本申請(qǐng)案要求2014年5月2日提交的標(biāo)題為“用于抗LYST免疫調(diào)節(jié)的組合物和方法(CompositionsandMethodsForAnti-LystImmunomodulation)”的美國臨時(shí)申請(qǐng)案第61/987,910號(hào)的優(yōu)先權(quán)，所述申請(qǐng)案的內(nèi)容以全文引用的方式并入。序列表的引用序列表于2015年5月4日提交，呈文本文件形式，名稱為“NWCH100PCT_ST25.txt”，創(chuàng)建于2015年5月1日，且大小為51,000字節(jié)，所述序列表以引用的方式并入本文中。關(guān)于聯(lián)邦政府贊助的研究或開發(fā)的聲明本發(fā)明在政府支持下在由美國國家衛(wèi)生研究院(NationalInstitutesofHealth)授予克里斯托弗·布魯爾(ChristopherBreuer)的NIH撥款R01HL098228下進(jìn)行。政府擁有本發(fā)明中的某些權(quán)利。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域大體上涉及用于增強(qiáng)血管組織再生以及減少與新內(nèi)膜增生和纖維增生疾病相關(guān)的發(fā)病率和死亡率的組合物、裝置和方法。
背景技術(shù)：
：組織修復(fù)是一個(gè)復(fù)雜、逐步進(jìn)行的過程，其有助于對(duì)來自損傷部位處的局部促炎性細(xì)胞的刺激性細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)起反應(yīng)從而有序的移除和替換死亡或受損細(xì)胞(溫(Wynn)和拜倫(Baron),《肝病論文集(SeminLiverDis.)》,30(3):245-257(2010)；溫,《臨床研究(Clin.Invest.)》117:524-529(2007))。然而，當(dāng)組織修復(fù)反應(yīng)不當(dāng)或持續(xù)長時(shí)間(例如對(duì)慢性疾病或反復(fù)損傷起反應(yīng))時(shí)，正常的再生機(jī)制可導(dǎo)致由損傷部位處的過度新組織生長和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)組分累積引起的病理學(xué)狀態(tài)。在血管損傷部位處的發(fā)炎和促凝血機(jī)制的過度或反復(fù)活化被認(rèn)為會(huì)顯著促進(jìn)內(nèi)膜增生的發(fā)展。在病理學(xué)條件下，血管損傷使得內(nèi)皮細(xì)胞層剝脫，且觸發(fā)一系列特征在于產(chǎn)生各種生長因子和炎性細(xì)胞因子的急性和慢性炎性反應(yīng)(穆拉卡米(Murakami),《美國生理學(xué)雜志肺細(xì)胞分子生理學(xué)(AmJPhysiolLungCellMolPhysiol.)》,272:L197-L202(1997)；科特蘭(Cotran)等人,《美國腎臟病學(xué)會(huì)雜志(JAmSocNephrol)》,1:225-235(1990))。在針對(duì)冠狀動(dòng)脈和/或外周動(dòng)脈疾病的外科手術(shù)(如血管成形術(shù)和支架術(shù)、手術(shù)旁路或動(dòng)脈內(nèi)膜剝除術(shù))之后發(fā)生的內(nèi)膜增生可在高達(dá)80％患者中引起血管再狹窄(西達(dá)爾(Seedial)等人,《血管手術(shù)雜志(JVascSurg.)》,57(5):1403-1414(2013)；格拉戈夫(Glagov),《循環(huán)(Circulation)》,89:2888-2891(1994))。已展示新內(nèi)膜形成可因血管內(nèi)存在外來物質(zhì)(如假體)而加速，且不受控制的新內(nèi)膜增生為限制心血管介入的長期臨床效率的主要障礙(弗蘭克(Frank)等人,《當(dāng)前脂質(zhì)學(xué)觀點(diǎn)(Curr.Opin.Lipidol)》,15:523(2004))。另外，新內(nèi)膜形成與數(shù)種增殖心血管病的發(fā)展和進(jìn)展相關(guān)，包括動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓和糖尿病性血管并發(fā)癥。內(nèi)皮細(xì)胞層的再生抑制新內(nèi)膜的發(fā)展且有助于血管修復(fù)(包特斯(Bauters)等人,《心血管疾病進(jìn)展(Prog.Cardiovasc.Dis.)》,40:107-116(1997)；金利(Kinlay)等人,《當(dāng)前脂質(zhì)學(xué)觀點(diǎn)》,12:383(2001))。然而，目前可用的抗新內(nèi)膜藥物無差別地阻斷內(nèi)皮細(xì)胞(EC)和平滑肌細(xì)胞(SMC)兩者的增殖，引起重新內(nèi)皮化(re-endothelialiazation)受損且延長創(chuàng)傷愈合過程。仍然存在開發(fā)對(duì)SMC敏感的抗增殖策略的需求。對(duì)反復(fù)組織損傷的未經(jīng)調(diào)節(jié)的炎性反應(yīng)還可引起組織和器官(如皮膚、肝、心和肺)的病理學(xué)纖維化(黃(Huang)和小川(Ogawa),《結(jié)締組織研究(ConnectTissueRes.)》,53(3):187-196(2012))。肝臟組織的慢性破壞和發(fā)炎引起ECM蛋白累積，其導(dǎo)致過度疤痕形成且扭曲肝臟架構(gòu)，這又引起肝硬化和肝衰竭(拜特爾(Battler)和勃倫那(Brenner),《臨床研究雜志(JClinInvest.)》,115:209-218(2005))。同樣地，纖維化組織在肺內(nèi)的過度沉積引起肺架構(gòu)的進(jìn)行性結(jié)疤和不可逆破壞，其最終引起器官功能障礙、氣體交換擾亂以及因呼吸衰竭死亡?；罨难“逶黾影准?xì)胞粘附到受損內(nèi)皮，且經(jīng)由趨化因子沉積在內(nèi)皮上促進(jìn)白細(xì)胞活化。這允許白細(xì)胞牢固地附著到血管壁且轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮下組織中。然而，還已知血小板衍生趨化因子在新內(nèi)膜增殖、動(dòng)脈損傷后的再狹窄和動(dòng)脈粥樣硬化中起作用(錢德拉塞卡爾(Chandrasekar)等人,《美國心臟病學(xué)會(huì)雜志(JAmCollegeCardiology)》,第35卷,第3期,第555-562頁(2000))。具有異常血小板功能的某些患者群體，包括患有腎病、糖尿病和高脂質(zhì)血癥的患者群體也處在增加的再狹窄風(fēng)險(xiǎn)中。纖維增生病癥在美國為發(fā)病率和死亡率的主要原因(比特曼(Bitterman)和亨克(Henke),《胸(Chest)》,99(3):s81-s84(1991))。具體來說，肝病和肺纖維化疾病通常難以治療且?guī)砀咚劳雎?。已確立的肝硬化具有34-66％的10年死亡率，且僅在美國每年造成約27,000例死亡。特發(fā)性肺纖維化(IPF)的發(fā)生率經(jīng)評(píng)估為每100,000例在14與42.7例之間，且在近30年中這一數(shù)據(jù)在每十年計(jì)一直升高(奧爾森(Olson)等人,《美國呼吸與重癥護(hù)理醫(yī)學(xué)(AmJRespirCritCareMed.)》176:277-2843(2007)；格里賓(Gribbin)等人,《胸部(Thorax)》,61:980-985(2006))。目前，肝臟或肺纖維化的最有效治療為器官移植。因此，本發(fā)明的目標(biāo)為提供用于在個(gè)體中調(diào)節(jié)免疫過程以減少或預(yù)防新內(nèi)膜形成、狹窄、再狹窄或其組合的組合物、裝置、移植物和其使用方法。本發(fā)明的目標(biāo)還為提供用以在個(gè)體中減少或預(yù)防不當(dāng)或有害血小板活化的組合物、裝置、移植物和其使用方法。本發(fā)明的目標(biāo)還為提供用于在個(gè)體中減少或預(yù)防對(duì)可植入假體的免疫反應(yīng)的組合物、方法和裝置。本發(fā)明的進(jìn)一步目標(biāo)為提供用以在個(gè)體中促進(jìn)愈合且抑制疤痕形成、粘連和纖維增生疾病的組合物、方法和裝置。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：已確立溶酶體運(yùn)輸調(diào)節(jié)劑(lysosomaltraffickingregulator；“LYST”)蛋白的抑制與組織損傷部位處的減少的炎性反應(yīng)相關(guān)。描述用于抑制LYST蛋白的表達(dá)和功能的組合物和方法。所述組合物和方法可適用于通過改變巨噬細(xì)胞、血小板和自然殺傷細(xì)胞功能來調(diào)節(jié)會(huì)促進(jìn)形成新內(nèi)膜和纖維增生病癥的免疫過程，從而形成促再生免疫反應(yīng)。公開包括呈有效減少或預(yù)防個(gè)體的疤痕組織形成的量的一種或多種LYST抑制劑的組合物。還公開包括呈有效減少或預(yù)防個(gè)體的血小板活化的量的一種或多種LYST抑制劑的組合物。通常，所述組合物包括生理學(xué)上可接受的載劑。在優(yōu)選實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑的量不妨礙個(gè)體的血管新組織形成。通常，所述組合物包括量在每千克人類體重0.1mg與1000mg之間的一種或多種LYST抑制劑。在一個(gè)實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑為抗體。在另一實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑為功能核酸。例示性功能核酸包括反義分子、siRNA、miRNA、適體、核酶、形成三鏈體的分子、RNAi和外部引導(dǎo)序列。一種或多種功能核酸可表達(dá)自表達(dá)載體。在一些實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑的組合物包括遞送媒劑。例示性遞送媒劑包括納米粒子、微米粒子、膠束、合成脂蛋白粒子、脂質(zhì)體和碳納米管。所公開的組合物還可包括一種或多種其他治療劑。公開包括一種或多種LYST抑制劑的血管移植物和醫(yī)療裝置。在一些實(shí)施例中，將一種或多種LYST抑制劑的組合物涂布在移植物或裝置上或結(jié)合到移植物或裝置中。例示性醫(yī)療裝置包括支架、植入物、針、插管、導(dǎo)管、分流器、氣囊和瓣膜。醫(yī)療裝置可為支架，諸如洗脫一種或多種LYST抑制劑的組合物的藥物洗脫支架。例示性血管移植物包括自體、保藏自體、同種異體、異種或合成移植物。還提供減少或預(yù)防個(gè)體的疤痕組織形成的方法，其包括向有需要的個(gè)體投與包括一種或多種LYST抑制劑的組合物。在個(gè)體中減少或預(yù)防靜脈血栓形成或動(dòng)脈血栓形成的發(fā)展的方法包括向有需要的個(gè)體投與包括一種或多種LYST抑制劑的組合物。在一些實(shí)施例中，個(gè)體處于正在顯現(xiàn)或已顯現(xiàn)再狹窄或其他血管增殖病癥的風(fēng)險(xiǎn)中。在其他實(shí)施例中，個(gè)體已經(jīng)歷、正在經(jīng)歷或?qū)⒔?jīng)歷血管創(chuàng)傷、血管成形術(shù)、血管手術(shù)或移植動(dòng)脈病。所述方法可相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體在個(gè)體中促進(jìn)愈合；減少或預(yù)防肥大性疤痕、瘢痕瘤或粘連的發(fā)展；減少或預(yù)防肝纖維化、肺纖維化、心纖維化或腎纖維化；減少或預(yù)防新內(nèi)膜形成、狹窄或再狹窄；或其任何組合。所述方法可促進(jìn)一種或多種假體裝置的整合但阻止其囊封：所述假體裝置如起搏器、神經(jīng)刺激器、起搏器導(dǎo)線、替換心臟瓣膜和人工關(guān)節(jié)或其組件。所述方法可相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體有效在個(gè)體中治療或預(yù)防血管植入物的植入部位、血管損傷部位或手術(shù)部位處的新內(nèi)膜形成。所述方法可相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體在個(gè)體中有效減少或預(yù)防血小板衍生生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子β或其任何組合的表達(dá)。附圖說明圖1為展示在植入到米色小鼠(bg；黑色圖式)和野生型小鼠(WT；灰色圖式)中之后兩周生物可降解導(dǎo)管移植物內(nèi)的導(dǎo)管的直徑(mm)的直方圖。米色小鼠和野生型小鼠分別N＝10和N＝25。圖2為展示在植入之后兩周，分別從米色小鼠(Bg；灰色圖式)和野生型小鼠(WT；黑色圖式)取出的生物可降解導(dǎo)管移植物內(nèi)的巨噬細(xì)胞數(shù)目(細(xì)胞/HPF)的直方圖。P＝0.0048。圖3為展示野生型(WT)和米色(Bg)小鼠的外顯子52上的LYST基因中的核苷酸序列之間的差異(在頂部)的示意圖。WT和Bg小鼠的LYST蛋白的氨基酸序列之間的相應(yīng)差異還展示在氨基酸序列比對(duì)中(中間)。氨基酸序列比對(duì)(在底部)展示來自人類、小鼠和大鼠的LYST多肽的氨基酸序列之中的保守性。米色(Bg)小鼠的LYST內(nèi)的缺失的位置利用*指示。核酸和氨基酸使用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)單字母代碼呈現(xiàn)。圖4為直方圖，展示在分別獲自野生型小鼠(WT-1(1)；WT-2(2))、米色小鼠(米色-1(3)；米色-2(4))或標(biāo)準(zhǔn)“原始”細(xì)胞株(5)的細(xì)胞中，使用5種不同寡核苷酸引物(LYST-1、LYST-3、LYST-4、LYST-5和LYST-6)中的每一者擴(kuò)增的，對(duì)應(yīng)于LYST基因產(chǎn)物的mRNA的相對(duì)水平。圖5為展示在2周植入之后分別在C57BL/6(野生型)小鼠和C57BL/6Lysttmlb基因敲除小鼠(n＝5)中的狹窄發(fā)生率(％)的直方圖。***p＝0.0001。圖6為展示分別在靜息(對(duì)照)和凝血酶活化的C57BL/6(野生型)小鼠以及C57BL/6米色(Bg)小鼠中分泌自PRP的血小板衍生生長因子(PDGF)的量(μg/ml)的直方圖。將來自每一組(n＝7)的分泌的PDGF的總濃度與靜息、非活化的對(duì)照(n＝5)相比。具體實(shí)施方式I.定義術(shù)語“狹窄”是指在血管壁(內(nèi)皮)損傷之后發(fā)生的血管的異常變窄。在一些實(shí)施例中，狹窄涉及管腔的圓周減小50％或更大。術(shù)語“再狹窄”是指在介入程序之后血管或合成移植物的管腔的先前狹窄部位或變窄處的狹窄。如本文中所用，再狹窄涵蓋阻塞。引起狹窄或再狹窄的例示性損傷包括動(dòng)脈粥樣硬化病灶的創(chuàng)傷(如在血管成形術(shù)或支架的情況下可見)、病灶的切除術(shù)(如在動(dòng)脈內(nèi)膜剝除術(shù)的情況下可見)、外部創(chuàng)傷(例如夾叉夾緊損傷)或手術(shù)吻合術(shù)。術(shù)語“新內(nèi)膜狹窄”是指由新內(nèi)膜形成引起的血管的異常變窄。術(shù)語“新內(nèi)膜”是指對(duì)來自受損內(nèi)皮細(xì)胞的信號(hào)起反應(yīng)在血管中形成的內(nèi)膜(內(nèi)部襯壁)的再生或增厚層。術(shù)語“疤痕組織”和“疤痕”是指在損傷之后產(chǎn)生以替代受損組織的纖維組織。術(shù)語“纖維增生病癥”、“FPD”和“纖維化疾病”可互換地使用且包括由結(jié)締組織的異常和過度沉積引起的良性和惡性疾病或病況。術(shù)語“血小板活化”為對(duì)內(nèi)皮的組織損傷(如破壞或中斷)起反應(yīng)引起循環(huán)血小板的粘附和聚集的逐步生理過程。血小板活化引起趨化性因子(如血小板衍生生長因子(PDGF)和轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ))的表達(dá)和分泌?！搬t(yī)藥學(xué)上可接受的載劑”涵蓋標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥載劑中的任一種，如磷酸鹽緩沖鹽水溶液、水和乳液，如油/水或水/油乳液，和各種類型的濕潤劑?！耙种?inhibit)”或所述詞的其他形式(如“抑制(inhibiting)”或“抑制(inhibition)”)意指阻礙或限制具體特征。應(yīng)理解，這通常相對(duì)于一些標(biāo)準(zhǔn)或預(yù)期值的，即，其為相對(duì)的，但不必總是參考標(biāo)準(zhǔn)或相對(duì)值。舉例來說，“抑制LYST”意指相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)或?qū)φ?，阻礙、干擾或限制LYST基因的活性?！耙种芁YST”還可意指相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)或?qū)φ?，阻礙或限制LYST蛋白的合成、表達(dá)或功能?！爸委?treatment)”或“治療(treating)”意指向具有非所需情況(例如再狹窄或纖維增生病癥)的個(gè)體或體系投與組合物。所述病況可包括疾病?！邦A(yù)防(prevention)”或“預(yù)防(preventing)”意指向處于所述情況風(fēng)險(xiǎn)中的個(gè)體或體系投與組合物。所述情況可為易患疾病。向個(gè)體投與組合物的作用(治療和/或預(yù)防)可為(但不限于)病況的具體癥狀的停止，病況癥狀的減少或預(yù)防，病況嚴(yán)重度的減小，病況的完全除去，具體事件或特征的發(fā)展或進(jìn)展的穩(wěn)定或延遲，或?qū)l(fā)生的具體事件或特征的幾率降到最低。除非另外明確指示，否則如本文所用的術(shù)語“抗體”以最廣泛的意義使用。因此，“抗體”可為天然存在或人造的，如利用常規(guī)融合瘤技術(shù)產(chǎn)生的單克隆抗體。抗體包括單克隆和多克隆抗體，以及含有這些抗體的抗原結(jié)合域和/或一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)的片段。“抗體”是指任何形式的抗體或其抗原結(jié)合片段，且包括單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)和抗體片段。II.組合物已確立，組織修復(fù)的過程可通過操縱LYST基因的表達(dá)和功能來介導(dǎo)。確切地說，LYST基因產(chǎn)物功能的失去引起某些免疫細(xì)胞的功能異常，導(dǎo)致免疫功能喪失和增生性病癥的相關(guān)減少。可通過調(diào)節(jié)LYST基因或LYST蛋白影響的免疫細(xì)胞包括先天性免疫細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血小板。先天性免疫細(xì)胞包括發(fā)炎、移除受損細(xì)胞和碎片以及新組織發(fā)展和其他創(chuàng)傷修復(fù)機(jī)制的先天性免疫過程是對(duì)損傷的生理反應(yīng)的重要組成部分。組織修復(fù)具有四個(gè)不同階段，包括：a)凝血/凝集；b)發(fā)炎；c)成纖維細(xì)胞遷移/增殖；和d)其中恢復(fù)正常組織架構(gòu)的最終重塑期。在組織損傷之后的最早階段中，上皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞釋放炎性介體，所述炎性介體引發(fā)抗纖維蛋白溶解凝集級(jí)聯(lián)，觸發(fā)凝血和臨時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的發(fā)展。血小板的聚集和后續(xù)脫顆粒促進(jìn)血管擴(kuò)張且增加滲透性，允許炎性細(xì)胞(如嗜中性白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞)高效募集到受損組織。嗜中性白細(xì)胞為創(chuàng)傷愈合最早階段中最豐富的炎性細(xì)胞，但在嗜中性白細(xì)胞脫顆粒之后被巨噬細(xì)胞快速替換?；罨木奘杉?xì)胞和嗜中性白細(xì)胞清除創(chuàng)傷，消除任何侵入生物體，且產(chǎn)生多種會(huì)擴(kuò)大發(fā)炎性反應(yīng)以及觸發(fā)成纖維細(xì)胞增殖和募集的細(xì)胞因子和趨化因子。在活化后，成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化成分泌α-平滑肌肌動(dòng)蛋白和ECM組分的肌成纖維細(xì)胞。最后，在重塑期中，上皮/內(nèi)皮細(xì)胞分裂且遷移在臨時(shí)基質(zhì)之上以再生受損組織。因此，愈合和新組織生成是一個(gè)精細(xì)調(diào)節(jié)過程，其平衡再生組織和增厚血管壁的需求，且不過度增厚和狹窄或纖維化。巨噬細(xì)胞已展示，循環(huán)單核細(xì)胞和浸潤性巨噬細(xì)胞的存在對(duì)于創(chuàng)傷愈合和新組織發(fā)展來說至關(guān)重要(阿薩(Arras)等人,《臨床研究雜志(JClinInvest)》,101(1):40-50(1998))。然而，組織損傷部位處的巨噬細(xì)胞浸潤程度還與增生性調(diào)節(jié)異常和新內(nèi)膜形成相關(guān)(日比野(Hibino)等人,《美國實(shí)驗(yàn)生物學(xué)學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)雜志(FASEBJ.)》25(12):4253-63(2011))。另外，許多研究已指示，巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞是參與纖維化發(fā)病機(jī)制的主要效應(yīng)細(xì)胞(綜述在溫,《自然綜述·免疫學(xué)(NatRevImmunol.)》4(8):583-94(2004)中)。在血管破壞之后，炎性單核細(xì)胞(人類中的CD16-hi、CD64-hi和CD14-hi；小鼠中的CD115+、CD11b+和Ly6c-hi)募集到受損組織，且在暴露于局部生長因子、促炎性細(xì)胞因子和微生物化合物后，分化成活化的巨噬細(xì)胞(人類中的Emr1-hi；小鼠中的F4/80-hi)(蓋斯曼(Geissmann)等人,《科學(xué)(Science)》327:656-661(2010))。過度巨噬細(xì)胞浸潤引起狹窄，而巨噬細(xì)胞浸潤的完全抑制會(huì)預(yù)防新組織形成(日比野等人,《美國實(shí)驗(yàn)生物學(xué)學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)雜志》25(12):4253-63(2011))。巨噬細(xì)胞的極化活化的兩種不同狀態(tài)已經(jīng)定義：經(jīng)典活化的(M1)巨噬細(xì)胞表型和替代活化的(M2)巨噬細(xì)胞表型(戈登(Gordon)和泰勒(Taylor),《自然綜述·免疫學(xué)》5:953-964(2005)；曼托瓦尼(Mantovani)等人,《免疫學(xué)趨勢(shì)(TrendsImmunol.)》23:549-555(2002))。經(jīng)典活化的(M1)巨噬細(xì)胞的作用為TH1細(xì)胞免疫反應(yīng)中的效應(yīng)細(xì)胞，而替代活化的(M2)巨噬細(xì)胞似乎參與免疫抑制和創(chuàng)傷愈合/組織修復(fù)。M1和M2巨噬細(xì)胞具有不同趨化因子和趨化因子受體譜，且M1分泌吸引TH1細(xì)胞的趨化因子CXCL9和CXCL10，以及M2巨噬細(xì)胞表達(dá)趨化因子CCL17、CCL22和CCL24。M2巨噬細(xì)胞的存在已與新內(nèi)膜發(fā)展和狹窄相關(guān)(日比野等人,《美國實(shí)驗(yàn)生物學(xué)學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)雜志》25(12):4253-63(2011))。在組織移植物植入之后的某些時(shí)間點(diǎn)下的巨噬細(xì)胞浸潤程度、新組織形成和狹窄之間的相關(guān)性提供經(jīng)由調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞活性預(yù)防狹窄的手段。另外，巨噬細(xì)胞通常接近產(chǎn)生膠原蛋白的肌成纖維細(xì)胞細(xì)胞定位，且已展示單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞決定性地使損傷之后的炎性反應(yīng)保持為纖維化的先決條件(溫和拜倫,《肝病論文集》,30(3):245-257(2010))。巨噬細(xì)胞產(chǎn)生會(huì)活化成纖維細(xì)胞的促纖維化介體，包括血小板衍生生長因子(PDGF，一種強(qiáng)力趨化性因子)和轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)。確切地說，巨噬細(xì)胞的非經(jīng)典M2(CD14+、CD16+)子集的顯著增加已與罹患慢性肝病的患者的促炎性細(xì)胞因子和臨床進(jìn)展相關(guān)。在纖維化進(jìn)展期間，單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，使慢性發(fā)炎不斷進(jìn)行下去，以及直接活化肝星狀細(xì)胞(HSC)，導(dǎo)致其增殖且轉(zhuǎn)分化成產(chǎn)生膠原蛋白的肌成纖維細(xì)胞(齊默爾曼(Zimmermann)等人,《公共科學(xué)圖書館·綜合(PLOSOne)》,5(6):e11049(2010))。血小板聚集的血小板通過分泌化學(xué)物質(zhì)來輔助血管修復(fù)，所述化學(xué)物質(zhì)將成纖維細(xì)胞從周圍結(jié)締組織吸引到受傷區(qū)域中以愈合創(chuàng)傷或在失調(diào)的炎性反應(yīng)的情況下形成疤痕組織。對(duì)組織損傷起反應(yīng)，血小板變得活化且釋放眾多刺激細(xì)胞外基質(zhì)沉積的生長因子，如血小板衍生生長因子(PDGF，一種強(qiáng)力趨化性因子)以及轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)。這兩種生長因子已展示出在結(jié)締組織的修復(fù)和再生中起到重要作用。PDGF充當(dāng)主要有絲分裂原和化學(xué)引誘劑，其顯著加強(qiáng)成纖維細(xì)胞和炎性細(xì)胞的內(nèi)流，以及刺激細(xì)胞增殖和基因表達(dá)。PDGF允許白細(xì)胞牢固地附著到血管壁且最終轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮下組織中。然而，還已知血小板衍生的趨化因子誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞(SMC)增殖且在新內(nèi)膜增殖和器官纖維化中起作用(錢德拉塞卡爾等人,《美國心臟病學(xué)會(huì)雜志》,第35卷,第3期,第555-562頁(2000))。PDGF和其受體的表達(dá)增加與硬皮病肺和皮膚組織相關(guān)。確切地說，在硬皮病肺和皮膚成纖維細(xì)胞中存在自分泌PDGF-受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)環(huán)的證據(jù)，暗示硬皮病中的慢性纖維化中的TGF-β和PDGF兩種路徑(特羅揚(yáng)諾夫斯卡(Trojanowska),《風(fēng)濕病學(xué)(Rheumatology)》；47:v2-v4(2008))。另外，PDGF信號(hào)傳導(dǎo)的失調(diào)與心血管適應(yīng)癥(如肺高血壓和動(dòng)脈粥樣硬化)相關(guān)。對(duì)損傷誘導(dǎo)的PDGF起反應(yīng)的中層平滑肌細(xì)胞(SMC)增殖和遷移為促進(jìn)新內(nèi)膜增厚的必需事件(芬格勒(Fingerle)等人,《美國國家科學(xué)院院刊(ProcNatlAcadSci.)》,86:8412(1989)；克洛斯(Clowes)等人,《循環(huán)研究(Circ.Res.)》,56:139-145(1985))，其最終引起血管變窄和狹窄。由血小板釋放的其他愈合相關(guān)的生長因子包括堿性成纖維細(xì)胞生長因子、胰島素樣生長因子1、血小板衍生表皮生長因子和血管內(nèi)皮生長因子。因此，LYST基因和LYST蛋白的抑制劑可形成促再生免疫環(huán)境，增強(qiáng)創(chuàng)傷愈合且預(yù)防增生性病癥(如內(nèi)膜增生)、過度疤痕組織和纖維化疾病的發(fā)展。LYST的調(diào)節(jié)還可調(diào)節(jié)血小板活性和功能。因此，LYST基因和/或LYST蛋白的抑制劑可用于減少或預(yù)防血小板的生物學(xué)功能(如血小板凝集)和血小板衍生生長因子(PDGF)的產(chǎn)生/表達(dá)。公開了通過阻斷LYST蛋白的表達(dá)和/或功能來促進(jìn)組織再生且預(yù)防或減少特征在于形成過度疤痕組織的疾病的組合物。A.LYST溶酶體運(yùn)輸調(diào)節(jié)劑(LYST)基因產(chǎn)物為普遍存在的蛋白，其與胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到溶酶體中相關(guān)。已確立，減少或抑制LYST蛋白的功能的突變會(huì)干擾巨噬細(xì)胞的正常功能且還影響自然殺傷(NK)細(xì)胞和血小板的生物學(xué)活性。據(jù)相信，LYST蛋白的調(diào)節(jié)提供調(diào)節(jié)引起血管增殖病癥、新內(nèi)膜形成。纖維化和過度結(jié)疤的免疫過程的手段。1.LYST基因人類LYST基因位于染色體1(區(qū)段1q42.1-q42.2；堿基對(duì)235,661,030到235,883,707)(巴拉(Barrat)等人,《美國人類遺傳學(xué)雜志(Am.J.Hum.Genet)》,59:625-632(1996))。本領(lǐng)域中已知LYST基因產(chǎn)物的核酸序列。參見例如，NCBI參考序列：NM000081.3，智人(Homosapiens)溶酶體運(yùn)輸調(diào)節(jié)劑(LYST)，轉(zhuǎn)錄物變異體1，mRNA，其提供核酸序列：(SEQIDNO:1)。還公開了與SEQIDNO:1具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％氨基酸序列一致性的核苷酸序列。2.LYST蛋白LYST多肽為3,801個(gè)氨基酸的細(xì)胞質(zhì)蛋白(也稱為溶酶體運(yùn)輸調(diào)節(jié)劑，CHS蛋白，CHS1或LYST蛋白)，分子量為約429kDa(巴爾博薩(Barbosa)等人,《自然(Nature)》,382(6588):262-265(1996))。LYST蛋白以三種同工型中的一種存在且預(yù)測會(huì)采用螺旋結(jié)構(gòu)(巴爾博薩等人,《自然》,382(6588):262-265(1996))。LYST蛋白在哺乳動(dòng)物物種中高度保守，且在所有細(xì)胞類型中以低水平表達(dá)，但在成年和胚胎胸腺外周血液白細(xì)胞、骨髓和成年大腦的數(shù)個(gè)區(qū)域中豐富地表達(dá)(參見多塔(Dotta)等人,《Orphanet罕見疾病雜志(OrphanetJournalofRareDiseases)》,8:168(2013)的綜述和其中的參考文獻(xiàn))。本領(lǐng)域中已知人類LYST蛋白的氨基酸序列。參見例如，GenBank登錄號(hào)U67615：公開了與SEQIDNO:2具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％氨基酸序列一致性的LYST多肽。盡管LYST蛋白已與許多不同的細(xì)胞活性相關(guān)，尤其在內(nèi)體和溶酶體中的胞內(nèi)蛋白運(yùn)輸方面，但LYST蛋白的生物學(xué)功能很大程度上仍然未知。LYST基因產(chǎn)物的異常表達(dá)和功能已涉及許多病理學(xué)病癥，包括自體免疫疾病、過度增殖病癥和血小板功能障礙。確切地說，LYST基因中的突變與人類疾病薛迪克-東氏綜合癥(Chediak-Higashisyndrome，CHS)相關(guān)(巴拉等人,《美國人類遺傳學(xué)雜志》,59:625-632(1996))。在CHS患者中，LYST基因在編碼域的核苷酸117-118處含有框移突變。CHS為罕見的溶酶體儲(chǔ)存病癥，其特征在于色素過少、重度免疫缺陷、出血傾向、神經(jīng)異常、多種細(xì)胞類型中進(jìn)入和來自溶酶體和巨包涵體的異常胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)。已在患有薛迪克-東氏綜合癥的人中鑒別出LYST基因中的至少30種突變。這些突變損害溶酶體運(yùn)輸調(diào)節(jié)劑蛋白的正常功能，其破壞細(xì)胞內(nèi)的溶酶體和相關(guān)結(jié)構(gòu)的大小、結(jié)構(gòu)和功能。具有LYST突變的人在整個(gè)體內(nèi)在細(xì)胞中具有異常大的溶酶體和相關(guān)結(jié)構(gòu)。這些增大的結(jié)構(gòu)干擾正常細(xì)胞功能。免疫系統(tǒng)細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞)中增大的溶酶體阻止這些細(xì)胞對(duì)細(xì)菌和其他外來侵入者恰當(dāng)?shù)仄鸱磻?yīng)；較大核周溶酶體以管狀方式配置在患有CHS的人的巨噬細(xì)胞內(nèi)。受影響的嗜中性白細(xì)胞和單核細(xì)胞具有正常細(xì)胞約40％的趨化性和遷移性能力。受影響的患者還具有出血的傾向，歸因于血小板功能障礙。由于對(duì)趨化性刺激的反應(yīng)降低，發(fā)生故障的免疫系統(tǒng)不可保護(hù)身體免于重度、復(fù)發(fā)性感染。CHS通常是致命的，因?yàn)榛颊呙庖吖δ懿蝗也荒芙?duì)感染的有效免疫反應(yīng)。在米色(Bg)小鼠品系中，LYST的小鼠同系物(“Lyst”)通過妨礙功能Lyst蛋白表達(dá)的缺失來破壞。發(fā)現(xiàn)與野生型小鼠相比，Bg小鼠展現(xiàn)出增生性疾病減少，包括在植入血管組織移植物之后狹窄的速率較低。Bg小鼠中的功能異常Lyst蛋白的作用是高度巨噬細(xì)胞特異性的，如通過骨髓移植實(shí)驗(yàn)所測定(參見實(shí)例)。C.LYST的抑制劑已確立，LYST蛋白的阻斷可減少或預(yù)防會(huì)在損傷之后引起血管增殖病癥、纖維增生疾病和過度疤痕組織的免疫過程。公開了抑制或減少LYST蛋白的轉(zhuǎn)錄、翻譯或功能的免疫調(diào)節(jié)因子。LYST的抑制劑可結(jié)合于LYST基因或LYST蛋白，且直接或間接阻斷LYST蛋白的生物學(xué)功能。抑制劑還可阻斷構(gòu)成LYST的下游生物學(xué)功能的一個(gè)或多個(gè)信號(hào)傳導(dǎo)路徑的生物學(xué)功能。在一些實(shí)施例中，LYST的抑制劑通過防止LYST蛋白的內(nèi)源性配體與LYST蛋白相互作用或直接結(jié)合于LYST蛋白來起作用。抑制劑可阻斷涉及LYST蛋白的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，或其可預(yù)防或減少LYST蛋白和配體的復(fù)合物的功能活性。直接結(jié)合于LYST蛋白的抑制劑可通過LYST蛋白上活性位點(diǎn)的直接阻塞或經(jīng)由間接阻塞(如通過LYST相互作用的硬脂酸阻斷)來起作用。舉例來說，在一些實(shí)施例中，抑制劑阻礙或阻隔蛋白相互作用域(如由WD40重復(fù)基序的串聯(lián)拷貝形成的螺線管蛋白域)的功能。在其他實(shí)施例中，抑制劑結(jié)合于在空間上與活性位點(diǎn)不同的位置。結(jié)合于LYST蛋白的抑制劑可通過包括(但不限于)以下的機(jī)制妨礙LYST功能：誘導(dǎo)二聚，誘導(dǎo)寡聚，誘導(dǎo)構(gòu)象變化，妨礙催化功能，誘導(dǎo)降解，誘導(dǎo)被免疫細(xì)胞攝取，妨礙被目標(biāo)細(xì)胞攝取，妨礙配體結(jié)合，妨礙磷酸化，誘導(dǎo)變性，妨礙一種或多種翻譯后修飾或以其他方式改變LYST蛋白的天然三級(jí)結(jié)構(gòu)。應(yīng)理解，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)路徑通過LYST的啟動(dòng)或轉(zhuǎn)導(dǎo)可能需要配體結(jié)合于LYST蛋白。因此，阻斷涉及LYST的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑和任選地妨礙LYST與其受體共接合的蛋白、抗體或小分子為適用的免疫調(diào)節(jié)因子。下文論述的LYST抑制劑的類別包括抗體和功能核酸。1.抗體公開了通過直接結(jié)合到LYST蛋白、其配體或其輔助分子來抑制LYST功能的抗體。任何特異性抗體均可用于本文提供的方法和組合物。抗體可包括抗原結(jié)合位點(diǎn)，其結(jié)合到LYST蛋白上的表位?？贵w與LYST的結(jié)合可經(jīng)由一種或多種不同機(jī)制抑制或減少LYST蛋白的功能。在一些實(shí)施例中，抗體或抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合到由SEQIDNO:2的氨基酸序列編碼的蛋白內(nèi)的表位。表位可為線性表位，且可包括SEQIDNO:2的一級(jí)序列的一個(gè)或多個(gè)連續(xù)氨基酸。在其他實(shí)施例中，抗體或其抗原結(jié)合片段可結(jié)合構(gòu)象表位，其包括LYST蛋白的3-D表面特征、形狀或三級(jí)結(jié)構(gòu)。在一些實(shí)施例中，3-D表面特征可包括來自SEQIDNO:2的任何數(shù)量的氨基酸，或同系物、直系同源物、旁系同源物或其變異體中的相應(yīng)殘基。在一些實(shí)施例中，特異性結(jié)合到由SEQIDNO:2的氨基酸序列編碼的蛋白內(nèi)的表位的抗體或抗原結(jié)合片段可僅在由SEQIDNO:2的氨基酸序列編碼的蛋白不被配體或小分子結(jié)合時(shí)結(jié)合。各種類型的抗體和抗體片段可以用于所公開的組合物和方法，包括任何類別的整個(gè)免疫球蛋白、其片段和至少含有抗體的抗原結(jié)合可變域的合成蛋白。抗體可為IgG抗體，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4?？贵w可呈抗原結(jié)合片段形式，包括Fab片段、F(ab')2片段、單鏈可變區(qū)等?？贵w可為多克隆或單克隆(mAb)。單克隆抗體包括“嵌合”抗體，其中一部分重鏈和/或輕鏈與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或子類別的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而所述鏈的其余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或子類別的抗體中的相應(yīng)序列以及此類抗體的片段(只要其特異性結(jié)合目標(biāo)抗原和/或展現(xiàn)所需生物活性即可)相同或同源(美國專利第4,816,567號(hào)；和莫里森(Morrison)等人,《美國國家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》,81:6851-6855(1984))。所公開的抗體還可通過重組手段，例如通過氨基酸的缺失、添加或取代加以修飾，以增加抗體在介導(dǎo)所需功能方面的功效。取代可為保守取代。舉例來說，抗體的恒定區(qū)中的至少一個(gè)氨基酸可經(jīng)不同殘基置換(參見例如，美國專利第5,624,821號(hào)；美國專利第6,194,551號(hào)；WO9958572；和安格爾(Angal)等人,《分子免疫學(xué)(Mol.Immunol.)》30:105-08(1993))。在一些情況下，作出改變以減少非所需活性，例如補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性?？贵w可為對(duì)至少兩個(gè)不同抗原表位具有結(jié)合特異性的雙特異性抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，表位來自相同抗原。在另一實(shí)施例中，表位來自兩種不同抗原。雙特異性抗體可包括雙特異性抗體片段(參見例如，霍林格(Hollinger)等人,《美國國家科學(xué)院院刊》,90:6444-48(1993)；格魯伯(Gruber)等人,《免疫學(xué)雜志(J.Immunol)》,152:5368(1994))。結(jié)合人類蛋白的多種抗體可購自多個(gè)來源，例如，美國加利福尼亞州的圣克魯茲生物技術(shù)(SantaCruzBiotechnology,CA,USA)，目錄號(hào)sc-136746)?？贵w可以通過本領(lǐng)域中已知的任何方式產(chǎn)生?？贵w生成和產(chǎn)生的例示性描述方式包括戴爾維(Delves),《抗體產(chǎn)生：必需技術(shù)(AntibodyProduction:EssentialTechniques)》(威利(Wiley),1997)；謝潑德(Shephard)等人,《單克隆抗體(MonoclonalAntibodies)》(牛津大學(xué)出版社(OxfordUniversityPress),2000)；戈丁(Goding),《單克隆抗體：原理和實(shí)踐(MonoclonalAntibodies:PrinciplesAndPractice)》(學(xué)術(shù)出版社(AcademicPress),1993)；和《免疫學(xué)最新方案(CurrentProtocolsInImmunology)》(約翰·威利父子公司(JohnWiley&Sons),最新版)。完整Ig分子的片段可使用本領(lǐng)域中熟知的方法產(chǎn)生，包括酶消化和重組方式。2.功能核酸公開了抑制LYST基因產(chǎn)物的轉(zhuǎn)錄、翻譯或功能的功能核酸。功能核酸為具有特定功能(如結(jié)合目標(biāo)分子或催化特定反應(yīng))的核酸分子。如下文較詳細(xì)論述，功能核酸分子可劃分為以下非限制性類別：反義分子、siRNA、miRNA、適體、核酶、形成三鏈體的分子、RNAi和外部引導(dǎo)序列。功能核酸分子可充當(dāng)目標(biāo)分子具有的比活性的效應(yīng)劑、抑制劑、調(diào)節(jié)劑和刺激劑，或功能核酸分子可具有獨(dú)立于任何其他分子的重生活性。功能核酸分子可與任何大分子，如DNA、RNA、多肽或碳水化合物鏈相互作用。因此，功能核酸可與LYST多肽的mRNA或基因組DNA相互作用，或其可與LYST多肽自身相互作用。通常，功能核酸經(jīng)設(shè)計(jì)以基于目標(biāo)分子與功能核酸分子之間的序列同源性與其他核酸相互作用。在其他情況下，功能核酸分子與目標(biāo)分子之間的特異性識(shí)別不基于功能核酸分子與目標(biāo)分子之間的序列同源性，而更確切地是基于形成允許特異性識(shí)別發(fā)生的三級(jí)結(jié)構(gòu)。因此，所公開的組合物可包括一種或多種經(jīng)設(shè)計(jì)以減少LYST蛋白的表達(dá)或功能的功能核酸。在一些實(shí)施例中，組合物包括功能核酸或多肽，其經(jīng)設(shè)計(jì)以靶向且減少或抑制LYSTmRNA的表達(dá)或翻譯；或減少或抑制LYST蛋白的表達(dá)，減少其活性，或增加其降解。在一些實(shí)施例中，組合物包括適用于功能核酸體內(nèi)表達(dá)的載體。在一些實(shí)施例中，功能核酸或多肽經(jīng)設(shè)計(jì)以靶向編碼SEQIDNO:2的氨基酸序列的核酸的區(qū)段、或其互補(bǔ)序列或其變異體，所述變異體具有與編碼SEQIDNO:2的氨基酸序列的核酸65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致的核酸序列。在其他實(shí)施例中，功能核酸或多肽經(jīng)設(shè)計(jì)以靶向SEQIDNO:1的核酸序列的區(qū)段、或其互補(bǔ)序列或其變異體，所述變異體具有與SEQIDNO:1至少65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致的核酸序列。在一些實(shí)施例中，功能核酸與SEQIDNO:1的核酸或其互補(bǔ)序列例如在嚴(yán)格條件下雜交。在一些實(shí)施例中，功能核酸與編碼SEQIDNO:2的核酸序列或其互補(bǔ)序列例如在嚴(yán)格條件下雜交。制造和使用用于體內(nèi)表達(dá)所公開的功能核酸(如反義寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、EGS、核酶和適體)的載體的方法為本領(lǐng)域中已知。i.反義分子功能核酸可為反義分子。反義分子經(jīng)設(shè)計(jì)以經(jīng)由典型或非典型堿基配對(duì)與目標(biāo)核酸分子相互作用。反義分子與目標(biāo)分子的相互作用經(jīng)設(shè)計(jì)以經(jīng)由例如RNA酶H介導(dǎo)的RNA-DNA混合降解促進(jìn)目標(biāo)分子的破壞?；蛘撸戳x分子經(jīng)設(shè)計(jì)以中斷通常將發(fā)生于目標(biāo)分子上的處理功能，如轉(zhuǎn)錄或復(fù)制。反義分子可基于目標(biāo)分子的序列經(jīng)設(shè)計(jì)。存在許多通過發(fā)現(xiàn)目標(biāo)分子的最可進(jìn)入?yún)^(qū)域而使反義效率最佳化的方法。例示性方法包括使用DMS和DEPC的體外選擇實(shí)驗(yàn)和DNA修飾研究。優(yōu)選的是，反義分子以小于或等于10-6、10-8、10-10或10-12的解離常數(shù)(Kd)結(jié)合LYST目標(biāo)分子。ii.適體功能核酸可為適體。適體為與目標(biāo)分子相互作用，優(yōu)選地以特定方式相互作用的分子。通常，適體為長度在15-50個(gè)堿基范圍內(nèi)的小核酸，其折疊成經(jīng)定義的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)，如莖-環(huán)或G-四聯(lián)體。適體可結(jié)合小分子(如ATP和茶堿)以及大分子(如逆轉(zhuǎn)錄酶和凝血酶)。適體可以低于10-12M的Kd極緊密地與目標(biāo)分子結(jié)合。優(yōu)選的是，適體以低于10-6、10-8、10-10或10-12的Kd結(jié)合LYST目標(biāo)分子。適體可以極高特異性程度結(jié)合目標(biāo)分子。舉例來說，已分離適體，其在目標(biāo)分子與僅分子上單一位置不同的另一分子之間的結(jié)合親和力方面具有大于10,000倍差異。優(yōu)選的是，適體與LYST目標(biāo)分子的Kd比與背景結(jié)合分子的Kd低至少10、100、1000、10,000或100,000倍。優(yōu)選地，當(dāng)進(jìn)行分子(如多肽)的比較時(shí)，背景分子為不同多肽。iii.核酶功能核酸可為核酶。核酶為能夠催化分子內(nèi)或分子間化學(xué)反應(yīng)的核酸分子。優(yōu)選的是，核酶催化分子間反應(yīng)。公開了基于天然系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的核酶的催化核酸酶或核酸聚合酶型反應(yīng)的不同類型核酶，如錘頭核酶。還公開了并非在天然系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的，但已經(jīng)工程化以從頭催化特定反應(yīng)的核酶。優(yōu)選的核酶裂解RNA或DNA底物，并且更優(yōu)選地裂解RNA底物。核酶通常經(jīng)由識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)底物與后續(xù)裂解來裂解核酸底物。這種識(shí)別通常大多基于典型或非典型堿基對(duì)相互作用。這種特性使得核酶成為靶向核酸特異性裂解的尤其良好候選物，因?yàn)閷?duì)目標(biāo)底物的識(shí)別是基于目標(biāo)底物序列。iv.形成三鏈體的寡核苷酸功能核酸可為形成三鏈體的寡核苷酸分子。形成三鏈體的功能核酸分子為可與雙鏈或單鏈核酸相互作用的分子。當(dāng)三鏈體分子與目標(biāo)區(qū)域相互作用時(shí)，形成稱作三鏈體的結(jié)構(gòu)，其中存在取決于沃森-克里克(Watson-Crick)和胡斯坦(Hoogsteen)堿基配對(duì)而形成復(fù)合物的DNA的三條鏈。三鏈體分子由于其可以高親和力和特異性結(jié)合目標(biāo)區(qū)域而為優(yōu)選的。優(yōu)選的是形成三鏈體的分子以低于10-6、10-8、10-10或10-12的Kd結(jié)合目標(biāo)分子。v.外部引導(dǎo)序列功能核酸可為外部引導(dǎo)序列。外部引導(dǎo)序列(EGS)為結(jié)合目標(biāo)核酸分子形成復(fù)合物的分子，所述復(fù)合物由RNA酶P識(shí)別，所述RNA酶P接著裂解目標(biāo)分子。EGS可經(jīng)設(shè)計(jì)以特異性靶向所選RNA分子。RNA酶P有助于處理細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)移RNA(tRNA)。細(xì)菌RNA酶P可經(jīng)募集以通過使用使目標(biāo)RNA:EGS復(fù)合物模擬天然tRNA底物的EGS來裂解實(shí)際上任何RNA序列。類似地，真核EGS/RNA酶P引導(dǎo)的RNA裂解可用于裂解真核細(xì)胞內(nèi)的所需目標(biāo)。如何制造和使用EGS分子以促進(jìn)多種不同目標(biāo)分子裂解的代表性實(shí)例為本領(lǐng)域中已知。vi.RNA干擾在一些實(shí)施例中，功能核酸經(jīng)由RNA干擾(siRNA)誘導(dǎo)基因沉默。LYST基因的表達(dá)可經(jīng)由RNA干擾以高度特異性方式有效地沉默?；虺聊畛跏窃谔砑与p鏈RNA(dsRNA)的情況下觀察到的(法爾(Fire)等人(1998)《自然》,391:806-11；那波利(Napoli)等人(1990)《植物細(xì)胞(PlantCell)》2:279-89；漢農(nóng)(Hannon),(2002)《自然》,418:244-51)。一旦dsRNA進(jìn)入細(xì)胞，其就被稱為切丁酶(Dicer)的RNA酶III樣酶裂解成長度為21-23個(gè)核苷酸的雙鏈小干擾RNA(siRNA)，其3'末端含有2個(gè)核苷酸突出物(艾爾巴希爾(Elbashir)等人,《基因與發(fā)育(GenesDev.)》,15:188-200(2001)；伯恩斯坦(Bernstein)等人,《自然》,409:363-6(2001)；哈蒙德(Hammond)等人,《自然》,404:293-6(2000)；尼凱寧(Nykanen)等人,《細(xì)胞(Cell)》,107:309-21(2001)；馬丁尼茲(Martinez)等人,《細(xì)胞》,110:563-74(2002))。iRNA或siRNA的效應(yīng)或其用途不限于任何類型的機(jī)制。在一個(gè)實(shí)例中，siRNA在siRNA與目標(biāo)LYSTRNA兩者之間的序列一致性區(qū)域內(nèi)觸發(fā)同源LYSTRNA分子，如LYSTmRNA的特異性降解。序列特異性基因沉默可使用模擬通過酶切丁酶產(chǎn)生的siRNA的合成短雙鏈RNA在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)(艾爾巴希爾等人,《自然》,411:494-498(2001))(烏-太(Ui-Tei)等人,《歐洲生物化學(xué)學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)快報(bào)(FEBSLett)》,479:79-82(2000))。siRNA可為化學(xué)或體外合成的或可為處理到細(xì)胞內(nèi)部的siRNA中的短雙鏈發(fā)夾樣RNA(shRNA)。舉例來說，WO02/44321公開當(dāng)與3'突出末端堿基配對(duì)時(shí)能夠序列特異性降解目標(biāo)mRNA的siRNA，制造這些siRNA的方法以引用的方式并入本文中。合成siRNA一般使用算法和常規(guī)DNA/RNA合成器設(shè)計(jì)。供應(yīng)商包括安必遜(Ambion)(德克薩斯州奧斯汀(Austin,Texas))、化學(xué)基因(ChemGenes)(馬薩諸塞州亞什蘭(Ashland,Massachusetts))、達(dá)爾馬肯(Dharmacon)(科羅拉多州拉斐特(Lafayette,Colorado))、格倫研究(GlenResearch)(弗吉尼亞州斯特林(Sterling,Virginia))、MWB生物技術(shù)(MWBBiotech)(德國埃伯斯貝格(Esbersberg,Germany))、普羅麗格(Proligo)(科羅拉多州博爾德(Boulder,Colorado))和凱杰(Qiagen)(荷蘭文托(Vento,TheNetherlands))。siRNA也可使用試劑盒，如安必遜siRNA構(gòu)筑試劑盒體外合成。在一些實(shí)施例中，組合物包括表達(dá)功能核酸的載體。從載體產(chǎn)生siRNA更通常經(jīng)由短發(fā)夾RNA酶(shRNA)的轉(zhuǎn)錄進(jìn)行。用于產(chǎn)生包括shRNA的載體的試劑盒是可獲得的，如英格奈克斯(Imgenex)的GENESUPPRESSORTM構(gòu)筑試劑盒和英杰(Invitrogen)的BLOCK-ITTM誘導(dǎo)型RNAi質(zhì)粒和慢病毒載體。在一些實(shí)施例中，功能核酸為siRNA、shRNA或miRNA。B.賦形劑、遞送媒劑和裝置LYST抑制劑可在存在或不存在遞送媒劑的輔助下投與并吸收到個(gè)體的細(xì)胞中。用于所公開抑制劑的適當(dāng)遞送媒劑為本領(lǐng)域中已知的且可經(jīng)選擇以適合具體抑制劑。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，抑制劑通過靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或局部注射遞送。典型載劑為鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水和其他可注射載劑。公開具有或不具有遞送媒劑的包括一種或多種LYST抑制劑的調(diào)配物。所公開的LYST抑制劑可調(diào)配到包括一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的醫(yī)藥組合物中。根據(jù)抑制劑和既定用途，醫(yī)藥組合物可經(jīng)調(diào)配以用于不同投與機(jī)制。公開了醫(yī)藥組合物，其經(jīng)調(diào)配以便通過腸胃外(肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)(IV)或皮下注射)、表面或經(jīng)皮(被動(dòng)地或使用離子導(dǎo)入療法或電致孔)投與途徑或使用生物溶蝕性插入物投與。1.腸胃外投與在一些實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑和任選地遞送媒劑經(jīng)調(diào)配以便以水溶液形式通過腸胃外注射投與。調(diào)配物還可呈懸浮液或乳液形式。通常，提供醫(yī)藥組合物，其包括有效量的活性劑、靶向部分和任選的遞送媒劑，且任選地包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、佐劑和/或載劑。此類組合物包括稀釋液無菌水；具有各種緩沖劑內(nèi)含物(例如Tris-HCl、乙酸鹽、磷酸鹽)、pH和離子強(qiáng)度的緩沖鹽水；和任選地添加劑，如清潔劑和增溶劑(例如也稱為聚山梨醇酯20或80)、抗氧化劑(例如抗壞血酸、偏亞硫酸氫鈉)和防腐劑(例如硫柳汞、苯甲醇)和增量物質(zhì)(例如乳糖、甘露糖醇)。非水性溶劑或媒劑的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄欖油和玉米油)、明膠以及可注射有機(jī)酯(如油酸乙酯)。調(diào)配物可以凍干并在即將使用之前再溶解/再懸浮。調(diào)配物可以通過例如經(jīng)由細(xì)菌截留過濾器過濾、通過將滅菌劑并入到組合物中、通過照射組合物或通過加熱組合物加以滅菌。2.經(jīng)肺和經(jīng)粘膜投與在其他實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑和任選地遞送媒劑經(jīng)調(diào)配以便投與粘膜，如口部、眼睛、肺、鼻、口腔(舌下、頰內(nèi))、陰道或直腸粘膜。投與粘膜的調(diào)配物將通常為噴霧干燥藥物粒子，其可結(jié)合到片劑、凝膠、膠囊、懸浮液或乳液中。標(biāo)準(zhǔn)藥物賦形劑可購自任何調(diào)配者。在一個(gè)實(shí)施例中，調(diào)配用于經(jīng)肺遞送(如鼻內(nèi)投與或經(jīng)口吸入)的化合物。呼吸道是參與大氣與血流之間的氣體交換的結(jié)構(gòu)。上氣道和下氣道稱為傳導(dǎo)性氣道。末端細(xì)支氣管分裂成呼吸性小支氣管，其接著通向最終呼吸區(qū)(肺泡或深肺)。深肺或肺泡是吸入的治療性氣霧劑進(jìn)行全身性藥物遞送的主要目標(biāo)。在肺中具活性的治療劑可全身性地投與并且通過經(jīng)肺吸收來靶向。如本文所用的術(shù)語氣霧劑是指粒子的精細(xì)霧狀物的任何制劑，其可以呈溶液或懸浮液形式，無論其是否使用推進(jìn)劑來產(chǎn)生。氣霧劑可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(如超聲作用或高壓處理)來產(chǎn)生。用于經(jīng)肺調(diào)配物的載劑可以劃分成用于干粉調(diào)配物和用于以溶液形式投與的載劑。用于將治療劑遞送到呼吸道的氣霧劑是本領(lǐng)域中已知的。對(duì)于經(jīng)由上呼吸道投與，可以將調(diào)配物調(diào)配到溶液(例如水或等張鹽水，被緩沖或未緩沖的)中，或調(diào)配成懸浮液，用于作為滴劑或作為噴霧進(jìn)行鼻內(nèi)投與。優(yōu)選地，此類溶液或懸浮液相對(duì)于經(jīng)鼻分泌物是等張的并且具有介于例如約pH4.0到約pH7.4或pH6.0到pH7.0范圍內(nèi)的大致相同的pH。緩沖液在生理學(xué)上應(yīng)是相容的并且簡單舉例來說包括磷酸鹽緩沖液。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地確定用于經(jīng)鼻和/或上呼吸道投與的無害水溶液的適合鹽水內(nèi)含物和pH。組合物可在吸入時(shí)遞送到肺且在以氣霧劑或空氣動(dòng)力學(xué)直徑小于約5微米的噴霧干燥粒子形式遞送時(shí)橫跨肺上皮襯壁到達(dá)血流。具有大粒徑的干粉調(diào)配物(“DPF”)具有改善的可流動(dòng)性特征(如較少聚集)、較容易氣溶膠化并且潛在地吞噬作用較小。通常產(chǎn)生的用于吸入療法的干粉氣霧劑的平均直徑基本上在小于5微米范圍內(nèi)，不過優(yōu)選范圍是空氣動(dòng)力學(xué)直徑在一與十微米之間。已將大“載劑”粒子(不含藥物)與治療性氣霧劑共遞送以幫助實(shí)現(xiàn)除其他可能益處以外的高效氣溶膠化。用于經(jīng)肺遞送的調(diào)配物包括單層磷脂囊泡、脂質(zhì)體或脂蛋白粒子。含有核酸的調(diào)配物和制備此類調(diào)配物的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的?？墒褂么蠓秶慕?jīng)設(shè)計(jì)以經(jīng)肺遞送治療產(chǎn)品的機(jī)械裝置，包括(但不限于)噴霧器、定量吸入器和粉末吸入器，其全部為本領(lǐng)域中熟習(xí)此項(xiàng)技術(shù)者熟悉的。3.表面和經(jīng)皮投與活性劑和任選的遞送媒劑可表面施用。表面投與可包括直接施用至血管或組織或假體，例如在手術(shù)期間，或通過直接投與皮膚進(jìn)行。還可制備經(jīng)皮調(diào)配物。這些將通常為軟膏、洗劑、噴霧劑或貼片，其全部可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備。經(jīng)皮調(diào)配物可包括滲透增強(qiáng)劑。用于表面或經(jīng)皮投與的標(biāo)準(zhǔn)藥物賦形劑可購自任何調(diào)配者。4.控制遞送基質(zhì)可以制造控制釋放聚合裝置用于在植入聚合裝置(棒、圓柱、膜、盤)或注射(微米粒子)之后長期全身性地釋放?；|(zhì)可呈微米粒子(如微球體)形式，其中LYST抑制劑分散在固體聚合基質(zhì)或微膠囊內(nèi)，其中核心具有與聚合外殼相比不同的物質(zhì)，且一種或多種LYST抑制劑分散或懸浮于核心中，其在性質(zhì)上可為液體或固體。除非本文中特別地定義，否則微米粒子、微球體和微膠囊可互換地使用?；蛘?，聚合物可以澆鑄成介于數(shù)納米到四厘米范圍內(nèi)的薄板或薄膜、通過研磨或其他標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)產(chǎn)生的粉末或甚至是如水凝膠的凝膠形式。非生物可降解或生物可降解的基質(zhì)可用于遞送所公開的LYST抑制劑，不過生物可降解的基質(zhì)為優(yōu)選的。這些基質(zhì)是天然或合成聚合物，但是合成聚合物是優(yōu)選的，這歸因于更好的降解和釋放曲線特征?；谙Ｍ谀囊浑A段釋放來選擇聚合物。在一些情況下，線性釋放可以是最有用的，但是在其他情況下，脈沖釋放或“大量釋放”可以提供更有效的結(jié)果。聚合物可以呈水凝膠(通常吸收高達(dá)約90重量％的水)形式，并且可以任選地與多價(jià)離子或聚合物交聯(lián)?；|(zhì)可以通過溶劑蒸發(fā)、噴霧干燥、溶劑萃取以及本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的其他方法形成。生物溶蝕性微球體可以使用為了制造用于藥物遞送的微球體所開發(fā)的方法中的任一種來制備，例如如通過馬西威茲(Mathiowitz)和蘭格(Langer),《控制釋放雜志(J.ControlledRelease)》,5:13-22(1987)；馬西威茲等人,《反應(yīng)性聚合物(ReactivePolymers)》,6:275-283(1987)；以及馬西威茲等人,《應(yīng)用聚合物科學(xué)雜志(J.Appl.PolymerSci.)》,35:755-774(1988)所描述。所述裝置可經(jīng)調(diào)配以便局部釋放，從而治療植入或注射區(qū)域，其將通常遞送遠(yuǎn)低于治療整個(gè)身體的劑量的劑量。所述裝置還可經(jīng)調(diào)配用于局部或全身遞送。本領(lǐng)域中已知經(jīng)設(shè)計(jì)以將負(fù)荷(如藥物和抗體)遞送到血管、血管平滑肌細(xì)胞或部位或凝塊或血栓的微米粒子和納米粒子。參見例如，威克萊恩(Wickline)等人,《動(dòng)脈硬化、血栓和血管生物學(xué)(Arteriosclerosis,Thrombosis,andVascularBiology)》,26:435-441(2006),在線公開(2005年12月)和美國公開申請(qǐng)案第2002/0168320號(hào)、第2003/0086867號(hào)、第2003/0129136號(hào)、第2004/0058951號(hào)、第2004/0115192號(hào)、第2006/0147380號(hào)、第2006/0239919號(hào)、第2007/0140965號(hào)、第2007/0202040號(hào)、第2007/0258908號(hào)、第2008/0175792號(hào)、第2008/0247943號(hào)和第2013/0064765號(hào)。舉例來說，先前被視為人工血液替代物的全氟化碳納米粒子已發(fā)展成用于分子成像和靶向藥物遞送的平臺(tái)技術(shù)，即，所謂的“治療診斷學(xué)”技術(shù)。這些標(biāo)稱直徑250nm的脂質(zhì)囊封的粒子可靜脈內(nèi)投與且通常因大小受限于完整血管。在一些實(shí)施例中，遞送媒劑為脂質(zhì)體。如果LYST抑制劑為抗體、蛋白或小分子，那么優(yōu)選的遞送媒劑可為脂質(zhì)體。公開了用于將所公開的LYST抑制劑直接遞送到某些細(xì)胞類型(例如巨噬細(xì)胞)的脂質(zhì)體。巨噬細(xì)胞可內(nèi)化脂質(zhì)體，引起一種或多種抑制劑遞送到巨噬細(xì)胞的胞內(nèi)區(qū)室。適用于制造脂質(zhì)體的方法、材料和脂質(zhì)為本領(lǐng)域中已知的。脂質(zhì)體遞送媒劑可購自多個(gè)來源。脂質(zhì)體可由單一脂質(zhì)雙層(即，脂質(zhì)體可為單層)或若干同心脂質(zhì)雙層(即，脂質(zhì)體可為多層)形成。脂質(zhì)體可由單一脂質(zhì)形成；然而，在一些實(shí)施例中，脂質(zhì)體由超過一種脂質(zhì)的組合形成。脂質(zhì)可在生理pH下為中性、陰離子性或陽離子性的。適合的中性和陰離子性脂質(zhì)包括固醇和脂質(zhì)，如膽固醇、磷脂、溶血脂質(zhì)、溶血磷脂和鞘脂。中性和陰離子性脂質(zhì)包括(但不限于)磷脂酰膽堿(PC)(如卵PC、大豆PC)，包括1,2-二?；?甘油-3-磷酸膽堿；磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酰甘油、磷脂酰環(huán)己六醇(PI)；糖脂；磷酸鞘酯，如神經(jīng)鞘磷脂；神經(jīng)鞘糖脂(也稱為1-神經(jīng)酰胺基葡糖苷)，如神經(jīng)酰胺吡喃半乳糖苷、神經(jīng)節(jié)苷脂和腦苷脂；脂肪酸，含有羧酸基的固醇，如膽固醇或其衍生物；和1,2-二?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺，包括1,2-二油?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺或1,2-二油?；视突字Ｒ掖及?DOPE)、1,2-雙十六烷基磷酸乙酰胺(DHPE)、1,2-二硬脂酰基磷脂酰膽堿(DSPC)、1,2-二棕櫚?；字Ｄ憠A(DPPC)和1,2-二肉豆蔻酰基磷脂酰膽堿(DMPC)。三甲基銨鹽，也稱為TAP脂質(zhì)，例如作為甲基硫酸鹽。適合的TAP脂質(zhì)包括(但不限于)DOTAP(二油酰基-)、DMTAP(二肉豆蔻酰基-)、DPTAP(二棕櫚酰基-)和DSTAP(二硬脂?；?)。其他適合的陽離子性脂質(zhì)包括溴化二甲基二(十八基)銨(DDAB)、1,2-二酰氧基-3-三甲基銨丙烷、N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N-二甲基胺(DODAP)。其他適合的脂質(zhì)包括上文所述的中性、陰離子性和陽離子性脂質(zhì)的聚乙二醇化衍生物。一種或多種聚乙二醇化脂質(zhì)衍生物的并入可產(chǎn)生在表面上呈現(xiàn)聚乙二醇鏈的脂質(zhì)體。所得脂質(zhì)體可具有與表面上缺乏PEG鏈的脂質(zhì)體相比在體內(nèi)增加的穩(wěn)定性和循環(huán)時(shí)間。如果LYST抑制劑為核酸或載體，那么遞送媒劑可為病毒載體，例如市售制劑，如腺病毒載體(量子生物技術(shù)公司(QuantumBiotechnologies,Inc.)，加拿大魁北克拉維爾(Laval,Quebec,Canada))。病毒載體遞送可經(jīng)由病毒系統(tǒng)，如可包裝重組逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體系統(tǒng)(參見例如，帕斯坦(Pastan)等人,(1988)《美國國家科學(xué)院院刊》85:4486；米勒(Miller)等人,(1986)《分子與細(xì)胞生物學(xué)(Mol.Cell.Biol.)》6:2895)。重組逆轉(zhuǎn)錄病毒可接著用于感染細(xì)胞且由此將編碼LYST抑制劑的核酸遞送到經(jīng)感染細(xì)胞。將經(jīng)改變核酸引入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的確切方法當(dāng)然不限于使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。其他技術(shù)廣泛可用于這一程序，包括使用腺病毒載體(三谷(Mitani)等人,《人類基因治療(Hum.GeneTher.)》5:941-948(1994))、腺相關(guān)病毒(AAV)載體(古德曼(Goodman)等人,《血液(Blood)》84:1492-1500(1994))、慢病毒載體(奈迪尼(Naidini)等人,《科學(xué)(Science)》272:263-267(1996))、假模式化逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(阿格拉沃(Agrawal)等人,《實(shí)驗(yàn)血液學(xué)(Exper.Hematol.)》24:738-747(1996))。還可使用物理轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)，如脂質(zhì)體遞送和受體介導(dǎo)的機(jī)制和其他內(nèi)飲作用機(jī)制(參見例如，施華森伯格(Schwartzenberger)等人,《血液(Blood)》87:472-478(1996))。市售脂質(zhì)體制劑，如LIPOFECTIN、LIPOFECTAMINE(馬里蘭州蓋瑟斯堡的吉畢科公司(GIBCO-BRL,Inc.,Gaithersburg,Md.))、SUPERFECT(德國希爾登的凱杰公司(Qiagen,Inc.Hilden,Germany))和TRANSFECTAM(威斯康星州麥迪遜的普洛麥格生物技術(shù)公司(PromegaBiotec,Inc.,Madison,Wis.))以及根據(jù)本領(lǐng)域中標(biāo)準(zhǔn)程序開發(fā)的其他脂質(zhì)體為熟知的。另外，所公開的核酸或載體可通過電致孔(其技術(shù)可從金托尼克公司(Genetronics,Inc.)(加利福尼亞州圣地亞哥(SanDiego,Calif.)獲得)以及借助于聲致穿孔或超聲處理機(jī)器(亞利桑那州圖森的依瑪阿克斯醫(yī)藥公司(ImaRxPharmaceuticalCorp.,Tucson,Ariz.))在體內(nèi)遞送。所公開的組合物和方法可與這些或其他常用基因轉(zhuǎn)移方法中的任一種結(jié)合使用。5.移植物和醫(yī)療裝置所公開的通過抑制LYST進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)的組合物可涂布在醫(yī)療裝置上或結(jié)合到醫(yī)療裝置中，或可用于離體預(yù)處理可植入血管移植物。移植物L(fēng)YST抑制劑可用于在植入個(gè)體之前離體預(yù)處理血管移植物。包括一種或多種LYST抑制劑和任選地遞送媒劑的組合物可施用到組織中，通過用以確保其粘附組織或移植物且分布在整個(gè)組織或移植物中的最優(yōu)位置以便藥物治療的方法。在一些實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑使用經(jīng)設(shè)計(jì)以實(shí)現(xiàn)以下功能的納米粒子、微米粒子、脂質(zhì)體、膠束、乳液、凝膠或包衣遞送：粘附到所關(guān)注的區(qū)域，攜帶足夠的藥物負(fù)載以提供用于長時(shí)間段的局部治療，以所需速率或時(shí)程釋放LYST抑制劑，滲透到組織或移植物中以達(dá)到最優(yōu)程度，或其組合。用于手術(shù)的移植物還可通過將細(xì)胞離體接種在生物可降解骨架上來形成。移植物可為自體的，例如隱靜脈或橈動(dòng)脈；保藏自體，例如冷凍保存的靜脈；同種異體的；異種的；或合成的，例如編織聚酯、聚氨基甲酸酯聚四氟乙烯(PTFE)、或聚乙烯對(duì)苯二甲酸酯使用乳房內(nèi)、橈骨或下腹動(dòng)脈的動(dòng)脈同種移植物為適用和耐用血管導(dǎo)管的實(shí)例。下文論述例示性移植物。組織工程化血管移植物公開了包括一種或多種LYST抑制劑的組織工程化血管移植物(TEVG)。組織工程化的血管移植物(TEVG)具有用于推進(jìn)先天性心臟手術(shù)領(lǐng)域的巨大前景，其中其生長能力可以其最大潛能使用。舉例來說，TEVG可經(jīng)設(shè)計(jì)用作連接經(jīng)歷經(jīng)改良的豐坦手術(shù)(Fontansurgery)的患者中的下腔靜脈與肺動(dòng)脈的血管導(dǎo)管。評(píng)估TEVG在25名具有單心室心臟異常的患者中的用途的試點(diǎn)研究的長期(>10年)結(jié)果未展示出移植相關(guān)死亡或移植失敗。還證實(shí)了TEVG的生長能力使得其成為具有生長能力的首個(gè)人造移植物。主要的移植相關(guān)并發(fā)癥為狹窄，影響約30％患者，其中16％(4/25)需要血管成形術(shù)來治療嚴(yán)重狹窄。在一個(gè)實(shí)施例中，TEVG由從聚乙醇酸纖維管制造的生物可降解管狀骨架形成。所述管可用共聚物涂布，如50:50比率的聚乳酸(PLA)和聚己內(nèi)酯。骨架可在植入到個(gè)體中之前用細(xì)胞接種。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞為來自既定接收方的自體細(xì)胞。已確立，巨噬細(xì)胞過度浸潤到組織工程化的血管移植物(TEVG)中會(huì)促進(jìn)結(jié)疤，引起血管增厚、阻塞和狹窄。因此，本文所述的組合物和方法可用于以局部方式且以受控制方式將一種或多種LYST抑制劑遞送到TEVG，從而預(yù)防或抑制巨噬細(xì)胞浸潤。旁路移植物公開了包括一種或多種LYST抑制劑的旁路移植物。旁路手術(shù)的常見形式涉及從腿切除隱靜脈以便自體移植到冠狀動(dòng)脈。在相當(dāng)大數(shù)目的情況中，這些移植物失效，很大程度上歸因于由新內(nèi)膜增生引起的再狹窄。本文所述的組合物和方法可用于以局部方式且以受控制方式將一種或多種LYST抑制劑遞送到自體移植物。抑制劑可在手術(shù)之前、在手術(shù)時(shí)和/或在手術(shù)之后立即投與。在隱靜脈切除術(shù)之后，在胸腔打開和準(zhǔn)備移植物植入期間，組織可(且通常)持續(xù)數(shù)小時(shí)懸浮于鹽水中。包括一種或多種LYST抑制劑和任選的靶向信號(hào)、遞送媒劑或其組合的組合物在這一時(shí)間段期間可與隱靜脈一起培育。動(dòng)靜脈移植物公開了包括一種或多種LYST抑制劑的動(dòng)靜脈移植物。在美國，終末期腎臟疾病逐漸增加。血液透析通路的發(fā)病率仍然是患者的主要生活質(zhì)量問題；其對(duì)社會(huì)還代表相當(dāng)大成本。天然動(dòng)靜脈瘺(AVF)仍然是所選導(dǎo)管以提供血液透析的通路且當(dāng)與其他選擇(如假體AVG)相比時(shí)提供優(yōu)異結(jié)果。令人遺憾的是，每一個(gè)體受到可建立的天然AVF數(shù)目的限制，歸因于適合部位和血管的數(shù)目有限。通路部位有限，因?yàn)榛加薪K末期腎臟疾病的患者通常具有重度合并癥，需要深入的靜脈穿刺以用于生命的診斷和療法。在耗盡主要AVF的所有選擇的患者中，新通路部位必須使用AV移植物。這些移植物因新內(nèi)膜增生而易遭受再狹窄，限制其有效性。可在手術(shù)時(shí)在移植物上培育包括一種或多種LYST抑制劑且任選地包括靶向信號(hào)、遞送媒劑或其組合的組合物。醫(yī)療裝置在一些實(shí)施例中，將包括一種或多種LYST抑制劑的組合物涂布在醫(yī)療裝置或其組件上或結(jié)合到醫(yī)療裝置或其組件中(如結(jié)合到血管支架中的聚合儲(chǔ)集器中)，以減少或抑制個(gè)體的血管增殖病癥，如新內(nèi)膜形成。裝置可為暫時(shí)插入到個(gè)體中的裝置，或永久植入的裝置。在一些實(shí)施例中，裝置為手術(shù)裝置。醫(yī)療裝置的實(shí)例包括(但不限于)針、插管、導(dǎo)管、分流器、氣囊和植入物，如支架和瓣膜。在一些實(shí)施例中，LYST抑制劑或醫(yī)藥組合物可經(jīng)調(diào)配以允許其結(jié)合在醫(yī)療裝置上，其可將抑制劑直接施加到部位以預(yù)防或治療如再狹窄或其他血管增殖病癥的病況。LYST抑制劑或其醫(yī)藥組合物可通過將其包括在醫(yī)療裝置上的涂層內(nèi)來調(diào)配。存在各種可使用的包衣，如聚合物包衣，其可在規(guī)定的時(shí)間段內(nèi)釋放抑制劑。抑制劑或其醫(yī)藥組合物可直接包埋在醫(yī)療裝置內(nèi)。在一些實(shí)施例中，LYST抑制劑涂布在裝置之上或之內(nèi)的遞送媒劑(如有助于其釋放和遞送的微米粒子或脂質(zhì)體)中。支架在一些實(shí)施例中，醫(yī)療裝置為血管植入物，如支架。支架用于藥品以預(yù)防或消除血管限制。支架可插入到受限制血管中，使得受限制血管增寬。使用此類血管植入物的經(jīng)驗(yàn)指示，鄰近細(xì)胞的過度生長也引起血管的限制，尤其在植入物的末端處，其引起植入物的有效性減少。如果將支架插入到人類動(dòng)脈中以用于消除動(dòng)脈硬化狹窄，那么內(nèi)膜增生可在一年內(nèi)在血管植入物的末端處發(fā)生且引起再生的狹窄。因此，在一些實(shí)施例中，支架涂布或裝載有包括LYST抑制劑和任選地遞送媒劑的組合物。許多支架為市售的或或另外本領(lǐng)域中知曉的。從適合材料的薄管，或從具有適合材料且輥軋成管的薄板，可形成(即，蝕刻或切割)支架。適用于支架的材料包括(但不限于)不銹鋼、銥、鉑、金、鎢、鉭、鈀、銀、鈮、鋯、鋁、銅、銦、釕、鉬、鈮、錫、鈷、鎳、鋅、鐵、鎵、錳、鉻、鈦、鋁、釩和碳以及其組合、合金和/或疊層。舉例來說，支架可由以下形成：鈷合金，如L605或鎳鈦諾(鎳-鈦形狀記憶合金)、ABI(鈀-銀合金)、(鈷-鉻-鎳合金)等。還預(yù)期，支架可由層壓在一起的兩種或更多種材料(如與層壓的鉭)形成。支架還可由具有不同金屬、合金或其他材料的同心層的線材形成。支架的實(shí)施例還可由中空管或已經(jīng)其他材料填充的管形成。上述材料和疊層打算作為實(shí)例且并不打算以任何方式具限制性。支架可為藥物洗脫支架。本領(lǐng)域中已知將治療性物質(zhì)同時(shí)遞送到治療部位同時(shí)為壁組織提供人工徑向支持物的各種藥物洗脫支架。包括支架的管腔內(nèi)裝置可在其外表面上涂布有如藥物釋放劑、生長因子、抗體等的物質(zhì)。也已開發(fā)具有中空管狀結(jié)構(gòu)的支架，所述中空管狀結(jié)構(gòu)具有經(jīng)由側(cè)壁切割的孔洞或孔口以允許藥物從中心管腔洗脫。盡管支架的中空性質(zhì)允許中心管腔裝載有經(jīng)由支架側(cè)壁中的孔口或孔洞遞送的藥物溶液，但中空管狀結(jié)構(gòu)可能不具有適合于在血管中提供充足骨架的機(jī)械強(qiáng)度。公開了洗脫LYST抑制劑的支架。在一些實(shí)施例中，裝置還涂布或浸漬有LYST抑制劑和一種或多種其他治療劑，包括(但不限于)抗血小板劑、抗凝血?jiǎng)?、抗微生物劑和抗代謝劑?？膳c本文中所公開的組合物和方法一起使用的例示性支架包括(但不限于)描述于以下各項(xiàng)中的支架：美國專利第5,891,108號(hào)、第6,918,929號(hào)、第6,923,828號(hào)、第6,945,992號(hào)、第6,986,785號(hào)、第7,060,090號(hào)、第7,144,419號(hào)、第7,163,555號(hào)、第7,323,008號(hào)、第7,651,527號(hào)、第7,655,034號(hào)、第7,678,141號(hào)、第7,744,645號(hào)、第7,942,917號(hào)、第8,001,925號(hào)、第8,001,925號(hào)、第8,034,099號(hào)、第8,048,149號(hào)、第8,066,760號(hào)、第8,100,960號(hào)、第8,157,855號(hào)、第8,172,893號(hào)、第8,182,524號(hào)、第8,187,284號(hào)、第8,187,322號(hào)、第8,197,528號(hào)、第8,206,432號(hào)、第8,221,490號(hào)、第8,231,669號(hào)、第8,236,044號(hào)、第8,252,048號(hào)、第8,252,065號(hào)、第8,257,425號(hào)、第8,257,431號(hào)、第8,292,945號(hào)、第8,298,278號(hào)、第8,298,280號(hào)、第8,348,991號(hào)、第8,348,992號(hào)、第8,348,993號(hào)、第8,353,952號(hào)、第8,359,998號(hào)、第8,361,140號(hào)、第8,372,134號(hào)、第8,372,138號(hào)、第8,377,112號(hào)、第8,388,676號(hào)、第8,398,695號(hào)、第8,414,637號(hào)、第8,414,639號(hào)和第8,414,656號(hào)。生物假體多種其他假體裝置可包括一種或多種LYST抑制劑，包括(但不限于)心臟瓣膜、人工關(guān)節(jié)、起搏器、留置導(dǎo)管和美容植入物。據(jù)相信，所公開的LYST抑制劑可減少或預(yù)防與生物假體的存在相關(guān)的炎性反應(yīng)和纖維增生病癥。因此，在一些實(shí)施例中，生物假體涂布或裝載有包括LYST抑制劑和任選地遞送媒劑的組合物。IV.使用方法提供了使用所公開的LYST抑制劑的方法。所述方法可包括向個(gè)體投與有效量的包括一種或多種LYST抑制劑的組合物，從而預(yù)防、減少或抑制個(gè)體中LYST的表達(dá)或功能；用有效量的包括LYST抑制劑的組合物預(yù)處理醫(yī)療裝置或血管移植物，從而在所述裝置或移植物插入或植入到個(gè)體中之后預(yù)防、減少或抑制新內(nèi)膜形成；或其組合。A.待治療的病癥和疾病LYST抑制劑可用于改變免疫功能，包括(但不限于)巨噬細(xì)胞、血小板和自然殺傷細(xì)胞功能，形成促再生免疫環(huán)境。使用LYST抑制劑的方法包括(但不限于)，經(jīng)設(shè)計(jì)以抑制或阻斷LYST蛋白的轉(zhuǎn)錄、翻譯或功能的方法可用于調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。在一些實(shí)施例中，所述方法促進(jìn)血管新組織形成，抑制新內(nèi)膜形成且改進(jìn)血管開放性，例如在血管手術(shù)之后。提供了使用LYST抑制劑來預(yù)防生物和合成血管導(dǎo)管兩者中的內(nèi)膜和新內(nèi)膜增生的方法。所述方法可減少或預(yù)防TEVG狹窄且改進(jìn)TEVG功能。另外，LYST抑制劑對(duì)于促進(jìn)組織再生、改進(jìn)創(chuàng)傷愈合以及調(diào)節(jié)外來身體反應(yīng)可具有更廣影響。因此，還描述了使用LYST抑制劑作為再生藥品應(yīng)用的佐劑的方法。在一些實(shí)施例中，使用LYST抑制劑的方法可促進(jìn)愈合且預(yù)防疤痕形成，例如在腹部手術(shù)之后促進(jìn)愈合且預(yù)防粘連。所述方法可調(diào)節(jié)由于組織損傷產(chǎn)生的血小板衍生生長因子(PDGF)的量。因此，所述方法可治療與PDGF的過度或不當(dāng)表達(dá)相關(guān)的疾病。所述方法還可預(yù)防或治療由過度纖維化引起的疾病，例如肝、肺或心的纖維化疾病。最終，抗LYST療法的方法可產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)，其改變外來身體反應(yīng)且促進(jìn)生物假體的整合但阻止其囊封，由此改進(jìn)裝置(如起搏器或神經(jīng)刺激器)的功能和壽命或者替換心臟瓣膜或人工關(guān)節(jié)的整合。在優(yōu)選實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑有效減少、抑制或延遲個(gè)體的疾病、病癥或病況的一種或多種癥狀。所公開的LYST抑制劑具有多種治療和預(yù)防用途，例如，其可用于治療或預(yù)防在損傷或各種外科手術(shù)之后的血管增殖病癥、結(jié)疤和纖維化疾病。描述了使用一種或多種LYST抑制劑來治療特征在于存在過度疤痕或纖維化組織的疾病的方法。還提供了使用一種或多種LYST抑制劑的方法，其用于抗血小板療法，例如用于治療由異常、過度或另外不當(dāng)?shù)难“寤钚曰騊DGF信號(hào)傳導(dǎo)引起的疾病。血管增殖病癥在一些實(shí)施例中，所公開的LYST抑制劑可用于治療預(yù)防血管增殖病癥。此類病癥的實(shí)例包括(但不限于)與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)的血管增殖；在血管內(nèi)裝置植入之后的血管增殖；在血管吻合部位處的血管增殖，如通常在血管再形成程序或A-V分流之后發(fā)生；在頸動(dòng)脈動(dòng)脈內(nèi)膜剝除術(shù)之后的血管增殖；和移植血管病變。提供了通過投與一種或多種LYST抑制劑來治療或預(yù)防血管增殖病癥的方法。與對(duì)照相比，所述方法通常減少或抑制巨噬細(xì)胞浸潤或巨噬細(xì)胞從M1表型轉(zhuǎn)化成M2表型或這兩者。在一些實(shí)施例中，所述方法減少或抑制巨噬細(xì)胞增殖，而不減少或抑制血管新組織發(fā)展。個(gè)體可能具有狹窄、再狹窄或其他血管增殖病癥，或被鑒別為處于再狹窄或其他血管增殖病癥的風(fēng)險(xiǎn)中，例如已經(jīng)歷、正在經(jīng)歷或?qū)⒔?jīng)歷血管創(chuàng)傷、血管成形術(shù)、手術(shù)或移植動(dòng)脈病等的個(gè)體。以下更詳細(xì)地論述可使用所公開的組合物治療的疾病、病癥和病況。血管損傷在一些實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑可在血管創(chuàng)傷之前、之時(shí)或之后施用。血管損傷觸發(fā)事件的級(jí)聯(lián)，包括內(nèi)皮細(xì)胞剝脫或功能障礙，發(fā)炎以及血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)的活化和增殖。功能異常內(nèi)皮細(xì)胞、炎性細(xì)胞、血小板和VSMC釋放多種生長因子和細(xì)胞因子。這些生長因子和細(xì)胞因子介導(dǎo)化學(xué)吸引、細(xì)胞遷移、增殖、細(xì)胞凋亡和基質(zhì)調(diào)節(jié)，且涉及許多血管增殖病癥。血管增殖疾病和病癥可因?qū)ρ鼙诘臋C(jī)械、生物化學(xué)或免疫損傷開始。典型血管創(chuàng)傷包括與鈍器和穿透損傷兩者相關(guān)的血管創(chuàng)傷，包括(但不限于)撕裂、刺傷、壓傷、槍傷、刀傷、職業(yè)損傷、摔倒和機(jī)動(dòng)車事故以及醫(yī)療介入(如手術(shù)或血管成形術(shù))。在一些實(shí)施例中，個(gè)體已經(jīng)歷、正在經(jīng)歷或?qū)⒔?jīng)歷手術(shù)。手術(shù)可包括侵入性、微創(chuàng)或經(jīng)皮手術(shù)。舉例來說，在一些實(shí)施例中，個(gè)體正在做手術(shù)以治療或修復(fù)腹主動(dòng)脈瘤、頸動(dòng)脈狹窄、曲張靜脈、外周動(dòng)脈閉塞疾病、急性肢體缺血或主動(dòng)脈剝離。常見血管手術(shù)包括(但不限于)開放性腹主動(dòng)脈瘤修復(fù)、血管內(nèi)動(dòng)脈瘤修復(fù)(EVAR)、頸動(dòng)脈動(dòng)脈內(nèi)膜剝除術(shù)、頸動(dòng)脈支架術(shù)、靜脈剝離、硬化療法和泡沫硬化療法、靜脈內(nèi)激光治療、射頻靜脈消融、點(diǎn)式微創(chuàng)靜脈切除術(shù)、伴有/不伴有支架術(shù)的血管成形術(shù)、旁路手術(shù)動(dòng)脈內(nèi)膜剝除術(shù)、粥樣斑塊切除術(shù)、氣囊栓子切除術(shù)、血栓摘除術(shù)、旁路手術(shù)、開放性修復(fù)、胸血管內(nèi)動(dòng)脈瘤修復(fù)(TEVAR)。外科醫(yī)生可在手術(shù)時(shí)、在手術(shù)之前或在手術(shù)之后向手術(shù)部位施用一種或多種LYST抑制劑，從而增強(qiáng)創(chuàng)傷愈合過程，或預(yù)防血管增殖病癥(如引起狹窄或再狹窄的血管增殖病癥)的發(fā)展。內(nèi)膜增生內(nèi)膜增生為對(duì)血管內(nèi)皮損傷的生理性愈合反應(yīng)。對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞層的損傷觸發(fā)一系列急性和慢性炎性反應(yīng)，所述反應(yīng)觸發(fā)血小板聚集、血纖維蛋白沉積且吸引白細(xì)胞到所述區(qū)域(穆拉卡米等人,《美國生理學(xué)雜志(AmJPhysiol)》,272:L197-L202(1997)；科特蘭等人,《美國腎臟病學(xué)會(huì)雜志》,1:225-235(1990))。因此，引起新血管形成和內(nèi)膜增生的再生過程似乎為免疫介導(dǎo)的現(xiàn)象，與所提出的單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞在其他人類血管生物過程(如靜脈移植物適應(yīng))中的作用相似(拉特利夫(Ratliff)和邁爾斯(Myles),《病理及實(shí)驗(yàn)室醫(yī)藥學(xué)志(Arch.Pathol.Lab.Med.)》113:772-776(1989)；莫塔尼(Motwani)和托波爾(Topol),《循環(huán)》97:916-931(1998))。狹窄內(nèi)膜增生可引起血管的內(nèi)膜層增厚，導(dǎo)致血管狹窄的并發(fā)癥。炎性和促凝血機(jī)制的活化被認(rèn)為顯著促進(jìn)狹窄的起始和發(fā)展。在介于數(shù)周到數(shù)個(gè)月范圍內(nèi)的一段時(shí)間內(nèi)，來自受損血管的內(nèi)側(cè)區(qū)域的平滑肌細(xì)胞再定位到內(nèi)膜區(qū)域。這些細(xì)胞增殖且沉積細(xì)胞外基質(zhì)以在損傷部位處在類似于疤痕形成的過程中形成新內(nèi)膜(芬格勒(Fingerle)等人,《美國國家科學(xué)院院刊》,86:8412(1989)；克洛斯(Clowes)等人,《循環(huán)研究》,56:139-145(1985))。因此，穩(wěn)健的愈合反應(yīng)引起血管壁內(nèi)部增厚(內(nèi)膜增生)且最終減小血管管腔，引起狹窄。內(nèi)膜增生的形成可通過血管內(nèi)存在外來物質(zhì)(如假體)加速，且可由血管內(nèi)介入(包括血管成形術(shù)、旁路和移植動(dòng)脈病等)引起(格拉戈夫,《循環(huán)》,89:2888-2891(1994))。因此，提供了使用所公開的LYST抑制劑預(yù)防內(nèi)膜增生和狹窄的方法。再狹窄提供了預(yù)防或減少冠狀動(dòng)脈血管或外周循環(huán)系統(tǒng)的再狹窄的方法。血管的再狹窄通常歸因于內(nèi)膜增生?？刹迦胧中g(shù)裝置(如支架)以打開狹窄的血管，然而這因?yàn)橹Ъ茏陨砜纱碳みM(jìn)一步內(nèi)膜增生也是成問題的。另外，增生的內(nèi)膜組織可經(jīng)由裸露支架的間隙生長且使血管再狹窄。盡管覆蓋的支架可預(yù)防這種情況發(fā)生，但內(nèi)膜增生可在最刺激血管壁的支架末端處再發(fā)生。具有支架中再狹窄的患者處于嚴(yán)重并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)中，因?yàn)閬碜詢?nèi)膜增生的狹窄通常難以治療。不同于軟動(dòng)脈粥樣化斑塊，這些狹窄穩(wěn)固且需要用氣囊長期較高膨脹壓力來擴(kuò)張。狹窄通常會(huì)復(fù)發(fā)，且血管的反復(fù)擴(kuò)張引起反復(fù)的內(nèi)膜損傷且使內(nèi)膜愈合反應(yīng)長存。因此，所公開的組合物、裝置或移植物可以有效減少或抑制新內(nèi)膜形成的量投與個(gè)體以減少或抑制平滑肌細(xì)胞增殖、遷移和其組合，且由此治療或預(yù)防個(gè)體的再狹窄和其他血管增殖病癥。在一些實(shí)施例中，移植物和裝置的開放性可使用含有LYST抑制劑的組合物增加。因此，提供了在植入之前或之后向裝置和移植物或向個(gè)體投與含有LYST抑制劑的組合物的方法。動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)脈粥樣硬化涉及多種過程，包括發(fā)炎、血管增殖和基質(zhì)改變(綜述在迪早(Dzau)等人,《自然·醫(yī)學(xué)(NatMed)》,.8(11)(2002)中)。在動(dòng)脈粥樣硬化中，VSMC引起發(fā)炎、來自血液的脂蛋白的滯留以及構(gòu)成斑塊的纖維沉積物的發(fā)展。已展示，發(fā)炎介導(dǎo)所有階段的動(dòng)脈粥樣硬化：在動(dòng)脈粥樣化斑塊的發(fā)展中，VSMC產(chǎn)生促炎性介體，如單核細(xì)胞化學(xué)引誘劑蛋白，且合成會(huì)引起來自血液的脂蛋白滯留的基質(zhì)分子；以及在斑塊發(fā)展之后，局部炎性環(huán)境可誘導(dǎo)膠原蛋白酶表達(dá)且抑制蛋白水解抑制劑的表達(dá)，使得纖維蓋不牢固且易遭受破裂。因此，在一些實(shí)施例中，所公開的LYST抑制劑用于治療、減少、抑制或預(yù)防個(gè)體的血管增殖病癥。血管成形術(shù)在一些實(shí)施例中，個(gè)體已經(jīng)歷、正在經(jīng)歷或?qū)⒔?jīng)歷血管成形術(shù)。血管成形術(shù)是使變窄或阻塞的動(dòng)脈(如由于動(dòng)脈粥樣硬化而阻塞的動(dòng)脈)機(jī)械加寬的技術(shù)。通常，血管成形術(shù)包括將稱為氣囊式導(dǎo)管的引導(dǎo)線上的空且塌陷的氣囊插入到個(gè)體的血管中，其穿過變窄的位置且接著膨脹到固定大小。氣囊迫使內(nèi)部白細(xì)胞/凝血斑塊沉積物和周圍肌肉壁擴(kuò)張，使血管打開以便改善流動(dòng)，且接著將氣囊放氣且抽出。支架可能或可能不在鼓起時(shí)插入以確保血管保持開放。血管成形術(shù)包括外周血管成形術(shù)(即，冠狀動(dòng)脈外部的血管，如在腹部或腿部)、冠狀動(dòng)脈成形術(shù)、腎動(dòng)脈血管成形術(shù)、頸動(dòng)脈血管成形術(shù)和腦動(dòng)脈血管成形術(shù)。在一些實(shí)施例中，個(gè)體已經(jīng)歷、正在經(jīng)歷或?qū)⒔?jīng)歷經(jīng)皮經(jīng)管腔冠狀動(dòng)脈成形術(shù)(PTCA)。使用PTCA已極大地減少經(jīng)歷心肌梗塞的患者的死亡數(shù)目(菲施曼(Fischman)等人,《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(NEnglJMed.)》,331:496-501(1994)；埃萊齊(Elezi)等人,《循環(huán)》98:1875-1880(1998)；班尼特(Bennett)和奧沙利文(O'Sullivan),《藥理學(xué)與治療學(xué)(PharmacolTher.)》,91:149-166(2001))。在PTCA期間，動(dòng)脈壁的初始直徑擴(kuò)張若干倍，以試圖增加管腔直徑且改善流動(dòng)。令人遺憾的是，這種技術(shù)受到以下困擾：血管重新變窄或再狹窄發(fā)生率較高，在所述程序6個(gè)月內(nèi)在30-40％患者中發(fā)生(安德森(Anderson)等人,《介入心臟病學(xué)雜志(JInterv.Cardiol.)》,6:187-202(1993)；菲施曼等人,《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》,331:496-501(1994)；埃萊齊等人,《循環(huán)》98:1875-1880(1998)；班尼特和奧沙利文,《藥理學(xué)與治療學(xué)》,91:149-166(2001)；哈肯坎普(Heckenkamp)等人,《心血管手術(shù)雜志(JCardiovasc.Surg.)》(托里諾(Torino)),43:349-357(2002))。在成功的PTCA之后預(yù)防再狹窄仍然是治療阻塞性冠狀動(dòng)脈疾病中最具挑戰(zhàn)性的任務(wù)之一。試圖改善這種增殖反應(yīng)涉及使用冠狀動(dòng)脈支架，其已顯著改善介入冠狀動(dòng)脈血管再形成程序之后的短期和長期結(jié)果。盡管在部署支架的情況下再狹窄率減小，但再狹窄仍然在6個(gè)月內(nèi)在15-30％患者中發(fā)生(菲施曼等人,《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》,331:496-501(1994)；埃萊齊等人,《循環(huán)》98:1875-1880(1998))。預(yù)期此支架中再狹窄的發(fā)生率會(huì)增加，因?yàn)楣跔顒?dòng)脈支架術(shù)變得更常見且用于較不理想的病灶。所公開的LYST抑制劑可用于治療或預(yù)防血管成形術(shù)之后的再狹窄、腹部粘連和結(jié)疤。移植動(dòng)脈病在一些實(shí)施例中，個(gè)體已經(jīng)歷、正在經(jīng)歷或?qū)⒔?jīng)歷移植。慢性移植動(dòng)脈病(CTA)是心臟或腎臟移植之后晚期同種移植損失的主要原因(泰勒(Taylor)等人,《心肺移植雜志(J.HeartLungTransplant)》,24:945-955(2005)，伯克(Burke)等人,《移植(Transplantation)》,60:1413-1417(1995)；科內(nèi)爾(Cornell)和科爾文(Colvin),《腎臟病和高血壓現(xiàn)狀(Curr.Opin.NephrolHypertens.)》,14:229-234(2005))。因此，在一些實(shí)施例中，所公開的LYST抑制劑用于減少、抑制或預(yù)防移植接受體的移植動(dòng)脈病。過度結(jié)疤所公開的LYST抑制劑可用于治療、延遲或預(yù)防結(jié)疤，包括形成瘢痕瘤和腹部粘連，例如在損傷、疾病或外科手術(shù)之后。提供了使用一種或多種LYST抑制劑來減少損傷或手術(shù)部位處血管生長的量的方法。在一些實(shí)施例中，所述方法預(yù)防或減少形成會(huì)引起結(jié)疤、瘢痕瘤或粘連的高密度細(xì)胞和結(jié)締組織。優(yōu)選地，一種或多種LYST抑制劑的量不妨礙創(chuàng)傷愈合。肥大性疤痕在一些實(shí)施例中，所公開的LYST抑制劑用于治療、減少、抑制或預(yù)防增生性瘢痕的發(fā)展。過度結(jié)疤可在組織反應(yīng)與正常修復(fù)和愈合所需的疤痕組織的量不成比例時(shí)發(fā)生。當(dāng)深度創(chuàng)傷涉及相當(dāng)大的真皮損失時(shí)，增生性瘢痕組織可沉積在創(chuàng)傷部位處。疤痕組織含有高密度細(xì)胞、體積增加的結(jié)締組織和由血管數(shù)目增加引起的血管供應(yīng)增加。增生性瘢痕可由于組織修復(fù)的重塑期中的缺陷發(fā)生(埃利希氏(Ehrlich)和凱利(Kelley),《整形外科(PlastReconstrSurg.)》,90:993-998(1992))。所公開的LYST抑制劑可用于減小或預(yù)防創(chuàng)傷區(qū)域中血管的發(fā)展，從而減少、延遲或預(yù)防肥大性疤痕的發(fā)展。瘢痕瘤在一些實(shí)施例中，所公開的LYST抑制劑用于治療、減少、抑制或預(yù)防瘢痕瘤疤痕的發(fā)展。瘢痕瘤疤痕為超出損傷邊界的凸起或增厚疤痕，且其可在長時(shí)間段內(nèi)繼續(xù)發(fā)展和增大。在瘢痕瘤生長的發(fā)展期間，用于創(chuàng)傷修復(fù)的膠原蛋白過度生長，產(chǎn)生大于初始疤痕許多倍的團(tuán)塊。LYST抑制劑可用于預(yù)防與皮膚損傷(例如耳穿孔、撕裂、燒傷、疫苗接種或炎性過程)相關(guān)的瘢痕瘤發(fā)展。視需要可局部或表面施用LYST抑制劑。粘連粘連為在組織與器官之間形成的纖維帶，通常由于手術(shù)期間的損傷形成。其可被認(rèn)為是結(jié)締組織通常不連接的內(nèi)部疤痕組織，通常跨假想空間(如腹膜腔)。在腹部手術(shù)或創(chuàng)傷之后，纖維蛋白溶解酶的產(chǎn)生或活性可由于損傷而受損，且產(chǎn)生纖維蛋白粘連。如果允許這種情況發(fā)生，那么組織修復(fù)細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和其他血管細(xì)胞)會(huì)滲透纖維蛋白粘附以沉積膠原蛋白和其他基質(zhì)物質(zhì)，從而形成永久的纖維粘連。可利用所公開的LYST抑制劑治療、減少或預(yù)防的例示性粘連包括腹部粘連、盆腔粘連(包括由子宮內(nèi)膜異位引起的骨盆粘連)、心包粘連、硬膜外粘連和腱鞘周粘連。粘連的癥狀可包括腹痛、阻滯、慢性盆腔疼痛、痙攣、惡心、靈活性受限和粘連部位處的發(fā)炎或腫脹。其他纖維增生疾病在一些實(shí)施例中，可施用一種或多種LYST抑制劑來治療纖維增生疾病。纖維化是對(duì)發(fā)炎和/或傷害起反應(yīng)，過量纖維結(jié)締組織沉積在器官或組織中(溫,《自然綜述·免疫學(xué)》4(8):583-594(2004))。受損組織的修復(fù)涉及在組織損傷部位處產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)組分。巨噬細(xì)胞和受損組織釋放細(xì)胞因子和TGFβ，其刺激細(xì)胞鋪設(shè)結(jié)締組織，包括膠原蛋白和葡糖胺聚糖。然而，這一過程的調(diào)節(jié)異?？梢疬@一結(jié)締組織的過度沉積，其可消除下層器官的結(jié)構(gòu)和功能，產(chǎn)生纖維化疾病的病理。纖維化可在體內(nèi)許多組織中發(fā)生，包括肝、肺、心和腎。提供了治療主要器官纖維化和纖維增生病癥的方法。肝硬化肝臟的纖維化引起肝損害，因?yàn)楦渭?xì)胞在稱為硬化的過程中被非功能疤痕組織替換(益岡(Masuoka)等人《紐約科學(xué)院年鑒(AnnNYAcad.Sci.)》,1281:106-122(2013))。肝纖維化和所引起的硬化代表實(shí)際上所有慢性肝病的最終共同路徑，且可引起肝衰竭、肝癌和肝臟相關(guān)的死亡。肝硬化因疤痕組織代替正常實(shí)質(zhì)而發(fā)生。在急性肝損傷(例如病毒肝炎)之后，在與發(fā)炎性反應(yīng)相關(guān)的過程中，實(shí)質(zhì)細(xì)胞再生且替換壞死或凋亡細(xì)胞。如果肝臟損傷持續(xù)，那么肝臟再生過程最終失效，且肝細(xì)胞經(jīng)豐富的細(xì)胞外基質(zhì)(包括纖維狀膠原蛋白)取代。晚期纖維化的特征在于纖維狀膠原蛋白(主要是膠原蛋白I和膠原蛋白III)中富含的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的累積(綜述在伊戴爾(Iredale),《臨床研究雜志》,117(3):529-548(2007)；拜特爾和勃倫那,《臨床研究雜志》,115(2):209-218(2005)中)?；罨涡菭罴?xì)胞(HSC)以分泌膠原蛋白的炎性細(xì)胞在纖維化肝病中為重要因子。逐漸增加的單核細(xì)胞數(shù)目與疾病進(jìn)展相關(guān)，特別是與非硬化進(jìn)展到硬化疾病相關(guān)。提供了治療個(gè)體的肝纖維化的方法，其包括向個(gè)體投與有效量的一種或多種LYST抑制劑，以相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體減少、降低、限制或預(yù)防肝病的一種或多種癥狀。肝病的典型癥狀包括(但不限于)增加的腹部腫塊、疲勞、腹痛、惡病質(zhì)、黃疸、包括淋巴阻滯的阻塞性綜合癥和腹水積累、貧血以及背痛(孫(Sun)等人,《臨床腫瘤護(hù)理雜志(ClinJ.Oncol.Nurs.)》,12:759-766(2008))。在一些實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體在患有肝病的個(gè)體中改善肝臟功能，減少發(fā)炎，減少纖維化或其組合。肺纖維化肺纖維化的特征在于過量纖維組織沉積在肺中，造成肺泡空間的顯著架構(gòu)扭曲和損失，導(dǎo)致器官衰竭和最終因呼吸衰竭死亡。肺纖維化涉及正常肺實(shí)質(zhì)與纖維化組織的逐漸交換，引起氧擴(kuò)散能力的不可逆降低。肺纖維化(也稱為隱源性致纖維化性肺泡炎)與間質(zhì)肺疾病(ILD)相關(guān)，如結(jié)締組織疾病或慢性發(fā)炎性疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、感染、特發(fā)性肺病和惡性疾病。環(huán)境暴露于吸入的毒素、藥物和放射療法也與肺纖維化相關(guān)。提供了治療或預(yù)防個(gè)體的肺纖維化的方法，其包括向個(gè)體投與有效量的一種或多種LYST抑制劑以相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體減少、降低、限制或預(yù)防肺纖維化的一種或多種癥狀。典型癥狀包括慢性干咳、呼吸短促、疲乏和無力、胸部不適、食欲不振和體重減輕。在一些實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體在患有肺纖維化的個(gè)體中改善呼吸功能、減少發(fā)炎、減少纖維化或其組合。其他纖維化疾病提供了治療或預(yù)防個(gè)體的特征在于過度纖維化的疾病的方法，其包括向個(gè)體投與有效量的一種或多種LYST抑制劑以相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體減少、降低、限制或預(yù)防過度纖維化的一種或多種癥狀。可利用所公開的方法治療的例示性疾病和病癥包括腎硬化、硬皮病、夏普氏綜合癥(Sharp'ssyndrome)、神經(jīng)纖維瘤、骨髓纖維化、全身性硬化癥、杜普征氏攣縮(Dupuytren'scontracture)和黃斑變性。另外，提供了治療與手術(shù)并發(fā)癥、化學(xué)治療劑相關(guān)的結(jié)疤和纖維化、或其他藥物誘發(fā)性纖維化、輻射誘導(dǎo)的纖維化、由損傷和燒傷引起的纖維化的方法。與血小板功能相關(guān)的疾病提供了治療或預(yù)防特征在于過度或有害血小板活化和/或血小板衍生生長因子(PDGF)介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)的疾病的方法。因?yàn)檠“逶谘耗Y(jié)過程中起到至關(guān)重要的作用，所以針對(duì)血小板的療法在對(duì)抗心臟和大腦的血管疾病的戰(zhàn)斗中是最重要的部分。血小板的不當(dāng)或過度活化可在完整血管內(nèi)引起凝塊形成(血栓)。自由斷裂且開始圍繞身體行進(jìn)的凝塊(血栓栓塞)可導(dǎo)致血管堵塞或阻塞、血液停滯、缺血、中風(fēng)和/或死亡。已確立，減少的LYST引起血小板活化減少和PDGF的表達(dá)減少(參見實(shí)例7)。因此，LYST抑制劑可以用作抗血小板藥物，以減少或預(yù)防有害血小板凝集和血栓形成。提供了治療或預(yù)防個(gè)體的特征在于有害或過度血小板活化的疾病的方法，包括向個(gè)體投與有效量的一種或多種LYST抑制劑，以相對(duì)于未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體減少、降低、限制或預(yù)防有害或過度血小板凝集的一種或多種癥狀。因此，LYST抑制劑可用于治療或預(yù)防與不當(dāng)或有害血小板功能相關(guān)的疾病或病癥。由血小板的不當(dāng)/有害活化引起的病癥的實(shí)例包括血小板超聚集或增加的平均血小板體積(MPV)和血小板增多動(dòng)脈血栓；靜脈血栓(布-加綜合癥(Budd-Chiarisyndrome)；海綿竇血栓；腦靜脈竇血栓；深靜脈血栓；佩吉特-施羅特疾病(Paget-Schroetterdisease)；門靜脈血栓；頸靜脈血栓；腎靜脈血栓)；以及微循環(huán)血栓。動(dòng)脈血栓可部分或完全地阻礙血液流動(dòng)，引起下游缺血、中風(fēng)或心肌梗塞。血小板衍生生長因子(PDGF)的增加或不受控制的過度表達(dá)和不受控制的PDGF信號(hào)傳導(dǎo)已涉及癌細(xì)胞的生長、血管新生和癌轉(zhuǎn)移以及與如腫瘤的發(fā)展、存活和癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的疾病(綜述在安德烈(Andrae)等人,《基因與發(fā)育(GenesDev.)》,22:第1276-1312頁(2008)中)。已展示，抑制PDGF會(huì)減少神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長。PDGFR介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)的數(shù)種抑制劑(如伊馬替尼(imatinib))已進(jìn)入治療多種惡性疾病的臨床試驗(yàn)。因此，一種或多種LYST抑制劑可用于治療或預(yù)防與增加或上調(diào)的PDGF表達(dá)和/或不受控制的PDGF信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的任何疾病。例示性疾病包括癌癥，如膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(例如退行性寡突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤)和肉瘤(真皮肉瘤；食道鱗狀細(xì)胞肉瘤)，以及視網(wǎng)膜血管疾病(例如缺血性視網(wǎng)膜病變)。B.治療方法LYST的抑制可以經(jīng)由局部或全身遞送用作治療性機(jī)制。在一些實(shí)施例中，組合物是全身性投與的。遞送媒劑可經(jīng)選擇且用于將抑制劑靶向具體位置或細(xì)胞類型。在其他實(shí)施例中，抑制劑使用裝置或移植物(如上文所論述的那些)直接投與血管。在其他實(shí)施例中，投與途徑將抑制劑直接靶向特定器官或損傷的局部部位。已確立，血管增殖的過程和發(fā)炎相關(guān)。據(jù)相信，LYST緩和促進(jìn)增生性病癥的免疫過程，如再狹窄過程。早期藥物介入可排除長期療法和與長期療法相關(guān)的任何潛在不良副作用。舉例來說，本文中所公開的組合物可減少或預(yù)防新內(nèi)膜形成，但允許出現(xiàn)新組織生長。以下更詳細(xì)地論述使用所公開的LYST抑制劑(任選地包括遞送媒劑)治療和預(yù)防疾病和病癥的方法。對(duì)照LYST抑制劑的作用可與對(duì)照相比。適合的對(duì)照為本領(lǐng)域中已知且包括例如未經(jīng)治療的細(xì)胞或未經(jīng)治療的個(gè)體。在一些實(shí)施例中，對(duì)照為來自經(jīng)治療個(gè)體或未經(jīng)治療個(gè)體的未經(jīng)治療的組織。優(yōu)選地，對(duì)照的細(xì)胞或組織來源于與經(jīng)治療細(xì)胞或組織相同的組織。在一些實(shí)施例中，未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體罹患與所治療個(gè)體相同的疾病或病況。舉例來說，在一些實(shí)施例中，將受抗LYST治療影響的一種或多種藥理學(xué)或生理學(xué)標(biāo)記物或路徑與未經(jīng)治療的對(duì)照細(xì)胞或未經(jīng)治療的對(duì)照個(gè)體中的相同藥理學(xué)或生理學(xué)標(biāo)記物或路徑比較。舉例來說，抗LYST治療的個(gè)體可與用其他新內(nèi)膜形成抑制劑(如雷帕霉素(rapamycin))治療的個(gè)體比較。用其他新內(nèi)膜形成抑制劑治療的個(gè)體與用LYST抑制劑治療的個(gè)體相比可具有更大的術(shù)后狹窄發(fā)生率或減少的新血管組織形成。包括一種或多種LYST抑制劑的醫(yī)藥組合物可以多種方式投與，取決于需要局部還是全身治療，且取決于待治療的區(qū)域。舉例來說，所公開的組合物可靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、腔內(nèi)或經(jīng)皮投與。組合物可腸胃外(例如靜脈內(nèi))、通過肌肉內(nèi)注射、通過腹膜內(nèi)注射、經(jīng)皮、體外、表面等投與，包括表面鼻內(nèi)投與或通過吸入劑投與。組合物的腸胃外投與(如果使用)通常特征為注射?？勺⑸湔{(diào)配物可以常規(guī)形式制備，作為液體溶液或懸浮液，適用于在注射之前懸浮在液體中的溶液的固體形式，或作為乳液。還論述了涉及使用緩慢釋放或持續(xù)釋放系統(tǒng)使得恒定劑量得以維持的投與。在某些實(shí)施例中，組合物經(jīng)局部投與，例如通過直接注射到待治療的部位。藥物的局部遞送可減少與全身遞送相關(guān)的副作用或毒性，且可因增加的局部劑量而產(chǎn)生增強(qiáng)的治療結(jié)果。提供了局部(即，經(jīng)由局部藥物遞送，LDD)投與所公開的LYST抑制劑的方法。在某些實(shí)施例中，LYST抑制劑可直接投與所治療組織，如動(dòng)脈或靜脈，且不造成不良全身作用。在其他實(shí)施例中，組合物經(jīng)注射或另外直接投與到一個(gè)或多個(gè)手術(shù)部位。通常，局部注射造成大于可通過全身性投與實(shí)現(xiàn)的增加的局部組合物濃度。在優(yōu)選實(shí)施例中，組合物通過局部注射或表面投與直接遞送到組織、假體、移植物或醫(yī)療裝置。在一些實(shí)施例中，LYST抑制劑局部遞送產(chǎn)生比通過全身性投與相同化合物實(shí)現(xiàn)的大兩倍、10倍、100倍、500倍、1000倍或超過1000倍的濃度。在一些實(shí)施例中，局部投與的LYST抑制劑在遞送部位處在一段時(shí)間內(nèi)以恒定速率穩(wěn)定地釋放。優(yōu)選地，穩(wěn)定釋放維持LYST抑制劑在遞送部位處的所需濃度。在處于疾病癥狀發(fā)作之前、期間或之后的時(shí)間段期間，或在一種或多種疾病癥狀發(fā)作之前、期間或之后的時(shí)間段的任何組合，可投與所公開的LYST抑制劑。舉例來說，個(gè)體可在疾病癥狀發(fā)作之前每1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、35或48天投與一種或多種劑量的組合物。個(gè)體可在疾病癥狀發(fā)作之后每1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、35或48天投與一種或多種劑量的組合物。在一些實(shí)施例中，投與多種劑量的組合物，隨后疾病病況明顯改善。舉例來說，在一些實(shí)施例中，個(gè)體歷經(jīng)1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、35或48天或數(shù)周的時(shí)間段，接受1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、35或48天，隨后疾病或病況明顯改善。因此，取決于待治療的疾病或病癥，在相對(duì)于診斷、預(yù)后、手術(shù)或損傷的不同時(shí)間，可投與所公開的包括一種或多種LYST抑制劑的組合物?？筁YST療法的開始時(shí)機(jī)應(yīng)基于個(gè)體的需求確定，且可在手術(shù)或損傷時(shí)到手術(shù)或損傷后一天或多天、數(shù)周或數(shù)月范圍內(nèi)變化。提供了使用調(diào)配物以便延遲釋放LYST抑制劑的方法。在一些實(shí)施例中，使用抑制劑的療法可在血管新組織生長出現(xiàn)時(shí)停止。在一些實(shí)施例中，單一劑量的一種或多種LYST抑制劑以一種或多種推注劑量形式向個(gè)體遞送，以將一種或多種抑制劑的血液濃度提高到所需水平。推注可通過任何方式給予，如經(jīng)由注射給予。推注劑量的放置可變化，取決于所需作用和待治療的目標(biāo)器官或組織。在一個(gè)特定實(shí)施例中，推注在投與其他劑型(如脈沖式釋放劑量形式)之前給予。因此，可使用用于立即、延遲或脈沖式釋放的調(diào)配物的組合，將一種或多種LYST抑制劑的所需血液濃度維持所需時(shí)間段。在粘連的情況下，正常解剖學(xué)結(jié)構(gòu)之間的結(jié)締組織的沉積是不必要的，并且因此預(yù)防血管組織發(fā)展并非有害的。因此，為了預(yù)防和減少粘連，LYST抑制劑將通常在手術(shù)時(shí)或手術(shù)后不久(例如在一周內(nèi))施用。在處于新內(nèi)膜形成風(fēng)險(xiǎn)中的外科手術(shù)的情況下，例如組織移植物或支架的狹窄或再狹窄，可在手術(shù)時(shí)投與一種或多種LYST抑制劑。在涉及皮膚的損傷或手術(shù)的情況下，LYST抑制劑可在皮膚表面重新形成上皮之后施用。涂布在移植物和裝置上通過將一種或多種抑制劑結(jié)合到醫(yī)療裝置(如支架或其他假體)中，通過將抑制劑裝載到所述裝置的結(jié)構(gòu)或密封材料之中或之上，可局部遞送一種或多種LYST抑制劑。抑制劑的釋放速率可利用許多方法控制，包括改變以下各項(xiàng)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：可吸收材料與藥劑的比率，可吸收材料的分子量、抑制劑的組成、可吸收聚合物的組成、涂層厚度、涂層數(shù)目和其相對(duì)厚度、抑制劑濃度和/或抑制劑與裝置或密封材料的物理或化學(xué)結(jié)合或連接。也可施用聚合物和其他材料(包括可吸收聚合物)的表涂層以控制一種或多種抑制劑的釋放速率。在一些實(shí)施例中，裝置或移植物組織上存在的LYST抑制劑的量可通過改變遞送媒劑來調(diào)整。還可調(diào)整抑制劑在整個(gè)組織中的滲透。以此方式，可小心地控制在植入部位處局部釋放的藥物的量。通常，LYST抑制劑或帶有抑制劑的遞送媒劑與裝置或移植材料離體接觸。接觸可在不存在或存在輕度攪動(dòng)或本領(lǐng)域中已知的其他方法下進(jìn)行，以確保抑制劑附著于或滲透裝置或移植物組織。攪動(dòng)可例如通過在定軌振蕩器上培育，或通過垂直旋轉(zhuǎn)，如通過在雜交爐的垂直傳送帶中培育來實(shí)現(xiàn)?？筛淖兣嘤桨敢杂绊懥Ｗ釉谘b置或移植物上的定位。遞送媒劑(如粒子)附著于裝置或移植物的量和定位還可通過改變媒劑上存在的附著和靶向配體(如所描述的那些)的類型和密度來改變。用于將藥物離體遞送到血管移植物的例示性組合物和方法論述在美國公開申請(qǐng)案第2006/0002971號(hào)、第2010/0151436號(hào)和美國專利第7,534,448號(hào)中。在有或沒有要求進(jìn)一步侵入性程序(如放置血管移植物或支架)的情況下，組合物和方法可用于將LYST抑制劑局部遞送到移植物。C.劑量和有效量在一些體內(nèi)方法中，LYST抑制劑的組合物以治療有效量投與個(gè)體。如本文中所用的術(shù)語“有效量”或“治療有效量”意指足以治療、抑制或緩解待治療病癥的一種或多種癥狀或以其他方式提供所需藥理和/或生理效應(yīng)的劑量。確切劑量將根據(jù)多種因素改變，如個(gè)體因變量(例如年齡、免疫系統(tǒng)、健康狀況等)、疾病或病癥和所實(shí)現(xiàn)的治療。關(guān)于所有所公開的化合物，隨著進(jìn)一步研究的進(jìn)行，將呈現(xiàn)關(guān)于用于治療不同患者的不同病況的恰當(dāng)劑量水平的信息，并且考慮接受體的治療背景、年齡和一般健康狀況，普通技術(shù)人員將能夠確定恰當(dāng)?shù)膭┝?。所選擇的劑量取決于所需治療作用、投與途徑和所需治療持續(xù)時(shí)間。通常，在每天每千克體重0.001mg與100mg之間的劑量水平投與哺乳動(dòng)物，最佳為人類。一般來說，關(guān)于靜脈內(nèi)注射或輸液，劑量可以更低。優(yōu)選地，組合物經(jīng)調(diào)配以實(shí)現(xiàn)在需要治療的部位處在約1與約1000μM之間的LYST抑制劑血清水平。在一些實(shí)施例中，LYST抑制劑有效預(yù)防免疫細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞、血小板和NK細(xì)胞)的正常生物學(xué)活性。舉例來說，一種或多種抑制劑的量可有效減少或預(yù)防巨噬細(xì)胞的遷移性或趨化性活性。在一個(gè)實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑的量有效預(yù)防或減少個(gè)體的新內(nèi)膜形成。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，與未經(jīng)治療的對(duì)照比較，一種或多種LYST抑制劑的量不妨礙個(gè)體的創(chuàng)傷愈合或新組織形成。優(yōu)選地，與未經(jīng)治療的對(duì)照比較，一種或多種LYST抑制劑的量在個(gè)體中有效預(yù)防或減少新內(nèi)膜形成且增強(qiáng)創(chuàng)傷愈合。在另一實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑的量有效降低損傷或手術(shù)部位處血管生長的量，預(yù)防或降低會(huì)引起纖維化、結(jié)疤、瘢痕瘤或粘連的高密度細(xì)胞和結(jié)締組織的形成。優(yōu)選地，一種或多種LYST抑制劑的量不妨礙創(chuàng)傷愈合。在另一實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑的量有效降低或抑制血小板活化。舉例來說，LYST抑制劑的量可有效預(yù)防或抑制損傷或手術(shù)部位處的不當(dāng)血小板凝集和趨化因子分泌。在另一實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑的量有效降低損傷或手術(shù)部位處對(duì)凝血酶活化起反應(yīng)由細(xì)胞產(chǎn)生或分泌的血小板衍生生長因子(PDGF)和/或轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)的量。一種或多種LYST抑制劑可有效減少PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C或PDGF-D的產(chǎn)生或分泌。因此，一種或多種LYST抑制劑可有效減少血清中生物活性PDGF的量。舉例來說，相對(duì)于在未經(jīng)治療的對(duì)照中的量，PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-CC、PDGF-DD或PGDF-AB的量可減少。因此，一種或多種LYST抑制劑可有效減少或預(yù)防因PDGF或因由PDGF控制的下游信號(hào)傳導(dǎo)事件出現(xiàn)的一種或多種生物學(xué)活性。舉例來說，一種或多種LYST抑制劑可有效減少或預(yù)防一種或多種酪氨酸激酶受體的活化，如PDGF受體α(PDGFRα)；PDGF受體β(PDGFRβ)；和/或PDGF受體αβ(PDGFαβ)。通過減少或預(yù)防一種或多種PDGF的活性，LYST抑制劑可減少或預(yù)防對(duì)數(shù)種控制細(xì)胞活性(包括細(xì)胞增殖、趨化性和肌動(dòng)蛋白再組織)的信號(hào)傳導(dǎo)路徑的PDGF介導(dǎo)的誘導(dǎo)。在另一實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑的量有效預(yù)防或降低會(huì)引起纖維化、結(jié)疤、瘢痕瘤或粘連的高密度細(xì)胞和結(jié)締組織的形成。優(yōu)選地，一種或多種LYST抑制劑的量不妨礙創(chuàng)傷愈合。D.組合療法所公開的包括LYST抑制劑的組合物、裝置和移植物可單獨(dú)或與一種或多種其他活性劑組合投與，作為治療性或預(yù)防性治療方案的一部分。舉例來說，組合物可在第一天、第二天、第三天或第四天或其組合投與。組合物可與第二活性劑同日或不同日投與。術(shù)語“組合(combination)”或“組合(combined)”用于指伴隨性、同時(shí)或連續(xù)投與兩種或更多種藥劑。因此，可以伴隨地(例如，以混合物形式)、單獨(dú)但同時(shí)地(例如，通過單獨(dú)的靜脈內(nèi)管線進(jìn)入同一個(gè)體中)或依次地(例如，首次給予化合物或藥劑中的一種，接著是第二種)投與所述組合。其他治療劑可為其他抗新內(nèi)膜劑、化學(xué)治療劑、抗體、抗生素、抗病毒劑、甾體和非甾體消炎劑、常規(guī)免疫治療劑、免疫抑制劑、細(xì)胞因子、趨化因子和/或生長因子、抗增生劑或抗遷移劑(其經(jīng)設(shè)計(jì)以用于治療或預(yù)防新內(nèi)膜形成或再狹窄)、影響遷移和細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生的藥劑、影響血小板沉積或血栓形成的藥劑以及促進(jìn)血管愈合和重新內(nèi)皮化的藥劑，描述在坦圭(Tanguay)等人《可生物降解支架、心臟科診所的現(xiàn)狀(CurrentStatusofBiodegradableStents,CardiologyClinics)》,12:699-713(1994)，J.E.蘇澤(J.E.Sousa),P.W.塞呂(P.W.Serruys)和M.A.科斯塔(M.A.Costa),《循環(huán)》107(2003)2274(第I部分),2283(第II部分)，K.J.薩盧(K.J.Salu),J.M.博斯曼斯(J.M.Bosmans),H.布爾特(H.Bult)和C.J.弗因特(C.J.Vrints),《心臟病學(xué)報(bào)(ActaCardiol)》59(2004)51中。例示性抗凝血酶藥劑包括(但不限于)肝素(包括低分子肝素)、R-水蛭素(R-Hirudin)、水蛭肽(Hirulog)、阿加曲班(Argatroban)、依非加群(Efegatran)、蜱抗凝血肽(Tickanticoagulantpeptide)和Ppack。例示性抗增殖劑包括(但不限于)太平洋紫杉醇(Paclitaxel，紫杉醇(Taxol))、QP-2長春新堿(QP-2Vincristin)、甲氨喋呤(Methotrexat)、血管抑肽(Angiopeptin)、絲裂霉素(Mitomycin)、BCP678、反義c-myc、ABT578、放射菌素-D、RestenASE、1-氯-脫氧腺苷、PCNA核酶和塞內(nèi)昔布(Celecoxib)。調(diào)節(jié)細(xì)胞復(fù)制/增殖的例示性藥劑包括雷帕霉素目標(biāo)(targetofrapamycin，TOR)抑制劑(包括西羅莫司(sirolimus)、依維莫司(everolimus)和ABT-578)，太平洋紫杉醇和抗瘤形成劑，包括烷基化劑(例如環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、二氯甲二乙胺(mechlorethamine)、氯芥苯丁酸(chlorambucil)、美法侖(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、丙卡巴肼(procarbazine)、達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、六甲蜜胺(altretamine)、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)和奧沙利鉑(oxaliplatin))，抗腫瘤抗生素(例如博萊霉素(bleomycin)、放射菌素D、光神霉素(mithramycin)、絲裂霉素C(mitomycinC)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、安吖啶(amsacrine)、拓?fù)涮婵?topotecan)、伊立替康(irinotecan)、多柔比星(doxorubicin)、道諾霉素(daunorubicin)、艾達(dá)霉素(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)和米托蒽醌)，抗代謝物(例如脫氧柯福霉素(deoxycoformycin)、6-巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、硫唑嘌呤、2-氯去氧腺苷、羥脲、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、卡培他濱(capecitabine)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosinearabinoside)、氮雜胞苷(azacytidine)、吉西他濱(gemcitabine)、氟達(dá)拉賓磷酸鹽(fludarabinephosphate)和天冬酰胺酶)、抗有絲分裂劑(例如長春新堿、長春堿(vinblastine)、長春瑞濱(vinorelbine)、多西他賽(docetaxel)、雌莫司汀(estramustine))和分子靶向劑(例如伊馬替尼(imatinib)、維甲酸(tretinoin)、貝瑟羅汀(bexarotene)、貝伐單抗(bevacizumab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、奧格米星(ogomicin)和地尼白介素(denileukindiftitox))。例示性抗再狹窄劑包括(但不限于)免疫調(diào)節(jié)劑，如西羅莫司(雷帕霉素)、他克莫司、Biorest、咪唑立賓(Mizoribin)、環(huán)孢素、干擾素γ1b、來氟米特(Leflunomid)、曲尼司特(Tranilast)、皮質(zhì)類固醇(Corticosteroide)、霉酚酸(Mycophenolicacid)和雙磷酸脂(Biphosphonate)。例示性抗遷移劑和細(xì)胞外基質(zhì)調(diào)節(jié)劑包括(但不限于)鹵夫酮(Halofuginone)、丙基羥化酶抑制劑、C蛋白酶抑制劑、MMP抑制劑、巴馬司他(Batimastat)、普羅布可(Probucol)。抗血小板劑的實(shí)例包括(但不限于)肝素。在一些實(shí)施例中，其他治療劑為N-3,4-三羥基苯甲酰胺或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或酯，地多西(didox)、酰亞胺酯(imidate)或羥脲，如美國專利第8,029,815號(hào)中所述?？梢韵騻€(gè)體局部或全身性地投與其他治療劑，或?qū)⑵渫坎蓟蚪Y(jié)合到裝置或移植物之上或之中。其他治療性試劑可通過相同或不同途徑和通過不同方式投與。舉例來說，一種或多種LYST抑制劑可與通過不同方式(如全身性地)遞送的以下各項(xiàng)中的一種或多種組合局部遞送：太平洋紫杉醇、紫杉德(taxotere)和其他紫杉烷類化合物、甲氨蝶呤、蒽環(huán)霉素如多柔比星、依維莫司、西羅莫司、雷帕霉素或雷帕霉素衍生物。在其他實(shí)施例中，一種或多種LYST抑制劑可以用于減少或預(yù)防與使用一種或多種其他治療劑相關(guān)的非所需副作用。舉例來說，一種或多種LYST抑制劑可與抗腫瘤劑博萊霉素一起使用，以預(yù)防與博萊霉素相關(guān)的肺纖維化。將通過參考以下非限制性實(shí)例進(jìn)一步理解本發(fā)明。實(shí)例實(shí)例1：米色突變減少組織移植物中的狹窄方法和材料組織工程化的血管移植物(TEVG)通過以下方式開發(fā)：將自體骨髓衍生的單核細(xì)胞接種在由聚乙醇酸纖維管制造的生物可降解管狀骨架上，所述聚乙醇酸纖維管涂布有聚乳酸和聚己內(nèi)酯的50:50共聚物。開發(fā)用于評(píng)估TEVG功能的鼠類模型，以努力闡明構(gòu)成TEVG形成基礎(chǔ)的細(xì)胞和分子機(jī)制。下腔靜脈(IVC)插入移植物模型為經(jīng)驗(yàn)證的模型，其用于研究血管移植物在與豐坦循環(huán)相似的低壓、高流動(dòng)循環(huán)系統(tǒng)中的用途。這種模型廣泛地用于研究TEVG中的新組織形成。將由PGA-PCL/LA構(gòu)成的生物可降解導(dǎo)管移植物分別植入到野生型小鼠和米色突變體小鼠的下腔靜脈中，且無細(xì)胞接種。移植物在手術(shù)之后2周取出，分割且測量血管的直徑并評(píng)估開放性。結(jié)果取決于小鼠的品系，當(dāng)TEVG以IVC插入移植物形式植入時(shí)，觀察到狹窄率的顯著變化。確切地說，應(yīng)注意，在具有米色突變的小鼠中植入的TEVG具有格外低的狹窄率。在C57B6(野生型小鼠)(N＝25)和米色突變體(N＝10)兩者中比較以IVC插入移植物形式植入的TEVG的開放性和內(nèi)腔直徑(表1)。野生型小鼠展現(xiàn)80％狹窄，且內(nèi)腔直徑經(jīng)測量為0.33mm，而米色小鼠展現(xiàn)10％狹窄率，且內(nèi)腔直徑經(jīng)測量為0.71mm(T檢驗(yàn)<0.001且卡方0.0002)(圖1)。表1：從米色(Bg)和野生型(Wt)小鼠取出的TEVG的開放性和內(nèi)腔直徑的差異Gunze21Gn直徑SD開放性(>0.45mm)開放性(％)米色100.710.16990Lyst-tm1b50.730.175100WT250.330.17520實(shí)例2：米色突變減少巨噬細(xì)胞浸潤到組織移植物中方法和材料先前已使用鼠類模型展示出，血管新組織形成由來源于宿主的細(xì)胞產(chǎn)生，且血管新組織形成的過程利用免疫系統(tǒng)，特別是來源于宿主的巨噬細(xì)胞協(xié)調(diào)。過度巨噬細(xì)胞浸潤引起狹窄，而巨噬細(xì)胞浸潤的抑制預(yù)防新組織形成。測量上文實(shí)例1中所述的米色和野生型小鼠兩者的取出的移植物中的巨噬細(xì)胞數(shù)目。使用對(duì)CD31細(xì)胞標(biāo)記物具有特異性的抗體，在每一移植物的組織切片上進(jìn)行免疫組織化學(xué)以表征每一組中的內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)目和形態(tài)。結(jié)果在手術(shù)之后2周，在米色小鼠中植入的TEVG與在野生型小鼠中植入的TEVG相比展現(xiàn)顯著更少的巨噬細(xì)胞浸潤。參見圖2。值得注意的是，內(nèi)皮細(xì)胞的免疫組織化學(xué)(使用對(duì)CD31具有特異性的抗體)不展示出來自野生型和米色小鼠的移植物切片之間的任何差異，指示新組織形成在兩個(gè)組中是類似的。實(shí)例3：米色表型從LYST基因中的突變產(chǎn)生方法和材料米色突變由LYST基因的自發(fā)突變產(chǎn)生(圖3)。為了分析蛋白表達(dá)，設(shè)計(jì)6種不同引物(分別命名為LYST1、LYST3、LYST4、LYST5和LYST6)以覆蓋全部LYST基因區(qū)域。LYST-5引物覆蓋外顯子52的區(qū)域，其包括在米色小鼠基因型中鑒別出的氨基酸突變。原始細(xì)胞用作標(biāo)準(zhǔn)以計(jì)算相對(duì)mRNA水平。結(jié)果鑒別出米色小鼠中引起米色表型的特定突變。全長LYST基因編碼3801個(gè)氨基酸的多肽。LYST的突變?cè)谕怙@子52上出現(xiàn)，引起氨基酸異亮氨酸缺失(ile3741del)(圖3)。分子分析展示出，在兩組之間的mRNA的表達(dá)方面無顯著差異。盡管野生型和突變體蛋白的轉(zhuǎn)錄水平等效，但無突變體蛋白的翻譯。另外，根據(jù)免疫組織化學(xué)和蛋白印跡法，LYST蛋白表達(dá)在米色突變體小鼠中耗乏(圖4)。這些結(jié)果指示，米色小鼠中的LYST基因突變影響在從基因翻譯之后的蛋白修飾水平。實(shí)例4：LYST基因中的米色突變改變免疫過程方法和材料測試米色突變通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)來抑制TEVG狹窄形成的假設(shè)。將骨髓從C57B6(野生型)小鼠移植到米色突變體小鼠中，且反之亦然。進(jìn)行FACS分析，以測定米色和野生型小鼠中的LYST單核細(xì)胞百分比。另外，與野生型相比，在米色突變體小鼠中，在用血纖維蛋白刺激后的血小板活化能力降低。結(jié)果在用來自米色小鼠的骨髓移植的野生型小鼠中展示出TEVG狹窄的顯著抑制。類似地，當(dāng)將TEVG植入用來自野生型小鼠的骨髓移植的米色小鼠中時(shí)，其展現(xiàn)較高TEVG狹窄率。這些發(fā)現(xiàn)指示米色突變經(jīng)由其對(duì)免疫系統(tǒng)的作用來抑制TEVG狹窄。分別來自野生型和米色小鼠的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的FACS分析展示出表型群體中的差異。展示分析流式細(xì)胞儀的代表結(jié)果的一系列散點(diǎn)圖展示出分別來自WT3、WT4、bg3和bg4小鼠的CD115(Y軸)和CD11b(X軸)染色的單核細(xì)胞比例。還測定了分別來自WT3、WT4、bg3和bg4小鼠的LYC6和F4/80染色的細(xì)胞的分布。計(jì)算命名為LYC6“高”和LYC6“低”的細(xì)胞百分比。結(jié)果代表在用硫乙醇酸酯刺激之后3天的腹膜巨噬細(xì)胞，經(jīng)選通以排除死細(xì)胞和殘?jiān)?。散點(diǎn)圖展示分析流式細(xì)胞儀的代表結(jié)果，繪制分別來自野生型小鼠和米色小鼠的PE-A染色的細(xì)胞(Y軸)對(duì)FITC-A熒光(X軸)。在用血纖維蛋白刺激之后，在血小板活化之后，選通細(xì)胞以排除死細(xì)胞和殘?jiān)?。在用硫乙醇酸酯刺激之?天，在腹膜巨噬細(xì)胞中，LY6C“高”單核細(xì)胞的數(shù)目在野生型組(WT3，WT4)中較高，而Ly6C“低”單核細(xì)胞的數(shù)目在米色組(bg3，bg)中較高。FACS分析還展示出，在用血纖維蛋白刺激細(xì)胞后，與野生型小鼠相比，在米色突變體小鼠中，血小板活化的能力降低。實(shí)例5：LYST介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)可使用LYST蛋白的抗體獲得方法和材料阻斷LYST蛋白的作用使用抗LYST抗體研究。C57B6小鼠用抗LYST抗體處理，且接著用TEVG植入。在手術(shù)前1天以及手術(shù)后1周，在三個(gè)不同治療組中的每一組中，將抗LYST抗體注射到野生型小鼠的腹膜中(0mg/kg(對(duì)照)、10mg/kg或50mg/kg)。在手術(shù)后2周，將小鼠處死，且取出移植物和脾。使用移植物的蘇木精(Hematoxylin)和伊紅(eosin)染色(HE染色)進(jìn)行組織學(xué)。脾組織使用對(duì)LYST蛋白具有特異性的抗體通過蛋白印跡法分析，以測定每一處理組中LYST蛋白的相對(duì)有效量。結(jié)果抗LYST抗體的全身注射展示出移植物開放性以劑量依賴性方式改善。觀察到巨噬細(xì)胞浸潤的明顯抑制和TEVG狹窄降低。開放性的這種劑量依賴性增加伴隨著脾組織內(nèi)在LYST蛋白存在下的劑量依賴性減少，如通過免疫組織化學(xué)所測定。因此，已確立引起新組織形成改善和TEVG狹窄形成抑制的免疫調(diào)節(jié)的方法。實(shí)例6：缺乏功能Lyst基因的轉(zhuǎn)基因小鼠并不展現(xiàn)TEVG的狹窄方法和材料產(chǎn)生缺乏功能LYST蛋白的C57BL/6轉(zhuǎn)基因小鼠。將這些小鼠命名為C57BL/6Lysttmlb。用于產(chǎn)生這種基因敲除品系的技術(shù)使用LacZ報(bào)導(dǎo)體。LacZ的PCR證實(shí)基因敲除模型。為了測定C57BL/6Lysttmlb基因敲除小鼠是否將在TEVG植入之后出現(xiàn)狹窄，5只C57BL/6Lysttmlb小鼠和5只C57BL/6野生型小鼠用未接種的TEVG植入。在植入后2周，取出并檢查TEVG。結(jié)果在植入2周后，100％在Lysttmlb基因敲除小鼠(n＝5)中植入的未接種組織工程化血管移植物(TEVG)開放(參見圖5；表1)。相比之下，C57BL/6野生型小鼠展現(xiàn)約90％狹窄發(fā)生率。實(shí)例7：Lyst對(duì)活化起反應(yīng)調(diào)節(jié)血小板功能方法和材料應(yīng)理解，Lyst蛋白與血小板功能有關(guān)，且薛迪克-東氏綜合癥(人類相關(guān))的特征為“血小板儲(chǔ)存池缺陷”。富血小板血漿(PRP)獲自米色(Bg)和野生型(WT)小鼠。樣品通過凝血酶活化且將來自每一組(n＝7)的分泌PDGF(血小板衍生生長因子)的總濃度與靜息、非活化對(duì)照(n＝5)比較。結(jié)果在活化和靜息兩組中，凝血酶活化引起PDGF的顯著更大濃度。然而，在與野生型相比時(shí)，來自活化血小板的PDGF分泌在米色組中顯著降低(參見圖6)。因此，Lyst活性的減少也減少PDGF，指示減少Lyst活性的藥劑還可用作抗血小板劑。序列表<110>國家兒童醫(yī)院研究所克里斯多夫·布羅伊爾日比野成俊維杜·加格卡梅隆·貝斯特<120>用于抗LYST免疫調(diào)節(jié)的組合物和方法<130>NWCH100PCT<150>US61/987910<151>2014-05-02<160>2<170>PatentIn版本3.5<210>1<211>13503<212>DNA<213>智人<400>1gtgcgcggcggcggcggcagcggcgtcggctcggggttctccgggagagggggagtgcgc60ggcggccgcagctgccacaaaccaggtgaagctttgttctaagaatatttgtttcatcta120gtttatgagtccaaatgatatagactgtaaatgtcacagcagtggtgaaagactgctcgg180tcatgagcaccgacagtaactcactggcacgtgaatttctgaccgatgtcaaccggcttt240gcaatgcagtggtccagagggtggaggccagggaggaagaagaggaggagacgcacatgg300caacccttggacagtaccttgtccatggtcgaggatttctattacttaccaagctaaatt360ctataattgatcaggcattgacatgtagagaagaactcctgactcttcttctgtctctcc420ttccactggtatggaagatacctgtccaagaagaaaaggcaacagattttaacctaccgc480tctcagcagatataatcctgaccaaagaaaagaactcaagttcacaaagatccactcagg540aaaaattacatttagaaggaagtgccctgtctagtcaggtttctgcaaaagtaaatgttt600ttcgaaaaagcagacgacagcgtaaaattacccatcgctattctgtaagagatgcaagaa660agacacagctctccacctcagattcagaagccaattcagatgaaaaaggcatagcaatga720ataagcatagaaggccccatctgctgcatcattttttaacatcgtttcctaaacaagacc780accccaaagctaaacttgaccgcttagcaaccaaagaacagactcctccagatgctatgg840ctttggaaaattccagagagattattccaagacaggggtcaaacactgacattttaagtg900agccagctgccttgtctgttatcagtaacat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