本發(fā)明涉及透明質(zhì)酸（acide hyaluronique）或其鹽和低分子量硫酸化多糖（polysaccharide sulfaté）的新型組合；并且涉及所述組合在抗老化和愈合領(lǐng)域中的用途。

背景技術(shù)：

透明質(zhì)酸（AH）為皮膚中具有最重要作用的分子。事實(shí)上，透明質(zhì)酸為細(xì)胞外基質(zhì)的主要組分。后者是指結(jié)締組織的細(xì)胞外大分子的集合。其主要由糖蛋白、純蛋白以及葡糖胺聚糖組成。AH為由重復(fù)的二糖單元構(gòu)成的直鏈非硫酸化葡糖胺聚糖，所述二糖單元自身由在二聚體間以交替的β1-3和β1-4糖苷鍵連接的D-葡萄糖醛酸和N-乙?；?D-葡萄糖胺構(gòu)成（Tammi R.,Agren U.M.,Tuhkanen A.L.,Tammi M.Hyaluronan metabolism in skin.Progress in Histochemistry&Cytochemistry 29(2):1–81,1994）。在其天然形式中，AH為聚合物，其具有600,000Da至3MDa的非常高的分子量（Toole BP.Hyaluronan:from extracellular glue to peracellular cue.Nat Rev Cancer 2004,4:538–539）。

隨著年齡增長，AH的量和聚合度下降，導(dǎo)致更少的水保留在細(xì)胞外基質(zhì)中。然后，皮膚經(jīng)歷老化過程，這導(dǎo)致纖維化的增加和彈性纖維含量的下降。在老化過程中，觀察到皮膚結(jié)構(gòu)和功能的改變。這種老化本質(zhì)上是生理的，但也可以是光誘導(dǎo)的，即，由于皮膚在日光特別是紫外線下的反復(fù)暴露。皮膚老化的主要臨床體征（signes clineques）為隨著年齡顯著增長的紋路和深皺紋的出現(xiàn)。溝紋和皺紋變得明顯；皮膚變得凹陷并失去其緊實(shí)度；在表面上，皮膚失去其光澤。

硫酸化多糖尤其包含具有5至25kDa的分子量的硫酸化巖藻聚糖（fucanes sulfatés）和硫酸化石莼聚糖（ulvanes sulfatés）。

這些低分子量硫酸化多糖具有有利的生化性質(zhì)：抑制膠原和彈性蛋白的降解，重構(gòu)，抗炎作用和誘導(dǎo)AH的產(chǎn)生。

在老化期間，成纖維細(xì)胞開始衰老，并且它們的增殖能力大大降低。因此，實(shí)際上能夠刺激這些細(xì)胞重新增殖是經(jīng)研究用于對(duì)抗皮膚老化的一種路徑。

此外，傷口愈合是一種復(fù)雜且動(dòng)態(tài)的生物過程，其調(diào)動(dòng)了在正常組織修復(fù)中的許多局部和全身要素的相互作用。愈合以三個(gè)相互依賴的階段進(jìn)行：止血和炎癥，增殖和重塑（General principles of wound healing.Witte MB,Barbul A.Surg Clin North Am.1997Jun;77(3):509–28.）。增殖涉及三個(gè)清晰可見的過程：肉芽化、收縮和再上皮化。

在肉芽化期間，觀察到細(xì)胞的增殖和向創(chuàng)面的遷移，這將干預(yù)其余的修復(fù)過程。因此，在此處發(fā)現(xiàn)了巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。巨噬細(xì)胞不斷釋放趨化因子和生長因子。成纖維細(xì)胞在傷口基部構(gòu)建細(xì)胞生長所必需的新的細(xì)胞基質(zhì)。這種骨架支撐細(xì)胞遷移。最終，內(nèi)皮細(xì)胞觸發(fā)血管芽的形成，所述血管芽將構(gòu)成新的毛細(xì)血管，所述毛細(xì)血管將恢復(fù)灌注，并確保傷口中細(xì)胞的代謝活動(dòng)所必需的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)。

傷口收縮是減小傷口尺寸的機(jī)制，成纖維細(xì)胞在這種收縮中發(fā)揮主導(dǎo)作用。

再上皮化在于覆蓋傷口的表皮的再生，以形成對(duì)抗外部環(huán)境的有效屏障，能夠變得有顏色，并恢復(fù)其感覺和免疫功能。因此，其涉及角化細(xì)胞遷移和增殖的細(xì)胞過程，也涉及這種新上皮的分化和連接真皮與表皮的基膜的恢復(fù)。當(dāng)基底細(xì)胞向著傷口中心遷移使得傷口的兩個(gè)邊緣接觸時(shí)，發(fā)生一波細(xì)胞有絲分裂，以填充遷移所留下的空間，并在三維再生中為上皮組織提供細(xì)胞。

角化細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞的增殖階段可以被認(rèn)為是顯示活性試劑的愈合活性的功能現(xiàn)象之一。升高的成纖維細(xì)胞增殖將參與深的傷口（抵達(dá)真皮）的愈合，而升高的角化細(xì)胞增殖將參與再上皮化。

仍然需要提出用于對(duì)抗皮膚老化體征的新型化妝品組合物。

申請(qǐng)人已表明透明質(zhì)酸和低分子量硫酸化多糖對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的協(xié)同作用的存在。這種活性在抗老化領(lǐng)域以及在組織再生和皮膚損傷愈合中是特別有利的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于一種組合，其包含透明質(zhì)酸或其鹽和具有5至25kDa分子量的硫酸化多糖。

在本發(fā)明的情況下，術(shù)語“透明質(zhì)酸”、“透明質(zhì)酸片段”、“AH”和“透明質(zhì)酸（hyaluronane）”可互換使用，以指代透明質(zhì)酸。當(dāng)透明質(zhì)酸為鹽形式時(shí)，其被稱作透明質(zhì)酸鹽。

在本發(fā)明的一個(gè)特別的實(shí)施方案中，組合包含透明質(zhì)酸或其鹽，所述透明質(zhì)酸或其鹽的重量平均分子量（Mw）將為50,000至750,000Da。

在本發(fā)明的一個(gè)特別的實(shí)施方案中，AH片段或其鹽的特征在于60至120kDa的重量平均分子量，通過組合了尺寸排阻色譜（SEC）和多角度光散射光度計(jì)（MALS）的分析方法測(cè)量所述分子量，所述多角度光散射光度計(jì)與粘度計(jì)（VIS）和差示折光計(jì)（RI）相結(jié)合。

在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，其將為透明質(zhì)酸鈉。

可以使用歐洲藥典的方法測(cè)量AH或其鹽的分子量，所述方法用Ubbelohde毛細(xì)管粘度計(jì)測(cè)量特性粘度（參見歐洲藥典7.6，透明質(zhì)酸鈉專論參考文獻(xiàn)：01/2011:1472）。然后，該粘度值通過Mark-Houwink關(guān)系與平均分子量相關(guān)聯(lián)。這種方法耗時(shí)長，并且需要完美的再現(xiàn)性。

在本發(fā)明的情況下，通過SEC-MALS-VIS-RI方法測(cè)量AH或其鹽的重量平均分子量，所述方法為組合了尺寸排阻色譜（SEC）和多角度光散射光度計(jì)（MALS）的分析方法，所述多角度光散射光度計(jì)與粘度計(jì)（VIS）和差示折光計(jì)相結(jié)合。這種技術(shù)能夠獲得重量平均分子量（Mw）。

這種技術(shù)能夠以精確和可再現(xiàn)的方式表征AH的分子量（Stepan Podzimek等人Solution of Hyaluronic Acid and Comparison of SEC–MALS–VIS Data with Off–line Capillary Viscometry.Journal of Applied Polymer Science.2009）。

在將聚合物溶液注入色譜系統(tǒng)后，組合了MALS檢測(cè)器的尺寸排阻色譜（SEC）能夠在色譜柱中按尺寸分離這些聚合物，通過光散射測(cè)量該尺寸，并使用差示折光計(jì)或UV光譜儀將它們量化。

·將透明質(zhì)酸或其鹽溶解于0.1M NaCl水溶液中，然后在填充有聚苯乙烯-二乙烯基苯珠粒的柱上洗脫，所述珠粒具有校準(zhǔn)孔徑。大的聚合物鏈不會(huì)進(jìn)入所有的孔，因此將在小鏈之前被洗脫。

·MALS檢測(cè)器測(cè)量在不同角度的入射光的散射。這些角度能夠通過外推測(cè)量R₀，所述R₀是在0度角的散射。R₀與分子尺寸直接成比例。

·根據(jù)以下等式（1），差示折光計(jì)的S_i響應(yīng)與具有聚合度i的聚合物的總質(zhì)量C_i成比例：

S_i=K′·dn/dc·C_i

其中：S_i因此為差示折光計(jì)的響應(yīng)，

K'為與裝置相關(guān)的常數(shù)，和

C_i為具有聚合度i的聚合物的總質(zhì)量（重量）（C_i=N_i×M_i），

N_i為摩爾質(zhì)量M_i的鏈的數(shù)量。

此外，折射率增量dn/dc為被研究的聚合物的特定值。

該dn/dc比例可以根據(jù)用透明質(zhì)酸鈉示例的以下方案來測(cè)量。

a/裝置和溶液的制備：

在折光計(jì)上進(jìn)行測(cè)量，所述折光計(jì)如具有氦-氖激光（λ=633nm）作為入射光源的Brice-Phoenix模型。

通過稱重獨(dú)立地制備待研究的各種聚合物濃度（在溶液中的持續(xù)時(shí)間=24小時(shí)）。然后，使用折光計(jì)測(cè)量各自的折射率（dn）。

b/結(jié)果

結(jié)果以圖形dn=f(濃度)的形式呈現(xiàn)（參見圖1）。然后，確定類型Y=A+B*X的線性回歸。

對(duì)于透明質(zhì)酸鈉，經(jīng)確定的值A(chǔ)和B分別為A=-2.030和B=14927.911。

因此，dn/dc比例對(duì)應(yīng)于k×B，其中k為設(shè)備的常數(shù)，其在該示例中等于0.97·10^-5。

對(duì)于透明質(zhì)酸鈉，從而以0.97·10^-5×14927.911=0.145ml/g評(píng)價(jià)dn/dc。

下面的公式給出了所有測(cè)量的參數(shù)之間的關(guān)系：

R₀=K·C_i·M_i

其中：R₀為散射角為0時(shí)的瑞利比，

K為裝置的常數(shù)，

C_i為注射的溶液的聚合物的總質(zhì)量，所述聚合物具有聚合度i[根據(jù)等式（1）計(jì)算]，

和M_i為所尋找的聚合物鏈的摩爾質(zhì)量。

然后，可以根據(jù)下式計(jì)算重量平均分子量Mw：

Mw=ΣC_iM_i/ΣC_i。

所有的分子量均以道爾頓表示。

可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法之一（如在文獻(xiàn)EP 1987153中提及的那些）獲得作為本發(fā)明目的的透明質(zhì)酸或其鹽。

主要通過細(xì)菌發(fā)酵以工業(yè)方式獲得AH：通過細(xì)菌合成透明質(zhì)酸絲。

因此，在本發(fā)明的一個(gè)特別的實(shí)施方案中，使用經(jīng)選擇的細(xì)菌菌株通過細(xì)菌發(fā)酵獲得天然AH，所述AH通常具有1MDa至2MDa范圍的高的分子量。

然后，可以將獲得的聚合物與細(xì)菌分離。然后將溶液純化，然后通過受控酸水解將其水解，直至獲得所期望的分子量。

對(duì)于透明質(zhì)酸鈉的制備，將通過加入NaOH進(jìn)行中和步驟。

透明質(zhì)酸鹽將優(yōu)選為透明質(zhì)酸鈉。

在本發(fā)明的情況下，低分子量硫酸化多糖可以選自具有5至25kDa的分子量的硫酸化巖藻聚糖和硫酸化石莼聚糖。

硫酸化巖藻聚糖為包含硫酸化L-巖藻糖的多糖。可以特別地從褐藻中，例如從巖藻目（Fucales）或昆布目（Laminariales）中提取這些多糖。

硫酸化石莼聚糖為硫酸化陰離子多糖，所述多糖包含分布在重復(fù)基序（motifs）中的糖醛酸（例如葡糖醛酸、艾杜糖醛酸）和能夠被硫酸化的糖（例如3-硫酸鼠李糖酯、3-硫酸半乳糖酯、3-硫酸木糖酯、3-硫酸葡萄糖酯）。主要基序?yàn)椋?/p>

-石莼二糖醛酸酸3-硫酸鹽（l’acide 3-sulfate ulvanobiuronique）類型A，其由通過1→4型鍵與β-D-葡萄糖醛酸連接的α-L-鼠李糖3-硫酸鹽組成，和

-石莼二糖醛酸酸3-硫酸鹽類型B，其由通過1→4型鍵與α-L-艾杜糖醛酸連接的α-L-鼠李糖3-硫酸鹽組成。

可以特別地從石莼或滸苔品種（石莼屬（Ulva sp.）和滸苔屬（Enteromorpha sp.）)的綠藻中提取石莼聚糖。

根據(jù)一個(gè)特別的實(shí)施方案，低分子量硫酸化巖藻聚糖如在WO 2010/086197中所描述。

可以提及由藻類球型褐藻（Ascophyllum nodosum）中提取的專利市售產(chǎn)品（Algues et Mer）。

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，低分子量硫酸化石莼聚糖如在WO 2013/150253中所描述。

還可以提及由Green Tech銷售的級(jí)分其基于來自藻類石莼萵苣（Ulva lactuca）的特別的低聚糖：磺基-低聚鼠李糖葡萄糖酸聚糖（sulpho-oligorhamnoglucuronane）。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別的實(shí)施方案，透明質(zhì)酸與多糖的質(zhì)量比為0.1至10。

根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)特別的實(shí)施方案，透明質(zhì)酸與多糖的質(zhì)量比為0.5至5，優(yōu)選為0.5至2。

本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種透明質(zhì)酸或其鹽和根據(jù)本發(fā)明的低分子量硫酸化多糖（即具有5至25kDa的分子量）的組合，其用于促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖的用途。

本發(fā)明還涉及一種化妝品組合物，其包含作為抗老化活性成分的透明質(zhì)酸或其鹽和具有5至25kDa分子量的硫酸化多糖的組合，并且進(jìn)一步包含至少一種化妝品學(xué)上可接受的賦形劑。

優(yōu)選地，化妝品學(xué)上可接受的賦形劑適合于局部施用。

特別地，可接受的賦形劑能夠確保良好的穩(wěn)定性和舒適的質(zhì)地與感覺。它們還可以為例如在化妝品中已知和常規(guī)使用的配制劑或添加劑：可以提及表面活性劑、著色劑、防腐劑、芳香劑、成膜劑、增稠劑等。

抗老化組合物可以為通常已知用于在皮膚上局部施用的形式，即，特別是霜?jiǎng)?、乳劑、洗劑、精華素、面膜、皺紋填充劑、眼線膏等。

本發(fā)明的目的在于根據(jù)本發(fā)明的組合的化妝品用途或根據(jù)本發(fā)明的該化妝品組合物用于對(duì)抗皮膚老化體征的化妝品用途。更特別地，根據(jù)本發(fā)明的組合的化妝品用途或根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物的化妝品用途旨在將物質(zhì)恢復(fù)至皮膚，增強(qiáng)其緊實(shí)度，并顯著減少明顯的皺紋和深溝紋。

本發(fā)明還涉及一種用于對(duì)抗皮膚老化體征的方法，其包括向需要其的人的施用，優(yōu)選局部施用有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合或根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及一種皮膚病學(xué)組合物，其旨在加速皮膚修復(fù)從而恢復(fù)皮膚的完整性和質(zhì)量，其包含作為皮膚病學(xué)或化妝品活性成分的透明質(zhì)酸或其鹽和上述分子量為5至25kDa的硫酸化多糖的組合，并且進(jìn)一步包含至少一種皮膚病學(xué)或化妝品學(xué)上可接受的賦形劑。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物旨在用于局部施用。

皮膚病學(xué)上（藥學(xué)上）或化妝品學(xué)上相容的賦形劑可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何賦形劑，所述賦形劑用于獲得乳液、霜?jiǎng)?、香膏、油劑、洗劑、凝膠劑、發(fā)泡凝膠劑、軟膏、噴霧劑等形式的用于局部施用的組合物。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物將為霜?jiǎng)┗蜍浉嗟男问健?/p>

在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的皮膚病學(xué)和化妝品組合物包含至少一種其他的活性成分。

這種其他的活性成分可以特別地選自抗老化劑、愈合劑、舒緩劑、止癢劑、抗氧化劑、抗自由基劑、抗UV劑、刺激真皮大分子合成或能量代謝的試劑、保濕劑、脫色劑、抗細(xì)菌劑、抗真菌劑、抗炎劑或麻醉劑。

根據(jù)一個(gè)特別的實(shí)施方案，根據(jù)本發(fā)明的組合物（優(yōu)選化妝品組合物）進(jìn)一步包含視黃醛。這種補(bǔ)充的抗老化活性劑是視黃酸的直接前體，具有直接細(xì)胞代謝再活化劑作用。視黃醛增加AH受體的表達(dá)，CD44，并誘導(dǎo)AH合成。

因此，根據(jù)本發(fā)明的組合物包含透明質(zhì)酸或其鹽、低分子量硫酸化多糖和視黃醛的組合。這種組合在真皮-表皮連接和乳突真皮層中具有重構(gòu)和再致密化作用。

根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，組合物將進(jìn)一步包含生育酚衍生物，所述生育酚衍生物包括δ-生育酚-吡喃葡萄糖苷：其強(qiáng)大的抗氧化作用保護(hù)皮膚并保持其光澤。

因此，根據(jù)本發(fā)明的組合物包含透明質(zhì)酸或其鹽、低分子量硫酸化多糖和δ-生育酚-吡喃葡萄糖苷的組合。

根據(jù)另一個(gè)特別的實(shí)施方案，其他的活性成分將選自愈合劑、舒緩劑及其混合物。這種活性成分將優(yōu)選用在皮膚病學(xué)組合物中。

最后，本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及一種透明質(zhì)酸或其鹽和低分子量硫酸化多糖的組合，或根據(jù)本發(fā)明的含有所述組合的皮膚病學(xué)組合物，其作為藥物（更特別地皮膚病學(xué)藥物）的用途，所述藥物特別地旨在用于治療和愈合皮膚損傷。

本發(fā)明還涉及透明質(zhì)酸或其鹽和具有5至25kDa分子量的硫酸化多糖的組合在制備藥物（更特別地皮膚病學(xué)藥物）中的用途，所述藥物特別地旨在用于治療和愈合皮膚損傷。

本發(fā)明還涉及一種用于治療和愈合皮膚損傷的方法，其包括向需要其的人的施用，優(yōu)選局部施用有效量的透明質(zhì)酸或其鹽和具有5至25kDa分子量的硫酸化多糖的組合或根據(jù)本發(fā)明的含有所述組合的皮膚病學(xué)組合物。

根據(jù)本發(fā)明的皮膚病學(xué)和化妝品組合物特別地旨在用于皮膚的護(hù)理，所述皮膚受損于：

·在侵入性操作/治療之后：有或無縫合的手術(shù)操作（撕除手術(shù)（exérèsis）、削除手術(shù)（shavings）)、冷凍療法、激光消融、中度或深度去皮（peelings）、美塑療法（mésothérapie）、刮除術(shù)（curettage），

·淺表割傷或燒傷的創(chuàng)傷后階段（post traumatique），

·在需要愈合產(chǎn)品的淺表（非侵入性）操作之后，所述愈合產(chǎn)品加速皮膚恢復(fù)，用于長期使用（直至皮膚的完全修復(fù)），

·在輕微的外部損傷之后：淺表擦傷，曬傷。

根據(jù)本發(fā)明的皮膚和粘膜損傷的治療可以特別地包括割傷、縫合、擦傷、劃傷、刮傷、手術(shù)后的疤痕或皮膚美容操作后的疤痕、淺表燒傷、曬傷的治療。

本發(fā)明進(jìn)一步涉及根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物旨在改善愈合和皮膚修復(fù)的用途。

在閱讀以下的結(jié)果后將更好地理解本發(fā)明，所述結(jié)果闡明本發(fā)明但并不限制其范圍。

附圖說明

圖1顯示透明質(zhì)酸鈉隨濃度c變化的折射率dn。

圖2顯示100和1000μg/ml的根據(jù)本發(fā)明的AH（HAF120）以及10和100μg/ml的對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的作用。*:p<0.05和**:p<0.01。實(shí)驗(yàn)代表三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。

圖3顯示100μg/ml的根據(jù)本發(fā)明的AH（HAF120）、10μg/ml的及其組合對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的作用。*:p<0.05。實(shí)驗(yàn)代表三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。

圖4顯示1000μg/ml的根據(jù)本發(fā)明的AH（HAF120）、10μg/ml的及其組合對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的作用。*:p<0.05和**:p<0.01。實(shí)驗(yàn)代表三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例

具有60至120kDa的重量平均分子量的透明質(zhì)酸鈉片段（HAF120）和具有低分子量（5-25kDa）的硫酸化巖藻聚糖的組合對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的藥理學(xué)評(píng)價(jià)

方案：

所使用的技術(shù)為在37℃在S期細(xì)胞的ADN中摻入核苷酸5-溴-2'-脫氧尿苷（BrdU），一種胸苷類似物。該技術(shù)能夠?qū)⒓?xì)胞量化，所述細(xì)胞在細(xì)胞周期中的進(jìn)展具有增殖細(xì)胞的特征（S期或ADN合成期）。

通常在含有10%SVF（胎牛血清）的DMEM（杜氏改良伊格爾培養(yǎng)基）中培養(yǎng)從手術(shù)廢棄皮膚中分離的FNH（正常人類成纖維細(xì)胞）。在我們的實(shí)驗(yàn)條件下，在含有3%SVF的DMEM中制備待測(cè)試產(chǎn)品的稀釋液。

首先，使細(xì)胞失去SVF持續(xù)24小時(shí)，以使細(xì)胞增殖停止，然后將它們?cè)诖u(píng)價(jià)分子的存在下在37℃在5%CO₂氣氛中溫育44小時(shí)。

通過抗-BrdU抗體系統(tǒng)（Roche Applied Science）評(píng)價(jià)BrdU摻入，所述BrdU摻入與細(xì)胞增殖速率成比例。在450nm測(cè)量相應(yīng)的吸光度（DO）。因此，該數(shù)據(jù)與細(xì)胞增殖速率成比例。

所評(píng)價(jià)的活性劑如下：

-陽性對(duì)照：10ng/ml的EGF（表皮生長因子）

-專利市售產(chǎn)品（Algues et Mer）：10和100μg/ml（分別對(duì)應(yīng)于0.001%和0.01%）

- 60-120kDa的根據(jù)實(shí)施例1的透明質(zhì)酸鈉：100和1000μg/ml（分別對(duì)應(yīng)于0.01和0.1%）

-組合，其包含分別為以下各濃度的和60-120kDa的透明質(zhì)酸鈉：

- 10μg/ml+100μg/ml，

- 10μg/ml+1000μg/ml。

結(jié)果的分析：

-表示為DO（與BrdU摻入成比例，因此與細(xì)胞增殖速率成比例）

-表示為刺激百分比：

-表示為平均的標(biāo)準(zhǔn)誤差：esm=標(biāo)準(zhǔn)偏差(Sd)/√n

統(tǒng)計(jì)分析：

使用不成對(duì)雙邊學(xué)生t檢驗(yàn)對(duì)原始DO值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

然后，該測(cè)試給出p值，所述p值表征在各種條件下獲得的結(jié)果的顯著性。顯著性的程度確立如下：

p<0.05（*）顯著

p<0.01（**）非常顯著

p<0.001（***）極顯著

p>0.05不顯著

結(jié)果：

在這些實(shí)驗(yàn)條件下，

-以非?？稍佻F(xiàn)的和統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的方式誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖，尤其是在100μg/ml（圖2）。

-單獨(dú)的透明質(zhì)酸鈉對(duì)成纖維細(xì)胞增殖具有中等（modéré）作用（圖2）。

-這兩種化合物的組合以協(xié)同方式誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖（圖3和4）。

結(jié)論：

在這些實(shí)驗(yàn)條件下，以非?？稍佻F(xiàn)的和統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的方式誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖。與HAF120的組合以協(xié)同方式誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖。

通過誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖，及其與60-120kDa的透明質(zhì)酸鈉片段的組合恢復(fù)細(xì)胞代謝，并參與皮膚修復(fù)和對(duì)抗老化。

示例性組合物

實(shí)施例1：

實(shí)施例2：