本發(fā)明的方面根據(jù)NIH合同號(hào)HHSN272200900008C在美國政府支持下完成，美國政府可以具有本發(fā)明的某些權(quán)利。
背景技術(shù)：
：Toll-樣受體4(TLR4)激動(dòng)劑是免疫原性的化合物。已經(jīng)將TLR-4激動(dòng)劑配制在脂質(zhì)體中用于遞送。單磷酰脂質(zhì)A是一種已知的TLR4激動(dòng)劑。將3-O-去?；膯瘟柞Ｖ|(zhì)A(MPL)配制在疫苗內(nèi)的脂質(zhì)體組合物中。在此需要一般的改進(jìn)的脂質(zhì)體組合物，特別是用于施用給人受試者的TLR4激動(dòng)劑的改進(jìn)的脂質(zhì)體組合物。具有高摻入效率的有效TLR4激動(dòng)劑的脂質(zhì)體組合物是合乎需要的。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于在藥物組合物中使用的改進(jìn)的脂質(zhì)體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體組合物，其包含脂質(zhì)（適當(dāng)?shù)厥橇字┖桶被闊N磺酸（amninoalkanesulfonic）緩沖劑諸如HEPES、HEPPS/EPPS、MOPS、MOBS和PIPES。在另一個(gè)合適實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體組合物，其包含脂質(zhì)（諸如磷脂）和氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸酯(AGP)（適當(dāng)?shù)厥荂RX-601）。在另一個(gè)合適實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體組合物，其包含脂質(zhì)、AGP和氨基烷烴磺酸緩沖劑，其中所述脂質(zhì)適當(dāng)?shù)厥橇字?。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種改進(jìn)的脂質(zhì)體組合物生產(chǎn)方法，所述方法包括下述步驟：將脂質(zhì)諸如二油?；字Ｄ憠A(通常，“DOPC”)(任選地與膽固醇和/或藥學(xué)活性成分諸如AGP一起)溶解在有機(jī)溶劑中，除去所述溶劑以產(chǎn)生磷脂膜，將所述膜加入HEPES緩沖劑中，將所述膜分散在所述溶液中，和將所述溶液接連地穿過聚碳酸酯過濾器擠出以形成單層脂質(zhì)體?？梢詫⑺鲋|(zhì)體組合物另外無菌過濾。這些新穎的脂質(zhì)體組合物具有非常高的AGP摻入效率，所述AGP已知是有效的和潛在反應(yīng)原性的。與所述激動(dòng)劑的其它制劑相比，如本文中所述配制用于藥用的AGP的脂質(zhì)體組合物可以導(dǎo)致所述組合物的改善的治療指數(shù)。在一個(gè)合適實(shí)施方案中，當(dāng)用膽固醇形成脂質(zhì)體時(shí)，脂質(zhì)體組合物表現(xiàn)出TLR4激動(dòng)劑的高摻入，但是當(dāng)不用膽固醇形成脂質(zhì)體時(shí)也如此，從而提供生產(chǎn)和配制這樣的脂質(zhì)體組合物的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的脂質(zhì)體在藥物組合物的生產(chǎn)和應(yīng)用中都是有益的。在本文提供的說明書、附圖和權(quán)利要求書中公開了另外的實(shí)施方案。附圖簡(jiǎn)述圖1的LAL數(shù)據(jù)顯示了通過相對(duì)于CRX-601IN參照(0%摻入)來對(duì)比樣品的斜率和開始時(shí)間而確定的摻入效率。圖2的LAL數(shù)據(jù)顯示了通過相對(duì)于CRX-601IN參照(0%摻入)來對(duì)比樣品的斜率和開始時(shí)間而確定的摻入效率。圖3的LAL數(shù)據(jù)顯示了通過相對(duì)于CRX-527IN參照(0%摻入)來對(duì)比樣品的斜率和開始時(shí)間而確定的摻入效率。發(fā)明詳述脂質(zhì)體術(shù)語“脂質(zhì)體”通常表示包封水性內(nèi)部的單層或多層(特別是2、3、4、5、6、7、8、9或10層，取決于形成的脂質(zhì)膜的數(shù)目)的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)。脂質(zhì)體和脂質(zhì)體制劑是本領(lǐng)域眾所周知的。能夠形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)包括具有脂肪或脂肪樣性質(zhì)的所有物質(zhì)?？梢詷?gòu)成脂質(zhì)體中的脂質(zhì)的脂質(zhì)可以選自甘油酯、甘油磷脂、甘油膦脂、甘油膦酰脂、硫脂、鞘脂、磷脂、isoprenolides、類固醇、硬脂、甾醇、archeolipids、合成陽離子脂質(zhì)和含碳水化合物的脂質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)特別的實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體包含磷脂。合適的磷脂包括(但不限于)：作為磷脂酰膽堿合成中的中間體的磷酸膽堿(PC)；天然磷脂衍生物：蛋磷酸膽堿、蛋磷酸膽堿、大豆磷酸膽堿、氫化大豆磷酸膽堿、作為天然磷脂的鞘磷脂；和合成磷脂衍生物：磷酸膽堿(二癸?；?L-α-磷脂酰膽堿[DDPC]、二月桂酰基磷脂酰膽堿[DLPC]、二肉豆蔻?；字Ｄ憠A[DMPC]、二棕櫚?；字Ｄ憠A[DPPC]、二硬脂?；字Ｄ憠A[DSPC]、二油?；字Ｄ憠A[DOPC]、1-棕櫚?；?、2-油酰基磷脂酰膽堿[POPC]、二反油?；字Ｄ憠A[DEPC])、磷酸甘油(1,2-二肉豆蔻?；?sn-甘油-3-磷酸甘油[DMPG]、1,2-二棕櫚?；?sn-甘油-3-磷酸甘油[DPPG]、1,2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸甘油[DSPG]、1-棕櫚?；?2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸甘油[POPG])、磷脂酸(1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酸[DMPA]、二棕櫚?；字醄DPPA]、二硬脂?；?磷脂酸[DSPA])、磷酸乙醇胺(1,2-二肉豆蔻?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺[DMPE]、1,2-二棕櫚?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺[DPPE]、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺DSPE1,2-二油?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺[DOPE])、磷酸絲氨酸、聚乙二醇[PEG]磷脂(mPEG-磷脂、聚甘油-磷脂、官能化的磷脂、末端活化的磷脂)、1,2-二油?；?3-(三甲基銨)丙烷(DOTAP)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體包含1-棕櫚?；?2-油?；?甘油-3-磷酸乙醇胺。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用高度純化的磷脂酰膽堿，并且其可以選自磷脂酰膽堿(蛋)、氫化磷脂酰膽堿(蛋)、磷脂酰膽堿(大豆)、氫化磷脂酰膽堿(大豆)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體包含磷脂酰乙醇胺[POPE]或其衍生物，或可以包含鞘磷脂(SPNG)。取決于磷脂組成和用于其制備的方法，脂質(zhì)體大小可以從30nm到數(shù)個(gè)5μm變化。在本發(fā)明的特別的實(shí)施方案中，脂質(zhì)體大小將在30nm至500nm的范圍中，并且在進(jìn)一步實(shí)施方案中，50nm至200nm，適當(dāng)?shù)匦∮?00nm。動(dòng)態(tài)激光散射是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的用于測(cè)量脂質(zhì)體大小的方法。具體地，本發(fā)明的脂質(zhì)體可以包含二油?；字Ｄ憠A[DOPC]和甾醇，特別是膽固醇。脂質(zhì)體組合物“脂質(zhì)體組合物”是制備的組合物，其包含脂質(zhì)體和在所述脂質(zhì)體內(nèi)的內(nèi)容物，具體地包括形成脂質(zhì)體雙層的脂質(zhì)、在所述脂質(zhì)體雙層內(nèi)除了所述脂質(zhì)以外的化合物、在所述脂質(zhì)體的水性內(nèi)部中且與其締合的化合物、以及與所述脂質(zhì)體的外層結(jié)合或締合的化合物。因而，除了所述脂質(zhì)體的脂質(zhì)以外，本發(fā)明的脂質(zhì)體組合物適當(dāng)?shù)乜梢园?、但不限于藥學(xué)活性成分、疫苗抗原和佐劑、賦形劑、載體和緩沖劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，這樣的化合物會(huì)補(bǔ)充所述脂質(zhì)體組合物的穩(wěn)定性或AGP-摻入效率和/或?qū)λ鲋|(zhì)體組合物的穩(wěn)定性或AGP-摻入效率沒有顯著損害。“脂質(zhì)體制劑”是指為了貯存和/或施用給受試者而適當(dāng)?shù)赜闷渌衔锱渲频闹|(zhì)體組合物，諸如本文描述的那些。因而，本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑包括本發(fā)明的脂質(zhì)體組合物，且可以另外包括、但不限于在本發(fā)明的范圍之外的脂質(zhì)體組合物，以及藥學(xué)活性成分、疫苗抗原和佐劑、賦形劑、載體和緩沖劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，這樣的化合物會(huì)補(bǔ)充本發(fā)明的脂質(zhì)體組合物的穩(wěn)定性或AGP-摻入效率和/或?qū)Ρ景l(fā)明的脂質(zhì)體組合物的穩(wěn)定性或AGP-摻入效率沒有顯著損害。氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸酯化合物.AGP是Toll-樣受體4(TLR4)調(diào)節(jié)劑。Toll-樣受體4識(shí)別細(xì)菌LPS(脂多糖)，且當(dāng)被活化時(shí)會(huì)啟動(dòng)先天性免疫應(yīng)答。AGP是細(xì)菌LPS的脂質(zhì)A蛋白的單糖模擬物，并且已經(jīng)用所述化合物的“?；湣鄙系拿押王ユI開發(fā)。用于制備這些化合物的方法是已知的，且公開在例如WO2006/016997、美國專利號(hào)7,288,640和6,113,918和WO01/90129中，它們?cè)谔卮送ㄟ^引用以其整體并入。其它AGP和有關(guān)的方法公開在美國專利號(hào)7,129,219、美國專利號(hào)6,525,028和美國專利號(hào)6,911,434中。在本發(fā)明的組合物中采用的、具有在?；溕系拿焰I的AGP是已知的且公開在WO2006/016997中，其特此通過引用整體并入。特別重要的是在WO2006/016997中的段落處根據(jù)式(III)闡述和描述的氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸酯化合物。在本發(fā)明中采用的氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸酯化合物具有如下式1所示的結(jié)構(gòu):(式1)其中m是0-6n是0-4；X是O或S，優(yōu)選地O；Y是O或NH；Z是O或H；每個(gè)R1、R2、R3獨(dú)立地選自C1-20?；虲1-20烷基；R4是H或Me；R5獨(dú)立地選自-H、-OH、-(Cl-C4)烷氧基、-PO3R8R9、-OPO3R8R9、-SO3R8、-OSO3R8、-NR8R9、-SR8、-CN、-NO2、-CHO、-CO2R8和-CONR8R9，其中R8和R9各自獨(dú)立地選自H和(Cl-C4)烷基；且每個(gè)R6和R7獨(dú)立地是H或PO3H2。在式1中，正脂肪?；鶜埢?也就是說，仲酰氧基或烷氧基殘基，例如，R1O、R2O和R3O)所連接的3’立體中心的構(gòu)型是R或S，優(yōu)選地是R(如通過Cahn-Ingold-Prelog優(yōu)先規(guī)則命名的)。R4和R5所連接的糖苷配基立體中心的構(gòu)型可以是R或S。認(rèn)為所有立體異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體及其混合物落在本發(fā)明范圍內(nèi)。通過變量“n”確定雜原子X和糖苷配基氮原子之間的碳原子的數(shù)目，所述“n”可以是0-4的整數(shù)，優(yōu)選地是0-2的整數(shù)。正脂肪酸R1、R2和R3的鏈長(zhǎng)度可以是約6至約16個(gè)碳，優(yōu)選約9至約14個(gè)碳。所述鏈長(zhǎng)度可以相同或不同。一些優(yōu)選的實(shí)施方案包括其中R1、R2和R3是6或10或12或14的鏈長(zhǎng)度。式1包括L/D-絲氨?；?蘇氨?；?半胱氨?；押王ブ|(zhì)AGP、激動(dòng)劑和拮抗劑和它們的同系物(n=1-4)、以及各種羧酸生物電子等排體(即，R5是能夠形成鹽的酸性基團(tuán)；所述磷酸酯可以是在葡糖胺單元的4-或6-位上，但是優(yōu)選地是在4-位)。在采用式1的AGP化合物的本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，n是0，R5是CO2H，R6是PO3H2，且R7是H。該優(yōu)選的AGP化合物被闡述為如下式1a的結(jié)構(gòu)：(式1a)其中X是O或S；Y是O或NH；Z是O或H；每個(gè)R1、R2、R3獨(dú)立地選自C1-20?；虲1-20烷基；且R4是H或甲基。在式1a中，正脂肪?；鶜埢?也就是說，叔酰氧基或烷氧基殘基，例如，R1O、R2O和R3O)所連接的3’立體中心的構(gòu)型是R或S，優(yōu)選地是R(如通過Cahn-Ingold-Prelog優(yōu)先規(guī)則命名的)。R4和CO2H所連接的糖苷配基立體中心的構(gòu)型可以是R或S。認(rèn)為所有立體異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體及其混合物落在本發(fā)明范圍內(nèi)。式1a包括L/D-絲氨酰基、-蘇氨?；?、-半胱氨?；鸦蝓ブ|(zhì)AGP、激動(dòng)劑和拮抗劑。在式1和式1a中，Z是通過雙鍵連接的O或各自通過一個(gè)單鍵連接的2個(gè)氫原子。也就是說，所述化合物是酯連接的（當(dāng)Z=Y=O時(shí)）；酰胺連接的（當(dāng)Z=O和Y=NH時(shí)）；和醚連接的（當(dāng)Z=H/H和Y=O時(shí)）。特別優(yōu)選的式1的化合物被稱作CRX-601和CRX-527。它們的結(jié)構(gòu)如下所示：。另外，另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案采用具有所示結(jié)構(gòu)的CRX547。CRX547。再其它的實(shí)施方案包括AGP諸如CRX602或CRX526，其給具有較短仲?；蛲榛湹腁GP提供增加的穩(wěn)定性。適合用于在本發(fā)明中使用的其它AGP包括CRX524和CRX529。緩沖劑.在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用兩性離子緩沖劑緩沖脂質(zhì)體組合物。適當(dāng)?shù)?，所述兩性離子緩沖劑是氨基烷烴磺酸或合適的鹽。氨基烷烴磺酸緩沖劑的例子包括、但不限于HEPES、HEPPS/EPPS、MOPS、MOBS和PIPES。優(yōu)選地，所述緩沖劑是適合用于在人類中使用（諸如用于在市售注射產(chǎn)品中使用）的藥學(xué)上可接受的緩沖劑。最優(yōu)選地，所述緩沖劑是HEPES。所述脂質(zhì)體組合物可以合適地包括AGP。在本發(fā)明的合適實(shí)施方案中，使用具有約7的pH的HEPES緩沖所述脂質(zhì)體。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在使用具有約7的pH的HEPES緩沖的脂質(zhì)體組合物中包括AGPCRX-601、CRX-527和CRX-547。所述緩沖劑可以與適當(dāng)量的鹽水或其它賦形劑一起使用以達(dá)到期望的等滲性。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，使用0.9%鹽水。HEPES：CAS登記號(hào)：7365-45-9C8H18N2O4S4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸HEPES是一種兩性離子緩沖劑，其被設(shè)計(jì)成在約6至約8(例如6.15-8.35)的生理pH范圍中和更具體地在約6.8至約8.2的更有用范圍（如在本發(fā)明中，約7至約8之間，或7-8之間，和優(yōu)選地約7至小于8之間）中緩沖。HEPES通常是白色結(jié)晶性粉末且具有下述結(jié)構(gòu)的分子式C8H18N2O4S:HEPES是眾所周知的和商購可得的(參見，例如，Good等人,Biochemistry1966)。脂質(zhì)體制備用于制備脂質(zhì)體的標(biāo)準(zhǔn)方法包括、但不限于在Liposomes:APracticalApproach,V.P.Torchilin,VolkmarWeissigOxfordUniversityPress,2003中報(bào)道的方法，且是本領(lǐng)域眾所周知的。在一種合適的制備本發(fā)明的脂質(zhì)體組合物的方法中，在圓底燒瓶中將AGP(例如CRX-601(20mg))和DOPC(具體地，1,2-二油?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿)(400mg))和任選的甾醇(例如膽固醇(100mg))溶解在氯仿或四氫呋喃的有機(jī)相中。通過在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上并進(jìn)一步在高壓真空下蒸發(fā)12小時(shí)，除去有機(jī)溶劑。向如此得到的混合磷脂膜中加入10ml氨基烷烴磺酸緩沖液諸如10mMHEPES或10mMHEPES-鹽水緩沖液pH7.2。將混合物在間歇渦旋下在水浴(20-30℃)上聲處理，直到所有膜沿著燒瓶壁分散在溶液中(30min-1.5小時(shí))。然后將溶液借助于脂質(zhì)微型擠出機(jī)(Lipex?擠出機(jī)(NorthernLipidsInc.,Canada))穿過聚碳酸酯過濾器接連地?cái)D出以形成單層脂質(zhì)體。然后將脂質(zhì)體組合物使用0.22μm過濾器無菌過濾進(jìn)無菌的去熱原的容器中。通過動(dòng)態(tài)光散射測(cè)量的得到的制劑的平均顆粒尺寸是80-120nm，具有凈負(fù)ζ電位。所述制劑代表2mg/mLCRX-601、10mg/mL膽固醇和40mg/mL總磷脂的最終靶濃度。在該工作中使用的氨基烷基氨基葡萄糖苷4-磷酸酯(AGP)CRX-601可以如以前所述合成{Bazin,200832447/id}，并通過層析進(jìn)行純化(至>95%純度)?？梢酝ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)反相HPLC分析方法定量在起始原料中或在終產(chǎn)物中的CRX-601。與脂質(zhì)體水合緩沖液(“LHB”，基于磷酸鹽，pH=6.1)相比，在HEPES緩沖液(pH=7.0)中配制的CRX-601以快5倍的速度得到期望的顆粒尺寸減小。與LHB磷酸鹽緩沖液相比，CRX-601脂質(zhì)膜在HEPES緩沖液中的再水合要求少4倍的總壓力和時(shí)間來配制脂質(zhì)體。這是一個(gè)顯著的改善，因?yàn)樗?jié)省能量和時(shí)間并在脂質(zhì)體的加工過程中對(duì)AGP產(chǎn)生更少的應(yīng)力。在一個(gè)實(shí)施方案中，脂質(zhì)體組合物的組分的合適范圍包含在約3-4%w/v范圍內(nèi)的脂質(zhì)、1%w/v的甾醇、在0.1-1%w/v范圍內(nèi)的活性劑（諸如AGP）和10mM的氨基烷烴磺酸緩沖液。在一個(gè)實(shí)施方案中，甾醇適當(dāng)?shù)匾?.5-4%w/v的范圍存在。另外，在一個(gè)實(shí)施方案中，所述脂質(zhì):甾醇:活性劑比率是約3-4:1:0.1-1。實(shí)施例實(shí)施例1：CRX-601制劑脂質(zhì)相容性研究.在使用CRX-601的研究中篩選了8種脂質(zhì)以發(fā)現(xiàn)CRX-601的最佳脂質(zhì)體制劑，其導(dǎo)致API(CRX-601)的最大穩(wěn)定性和可接受的可能與佐劑有關(guān)的致熱原性和/或毒性。使用LipexExtruder?來制備制劑。選擇10mMHEPES（在pH=7.0）作為水合緩沖液。在HEPES緩沖液（在pH=7.0）中以2mg/mL的靶濃度制備脂質(zhì)體制劑。將這些脂質(zhì)制劑置于在2-8℃的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性6個(gè)月和在40℃的加速穩(wěn)定性14天以監(jiān)測(cè)CRX-601隨時(shí)間的降解（通過RP-HPLC）、以及外觀、顆粒尺寸和ζ電位的任何變化（以解釋聚集）、和產(chǎn)色鱟阿米巴樣細(xì)胞溶解物（LAL）（以解釋CRX-601的摻入百分比的變化）。表1顯示了所有制備的脂質(zhì)體的t=0(過程數(shù)據(jù))。從LAL數(shù)據(jù)通過相對(duì)于CRX-601IN參照(0%摻入)來對(duì)比樣品的斜率和開始時(shí)間而確定摻入效率。下面顯示的在t=0的LAL數(shù)據(jù)表明了CRX-601在DOPC、DOPCChol、DOPCDC-Chol、DOTAP和DOTAPChol中的良好摻入，圖1和3。剩余制劑表明差摻入，如在下面圖2中所見。實(shí)施例2摻入效率測(cè)試為了確定膽固醇對(duì)CRX-601在脂質(zhì)體中的摻入的影響，對(duì)含有和不含膽固醇的各種脂質(zhì)體組合物執(zhí)行LAL測(cè)定。得到的數(shù)據(jù)(未顯示)證實(shí)了早前的LAL工作，其顯示DOPC和DOPC-膽固醇組合物具有驚人高的CRX601摻入水平。但是，這些LAL測(cè)定的結(jié)果的靈敏度或一致性不足以得出關(guān)于膽固醇對(duì)摻入的影響的結(jié)論。使用兔致熱原性測(cè)試作為CRX-601在脂質(zhì)體中的摻入的替代量度和作為它們?cè)谏锃h(huán)境中的穩(wěn)定性的量度。在PacificBiolabs(Hercules,CA)按照它們的SOP16E-02執(zhí)行測(cè)試。在下表中指出了來自每個(gè)測(cè)試的三只兔子的各個(gè)溫度增加。來自表2的數(shù)據(jù)指示，用或不用膽固醇制備的、含有高達(dá)4mgCRX-601/ml的DOPC脂質(zhì)體制劑直到1000ng/kg的劑量是無熱原的。這種致熱原性缺乏對(duì)應(yīng)于相對(duì)于游離CRX-601(最大無熱原劑量為2.5ng/kg)的400倍改善，并指示>99%的CRX-601在脂質(zhì)體雙層中的摻入。表2:用或不用膽固醇制備的DOPC脂質(zhì)體制劑的代表性兔熱原測(cè)試測(cè)量結(jié)果.在括號(hào)中的值是三只動(dòng)物在測(cè)試階段中的最大溫度變化。0.5℃或更大的溫度升高被認(rèn)為是熱原性應(yīng)答。符號(hào)P和F分別指示‘通過（Pass）’或‘失?。‵ail）’應(yīng)答。制劑在500ng/kg的劑量在任何時(shí)間區(qū)間觀察到的最大溫度升高(相對(duì)于對(duì)照)在1000ng/kg的劑量在任何時(shí)間區(qū)間觀察到的最大溫度升高(相對(duì)于對(duì)照)在2mg/mL的靶濃度制備的CRX-601DOPC脂質(zhì)體P(0.3℃,0.0℃,0.0℃)P(0.0℃,0.0℃,0.0℃)在2mg/mL的靶濃度制備的CRX-601DOPC-膽固醇脂質(zhì)體P(0.3℃,0.0℃,0.4℃)P(0.1℃,0.4℃,0.4℃)在4mg/mL的靶濃度制備的CRX-601DOPC脂質(zhì)體P(0.1℃,0.0℃,0.2℃)P(0.0℃,0.0℃,0.4℃)在4mg/mL的靶濃度制備的CRX-601DOPC-膽固醇脂質(zhì)體P(0.0℃,0.0℃,0.0℃)P(0.3℃,0.4℃,0.2℃)來自表3的數(shù)據(jù)指示，含有高達(dá)8mgCRX-601/ml的DOPC膽固醇脂質(zhì)體制劑直到500ng/kg的劑量是無熱原的。這種致熱原性缺乏對(duì)應(yīng)于相對(duì)于游離CRX-601(最大無熱原劑量為2.5ng/kg)的200倍改善，并指示>99%的CRX-601在脂質(zhì)體雙層中的摻入。表3：用膽固醇制備的DOPC脂質(zhì)體制劑的代表性兔熱原測(cè)試測(cè)量結(jié)果。在括號(hào)中的值是三只動(dòng)物在測(cè)試階段中的最大溫度變化。0.5℃或更大的溫度升高被認(rèn)為是熱原性應(yīng)答。符號(hào)P和F分別指示‘通過（Pass）’或‘失敗（Fail）’應(yīng)答。表3制劑在500ng/kg的劑量在任何時(shí)間區(qū)間觀察到的最大溫度升高(相對(duì)于對(duì)照)在1000ng/kg的劑量在任何時(shí)間區(qū)間觀察到的最大溫度升高(相對(duì)于對(duì)照)在8mg/mL的靶濃度制備的CRX-601DOPC膽固醇脂質(zhì)體P(0.1℃,0.1℃,0.3℃)P(0.4℃,0.3℃,03℃)在8mg/mL的靶濃度制備的CRX-601DOPC-膽固醇脂質(zhì)體P(0.2℃,0.4℃,0.3℃)F(0.6℃,1.0℃,0.4℃)CRX-527是CRX601的酯類似物。來自表4的數(shù)據(jù)指示，含有高達(dá)2mgCRX-527/ml的DOPC膽固醇脂質(zhì)體制劑直到500ng/kg的劑量是無熱原的。這種致熱原性缺乏提示非常高(可能>99%)的CRX-601在脂質(zhì)體雙層中的摻入。令人感興趣的是，不同于CRX-601，在DOPC脂質(zhì)體制劑(即在沒有膽固醇存在下)中的CRX-527被證實(shí)在500ng/kg是熱原性的。表4制劑在500ng/kg的劑量在任何時(shí)間區(qū)間觀察到的最大溫度升高(相對(duì)于對(duì)照)在1000ng/kg的劑量在任何時(shí)間區(qū)間觀察到的最大溫度升高(相對(duì)于對(duì)照)在2mg/mL的靶濃度制備的527DOPC脂質(zhì)體F(0.9C,1.2C,1.0C)F(0.7C,1.0C,1.3C)在2mg/mL的靶濃度制備的527DOPCCHOL脂質(zhì)體P(0.4,0.3,0.2C)P(0.1,0.0,0.1C)在表5中也顯示了含有CRX-601的陽離子DOTAP和DOTAP-膽固醇脂質(zhì)體的良好摻入結(jié)果。表5制劑在500ng/kg的劑量在任何時(shí)間區(qū)間觀察到的最大溫度升高(相對(duì)于對(duì)照)在1000ng/kg的劑量在任何時(shí)間區(qū)間觀察到的最大溫度升高(相對(duì)于對(duì)照)在2mg/mL的靶濃度制備的601DOTAP脂質(zhì)體P(0.3C,0.3C,0.1C)F(0.6C,0.6C,0.7C)在2mg/mL的靶濃度制備的601DOTAPCHOL脂質(zhì)體P(0.2C,0.4C,0.4C)F(0.6C,0.5C,0.4C)當(dāng)前第1頁1 2 3