本發(fā)明涉及用于治療癌癥如血液學(xué)癌癥和乳腺癌的組合。

發(fā)明背景

癌癥是最具有生命威脅的疾病之一。癌癥是其中身體一部分中的細(xì)胞經(jīng)歷失控生長(zhǎng)的病癥。根據(jù)來(lái)自美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)的最新數(shù)據(jù)，估計(jì)在2014年美國(guó)將有167萬(wàn)新增癌癥病例。癌癥是美國(guó)第二大死因(僅次于心臟病)并且在2014年將奪去超過(guò)585,000條生命。實(shí)際上，預(yù)計(jì)生活在美國(guó)的50％的所有男人和33％的所有女人在他們的有生之年都將發(fā)展某種類型的癌癥。因此，癌癥構(gòu)成重大的公共健康負(fù)擔(dān)并且在美國(guó)導(dǎo)致了顯著成本。這些數(shù)字在其他地方在全球大多數(shù)國(guó)家中反映，盡管癌癥的類型和發(fā)展癌癥的群體的相對(duì)比例取決于許多不同因素(如包括遺傳和飲食)而變化。

幾十年來(lái)，外科手術(shù)、化療和放射是針對(duì)各種癌癥的確立的治療?；颊咄ǔ＝邮苓@些治療的組合，這取決于他們疾病的類型和程度。但是，當(dāng)外科手術(shù)治療(即摘除患病組織)是不可能時(shí)，對(duì)于癌癥患者而言化療是最重要的選項(xiàng)。盡管外科手術(shù)有時(shí)有效摘除位于某些部位(例如，位于乳房、結(jié)腸和皮膚)的腫瘤，但是其不能用于治療位于其他區(qū)域(如脊柱)的腫瘤，也不能用于治療彌散性的血液學(xué)癌癥，包括血液和形成血液的組織(如骨髓)的癌癥。它們包括多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤和白血病。放射療法涉及將活組織暴露于電離輻射，導(dǎo)致被暴露的細(xì)胞的死亡或損傷。放射療法的副作用可以是急性的和暫時(shí)性的，而其他可能是不可逆的?；熒婕捌茐募?xì)胞復(fù)制或細(xì)胞代謝。其最經(jīng)常地用于治療乳腺癌、肺癌和睪丸癌。該癌癥治療失敗的主要原因之一是癌細(xì)胞的耐藥性形成，這是可能導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)或甚至死亡的一個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題。因此，需要更有效的癌癥治療。

多發(fā)性骨髓瘤是一個(gè)顯著和正在增長(zhǎng)的問(wèn)題。它是由漿細(xì)胞產(chǎn)生的癌癥。正常漿細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白來(lái)抗擊感染。在骨髓瘤中，漿細(xì)胞變得異常的、失控地增殖并且僅釋放一種類型的抗體-已知為副蛋白-其不具有有益功能。它傾向于在骨髓中累積并且在血液中循環(huán)，并且也可以在尿中檢測(cè)到。它影響其中骨髓在成人中具有正?；钚缘捏w內(nèi)多個(gè)部位(因此‘多發(fā)性’骨髓瘤)。多發(fā)性骨髓瘤(或其也稱作骨髓瘤)的主要形式有活躍骨髓瘤(active myeloma)、漿細(xì)胞瘤、輕鏈型骨髓瘤和非分泌性骨髓瘤。在2011年美國(guó)的新增骨髓瘤病例的數(shù)目為每年每100,000個(gè)男人和女人中6.1個(gè)，五年生存百分率為45％。預(yù)計(jì)在2014年美國(guó)新增病例的數(shù)目將超過(guò)24,000(所有癌癥病例的1.4％)，而在2014年的死亡數(shù)目將剛好超過(guò)11,000(所有癌癥病例的1.9％)。

在WO-A-2010/085377中，證明式I的化合物具有優(yōu)異的針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的體外活性，活性在比苯達(dá)莫司汀(bendamustin)所示活性高□35-100的范圍內(nèi)。

白血病是一類血液或骨髓癌癥，特征在于未成熟白細(xì)胞(稱為“胚細(xì)胞”)的異常增加。身體產(chǎn)生大量的這些無(wú)功能的胚細(xì)胞，而不是產(chǎn)生正常的、有功能的白細(xì)胞以抗擊感染。白血病是涵蓋廣譜疾病的寬泛術(shù)語(yǔ)。它又是甚至更寬泛的一組影響血液、骨髓和淋巴樣系統(tǒng)的疾病(它們?nèi)糠Q為血液腫瘤)的一部分。最常見(jiàn)形式有急性成淋巴細(xì)胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)、急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)和慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)，較不常見(jiàn)的形式包括多毛細(xì)胞白血病(hairy cell leukemia，HCL)、T細(xì)胞前淋巴細(xì)胞白血病(T-cell prolymphocytic leukemia，T-PLL)、巨粒淋巴細(xì)胞白血病(large granular lymphocytic leukemia)和T細(xì)胞急性成淋巴細(xì)胞性白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia)。預(yù)計(jì)在2014年美國(guó)新增病例將超過(guò)52,000(美國(guó)所有新增癌癥的3.1％)，超過(guò)24,000死亡(美國(guó)所有癌癥死亡的4.1％)。五年生存百分率目前為57.2％，該數(shù)字顯著低于許多其他癌癥，急性髓細(xì)胞白血病的五年存活率特別低，僅為20％。

淋巴瘤是一種淋巴系統(tǒng)的癌癥。存在兩種主要類型的淋巴瘤，即霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)和非霍奇金淋巴瘤(non Hodgkin lymphoma)。

非霍奇金淋巴瘤是最常見(jiàn)的淋巴瘤形式。淋巴系統(tǒng)貫穿身體運(yùn)行，因此可能在幾乎身體所有部分發(fā)現(xiàn)非霍奇金淋巴瘤。在非霍奇金淋巴瘤患者中，它們的白細(xì)胞中的一些(淋巴細(xì)胞)異常分裂。它們不具有像正常細(xì)胞那樣的任何靜止時(shí)間，它們開(kāi)始持續(xù)分裂，因此生產(chǎn)過(guò)多。它們不像它們通常那樣自然死亡。這些細(xì)胞在它們完全成熟之前開(kāi)始分裂，因此不能與正常白細(xì)胞一樣抵抗感染。所有的異常淋巴細(xì)胞開(kāi)始在淋巴結(jié)或其他地方如骨髓或脾臟中聚集。然后，它們可以生長(zhǎng)為腫瘤并且開(kāi)始在它們生長(zhǎng)所在的淋巴系統(tǒng)或器官內(nèi)導(dǎo)致問(wèn)題。例如，如果淋巴瘤在甲狀腺中起始，則它可以影響甲狀腺激素的正常生產(chǎn)。存在許多不同類型的非霍奇金淋巴瘤。它們可以以幾種不同方式分類。一種方式是通過(guò)受影響的細(xì)胞的類型。在非霍奇金淋巴瘤中，兩種類型的淋巴細(xì)胞可以被影響-B細(xì)胞和T細(xì)胞。這分類為B細(xì)胞淋巴瘤或T細(xì)胞淋巴瘤。大多數(shù)具有非霍奇金淋巴瘤的人具有B細(xì)胞淋巴瘤。T細(xì)胞淋巴瘤在青少年和年輕人中更常見(jiàn)。

霍奇金淋巴瘤細(xì)胞在顯微鏡下具有特殊的外觀。這些細(xì)胞稱為里-施(Reed Stemberg)細(xì)胞。非霍奇金淋巴瘤不具有里-施細(xì)胞。對(duì)于醫(yī)生而言，重要的是能夠分辨出霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞之間的差異，因?yàn)樗鼈兪莾煞N不同的疾病。在霍奇金淋巴瘤中，淋巴結(jié)中的細(xì)胞是癌變的。

在2009年非霍奇金淋巴瘤患者的5年存活率％是63％，而霍奇金淋巴瘤的那些在相同期間的存活率為83％。

乳腺癌是乳房組織中形成的癌癥。最常見(jiàn)的乳腺癌類型是導(dǎo)管癌，其在輸乳管(將乳汁從乳房小葉輸送至乳頭的細(xì)管)內(nèi)膜中開(kāi)始。另一種類型的乳腺癌是小葉癌，其在乳房的小葉(乳腺)中開(kāi)始。乳腺癌可以分成亞類，如低密蛋白(claudin-low)腫瘤、基底細(xì)胞樣(basal-like)腫瘤、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)陽(yáng)性腫瘤、luminal A型腫瘤和luminal B型腫瘤。浸潤(rùn)性乳腺癌是已經(jīng)從其在乳腺導(dǎo)管或小葉中起始之處擴(kuò)散至周圍正常組織的乳腺癌。乳腺癌在男人和女人中都發(fā)生，但是男性乳腺癌很少。在2014年，估計(jì)有將近233,00個(gè)新增女性病例和2,400個(gè)男性病例，40,00個(gè)女性死亡和僅超過(guò)400個(gè)男性死亡。

每100個(gè)乳腺癌女性中約15個(gè)具有三陰性乳腺癌，即是雌激素陰性的，孕酮陰性的和HER2陰性的。復(fù)發(fā)性三陰性乳腺癌是一種醫(yī)療需要高度未滿足的病癥，這是由于其具有侵襲性的生物學(xué)、耐藥性的快速發(fā)展和缺乏分子靶標(biāo)導(dǎo)致。直至現(xiàn)在，化療仍然是晚期三陰性乳腺癌的護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)，中位整體存活率很差。在WO-A-2010/085377中，公開(kāi)了以下式I的化合物。它是首創(chuàng)一類(first-in-class)雙功能烷基化-HDACi融合分子，其有效地抑制HDAC途徑。

生物學(xué)測(cè)定顯示，式I的化合物有效地抑制HDAC酶(HDAC1 IC₅₀為9nM)，并且已經(jīng)顯示具有針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的優(yōu)異的體外活性。

需要更有效的癌癥治療，包括治療乳腺癌和血液學(xué)癌癥，如多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。目前，這些病癥影響許多人，并且對(duì)于這些病癥中的許多中長(zhǎng)期預(yù)后并不好。

發(fā)明概述

在本發(fā)明的第一方面，提供了包含III類受體酪氨酸激酶抑制劑和式I的化合物或其藥用鹽的組合：

我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，式I的化合物或其藥用鹽和III類受體酪氨酸激酶抑制劑如quizartinib的組合在治療癌癥如血液學(xué)癌癥(例如，白血病，淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤)和乳腺癌中特別有效，因此它們非常有希望來(lái)努力解決發(fā)現(xiàn)更有效的癌癥治療的問(wèn)題。

在本發(fā)明的第二方面，提供了藥物組合物，其包含藥用稀釋劑或載體和根據(jù)本發(fā)明第一方面的組合。

在本發(fā)明的第三方面，提供了試劑盒，其包含根據(jù)本發(fā)明第一方面的組合和任選地，治療患者的使用說(shuō)明。

在本發(fā)明的第四方面，提供了根據(jù)本發(fā)明第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒，其用于治療癌癥，如血液學(xué)癌癥和乳腺癌。

在本發(fā)明的第五方面，提供了在有此需要的患者中治療癌癥的方法，其包括向所述患者施用根據(jù)本發(fā)明第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒。

附圖描述

圖1是對(duì)于每種測(cè)試的化合物，在單一化合物測(cè)試中(EDO-S101vs順鉑和quizartinib vs順鉑)，作為對(duì)照％的體外MV-4-11急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞存活％針對(duì)log IC50的圖表；

圖2是對(duì)于每種測(cè)試的化合物，在單一化合物測(cè)試中以及對(duì)于組合(EDO-S101，quizartinib及其組合)，作為對(duì)照％的體外MV-4-11急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞存活％針對(duì)log IC50的圖表；

圖3是對(duì)于每種測(cè)試的化合物，在單一化合物測(cè)試中(EDO-S101vs順鉑，quizartinib和EDO-S101vs quizartinib)，作為對(duì)照％的體外Molm-13急性髓性白血病細(xì)胞存活％針對(duì)log IC50的圖表；和

圖4是對(duì)于每種測(cè)試的化合物，在單一化合物測(cè)試中以及對(duì)于組合(EDO-S101，quizartinib及其組合)，作為對(duì)照％的體外Molm-13急性髓性白血病細(xì)胞存活％針對(duì)log IC50的圖表。

發(fā)明詳述

在本發(fā)明中，使用許多通用術(shù)語(yǔ)和措詞，其應(yīng)該如下解釋。

“動(dòng)物”包括人，非人哺乳動(dòng)物(例如，狗，貓，兔，牛，馬，綿羊，山羊，豬，鹿等)和非哺乳動(dòng)物(例如，鳥等)。

“藥用鹽”是指本發(fā)明化合物的鹽，其是藥學(xué)上可接受的，如上定義，并且具有所需的藥理學(xué)活性。這些鹽包括與無(wú)機(jī)酸或與有機(jī)酸形成的酸加成鹽。藥用鹽還包括堿加成鹽，其當(dāng)存在的酸性質(zhì)子能夠與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)時(shí)可以形成。通常，這樣的鹽可以例如通過(guò)將游離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計(jì)算量的適當(dāng)?shù)膲A或酸在水中或在有機(jī)溶劑中或在這兩者的混合物中反應(yīng)來(lái)制備。通常，優(yōu)選非水性介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。酸加成鹽的實(shí)例包括無(wú)機(jī)酸加成鹽，如例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，氨基磺酸鹽，硝酸鹽，磷酸鹽，和有機(jī)酸加成鹽，如例如乙酸鹽，三氟乙酸鹽，馬來(lái)酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，水楊酸鹽，甲苯磺酸鹽，乳酸鹽，萘磺酸鹽，蘋果酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實(shí)例包括無(wú)機(jī)鹽，如例如，鈉、鉀、鈣和銨鹽，和有機(jī)堿鹽，如例如乙二胺、乙醇胺、N，N-二亞烷基乙醇胺、三乙醇胺和堿性氨基酸鹽。

已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，式I的化合物或其藥用鹽和III類受體酪氨酸激酶抑制劑如quizartinib的組合在治療癌癥方面特別有效，所述癌癥包括血液學(xué)癌癥如多發(fā)性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤，和乳腺癌，因此它們高度有希望用于解決發(fā)現(xiàn)更有效的癌癥治療的問(wèn)題。

在本發(fā)明的組合中，式I的化合物的藥用鹽可優(yōu)選為鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，氨基磺酸鹽，硝酸鹽，磷酸鹽，檸檬酸鹽，甲磺酸鹽，三氟乙酸鹽，谷氨酸鹽，葡糖醛酸鹽，戊二酸鹽，蘋果酸鹽，馬來(lái)酸鹽，琥珀酸鹽，富馬酸鹽，酒石酸鹽，甲苯磺酸鹽，水楊酸鹽，乳酸鹽，萘磺酸鹽或乙酸鹽，并且更優(yōu)選乙酸鹽。

在本發(fā)明的組合中，III類受體酪氨酸激酶抑制劑優(yōu)選為選自以下的III類酪氨酸受體激酶的抑制劑：FMS-相關(guān)酪氨酸激酶3(FLT3/STK1)、集落刺激因子1受體(CSF-1R)、干細(xì)胞因子受體(SCFR)和血小板來(lái)源的生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)。

優(yōu)選地，所述III類受體酪氨酸激酶抑制劑是選自由以下組成的組的FMS-相關(guān)酪氨酸激酶3(FLT3)抑制劑：quizartinib、舒尼替尼、linifanib、foretinib、星狀孢子素(staurosporine)和坦度替尼(tandutinib)，并且更優(yōu)選其為quizartinib。

在另一個(gè)優(yōu)選的包含式I的化合物或其藥用鹽和III類受體酪氨酸激酶抑制劑的本發(fā)明的組合中，所述組合可以進(jìn)一步包含一種或多種另外的藥物活性劑。特別適合的藥用活性劑是與所述式I的化合物或其藥用鹽和III類受體酪氨酸激酶抑制劑具有不同作用模式的抗腫瘤劑，例如烷化劑，如亞硝基脲(nitrosureas)、乙烯亞胺(ethylenimines)、烷基磺酸鹽、肼和三嗪，和基于鉑的藥劑；植物生物堿、紫杉烷類、長(zhǎng)春花生物堿；抗腫瘤抗生素，如色霉素、蒽環(huán)霉素，和其他抗生素，如絲裂霉素和博來(lái)霉素；抗代謝藥，如葉酸拮抗劑，嘧啶拮抗劑，嘌呤拮抗劑和腺苷脫氨酶抑制劑；糖皮質(zhì)激素如地塞米松；蛋白酶體抑制劑如硼替佐米(bortezomib)和卡非佐米(carfilzomib)，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，如拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，其他抗腫瘤劑如核糖核苷酸還原酶抑制劑，腎上腺皮質(zhì)類固醇抑制劑，抗微管劑和維甲類；蛋白激酶；熱休克蛋白，多-ADP(腺苷二磷酸)-核糖聚合酶(PARP)、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)、蛋白酶體、Wnt/Hedgehog/Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、TNF-α、基質(zhì)金屬蛋白酶、法呢基轉(zhuǎn)移酶、凋亡途徑、組蛋白脫乙?；?HDAC)、組蛋白?；D(zhuǎn)移酶(HAT)和甲基轉(zhuǎn)移酶；激素療法、血管破壞劑、基因治療、RNAi癌癥療法、化學(xué)保護(hù)劑、抗體綴合物、癌癥免疫療法如白介素-2、癌癥疫苗或單克隆抗體；和優(yōu)選地DNA損傷劑、抗代謝藥、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗微管劑、糖皮質(zhì)激素、蛋白酶體抑制劑、EGFR抑制劑、HER2抑制劑、VEGFR2抑制劑、BRAF抑制劑、Bcr-Ab1抑制劑、PDGFR抑制劑、ALK抑制劑、PLK抑制劑、MET抑制劑、表觀遺傳學(xué)藥物、HSP90抑制劑、PARP抑制劑、CHK抑制劑、芳香酶抑制劑、雌激素受體拮抗劑和靶向VEGF、HER2、EGFR、CD50、CD20、CD30、CD33等的抗體。

在本發(fā)明組合的一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合的式I的化合物或其藥用鹽和III類受體酪氨酸激酶抑制劑適合同時(shí)、順序或分開(kāi)施用。優(yōu)選地，所述組合的式I的化合物或其藥用鹽和III類受體酪氨酸激酶抑制劑適合于同時(shí)施用。

在本發(fā)明組合的一個(gè)實(shí)施方案中，所述III類受體酪氨酸激酶抑制劑是quizartinib并且所述式I的化合物或其藥用鹽是

或其乙酸鹽。

在本發(fā)明的組合中，所述III類受體酪氨酸激酶抑制劑與式I的化合物或其藥用鹽的摩爾比典型地為1∶2000至2000∶1。優(yōu)選地，在所述組合中，III類受體酪氨酸激酶抑制劑與式I的化合物或其藥用鹽的摩爾比為1∶2000至1∶100，更優(yōu)選在所述組合中，III類受體酪氨酸激酶抑制劑與式I的化合物或其藥用鹽的摩爾比為1∶1000至1∶500，并且最優(yōu)選其為1∶900至1∶500，例如1∶900，1∶800，1∶700，1∶600或1∶500。

一個(gè)特別優(yōu)選的本發(fā)明的組合包含式I的化合物或其乙酸鹽和quizartinib，其中在所述組合中，quizartinib與式I的化合物或其乙酸鹽的摩爾比為1∶900至1∶500，例如1∶900，1∶800，1∶700，1∶600或1∶500。

已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，許多包含quizartinib和式I的化合物或其藥用鹽的組合是協(xié)同組合。換句話說(shuō)，該組合的功效已經(jīng)使用Calcusyn軟件(biosoft，F(xiàn)erguson，MO，USA)測(cè)量，所述軟件是基于Chou Talay方法(Chou等，Adv.Enzyme Regul.，22，27-55(1984))，所述方法計(jì)算具有以下解釋的組合指數(shù)(CI)：

CI 1＞1：拮抗作用，CI＝1：加和作用，和CI＜1協(xié)同作用。

對(duì)于許多包含quizartinib和式I的化合物或藥用鹽的本發(fā)明的二元組合，發(fā)現(xiàn)CI小于1，表明協(xié)同作用。

根據(jù)本發(fā)明第二方面的藥物組合物包含藥用稀釋劑或載體和根據(jù)本發(fā)明第一方面的組合。第二方面的優(yōu)選組合物包括包含以上描述和例舉的本發(fā)明的優(yōu)選組合的那些。

根據(jù)本發(fā)明第二方面的藥物組合物的藥用稀釋劑或載體可以是任何適當(dāng)?shù)姆稚x形劑，輔劑，或用作本發(fā)明組合活性劑的載體并且不干擾所述組合中存在的活性劑的其他材料。典型的藥用載體和稀釋劑的實(shí)例可以參見(jiàn)E.W.Martin的"Remington′s Pharmaceutical Sciences"，這些包括水，鹽水，葡萄糖溶液，血清溶液，林格氏溶液、聚乙二醇(例如PEG400)，表面活性劑(例如Cremophor)，環(huán)多糖(例如，羥丙基-β-環(huán)糊精或磺丁基醚β-環(huán)糊精)、聚合物、脂質(zhì)體、膠束、納米球等。

在本發(fā)明的第三方面，提供試劑盒，其包含根據(jù)本發(fā)明第一方面的組合和任選地治療患者的使用說(shuō)明。典型地，試劑盒可以包含式I的化合物或其藥用鹽和III類受體酪氨酸激酶抑制劑以及治療患者的使用說(shuō)明。每種活性劑可以在適當(dāng)?shù)娜萜髦刑峁Ｔ噭┖锌梢粤硗獍f送系統(tǒng)，其例如用于式I的化合物或其藥用鹽和III類受體酪氨酸激酶抑制劑或它們的組合。

使用說(shuō)明可以建議根據(jù)諸如以下變量同時(shí)、順序或分開(kāi)施用所述III類受體酪氨酸激酶抑制劑和式I的化合物或其藥用鹽：被治療的具體病癥，病癥狀態(tài)，使用的具體化合物的活性；使用的具體組合；患者的年齡，體重，整體健康，性別和飲食；給藥時(shí)間，給藥途徑和使用的具體化合物的排泄率；治療持續(xù)時(shí)間；與使用的具體化合物組合或同時(shí)使用的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域公知的類似因素。

根據(jù)本發(fā)明第三方面的優(yōu)選試劑盒包括包含如上所述和例舉的本發(fā)明優(yōu)選組合的那些。

在本發(fā)明的第四方面中，提供了根據(jù)本發(fā)明第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒，其用于治療癌癥。

在本發(fā)明的第五方面中，提供了在有此需要的患者中治療癌癥的方法，其包括向所述患者施用根據(jù)本發(fā)明第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒在體內(nèi)和體外針對(duì)各種各樣的腫瘤細(xì)胞類型都是高度有效的。本發(fā)明的這些二元組合和本發(fā)明的組合物和試劑盒中的組合顯示的抗腫瘤活性在許多情況下不僅僅是加和的，而是顯示顯著小于1的組合指數(shù)CI，表明這些組合的協(xié)同作用。這種出人意料的發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步支持本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒在治療癌癥中特別有效。

通過(guò)本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒能夠治療的癌癥的實(shí)例包括血液學(xué)癌癥如多發(fā)性骨髓瘤，淋巴瘤和白血病，乳腺癌，肺癌，結(jié)直腸癌，前列腺癌，睪丸癌，胰腺癌，肝癌，胃癌，膽管癌，食道癌，胃腸道基質(zhì)瘤，宮頸癌，卵巢癌，子宮癌，腎癌，黑素瘤，基底細(xì)胞癌，鱗狀細(xì)胞癌，膀胱癌，肉瘤，間皮瘤，胸腺瘤，骨髓增生異常綜合征，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和骨髓增生性疾病。具體地，本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒針對(duì)血液學(xué)癌癥如多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤和白血病和乳腺癌有效。

在根據(jù)本發(fā)明第四方面用于治療癌癥的組合、組合物或試劑盒或根據(jù)本發(fā)明第五方面的治療方法的一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥選自血液學(xué)癌癥和乳腺癌。

當(dāng)本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒用于治療血液學(xué)癌癥時(shí)，這可以優(yōu)選選自多發(fā)性骨髓瘤(例如，活躍骨髓瘤(active myeloma)、漿細(xì)胞瘤(plasmacytoma)、輕鏈型骨髓瘤(light chain myeloma)或非分泌性骨髓瘤(non-secretory myeloma))，淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)和白血病[急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、急性髓細(xì)胞白血病(AML，包括成髓細(xì)胞白血病，急性前髓細(xì)胞白血病，急性髓單核細(xì)胞白血病，急性單核細(xì)胞白血病，急性紅白血病和急性巨核細(xì)胞白血病，以及在包括復(fù)發(fā)和難治階段的所有階段中可治療的所有形式)、慢性髓性白血病(CML)、多毛細(xì)胞白血病(hairy cell leukemia，HCL)、T細(xì)胞前淋巴細(xì)胞白血病(T-PLL)、巨粒淋巴細(xì)胞白血病或T細(xì)胞急性成淋巴細(xì)胞性白血病]。特別優(yōu)選的是用于治療急性髓性白血病(AML)的組合。

當(dāng)本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒是用于治療乳腺癌時(shí)，乳腺癌可以典型地選自低密蛋白(claudin-low)腫瘤、基底細(xì)胞樣(basal-like)腫瘤、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)陽(yáng)性腫瘤、luminal A型腫瘤和luminal B型腫瘤，并且其優(yōu)選為三陰性乳腺癌。

在根據(jù)本發(fā)明用于治療癌癥的組合、組合物或試劑盒和根據(jù)本發(fā)明治療癌癥的方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，III類受體酪氨酸激酶抑制劑和式I的化合物或其藥用鹽被同時(shí)、順序或分開(kāi)施用。更優(yōu)選地，III類受體酪氨酸激酶抑制劑和式I的化合物或其藥用鹽被同時(shí)施用。

在用于治療癌癥的組合、組合物或試劑盒中和根據(jù)本發(fā)明的治療癌癥的方法中，將式I的化合物或其藥用鹽典型地以10至100mg/kg患者體重的劑量范圍，和優(yōu)選以40至80mg/kg患者體重的劑量范圍，施用于有此需要的患者。典型地，將III類受體酪氨酸激酶抑制劑以0.01至1mg/kg患者體重的劑量范圍施用，并且優(yōu)選地，將其以0.1至0.25mg/kg患者體重的劑量范圍施用。

根據(jù)本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒的治療有效量是所述組合、組合物或試劑盒的以下量，所述量以適用于任何藥物治療的合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比賦予所治療的受試者以根據(jù)本發(fā)明第四和第五方面的治療效果。治療效果可以是客觀的(即，通過(guò)某種測(cè)試或標(biāo)記可測(cè)量的)或主觀的(即，受試者給出效果指示或感覺(jué))。認(rèn)為根據(jù)本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒的有效量是這樣的量，其中式I的化合物或其鹽以10至100mg/kg患者體重(例如40至80mg/kg體重如40、50、60、70或80mg/kg體重)的劑量范圍包括在組合中，并且III類受體酪氨酸激酶抑制劑以0.1至0.25mg/kg患者體重(例如0.1，0.15，0.2或0.25mg/kg患者體重)的劑量范圍施用。

有效量將根據(jù)給藥途徑以及與其他活性劑的共同使用的可能性而變化。然而，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒的總?cè)談┝繉⒂芍髦吾t(yī)師在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)決定。對(duì)于任何具體患者的特定治療有效劑量水平將取決于各種因素而變化，所述因素包括被治療的病癥和病癥嚴(yán)重性；使用的具體化合物的活性；使用的具體組合；患者的年齡，體重，整體健康，性別和飲食；給藥時(shí)間，給藥途徑和使用的具體化合物的排泄率；治療持續(xù)時(shí)間；與使用的具體化合物組合或同時(shí)使用的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域公知的類似因素。

本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療癌癥，例如用于治療血液學(xué)癌癥或乳腺癌。

本發(fā)明組合、組合物或試劑盒的適當(dāng)給藥形式的實(shí)例非限制性地包括口服、局部、腸胃外、舌下、直腸、陰道、經(jīng)眼和鼻內(nèi)。腸胃外給藥包括皮下注射，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、胸骨內(nèi)注射或輸注技術(shù)。優(yōu)選地，將所述組合、組合物和試劑盒腸胃外施用?？梢耘渲票景l(fā)明的組合、組合物和試劑盒，以便允許本發(fā)明的組合或組合物在將組合、組合物或試劑盒施用于動(dòng)物(優(yōu)選人)之后可生物利用。組合物可以采用一個(gè)或多個(gè)劑量單位的形式，其中例如，片劑可以是單劑量單位，氣溶膠形式的本發(fā)明的組合或組合物的容器可以容納多個(gè)劑量單位。

優(yōu)選地，本發(fā)明的組合以試劑盒的形式提供。典型地，試劑盒包括式I的化合物或其藥用鹽和III類受體酪氨酸激酶抑制劑。在某些實(shí)施方案中，試劑盒可以包括一種或多種遞送系統(tǒng)，例如III類受體酪氨酸激酶抑制劑、式I的化合物或其藥用鹽或它們的組合，和使用試劑盒的指導(dǎo)(例如，治療受試者的使用說(shuō)明)。這些指示/使用說(shuō)明可以建議根據(jù)以下變量同時(shí)、順序或分開(kāi)施用所述組合的III類受體酪氨酸激酶抑制劑和式I的化合物或其藥用鹽，所述變量諸如被治療的具體病癥，病癥狀態(tài)，使用的具體化合物的活性；使用的具體組合；患者的年齡，體重，整體健康，性別和飲食；給藥時(shí)間，給藥途徑和使用的具體化合物的排泄率；治療持續(xù)時(shí)間；與使用的具體化合物組合或同時(shí)使用的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域公知的類似因素。

藥用稀釋劑或載體可以是顆粒的，以便組合物是例如片劑或粉劑形式。載體可以是液體，所述組合、組合物或試劑盒是例如口服糖漿或注射液。另外，載體可以是氣態(tài)的，以提供氣溶膠組合物，用于例如吸入器給藥。這樣的藥用載體可以是液體，如水和油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來(lái)源的那些，如花生油，大豆油，礦物油，芝麻油等。載體可以是鹽水，阿拉伯樹膠，明膠，淀粉糊，滑石，角蛋白，膠態(tài)氧化硅，脲等。另外，可以使用輔助劑，穩(wěn)定劑，增稠劑，潤(rùn)滑劑和著色劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)施用于動(dòng)物時(shí)，本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒和藥用載體是無(wú)菌的。當(dāng)靜脈內(nèi)施用本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒時(shí)，水是優(yōu)選的載體。鹽水溶液和葡萄糖溶液和甘油溶液也可以用作液體載體，特別是用于注射液。適當(dāng)?shù)乃幱幂d體還包括賦形劑，如淀粉，葡萄糖，乳糖，蔗糖，明膠，麥芽，大米，面粉，白堊，硅膠，硬脂酸鈉，單硬脂酸甘油酯，滑石，氯化鈉，脫脂奶粉，甘油，丙二醇，水，乙醇等。本發(fā)明的組合物，如果需要，還可以含有少量的潤(rùn)濕劑或乳化劑，或pH緩沖劑。

當(dāng)意欲用于口服給藥時(shí)，組合、組合物或試劑盒可以是固體或液體形式，其中半固體、半液體、混懸液和凝膠形式被包括在本文中考慮為固體或液體的形式內(nèi)。

作為用于口服給藥的固體組合物，所述組合、組合物或試劑盒可以配制成粉末、顆粒、壓縮片劑、藥丸、膠囊、口香糖、糯米紙囊劑等形式。該固體組合物典型地含有一種或多種惰性稀釋劑，作為包含所有活性劑的單一片劑或作為各自包含本發(fā)明組合單一活性劑的多個(gè)分開(kāi)的固體組合物(在試劑盒的情形中)。另外，可以存在以下中的一種或多種：粘合劑如羧甲基纖維素，乙基纖維素，微晶纖維素，或明膠；賦形劑，如淀粉，乳糖或糊精，崩解劑，如海藻酸，海藻酸鈉，玉米淀粉等；潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂；助流劑，如膠體二氧化硅；甜味劑，如蔗糖或糖精；調(diào)味劑如薄荷油，水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑；和著色劑。

當(dāng)所述組合、組合物或試劑盒是膠囊形式(例如，明膠膠囊)時(shí)，除了上述類型的材料以外，它還可以含有液體載體，如聚乙二醇，環(huán)糊精或脂肪油。

所述組合，組合物或試劑盒可以是液體形式，例如酏劑、糖漿、溶液劑、乳劑或混懸劑。該液體可以用于口服給藥或者用于注射遞送。當(dāng)意欲用于口服給藥時(shí)，組合、組合物或試劑盒可以包含甜味劑、防腐劑、染料/著色劑和增香劑中的一種或多種。在用于注射給藥的組合或組合物中，還可以包括表面活性劑、防腐劑、潤(rùn)濕劑、分散劑、懸浮劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑和等張劑中的一種或多種。

優(yōu)選的給藥途徑是腸胃外給藥，包括但不限于，皮內(nèi)，肌內(nèi)，腹膜內(nèi)，靜脈內(nèi)，皮下，鼻內(nèi)，硬膜外，鼻內(nèi)，腦內(nèi)，心室內(nèi)，鞘內(nèi)，陰道內(nèi)或透皮。優(yōu)選的給藥方式留待執(zhí)業(yè)醫(yī)生判斷，并且部分取決于醫(yī)學(xué)病癥的部位(如癌癥部位)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，靜脈內(nèi)施用本發(fā)明的當(dāng)前組合、組合物和試劑盒。

本發(fā)明的液體組合和組合物，無(wú)論它們是溶液、混懸液或其他類似形式，也可以包括以下中的一種或多種：無(wú)菌稀釋劑，如注射用水，鹽水溶液，優(yōu)選生理鹽水，林格氏溶液，等張氯化鈉，固定油，如合成甘油單酯或二酯，聚乙二醇，甘油，或其他溶劑；抗細(xì)菌劑，如苯甲醇，或?qū)αu基苯甲酸甲酯；和用于調(diào)節(jié)張力的試劑，如氯化鈉或右旋糖。腸胃外組合或組合物可以被包封在由玻璃、塑料或其他材料制成的安瓿管、一次性注射器或多劑量小瓶中。生理鹽水是優(yōu)選的輔劑。

對(duì)于給藥(例如靜脈內(nèi))，組合或組合物可以典型地包含劑量范圍為10至100mg/kg患者體重并且優(yōu)選40至80mg/kg患者體重的式I的化合物或其鹽。典型地，所述組合或組合物可以包含劑量范圍為0.1至1mg/kg患者體重和優(yōu)選0.1至0.25mg/kg患者體重的III類受體酪氨酸激酶抑制劑。

可以配制本發(fā)明的組合，以使所述組合的III類受體酪氨酸激酶抑制劑和式I的化合物或其藥用鹽適合于同時(shí)、順序或分開(kāi)施用。優(yōu)選地，將它們同時(shí)施用。

可以通過(guò)任何便利的途徑，例如通過(guò)輸注或推注，通過(guò)上皮或皮膚黏膜襯里吸收，施用本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒。

在具體實(shí)施方案中，理想的是將一種或多種本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒或者組合、組合物或試劑盒局部施用于需要治療的區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)直接注射于癌癥、腫瘤或腫瘤性(neoplastic)或前腫瘤性(pre-neoplastic)組織的部位(或之前的部位)來(lái)進(jìn)行給藥。

例如通過(guò)使用吸入器或霧化器，用霧化劑配制，或通過(guò)在碳氟化合物或合成的肺表面活性劑中灌注，也可以采用肺給藥。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒或組合物可以用傳統(tǒng)的粘合劑和載體如甘油三酯配制為栓劑。

本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒可以采取以下形式：溶液劑，混懸劑，乳劑，片劑，丸劑，小丸，膠囊，含有液體的膠囊，粉末劑，緩釋制劑，栓劑，乳劑，氣溶膠，噴霧劑，混懸劑，或適合使用的任何其他形式。適當(dāng)藥物載體的其他實(shí)例描述在E.W.Martin的"Remington′s Pharmaceutical Sciences″中。

藥物組合、組合物或試劑盒可以使用藥學(xué)領(lǐng)域公知的方法制備。例如，意欲通過(guò)注射施用的組合物可以通過(guò)將本發(fā)明的組合或組合物與水組合以形成溶液來(lái)制備?？梢约尤氡砻婊钚詣﹣?lái)促進(jìn)均勻溶液或混懸劑的形成。

本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒在治療癌癥方面特別有效。已經(jīng)顯示本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒在體內(nèi)和體外對(duì)于各種各樣的腫瘤細(xì)胞類型都具有高活性，使得它們特別有希望用于開(kāi)發(fā)在治療癌癥，例如血液學(xué)癌癥和乳腺癌中的用途。

實(shí)施例

在以下實(shí)施例中，將具有下式I的化合物稱為EDO-S101：

實(shí)施例1EDO-S101組合體外-急性髓性白血病細(xì)胞系MV-4-11

在補(bǔ)充有10％胎牛血清(FBS)的培養(yǎng)基中在37℃的溫度下在5％CO₂和95％濕度下培養(yǎng)急性髓性白血病細(xì)胞系MV-4-11(獲自ATCC)。培養(yǎng)基購(gòu)自GIBCO，USA。將細(xì)胞鋪平板于96-孔平底透明黑色聚苯乙烯TC處理微量滴定板(Cat#3603，)上。

測(cè)試的化合物是EDO-S101和quizartinib，以及參比對(duì)照順鉑。使用的裝置是EnVision多標(biāo)記讀取器，PerkinElmer(USA)。CO₂水套式培養(yǎng)箱，Therma(USA)。倒置顯微鏡，Chongguang XDS-1B，Chongqing Guangdian Corp.(Chongqing，P.R.China)。

在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期期間分別收獲細(xì)胞，并用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。通過(guò)錐蟲藍(lán)拒染法(trypan blue exclusion)，細(xì)胞存活率為98％以上。

對(duì)于單一藥物測(cè)試，用補(bǔ)充有10％FBS的培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整為4.44×10⁴個(gè)細(xì)胞/ml。將90μl細(xì)胞懸浮液加入96孔平板，以使最終細(xì)胞密度為4×10³個(gè)細(xì)胞/孔。按照我們第一次測(cè)試的結(jié)果，確定和調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度。

次日，制備10μl(10x)藥物溶液并將其分散在各孔中(每個(gè)藥物濃度一式三份)。在72小時(shí)溫育后，將100ul 試劑加入各孔。將內(nèi)容物在定軌搖床上混合2分鐘以誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。使得平板在室溫溫育10分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號(hào)。最后，使用EnVision多標(biāo)記讀取器記錄發(fā)光。

對(duì)于二種藥物組合測(cè)試，用補(bǔ)充有10％FBS的培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整為5.00×10⁴/ml。將80μl細(xì)胞懸浮液加入96孔平板，以使最終細(xì)胞密度為4×10³個(gè)細(xì)胞/孔。按照我們第一次測(cè)試的結(jié)果，確定和調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度。

次日，制備10μl(10x)的每種藥物溶液并同時(shí)分散在各孔中(每個(gè)濃度一式三份)。在72小時(shí)溫育后，將100ul試劑加入各孔。將內(nèi)容物在定軌搖床上混合2分鐘以誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。使得平板在室溫溫育10分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號(hào)。然后，使用EnVision多標(biāo)記讀取器記錄發(fā)光。

使用GraphPad Prism 5.0用圖表顯示數(shù)據(jù)。為了計(jì)算IC₅₀，使用具有S形劑量反應(yīng)的非線性回歸模型擬合劑量反應(yīng)曲線。存活率公式顯示如下，并且通過(guò)GraphPad Prism 5.0自動(dòng)生成IC₅₀。

存活率(％)＝(Lum_{測(cè)試物}-Lum_{培養(yǎng)基對(duì)照})/(Lum_未處理-Lum_{培養(yǎng)基對(duì)照})×100％。

化合物相互作用通過(guò)多藥效應(yīng)分析計(jì)算，并且按照Chou和Talalay(Chou等，Adv.Enzyme Regul.，22，27-55(1984))描述的方法，從每種藥物的每個(gè)藥物比率濃度下的平均影響分?jǐn)?shù)，通過(guò)中位數(shù)方程原理使用CalcuSyn軟件進(jìn)行，其計(jì)算具有以下解釋的組合指數(shù)(CI)：

CI＞1：拮抗作用，CI＝1：加和作用，和CI＜I協(xié)同作用。

從每種藥物的每個(gè)藥物比率濃度下的平均影響分?jǐn)?shù)，計(jì)算CI。

在圖1中的％存活細(xì)胞vs.測(cè)試藥物的對(duì)數(shù)濃度的圖表中(單一藥物測(cè)試)，對(duì)照順鉑和EDO-S101的IC₅₀值分別為0.9607和0.6675，而quizartinib和順鉑的那些分別為0.0008043和1.256。

圖2顯示了％存活細(xì)胞vs.測(cè)試藥物log IC₅₀的圖表，顯示了EDO-S101和quizartinib組合的優(yōu)異組合活性。這在以下表1中的CI值中證實(shí)：

表1

如可以從CI值中看出，EDO-S101和quizartinib的組合在其針對(duì)急性髓性白血病MV-4-11細(xì)胞系的活性方面顯示了協(xié)同作用。

實(shí)施例2EDO-S101組合體外-急性髓性白血病細(xì)胞系MOLM-13

在補(bǔ)充有10％FBS的培養(yǎng)基中在37℃的溫度下在5％CO₂和95％濕度下培養(yǎng)急性髓性白血病細(xì)胞系MOLM-13(獲自ATCC)。培養(yǎng)基購(gòu)自GIBCO，USA。將細(xì)胞鋪平板于96-孔平底透明黑色聚苯乙烯TC處理微量滴定板(Cat#3603，)上。

測(cè)試的化合物是EDO-S101和quizartinib，以及參比對(duì)照順鉑。使用的裝置是EnVision多標(biāo)記讀取器，PerkinElmer(USA)。CO₂水套式培養(yǎng)箱，Therma(USA)。倒置顯微鏡，Chongguang XDS-1B，Chongqing Guangdian Corp.(Chongqing，P.R.China)。

在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期期間分別收獲細(xì)胞，并用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。通過(guò)錐蟲藍(lán)拒染法，細(xì)胞存活率為98％以上。

對(duì)于單一藥物測(cè)試，用補(bǔ)充有10％FBS的培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整為4.44×10⁴個(gè)細(xì)胞/ml。將90μl細(xì)胞懸浮液加入96孔平板，以使最終細(xì)胞密度為4×10³個(gè)細(xì)胞/孔。按照我們第一次測(cè)試的結(jié)果，測(cè)定和調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度。

次日，制備10μl(10x)藥物溶液并分散在各孔中(每個(gè)藥物濃度一式三份)。在72小時(shí)溫育后，將100ul試劑加入各孔。將內(nèi)容物在定軌搖床上混合2分鐘以誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。使得平板在室溫溫育10分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號(hào)。最后，使用EnVision多標(biāo)記讀取器記錄發(fā)光。

對(duì)于二藥物組合測(cè)試，用補(bǔ)充有10％FBS的培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整為5.00×10⁴/ml。將80μl細(xì)胞懸浮液加入96孔平板，以使最終細(xì)胞密度為4×10³個(gè)細(xì)胞/孔。按照我們第一次測(cè)試的結(jié)果，測(cè)定和調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度。

次日，制備10μl(10x)的每種藥物溶液并同時(shí)分散在各孔中(每個(gè)濃度一式三份)。在72小時(shí)溫育后，將100ul試劑加入各孔。將內(nèi)容物在定軌搖床上混合2分鐘以誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。使得平板在室溫溫育10分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號(hào)。然后，使用EnVision多標(biāo)記讀取器記錄發(fā)光。

使用GraphPad Prism 5.0用圖表顯示數(shù)據(jù)。為了計(jì)算IC₅₀，使用具有S形劑量反應(yīng)的非線性回歸模型擬合劑量反應(yīng)曲線。存活率公式顯示如下，并且通過(guò)GraphPad Prism 5.0自動(dòng)生成IC₅₀。

存活率(％)＝(Lum_{測(cè)試物}-Lum_{培養(yǎng)基對(duì)照})/(Lum_未處理-Lum_{培養(yǎng)基對(duì)照})×100％。

化合物相互作用是通過(guò)多藥效應(yīng)分析計(jì)算的，并且按照Chou和Talalay描述的方法，從每種藥物的每個(gè)藥物比率濃度下的平均影響分?jǐn)?shù)，通過(guò)中位數(shù)方程原理使用CalcuSyn軟件進(jìn)行，其計(jì)算具有以下解釋的組合指數(shù)(CI)：

CI＞1：拮抗作用，CI＝1：加和作用，和CI＜1協(xié)同作用。

從每種藥物的每個(gè)藥物比率濃度下的平均影響分?jǐn)?shù)，計(jì)算CI。

在圖3中的％存活細(xì)胞vs.測(cè)試藥物的對(duì)數(shù)濃度的圖表中(單一藥物測(cè)試)，對(duì)照順鉑、EDO-S101和quizartinib的IC₅₀值分別為1.151、和0.7079和0.002112，而使用不同劑量(1∶2連續(xù)稀釋)的EDO-S101和quizartinib的那些分別為1.720和0.004546。

圖4顯示了％存活細(xì)胞vs.測(cè)試化合物log IC₅₀的圖表，顯示了EDO-S101和quizartinib組合的優(yōu)異組合活性。這在以下表2中的CI值中證實(shí)：

表2

如可以從CI值中看出，EDO-S101和quizartinib的組合在其針對(duì)急性髓性白血病MOLM-13細(xì)胞系的活性方面顯示了協(xié)同作用。

綜上，可以看出，式I的化合物(EDO-S101)與III類受體酪氨酸激酶抑制劑如quizartinib組合，在體外和體內(nèi)針對(duì)急性髓性白血病作用方面，都顯示了優(yōu)異的活性。另外，可以看出，這些組合的活性是出人意料地協(xié)同的。預(yù)期這些組合具有針對(duì)各種各樣的血液學(xué)癌癥(不僅僅白血病，而且有其他血液學(xué)病癥，如淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤)的活性。我們還認(rèn)為這些組合可能具有針對(duì)其他癌癥如乳腺癌的活性。

結(jié)果，預(yù)期本發(fā)明的式I的化合物與III類受體酪氨酸激酶抑制劑的組合可用于治療癌癥，特別是血液學(xué)癌癥和乳腺癌。