大。這些結果暗示，CVC可在到達系統(tǒng)循環(huán)之前代謝成M-II。在大鼠、狗和猴的血漿中還檢測到微量代謝物(包括M-I、T-1184803和T-1169518)。據(jù)推測，代謝物M-I是通過氧化CVC的亞磺酰基部分而形成，且M-II是通過后續(xù)還原亞磺酰基部分，并裂解[(1-丙基-1H-咪唑-5-基)甲基]亞磺?；鶊F的C-S鍵，隨后S-甲基化形成。臨床試驗實施例21：HIV-1感染成人受試者的短期功效數(shù)據(jù)方法2a期雙盲、隨機、安慰劑對照、劑量遞增研究評估在感染CCR5嗜性HIV-1的受試者中用CVC單藥治療10天的抗病毒活性、PK、安全性和耐受性。要求參與者經(jīng)歷過抗逆轉錄病毒治療，初次使用CCR5拮抗劑，HIV-1RNA水平為至少5000拷貝/mL，且CD4+細胞計數(shù)為至少250個細胞/mm3。隨后將10名受試者群組以4:1受試者比納入每個定群，以接收CVC(25、50、75、100或150mg)或相匹配的安慰劑。所有受試者接收每天一次劑量的CVC或安慰劑10天，并追蹤到第40天。人口統(tǒng)計和其它基線特征將總共54名受試者納入本研究。人口統(tǒng)計在劑量組間大體上類似。每個劑量組中的大多數(shù)受試者是男性(66.7％至100％)，且中位數(shù)年齡介于33.5歲(安慰劑組)至45.0歲(150-mg組)的范圍內(nèi)。大所屬受試者是白種人或非裔美國人。中位數(shù)BMI介于22.9kg/m2(100-mg組至27.4kg/m2(25-mg組)的范圍內(nèi)。中位數(shù)HIV-1RNA值介于4.00log10拷貝/mL(150-mg組)至4.60log10拷貝/mL(75-mg組)的范圍內(nèi)。中位數(shù)CD4+細胞計數(shù)在150-mg組(508.0個細胞/mmm3)中最高，且在剩余的組中介于402.0至460.0個細胞/mm3的范圍內(nèi)。功效和安全性結果CVC對HIV-1RNA水平示出強效效果，這種效果在完成治療后持續(xù)。在初次使用CCR5-拮抗劑、經(jīng)歷過治療的HIV-1感染受試者中，25-、50-、75-和150-mg劑量的與基線相比的中位數(shù)最低點變化分別為-0.7、-1.6、-1.8和-1.7log10拷貝/mL。這些結果證實CVC具有強效拮抗CCR5活性。圖45中示出HIV-1RNA水平的平均變化。開展MCP-1(CCR2的配體，它是一種在促炎性單核細胞上表達的趨化因子共受體，也稱作CCL2)、hs-CRP和IL-6的變化的探索性評估，且觀察到MCP-1的顯著劑量依賴性增加(表23)。在第10天，與安慰劑組中的略微下降相比，在25-、50-、75-和150-mg劑量組中，最小二乘均數(shù)MCP-1水平比基線分別高56.3、94.2、34.4和334.3pg/mL。在50-和150-mg劑量下，這些結果具有統(tǒng)計顯著性(分別地，p＝0.024和p<0.001)。這些結果證實CVC具有強效拮抗CCR2活性。CVC在這個10天研究中對hs-CRP或IL-6水平總體上無效果。表23縮寫：LS，最小二乘aP值是單側的，且基于每個劑量的CVC與安慰劑的比較，無需多重比較調整。不良事件賽尼克韋羅在所研究的劑量下大體上耐受良好，且沒有識別出安全問題。沒有死亡、SAE、或其它重大AE，且未因為AE而中斷。大多數(shù)治療突發(fā)AE的嚴重性是輕度或中度。與其它劑量組中的受試者相比，接收150mgCVC(即，研究的最高劑量)具有更多AE，但所有劑量組的AE嚴重性是相當?shù)摹Ｔ谶@個研究中，最常見(≥10％)治療緊急AE為惡心(18.5％)、腹瀉(16.7％)、頭疼(14.8％)和疲勞(11.0％)。實驗安全性在觀測期間，在25mg(2名受試者)、50mg(2名受試者)、100mg(1名受試者)和150mg(1名受試者)劑量組中有6名受試者ALT和/或AST升高，且安慰組中有一名受試者AST升高。所有升高都是1級，孤立的，在2名具有超過一個升高的受試者(都是在50-mg劑量組)除外，且都在沒有后遺癥的情況下消解。具有超過一個升高的2名受試者在50mg劑量組，且這些受試者中的一名在基線時具有1級升高AST。在治療期間，在100mg和150mg劑量組中的受試者中觀察到AST升高(在每個劑量組的1名受試者中觀察到)，其在繼續(xù)治療期間恢復到正常值。研究期間沒有出現(xiàn)ALT或AST的2-4級升高。僅有的3級別或更高級實驗異常是25mg劑量組中的在給藥前存在的3級低磷血癥，50mg劑量組中在基線時具有3級甘油三酯的受試者中的4級升高甘油三酯，和在先前具有胰腺炎病史的受試者中的3級淀粉酶和4級脂肪酶。心血管安全性和身體檢查在150-mg劑量組中在基線時具有收縮壓2級升高的受試者中觀察到3級收縮性高血壓。沒有臨床相關身體檢查或ECG發(fā)現(xiàn)。如先前所述，CVC具有作為CCR5和CCR2拮抗劑的雙重活性。開展MCP-1(CCR2的配體，也稱作CCL2)、hs-CRP和IL-6的變化的探索性評估，且觀察到MCP-1的顯著劑量依賴性增加(參見表24)。在第10天，與安慰劑組中的略微下降相比，在25、50、75和150mg劑量組中，最小二乘均數(shù)MCP-1水平比基線分別高56.3、94.2、34.4和334.3pg/mL。在50和150mg劑量下，這些結果具有統(tǒng)計顯著性(分別地，p＝0.024和p<0.001)。這些結果證實CVC具有強效拮抗CCR2活性。CVC在這個10天研究中對hs-CRP或IL-6水平總體上無效果。表24：依據(jù)定群匯總的MCP-1水平–研究201耐性數(shù)據(jù)在研究201中，在基線、第7天和第40天(或在“提前終止”訪視時，如果適用)開展藥物耐性測試。所有具有可評估樣品的受試者仍然完全對CVC敏感。病毒嗜性測試研究201中的所有受試者的病毒嗜性，以排除他們的病毒是CXCR4嗜性或雙重/混合的。所有受試者在篩選時具有CCR5嗜性病毒(基于增強敏感性概況分析)。總共39名在接受CVC的受試者在治療后具有可評估樣品，且發(fā)現(xiàn)這些受試者中有一名(在CVC150mg劑量組)在第10天具有雙重/混合嗜性病毒。進一步測試(在另一個使用不同分析的實驗室)揭示，這個受試者在基線時主要具有CXCR4嗜性病毒，因此，根據(jù)入選標準，這個受試者不應納入研究中。這名受試者對CVC治療無響應；這名受試者的HIV-1RNA的最大下降為0.13log10拷貝/mL，低于基線值。藥代動力學/藥效動力學關系對于研究201中測試的所有劑量，對于“制劑F1”，在暴露時不止觀察到劑量比例增加，將所述制劑用于所有定群，100mg劑量定群除外。利用以下最大效果(Emax)模型表征藥物反應：其中E為效果，E0為基線效果(固定為0)，Imax為最大抑制，C表示PK變量(AUC0-24、Cmax或穩(wěn)態(tài)濃度[Css])，IC50為對應50％最大抑制的PK變量的值，且γ為描述S形度的形狀參數(shù)。CVC在PK/PD模型中的Emax為-1.43log10拷貝/mL?；贓max模型，25、50、75和150mg劑量的CVC的平均Css預期造成藥物的54.9％、79.8％、85.9％和95.9％最大抑制效應。因此，75和150mgQD的劑量水平展示強效抗病毒活性，PD效果在HIV-1感染受試者中大于CVC的Emax的80％。實施例22：HIV-1感染成人受試者的長期功效數(shù)據(jù)研究202的功效結果研究設計和目標這是一項隨機、雙盲、雙模擬、48周比較研究，評估了CVC100mg和CVC200mg與獲批抗逆轉錄病毒藥劑依法韋侖(EFV，)的功效和安全性，它們?nèi)颗c獲批的抗逆轉錄病毒藥劑恩曲他濱/富馬酸替諾福韋二吡呋酯(FTC/TDF)在只有CCR5嗜性病毒的HIV-1感染的抗逆轉錄病毒治療初治成人受試者中結合施用。將具有HIV-2、乙型和/或丙型肝炎、肝臟硬化癥或任何已知活性或慢性活性肝病病史的受試者從研究中排除。計劃以2:2:1比將約150名受試者隨機分配(143名受試者實際上隨機分配)給CVC100mg+安慰劑、CVC200mg+安慰劑或獲批的抗病毒藥劑依法韋侖(EFV)+安慰劑，全部與獲批的抗病毒藥劑恩曲他濱/富馬酸替諾福韋二吡呋酯(FTC/TDF)組合以固定劑量組合制劑提供為開放標簽研究藥物。在最初的25名研究受試者中開展藥代動力學評估，以確認在所選的CVC100mg和CVC200mg的劑量下充分CVC血漿暴露，然后納入剩余的研究群體。人口統(tǒng)計和基線特征大多數(shù)收受試者為男性(94％)和白人(62％)，平均年齡35歲，且平均體質指數(shù)為26.2kg/m2?？偣?2％的受試者是美國黑人/非裔美國人。此外，24％的隨機分配受試者是西班牙裔。在基線時，HIV-1感染的中位數(shù)持續(xù)時間(即第一次陽性HIV-1測試到知情同意日期的時間[月])是8個月，平均HIV-1RNA為4.50log10拷貝/mL。(80％的受試者的病毒載量<100,000拷貝/mL)，且平均CD4+細胞計數(shù)為402個細胞/mm3(58％的受試者的CD4+細胞計數(shù)≥350個細胞/mm3)。初步功效結果主要功效終點為第24周的病毒學應答，利用FDA快照算法定義為HIV-1RNA<50拷貝/mL。具有病毒學成功(應答)的受試者的百分比在三個治療組中相當(CVC100mg76％，CVC200mg73％，且EFV71％)。與CVC100mg組(17/59受試者，29％)和CVC200mg組(15/56受試者，27％)相比，EFV組中更多受試者提前終止研究(11/28受試者，39％)。第48周的數(shù)據(jù)與第24周觀察到的數(shù)據(jù)一致。隨時間推移具有病毒學成功的受試者的百分比在3個治療組中大體上相當，但與EFV組相比，第48周時CVC組更高(CVC100mg68％，CVC200mg64％且EFV50％)。次要和探索性分析炎癥的生物標記物作為探索性分析，測量炎癥生物標記物MCP-1、sCD14、高敏C-反應蛋白[hs-CRP]、白介素n-6[IL-6]、D-二聚體和纖維蛋白原)的水平。表25中匯總了MCP-1、sCD14、hs-CRP、IL-6、D-二聚體和纖維蛋白原的基線值和在第24周和第48周與基線相比的變化。表25N＝受試者的數(shù)量備注：基線被定義為在研究治療開始前的最后一次不可缺失的評估。*使用LSMeans基于具有治療、基線和基線下HIV-1RNA的因素的ANCOVA模型與EFV組進行的成對比較顯示<0.001的p值。#治療組之間的差異(如利用控制基線HIV-1RNA的vanElteren檢驗所評估)具有統(tǒng)計顯著性(p值：0.048)。使用CVC觀察到MCP-1(CCR2的配體)隨時間增加的劑量-反應，而MCP-1在EFV組中保持基線值(參見圖46)。EFV和CVC100mg與CVC200mg治療組之間的血漿MCP-1與基線相比的變化的差異在第24周和第48周具有統(tǒng)計顯著性(p<0.001)(參見表25)。此外，在兩個CVC治療組中，觀察到sCD14在48周治療期間的下降(重復sCD14分析的線性混合模型分析，參見下文)，而在EFV組中，觀察到sCD14在相同的觀察期內(nèi)增加(參見圖47)?？扇苄訡D14是單核細胞活化的生物標記物，且獨立地與大型長期定群研究中HIV感染患者的發(fā)病率和死亡率以及具有慢性病毒性肝炎的患者和具有嚴重肝纖維變性的患者中的較差臨床結果相聯(lián)系。sCD14樣品起初在2個獨立批次中進行分析：批次1包括第24周初步分析前的樣品，且批次2包括第32周和第48周(研究結束)樣品。表25中提供來自2-批次分析的sCD14與基線相比的變化的結果。開展全部在一個批次中分析的存檔樣品的重復分析，以獲得不同時間點的分析一致性。為控制協(xié)變量的效果，對sCD14于基線相比的變化開展線性混合模型重復測量(分析日期為2013年9月)。除CVC200mg組中從基線到第32周的變化以外，與使用EFV觀察到的增加相比，兩種劑量(100和200mg)下在48周治療期間使用CVC觀察到的sCD14水平(LS均數(shù))具有統(tǒng)計顯著性(p<0.05)(參見表26和圖47)。表26在CVC和EFV治療組中，其它炎癥生物標記物(hs-CRP、IL-6、D-二聚體)的變化類似。APRI和FIB-4評分此外，在來自這個納入根據(jù)嚴格合格標準(HIV-1感染且ALT/AST級別不≥2，總膽紅素>ULN、HBV和/或HCV、活性或慢性肝病、硬化癥或BMI>35kg/m2)無明顯肝病的受試者的研究的數(shù)據(jù)的post-hoc分析中，在≥10％的所有CVC治療受試者中經(jīng)時觀察到AST-血小板比率指數(shù)(APRI)和綜合了標準生化值、血小板、ALT、AST和年齡(FIB-4)的無創(chuàng)性肝纖維變性指數(shù)評分的提高(合并CVC100mg和200mg的數(shù)據(jù))(圖48)。在EFV組中，5％的受試者在第24周且6％的受試者在第48周的APRI評分與基線相比下降一個類別；沒有用EFV治療的受試者的FIB-4評分下降一個類別，其中所有受試者在基線時評分<1.45。如上所述，在這個研究中，CVC還對sCD14(單核細胞活化的重要標記物)具有顯著影響。在上述相同post-hoc分析中，CVC治療受試者在第24周的FIB-4評分與sCD14水平的變化間以及第48周的FIB-4評分與sCD14水平的變化間具有統(tǒng)計上顯著的相關性。圖49和圖50中示出第48周的結果。安全性結果暴露程度在CVC組中，攝入研究藥物(CVC或EFV)的平均持續(xù)時間比EFV治療組長(CVC100mg和200mg分別為41.2和40.9周，相對地，EFV為36.2周)，在EFV組中，這受到較高中斷率的影響。所有不良事件匯總總計，CVC100mg組、CVC200mg組和EFV組中分別有51名受試者(88％)、48名受試者(84％)和27名受試者(96％)具有至少1個AE。最常報道的AE(首選術語，3個治療組中任一個中≥10％受試者)是惡心、上呼吸道感染、腹瀉、頭疼、皮疹事件、疲勞、頭暈、鼻咽炎、異常夢境、失眠、淋巴結病、抑郁和梅毒(表27)。在這些最常報道的AE中，在CVC組中，頭疼、疲勞和上呼吸道感染比EFV組報道更頻繁；且在EFV組中，頭暈、異常夢境、失眠、淋巴結病、抑郁和梅毒比CVC組報道更頻繁。表27N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。備注：使用MedDRA版本13.1將不良事件編碼。只報告發(fā)作日期在研究藥物的第一次給藥日期至研究藥物停用后30天內(nèi)之間的不良事件。對于經(jīng)歷相同編碼事件超過一次的受試者，只呈現(xiàn)具有最高嚴重度的事件。a注意暴露是基于ITT群體。b包括皮疹、斑狀丘疹、瘙癢性皮疹、全身性皮疹和流行性皮疹。大多數(shù)AE是輕度或中度(1級或2級)。3級或4級AE匯總于表29中。經(jīng)歷≥3級AE的受試者的百分比在CVC組中(總計4％)比在EFV組中(15％)低。EFV組中的一個受試者(受試者06007)具有自殺意念的4級AE，這被認為是嚴重的。在經(jīng)CVC治療的受試者中沒有4級AE的報告。沒有在超過1個受試者中報道≥3級的AE(首選術語)。表28提供了死亡、SAE、AE、不同嚴重程度的AE、與研究藥物相關的AE和導致停藥的AE的概述。表28N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。備注：使用MedDRA版本13.1將不良事件編碼。只報告發(fā)作日期在研究藥物的第一次給藥日期至研究藥物停用后30天內(nèi)之間的不良事件。對于經(jīng)歷相同編碼事件超過一次的受試者，只呈現(xiàn)具有最高嚴重度的事件。a注意暴露是基于ITT群體。b根據(jù)研究人員所知被認為與研究藥物(即，CVC、EFV或FTC/TDF)至少部分相關的AE。表29N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。備注：使用MedDRA版本13.1將不良事件編碼。只報告發(fā)作日期在研究藥物的第一次給藥日期至研究藥物停用后30天內(nèi)之間的不良事件。對于經(jīng)歷相同編碼事件超過一次的受試者，只呈現(xiàn)具有最高嚴重度的事件。a注意暴露是基于ITT群體。bCVC100mg組中的受試者10004和54001cCVC200mg組中的受試者06009、42001和45005dEFV組中的受試者06005、06007、46003和48001e備注：這項(EFV組中的自殺意念)是4級事件；所有其它事件為3級。嚴重的不良事件匯總于表30中。表30-直到第48周具有嚴重不良事件的受試者的數(shù)量(％)-安全性群體N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。備注：使用MedDRA版本13.3將不良事件編碼。只報告發(fā)作日期在研究藥物的第一次給藥日期至研究藥物停用后30天內(nèi)之間的不良事件。對于經(jīng)歷相同編碼事件超過一次的受試者，只呈現(xiàn)具有最高嚴重度的事件。a注意暴露是基于ITT群體。導致停藥的不良事件導致研究藥物停用的AE匯總于表31中?？偟膩碚f，導致研究藥物停用的AE發(fā)生在CVC200mg組的1個受試者中(2％)，以及EFV組的6個受試者中(21％)。在超過1個受試者中報告的導致研究藥物停用的AE(首選術語)是失眠和眩暈，在EFV組中分別報告于3和2個受試者中；以及抑郁，在CVC200mg組中報告于1個受試者中并且在EFV組中報告于1個受試者中(失眠、眩暈和抑郁都是EFV的常見AE)。表31-直到第48周具有導致研究藥物停用的不良事件的受試者的數(shù)量(％)-安全性群體N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。備注：使用MedDRA版本13.1將不良事件編碼。只報告發(fā)作日期在研究藥物的第一次給藥日期至研究藥物停用后30天內(nèi)之間的不良事件。對于經(jīng)歷相同編碼事件超過一次的受試者，只呈現(xiàn)具有最高嚴重度的事件。a注意暴露是基于ITT群體。bCVC200mg組中的受試者06001。cEFV組中的受試者02016、16031、20004、26001、46003和48001。具有分級的治療突發(fā)實驗室異常的受試者數(shù)目的概述提供于表32中。表32N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。a百分比是基于具有給定實驗室評估的受試者的數(shù)量。3或4級(最壞毒性等級)治療突發(fā)實驗室異常匯總于表33中。除了在CVC200mg組中觀察到更頻繁的CPK異常以外，具有3級或4級實驗室異常的受試者的百分比在治療組之間無差異。表33-直到第48周的治療突發(fā)的3級或4級(最壞等級；DAIDS)實驗室參數(shù)-安全性群體N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。a百分比是基于具有給定實驗室評估的受試者的數(shù)量。在CVC200mg組中觀察到的肌酸磷酸激酶(CPK)的3級或4級增加比在其它兩個治療組中更頻繁。在CVC組中的具有3或4級CPK增加的12個受試者(CVC100mg有3個受試者且CVC200mg有9個受試者)中，11個受試者具有在單一時間點下觀察到的CPK升高(8個受試者具有3級升高且3個受試者具有4級升高)(注意：這11個受試者中的1個[受試者48015]在第8周和第36周具有單獨的3級CPK升高)。第12個受試者(受試者42001)具有2個連續(xù)的CPK升高(3級之后4級)，它們在后續(xù)訪問下進行持續(xù)治療的同時恢復到正常值。CPK升高均不與臨床癥狀相關；沒有受試者因CPK升高而停藥，并且在CVC和EFV組之間沒有與肌肉骨骼病癥相關的AE的差異。CPK的基線變化示于圖51中。在任何治療組中均沒有觀察到CPK的隨時間變化的實際值或基線變化的明顯趨勢。具有選定的目標肝臟參數(shù)的分級治療突發(fā)實驗室異常的受試者的數(shù)量示于表34中。沒有觀察到4級ALT或AST升高。除了一個3級AST升高，所有的ALT和AST升高均為1級或2級。在1個受試者(CVC100mg組中的48015)中的3級AST升高是在單一時間點下被觀察到并且是無癥狀的；該受試者沒有因3級AST升高而停用研究藥物并且沒有報告與AST升高相關的AE。此外，這個具有3級AST升高的受試者沒有任何分級膽紅素升高，而是在與3級AST升高相同的研究訪問下具有單個3級CPK增加。所有膽紅素異常均為1級或2級。大多數(shù)ALT、AST和膽紅素升高是短暫的，在后續(xù)訪問時進行持續(xù)治療后恢復至基線值，與任何臨床癥狀不相關，并且沒有造成停藥。表34-直到第48周的治療突發(fā)最壞等級(DAIDS)選定肝臟參數(shù)實驗室異常-安全性群體N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。a百分比是基于具有給定實驗室評估的受試者的數(shù)量。在第24和48周進行探索性分析，以評價具有治療突發(fā)實驗室不良事件的受試者中的CVC暴露。特別受關注的是CPK升高(鑒于CPK異常在CVC200mg組中的發(fā)生率增加)，以及受關注的肝臟參數(shù)(AST、ALT和膽紅素)。兩個暴露參數(shù)(Cavg和Cmin)被認為可合理地探索與實驗室異常的可能的關系；然而Cavg被認為是最相關的，因為它反映總體CVC暴露。盡管由于研究治療組之間的差異而存在關于CPK升高的劑量-反應關系的可能信號，但這些廣泛的探索性分析都未能發(fā)現(xiàn)任何暴露-反應關系。評估Ln暴露的Logistic回歸分析輸出與CPK嚴重度等級>2的概率的關系曲線沒有確定CVC暴露和CPK升高之間存在關聯(lián)。沒有CPK升高的頻率或嚴重度相對于CVC暴露漸增的趨勢。對ALT、AST和膽紅素升高進行類似分析，并且這些分析也沒有揭示CVC暴露和肝臟相關的實驗室異常間的任何明顯的關系(圖52-圖55)。代謝參數(shù)具有空腹訪問下的分級治療突發(fā)空腹實驗室異常的受試者的數(shù)量示于表35中?？偰懝檀肌DL膽固醇、甘油三酯或葡萄糖的所有異常均為1級或2級。在CVC組中具有總膽固醇和LDL膽固醇異常的受試者的百分比比在EFV組中低，這與在CVC治療期間膽固醇隨時間的減少相一致(圖56)。表35-直到第48周的空腹訪問下的治療突發(fā)的最壞等級(DAIDS)空腹實驗室異常。N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。備注：(LDL)膽固醇的4級異常和甘油三酯的1級異常無法利用DAIDS分級量表獲得。a百分比是基于具有給定實驗室評估的受試者的數(shù)量。HbA1c、HOMA-IR、空腹LDL、空腹HDL、空腹總膽固醇、空腹總膽固醇/HDL比和空腹甘油三酯的平均基線值和基線變化示于表36中。代謝參數(shù)的平均基線變化示于圖56中。在CVC治療(包括CVC100mg和200mg兩者)期間觀察到總膽固醇的減少，這主要是由于LDL膽固醇的減少(見表36)。與此相反，在EFV治療期間觀察到LDL膽固醇以及HDL膽固醇的增加。在所有的治療組中觀察到空腹總膽固醇/HDL比的小幅和相當?shù)南陆?。沒有觀察到葡萄糖、胰島素、HOMA-IR、HbA1c和甘油三酸酯隨時間推移的顯著變化(見表36)。表36-直到第48周的空腹代謝實驗室參數(shù)的平均基線變化-安全性群體HbAlc＝血紅蛋白類型Alc；HDL＝高密度脂蛋白；HOMA-IR＝穩(wěn)態(tài)模型評估–胰島素抗性；LDL＝低密度脂蛋白；N＝受試者數(shù)量。備注：基線被定義為在研究治療開始前的最后一次不可缺失的評估。在任何治療組中，沒有在第24周和第48周觀察到腰臀比從基線的顯著變化。心血管安全性治療期間最壞的治療突發(fā)ECG異常匯總于表37中。CVC組中具有>30–60msec的QTc增加的受試者的比例相比于EFV組是較低的。在CVC100mg組中只有1個受試者具有>60msec的QTc增加。沒有受試者具有延長的或病理上延長的QTc。在任何治療組中的治療期過程中，沒有觀察到ECG參數(shù)的臨床相關的變化。表37-直到第48周的治療期內(nèi)的最壞的治療突發(fā)ECG異常N＝受試者數(shù)量；n＝觀察的數(shù)量。備注：百分比是基于具有給定ECG參數(shù)的受試者的數(shù)量。aQTcF：正常<450ms≤邊界<480ms<延長≤500ms<病理bQTcB：正常<450ms≤邊界<480ms<延長≤500ms<病理c異常QRS：異常低≤50ms<正常<120ms≤異常高d該受試者(受試者06004)在24周具有120ms的QRS值并且具有125ms的篩選值和<120ms的基線值(即111ms；參見列表16.2.8.7)。e異常PR：正常<210ms≤異常高。f異常HR：異常低≤50bpm<正常<120bpm<異常高。生命體征在任何治療組中均未觀察到關于任何生命體征參數(shù)(收縮壓和舒張壓、心率)的臨床相關的平均變化。來自2期試驗的關于MCP-1的數(shù)據(jù)觀察結果。MCP-1蛋白和基因表達被證明在具有不同程度的肝損傷和纖維化的慢性肝病患者的肝組織中被上調。如前所示，在非臨床和臨床研究中的CVC治療后觀察到血漿MCP-1水平的代償性增加，這表明有效的CCR2阻斷。雖然繼發(fā)于CVC的CCR2拮抗作用的MCP-1水平的持久代償性增加在人類中的影響目前尚不清楚，但現(xiàn)有數(shù)據(jù)基于48周的安全性數(shù)據(jù)未表明肝膽障礙的風險增加或肝臟參數(shù)的異常。沒有在臨床病理學參數(shù)或任何組織包括肝中通過在1000mg/kg/天的高劑量下的顯微評價看見炎癥的任何指示，其中在慢性(3和9個月)猴毒性研究中的血漿MCP-1水平是對照的～5倍。事實上，在NASH的小鼠模型中觀察到的100mg/kg/天劑量的CVC的抗纖維化作用與顯著增加的血漿MCP-1水平一起被看見。另外，在經(jīng)CVC治療的受試者中觀察到APRI和FIB-4纖維化指數(shù)評分的改善長達48周，盡管MCP-1顯著和持續(xù)地升高。另外，在此研究中，CVC在經(jīng)受CVC100mg和200mg治療的115個受試者中普遍耐受良好長達48周。第1年和第2年的NAS和肝纖維化階段(NASHCRN系統(tǒng)和Ishak)的變化將通過組織學進行評估。肝活檢物上的膠原的形態(tài)定量評估的變化也將進行評估。將評價療效終點和MCP-1血漿水平之間的相關性，以確定伴隨CVC治療所觀察到的持久MCP-1增加是否在具有由NASH所引起的肝纖維化的受試者中造成潛在危險。實施例23：炎癥和免疫功能的生物標記物使用CVC觀察到MCP-1(在單核細胞上發(fā)現(xiàn)的趨化因子受體CCR2的配體)隨時間增加的劑量反應，而MCP-1在EFV組中保持基線值。EFV與CVC100mg和CVC200mg治療組之間的血漿MCP-1的基線變化的差異在第24周和第48周是統(tǒng)計顯著的(p<0.001)，這表明CVC的有效和劑量依賴性CCR2阻斷。此外，在兩個CVC治療組中均觀察到sCD14(單核細胞活化的生物標記物和HIV感染的死亡率的獨立預測因子)在最初24周內(nèi)的下降，而在EFV組中，在相同的觀察期內(nèi)觀察到sCD14的增加。在第24周和第48周之間，sCD14水平在經(jīng)CVC治療的受試者中恢復到基線值，而它們在經(jīng)EFV治療的受試者中繼續(xù)上升。CVC組和EFV組之間的基線變化的差異在第24周和第48周以及在重復分析中的第48周是統(tǒng)計顯著的(p<0.001)。這些結果表明CVC對降低單核細胞活化的潛在作用。在治療組之間沒有觀察到其它炎癥生物標記物(hs-CRP、纖維蛋白原、IL-6和D-二聚體)和免疫功能生物標記物(CD4+T細胞或CD8+T細胞上的總CD38+表達和總HLADR+表達)的基線變化的有意義的差異。實施例24：與細菌易位有關的生物標記物的測量在經(jīng)CVC治療的受試者中的sCD14水平的降低也可以等同于細菌易位的減少，細菌易位是在HIV感染患者[15]以及具有NASH[16-18]、酒精性肝病[17,19]、HIV/HCV共感染[20]和肝硬化[21]的患者中普遍觀察到的現(xiàn)象。細菌易位是由于腸上皮細胞緊密連接(TJs)的破壞而產(chǎn)生，其損害腸粘膜屏障，該現(xiàn)象通常被稱為腸漏。腸完整性的降低已與免疫缺陷和/或腸道菌群的顯著變化(也被稱為生態(tài)失調和細菌過度生長)相關聯(lián)。微生物產(chǎn)物如脂多糖(LPS)和16S核糖體DNA(16SrDNA)的后續(xù)易位有助于免疫激活。LPS(革蘭氏陰性細菌的細胞壁的組分)結合膜或可溶性CD14(sCD14；在LPS激活單核細胞后產(chǎn)生)和髓樣分化蛋白-2(MD-2)-TLR4復合物[14]。脂多糖在單核細胞和巨噬細胞中是炎性細胞因子特別是TNF-α的最有效的誘導物。高血漿sCD14水平預測HBV和HCV感染的疾病進展，而不依賴于肝臟炎癥、纖維化和疾病進展的其它標記物[20]。暴露于腸源性細菌產(chǎn)物(最顯著的是內(nèi)毒素，包括LPS)導致肝臟炎癥、肝細胞損傷和肝纖維化[22]。經(jīng)由TLR4依賴性機制的枯否細胞活化和肝星狀細胞的后續(xù)活化都是纖維發(fā)生的有效驅動因子[19]。該假設將通過測試來自研究652-2-202、即將進行的肝損害研究652-1-121和肝纖維化PoC研究652-2-203的歸檔樣品中的細菌易位的生物標記物進行評價。這些生物標記物將包括LPS、LPS結合蛋白(LBP)、sCD14、腸脂肪酸結合蛋白(I-FABP)。實施例25-基于CVC臨床第1階段數(shù)據(jù)和第2階段的總結感染HIV的受試者中的數(shù)據(jù)。CVC已經(jīng)在健康志愿受試者(n＝390)的14個單劑量和多劑量生物利用度研究和DDI研究中以及感染HIV的受試者(n＝159)(包括用CVC治療長達48周的115個受試者)的兩個2期研究中進行評價。在僅提供CVC的1期研究中觀察到的最常見的不良事件與在1期研究單元中通常報道的情況是一致的。總體而言，不良事件的模式表明CVC在評價高達800mg的單劑量CVC的這些1期研究中以及在持續(xù)10天的多個高達200mg的日劑量下普遍耐受良好。在這些研究中觀察到的轉氨酶升高的頻率和幅度與科學文獻中針對1期研究所描述的模式是一致的。已經(jīng)在2a期的10天CVC單藥治療研究中以25mg至150mg的劑量(n＝44)以及在2b期的48周療效和安全性研究中以CVC100mg和CVC200mg的劑量(n＝115)評價CVC。在兩項研究中和所有劑量下，CVC均呈現(xiàn)有利的不良事件概況?；趤碜?b期研究的48周數(shù)據(jù)，CVC與肝膽病癥或轉氨酶升高的風險增加不相關。在此研究中，在經(jīng)CVC治療的受試者中觀察到總膽固醇和LDL膽固醇的降低。在48周的治療期內(nèi)，沒有觀察到臨床相關的ECG參數(shù)的變化或任何生命體征參數(shù)的變化。沒有觀察到關于不良事件、實驗室異常(包括CPK、ALT、AST和膽紅素升高)或劑量限制性毒性的明顯的劑量或暴露關系?；趤碜?期程序的數(shù)據(jù)和來自HIV感染受試者的研究的2期數(shù)據(jù)，我們計劃在研究652-2-203中，在患有由NASH所致的肝纖維化的受試者的治療中評價每天服用一次的CVC150mg持續(xù)2年時間(主要研究終點在第1年)。這項研究的交叉設計將評價連續(xù)2年的CVC治療以及在1年安慰劑治療后進行1年CVC治療的安全性和療效。CVC治療對由NASH所引起的肝纖維化的影響的標準評估將基于來自肝活檢的數(shù)據(jù)和組織學改善的其它量度來進行。安全性和耐受性將被評估，并且將對肝或其它器官毒性的跡象進行仔細監(jiān)測，包括由獨立的數(shù)據(jù)監(jiān)測委員會進行的定期數(shù)據(jù)審查。預期該研究將闡明CVC的抗炎和抗纖維化活性及其對由NASH所引起的肝纖維化的影響，并且針對CVC150mg的安全性和耐受性評估提供額外的數(shù)據(jù)。實施例26-評價NASH中的肝組織學改善的CVC研究基于指示CVC具有抗炎和抗纖維化活性并且普遍耐受良好的非臨床和臨床數(shù)據(jù)，Tobira計劃在2期研究中在患有由NASH所引起的肝纖維化的受試者中探究CVC。該2期研究將評價CVC治療患有肝纖維化的成年受試者中的NASH的功效，這些成年受試者由于至少一種影響因素的存在而處在疾病進展的風險下，所述影響因素包括2型糖尿病(T2DM)、具有由美國國家膽固醇教育計劃(NCEP)所定義的代謝綜合征(MS)的至少1個標準的高體質指數(shù)(BMI)(>25kg/m2)、橋連纖維化和/或明確型NASH(NAS≥5)。該2期研究旨在評價CVC治療這種嚴重病狀的潛力并解決患有由NASH所引起的肝纖維化的患者的未滿足的重大醫(yī)療需求。該研究是隨機、雙盲、安慰劑對照研究，其旨在評價CVC150mg在患有由NASH所引起的肝纖維化的受試者中相比于安慰劑的療效和安全性。研究群體由患有由NASH(NAS≥4)所引起的肝纖維化(NASH臨床研究網(wǎng)絡[CRN]階段1-3)并且有疾病進展的風險的受試者組成。將在研究652-2-203中基于以下考慮評價CVC150mg(DP7制劑)的劑量對肝纖維化受試者中的NASH的治療作用：預期CVC將提供抗炎和抗纖維化活性，這主要是由于其對CCR2和CCR5共受體的拮抗作用以及對促炎性單核細胞募集、遷移和浸潤到肝損傷部位所產(chǎn)生的影響。因此，對于選擇用于本研究的劑量的主要考慮因素是確保CVC血漿暴露足以提供CCR2和CCR5的接近最大的拮抗作用。CVC對CCR2和CCR5的拮抗作用已在體外和離體研究中以及CVC治療HIV-1感染的2個臨床研究(2a期研究652-2-201和2b期研究652-2-202)中進行評價。在每種情況下，觀察到CCR2和CCR5的有效的和濃度依賴性的拮抗作用。通過在這2個2期研究中分別測定血漿MCP-1(CCR2的配體)濃度的基線變化和血漿HIV-RNA(HIV進入所需的CCR5共受體)的變化確立了CCR2和CCR5拮抗作用的臨床證據(jù)。在研究652-2-202中，CVC100mg和CVC200mg(DP6制劑)的劑量在115個HIV-1感染受試者中被評價長達48周(CVC攝入的平均[SE]持續(xù)時間：41.1[1.33]周)，并且被發(fā)現(xiàn)在HIV感染的治療中是有效的和耐受良好的?；诒砻鳚u增的CVC血漿濃度與改善的病毒學結果具有相關性的暴露-反應分析，CVC200mg被認為是用于在3期研究中進一步評價CVC作為治療HIV感染的抗病毒劑的適當劑量。然而，當在相同的給藥條件下施用CVC時(研究652-1-111、652-1-110、652-2-202)，在非HIV感染的健康志愿受試者中的CVC血漿暴露似乎比在HIV感染受試者中高。在研究6522203中將評價CVC150mg的劑量對肝纖維化受試者中的NASH的治療。基于引用的現(xiàn)有數(shù)據(jù)，該劑量被認為是在治療上相關的范圍內(nèi)并且預期將在患有NASH和肝纖維化的受試者中提供與CVC200mg相當?shù)谋┞叮珻VC200mg在研究652-2-202中進行評價并且被發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生有效的CCR2和CCR5拮抗作用。計劃共有250個受試者(每個治療組125個受試者)，并且總研究治療持續(xù)時間為2年。研究群體將包括患有NASH(NAS≥4)和肝纖維化(階段1至3[NASHCRN系統(tǒng)])的受試者，其由于≥1個影響因素的存在而具有增加的疾病進展風險：2型糖尿病的書面證據(jù)具有如NCEP所定義的代謝綜合征的下列標準中的至少1個的高BMI(>25kg/m2)：中心性肥胖：腰圍≥102cm或40英寸(男性)，≥88cm或35英寸(女性)血脂異常：TG≥1.7mmol/L(150mg/dL)血脂異常：HDL膽固醇<40mg/dL(男性)，<50mg/dL(女性)血壓≥130/85mmHg(或接受高血壓治療)空腹血糖≥6.1mmol/L(110mg/dL)；或橋連纖維化(NASHCRN階段3)和/或明確型NASH(NAS≥5)。將會有2個治療期。治療期1將由1年的雙盲隨機治療(CVC150mg或匹配的安慰劑)組成。受試者和研究人員在周期1期間將對治療分配保持不知情。在治療期2期間，原本隨機分配到CVC150mg的受試者將繼續(xù)接受該治療額外的一年，且原本隨機分配到安慰劑的受試者將從安慰劑交叉到CVC150mg。受試者將接受研究藥物，每天一次(QD)，持續(xù)2年。該研究將包括2個治療期：治療期1(第一年)和治療期2(第二年)。合格的受試者將在治療的第一年期間(治療期1)被分配到接受CVC(n＝126)或匹配的安慰劑(n＝126)。對于治療期2，經(jīng)安慰劑治療的受試者的一半(在基線處隨機分配)將交叉到CVC，而另一半將在第二年的治療中繼續(xù)接受安慰劑。在基線處(第1天)，篩選評價后，合格的受試者將利用通過篩選時的NAS(4或≥5)和纖維化分期(≤2或>2)分層的置換區(qū)組隨機化分配給治療組。合格的受試者將以2:1:1的比率被隨機分配至以下3個治療組之一：表38組n治療期1治療期2A126CVC150mg,QDCVC150mg,QDB63匹配安慰劑，QDCVC150mg,QDC63匹配安慰劑，QD匹配安慰劑，QDCVC和匹配的安慰劑將會作為雙盲研究藥物施用。研究藥物(CVC/匹配安慰劑)應該每天早晨隨食物一起服用。主要終點(第1年)活檢必須在治療期1結束前的1個月內(nèi)和開始治療期2之前進行。最后(第2年)活檢必須在研究藥物治療結束前的1個月內(nèi)進行。招募將在有限數(shù)量的地點開始，直到最多20個受試者已被隨機分配和治療并且安全性數(shù)據(jù)已由數(shù)據(jù)監(jiān)測委員會(DMC)審查。第一DMC審查將在第一個受試者被招募的3個月內(nèi)，或當最多20個受試者已被隨機分配并且至少10個受試者已被治療1個月時進行，無論哪種情況先發(fā)生。一旦DMC已評價這些最初的10至20個受試者的安全性數(shù)據(jù)并確定該研究可以繼續(xù)，就將進行其余的研究受試者的后續(xù)招募。在治療期1期間，所有受試者將在第1個月的第2周和第4周接受安全性評估。另外，最初的20個受試者將在第1個月的第1周和第3周接受安全性評估。所有受試者將在第2個月期間每2周接受一次研究訪問評估，在第3至6個月期間接受每月一次的訪問，并在第8、10和12個月接受訪問。在治療期2期間，受試者將在第13至15個月期間以及第18、21和24個月接受每月訪問。重點評估在研究期間：肝活檢將在篩選時、在主要終點處(第1年：治療期1結束前的1個月內(nèi)和開始治療期2之前)和在第2年(治療結束前的1個月內(nèi))進行。促炎性細胞因子、炎癥的生物標記物、肝細胞凋亡的生物標記物、細菌易位的生物標記物、空腹代謝參數(shù)、腎參數(shù)和eGFR將在基線處以及第3、6、12、15、18和24個月進行測量。在可用的部位，非侵入性肝成像(例如，超聲瞬時彈性成像[TE]、二維磁共振彈性成像[MRE]、聲輻射力脈沖[ARFI])的評估將在基線處以及在第6、12、18和24個月進行。CVC的藥代動力學樣品將在基線處(在即將開始治療前的給藥前樣品)、第0.5、3和15個月(給藥前和給藥后至少1小時)以及第6、12、18和24個月(給藥前)進行收集。體重、腰圍、臀圍、臂圍和三頭肌皮褶厚度將在基線處和第3、6、12、15、18和24個月進行測量。身高將在篩選時和第12個月進行測量。身體檢查和實驗室分析將在每次訪問時進行。ECG將在基線處和在第3、6、12、15、18和24個月進行。不良事件和伴隨用藥將在每次訪問時進行評估。知情同意書和有關NASH、肝纖維化和肝活檢程序的患者教育材料將在篩選訪問時進行審查。研究藥物日記將在分配研究藥物的同時被提供給每個受試者。該日記將在所有治療期間訪問和早期停藥訪問時進行審查。受試者將在接受其最后治療后的1個月返回臨床以接受研究結束時的隨訪評價。該研究的主要療效目標將是評價第1年的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)活性評分(NAS)相對于篩選活檢的肝組織學改善，由最小2分的NAS改善以及小葉炎癥和氣球樣變性分類的至少1分的改善和沒有纖維化分期的同時惡化(惡化被定義為進展至橋連纖維化或肝硬化)所定義。次要療效目標包括評價在第2年無肝纖維化分期的同時惡化(惡化被定義為進展至橋連纖維化或肝硬化)的NASH分解；在第1年無肝纖維化分期的同時惡化(惡化被定義為進展至橋連纖維化或肝硬化)的NASH分解；CVC在肝纖維化成年受試者的1年和2年NASH治療中的安全性和耐受性；CVC在群體PK分析中的血漿PK的表征；評價第2年的NAS的肝組織學改善，由最小2分的NAS改善和超過1個分類的至少1分的改善以及沒有纖維化分期的同時惡化(惡化被定義為進展至橋連纖維化或肝硬化)所定義；在第1年和第2年評價CVC在肝纖維化成人受試者中相對于安慰劑的療效，如肝活檢物上的形態(tài)定量膠原的變化所測定；在第1年和第2年評價組織學纖維化分期(非酒精性脂肪性肝炎臨床研究網(wǎng)絡[NASHCRN]系統(tǒng)和Ishak)的變化；在第1年和第2年評價肝組織纖維發(fā)生蛋白(α-平滑肌肌動蛋白[α-SMA])的變化；在第3、6、12、15、18和24個月評價非侵入性肝纖維化標記物(APRI、FIB-4、透明質酸、FibroTest(FibroSure)、NAFLD纖維化評分[NFS]和增強肝纖維化測試[ELF])的基線變化；在第1年和第2年評價肝細胞凋亡的生物標記物的基線變化；在第3、6、12、15、18和24個月評價肝臟參數(shù)和空腹代謝參數(shù)的基線變化；在第3、6、12、15、18和24個月評價體重、BMI、腰圍、腰臀比、臂圍和三頭肌皮褶厚度的基線變化。第三目標包括評價非侵入性肝成像方法(例如，超聲瞬時彈性成像[TE]、二維磁共振彈性成像[MRE]、聲輻射力脈沖[ARFI])在第6、12、18和24個月(在可用的部位)的基線變化；促炎性細胞因子和炎癥的生物標記物在第3、6、12、15、18和24個月的基線變化；腎小球濾過率估計值(eGFR)和腎參數(shù)在第3、6、12、15、18和24個月的基線變化；以及與細菌易位相關的生物標記物在第3、6、12、15、18和24個月的基線變化。本文中的詳細說明描述了本發(fā)明的各個方面和實施方案，然而，除非另有規(guī)定，否則這些都不旨在為限制性的。事實上，已閱讀本公開的本領域技術人員將預想到可以在不脫離本發(fā)明的范圍和精神的情況下作出的變化、改變和調整，所有這些都應該被認為是本發(fā)明的一部分，除非另有規(guī)定。因此，申請人預想本文所描述的發(fā)明將僅受所附權利要求書限制。參考文獻：1.SaimanY，F(xiàn)riedmanSL.Theroleofchemokinesinacuteliverinjury.2012；3：213.2.ZimmermannHW，TackeF.Modificationofchemokinepathwaysandimmunecellinfiltrationasanoveltherapeuticapproachinliverinflammationandfibrosis.InflammAllergyDrugTargets.2011；10：509-536.3.SekiE，DeMinicisS，GwakGY，KluweJ，InokuchiS，BursillCA，LlovetJM，BrennerDA，SchwabeRF.CCR1andCCR5promotehepaticfibrosisinmice.JClinInvest.2009；119：1858-1870.4.SekiE，deMinicisS，InokuchiS，TauraK，MiyaiK，vanRooijenN，SchwabeRF，BrennerDA.CCR2promoteshepaticfibrosisinmice.Hepatology.2009；50：185-197.5.MiuraK，YangL，vanRooijenN，OhnishiH，SekiE.HepaticrecruitmentofmacrophagespromotesnonalcoholicsteatohepatitisthroughCCR2.AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol.2012；302：G1310-1331.6.MitchellC，CoutonD，CoutyJP，AnsonM，CrainAM，BizetV，RéniaL，PolS，MalletV，GilgenkrantzH.DualroleofCCR2intheconstitutionandtheresolutionofliverfibrosisinmice.AmJPathol.2009；174：1766-1775.7.XiaY，EhtmanML，WangY.CCR2regulatestheuptakeofbonemarrow-derivedfibroblastsinrenalfibrosis，PLoSONE2013；8(10)：e77493.doi：10.1371/journal.pone.00774938.KarlmarkKR，WasmuthHE，TrautweinC，TackeF.Chemokine-directedimmunecellinfiltrationinacuteandchronicliverdisease.ExpertReviewGastroen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