涉及腫瘤生長進展和轉(zhuǎn)移的過程由在癌細胞中激活的信號傳導途徑介導。ERK途徑在通過傳遞來自配體結合的細胞表面受體酪氨酸激酶(“RTK's”)諸如ErbB家族、PDGF、FGF和VEGF受體酪氨酸激酶的細胞外信號來調(diào)節(jié)哺乳動物細胞生長中發(fā)揮核心作用。RTK的激活誘導以Ras的激活開始的一系列磷酸化事件。Ras的激活導致Raf(一種絲氨酸-蘇氨酸激酶)的募集和激活。然后活化的Raf磷酸化并激活MEK1/2，其然后磷酸化并激活ERK1/2。當激活時，ERK1/2磷酸化參與多種細胞事件(包括細胞骨架改變和轉(zhuǎn)錄激活)的幾種下游靶標。ERK/MAPK途徑是細胞增殖最重要的一種，并且據(jù)信ERK/MAPK途徑在許多腫瘤中頻繁激活。在ERK1/2的上游的Ras基因在幾種癌癥中突變，包括結腸直腸癌、黑素瘤、乳腺癌和胰腺腫瘤。高Ras活性伴隨著許多人類腫瘤中升高的ERK活性。此外，BRAF(一種Raf家族的絲氨酸-蘇氨酸激酶)的突變與增加的激酶活性相關。已經(jīng)在黑素瘤(60％)、甲狀腺癌(大于40％)和結腸直腸癌中鑒定了BRAF中的突變。這些觀察結果表明ERK1/2信號傳導通路是廣譜的人類腫瘤中抗癌療法的有吸引力的途徑(M.HohnoandJ.Pouyssegur,Prog.inCellCycleRes.20035:219)。ERK途徑也被認為是治療疼痛和炎癥的有希望的治療靶標(Ma,WeiyaandRemi,Quirion.“TheERK/MAPKPathway,asaTargetForTheTreatmentOfNeuropathicPain”ExpertOpin.Ther.Targets.20059(4):699-713，以及Sommer,ClaudiaandFrankBirklein“ResolvinsandInflammatoryPain”F1000MedicineReports20113:19)。因此，ERK活性(即ERK1和/或ERK2活性)的小分子抑制劑可用于治療廣譜的癌癥，諸如黑素瘤、胰腺癌、甲狀腺癌、結腸直腸癌、肺癌、乳腺癌和卵巢癌，以及治療疼痛和炎癥，諸如關節(jié)炎、腰痛、炎性腸病和風濕病。本發(fā)明提供了用于制備(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮、藥學上可接受的鹽和所述鹽的結晶形式的方法和中間體。本發(fā)明還提供了包含所述鹽或所述鹽的結晶形式的藥物組合物，和使用所述鹽和所述鹽的結晶形式的方法。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮的合成述于WO2013/130976。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了用于制備I的方法，I為可用于制備VIII的有用中間體(WO2013/130976)?；衔颲III為ERK抑制劑和用于治療過度增殖性病癥的藥物。所述方法提供了得到VIII和有用中間體VI和VII的有效路線。VII與VI的烷基化得到I，其最終與1-甲基-1H-吡唑-5-胺(XIV)縮合(方案A)。方案A本發(fā)明還提供了一種不對稱酶促還原，其容許立體特異性還原1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙酮以得到(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇(IV)。本發(fā)明還提供了一種制備4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)的改進方法。本發(fā)明提供了一種結晶性苯磺酸鹽(VIIIb)，其具有容許容易配制和良好生物利用度的期望物理性質(zhì)。在實施方案1中，本發(fā)明提供了用于制備式VIII的化合物的方法，所述方法包括以下步驟：(a)使4-溴-1-氯-2-氟苯與金屬化劑于非質(zhì)子性有機溶劑中接觸以得到有機鎂化合物，其與2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺反應以得到2-氯-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酮(II)；(b)使II與甲酸鈉和甲酸于水性乙醇中接觸以得到1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙酮(III)(c)使III與酮還原酶接觸以得到(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇(IV)；(d)使IV與氯硅烷(Ra)3SiCl和至少一種堿于非極性非質(zhì)子性溶劑中接觸以得到(V)，并隨后添加磺酰氯RbS(O)2Cl以得到VI，其中Ra在每次出現(xiàn)時獨立地為C1-6烷基或苯基且Rb選自C1-4烷基或苯基，其任選地取代有1至3個獨立地選自C1-3烷基、鹵素、硝基、氰基或C1-3烷氧基的基團；(e)使4-(2-(甲基磺?；?嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)與強堿于有機溶劑中接觸，隨后添加VI以得到XI；(f)用氧化劑處理XI以得到I；(g)在降低的溫度于非質(zhì)子性溶劑中用強堿處理1-甲基-1H-吡唑-5-胺并添加式I的化合物以得到IX；和(h)使IX與脫甲硅烷基化劑(de-silylatingagent)接觸以得到VIII。在實施方案2中，本發(fā)明提供了實施方案1的方法，其中步驟(c)中的酮還原酶提供至少約98％的對映異構體過量。在實施方案3中，本發(fā)明提供了實施方案2的方法，其中步驟(c)中的酮還原酶為KRED-NADH-112。在實施方案4中，本發(fā)明提供了實施方案2的方法，其中步驟(c)還包括作為輔助因子的NADH或NADPH。在實施方案5中，本發(fā)明提供了實施方案4的方法，其中所述輔助因子用輔助底物或另外的酶再生，所述輔助底物選自仲醇，所述另外的酶選自醇脫氫酶、葡萄糖脫氫酶、甲酸脫氫酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、亞磷酸脫氫酶或氫化酶。在實施方案6中，本發(fā)明提供了實施方案2至5中任一項的方法，其中所述酮還原酶步驟于水性介質(zhì)中在有機共溶劑存在情況下在至1至50℃溫度進行。在實施方案7中，本發(fā)明提供了實施方案6的方法，其中所述酮還原酶步驟產(chǎn)生均勻的混懸液。在實施方案8中，本發(fā)明提供了實施方案1的方法，其中所述氯硅烷為叔丁基二甲基氯硅烷，所述磺酰氯為甲烷磺酰氯，步驟(d)中的堿為DMAP和TEA且所述非極性非質(zhì)子性溶劑為DCM且在步驟(e)中所述有機溶劑為二噁烷。在實施方案9中，本發(fā)明提供了實施方案1的方法，其中(Ra)3Si為叔丁基二甲基甲硅烷基，Rb為甲基，且在步驟(e)中所述強堿為六甲基二硅氮烷鉀(potassiumhexamethyldisilazane)且所述有機溶劑為二甘醇二甲醚。在實施方案10中，本發(fā)明提供了實施方案1的方法，其中在步驟(a)中所述金屬化劑為i-PrMgCl和LiCl且所述溶劑為THF，在步驟(c)中所述酮還原酶為KRED-NADH-112且步驟(c)還包括輔助因子NAD和輔助因子再生劑葡萄糖脫氫酶，在步驟(d)中(Ra)3Si為叔丁基二甲基甲硅烷基，Rb為甲基，所述堿為DMAP和TEA且所述非極性非質(zhì)子性溶劑為DCM，且在步驟(e)中所述強堿為六甲基二硅氮烷鉀且所述有機溶劑為二甘醇二甲醚。在實施方案11中，本發(fā)明提供了實施方案1的方法，其中在步驟(a)中所述金屬化劑為i-PrMgCl和LiCl且所述溶劑為THF，在步驟(c)中所述酮還原酶為KRED-NADH-112且步驟(c)還包括輔助因子NAD和輔助因子再生劑是葡萄糖脫氫酶，在步驟(d)中(Ra)3Si為叔丁基二甲基甲硅烷基，Rb為甲基，所述堿為DMAP和TEA且所述非極性非質(zhì)子性溶劑為DCM，在步驟(e)中所述強堿為六甲基二硅氮烷鉀且所述有機溶劑為二甘醇二甲醚，且在步驟(g)中所述強堿為六甲基二硅氮烷鉀且所述非質(zhì)子性溶劑為THF。在實施方案12中，本發(fā)明提供了實施方案1的方法，其中在步驟(a)中所述金屬化劑為i-PrMgCl和LiCl且所述溶劑為THF，在步驟(c)中所述酮還原酶為KRED-NADH-112且步驟(c)還包括輔助因子NAD和輔助因子再生劑是葡萄糖脫氫酶，在步驟(d)(Ra)3Si為叔丁基二甲基甲硅烷基，Rb為甲基，所述堿為DMAP和TEA且所述非極性非質(zhì)子性溶劑為DCM，在步驟(e)中所述強堿為六甲基二硅氮烷鉀且所述有機溶劑為二甘醇二甲醚，在步驟(g)中所述強堿為六甲基二硅氮烷鉀且所述非質(zhì)子性溶劑為THF，且在步驟(h)中所述脫硅基化劑為甲醇化的HCl。在實施方案13中，本發(fā)明提供了實施方案1的方法，其中來自步驟h的化合物VIII與磺酸于有機溶劑和水中接觸以得到VIIIa的鹽，其中Rc為芳基磺酸在實施方案14中，本發(fā)明提供了實施方案13的方法，其中RcSO3H為苯磺酸且所述溶劑為甲基乙基酮和水以得到苯磺酸鹽VIIIb。在實施方案15中，本發(fā)明提供了用于制備4-(2-(甲基磺?；?嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)的方法，所述方法包括以下步驟：(a)使2-氟-4-碘吡啶與金屬化劑于非質(zhì)子性有機溶劑中接觸以得到有機鎂化合物，其與4-氯-2(甲基硫基)嘧啶在鈀催化劑存在情況下反應以得到4-(2-氟吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶(X)；(b)于THF中用叔丁醇鉀處理X，隨后用水性酸處理，以得到4-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)。在實施方案16中，本發(fā)明提供了實施方案15的方法，其中所述鈀催化劑為(1,3-二異丙基咪唑-2-基亞基)(3-氯吡啶基)二氯化鈀(II)，所述金屬化劑為i-PrMgCl和LiCl，且所述非質(zhì)子性溶劑為THF。在實施方案17中，本發(fā)明提供了化合物(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽。在實施方案18中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽和藥學上可接受的賦形劑。在實施方案19中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽。在實施方案20中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有包含處于以下位置的峰的X-射線粉末衍射圖：6.16±0.2、7.46±0.2、16.36±0.2、25.76±0.2和25.98±0.22θ。在實施方案21中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有基本上如圖1所示的X-射線粉末衍射圖。在實施方案22中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有基本上如圖19所示的13CNMR圖。在實施方案23中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有基本上如圖20所示的19FNMR圖。在實施方案24中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有基本上如圖19所示的13CNMR圖和基本上如圖20所示的19FNMR圖。在實施方案25中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有包含相對于CFCl3處于以下位置的峰的19FNMR圖：-111.1±0.4ppm和-115.4±0.4ppm(在293K)。在實施方案26中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有包含相對于四甲基硅烷處于以下位置的峰的13CNMR圖：157.7±0.2ppm、129.6±0.2ppm、125.8±0.2ppm和117.0±0.2ppm(在293K)。在實施方案27中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有基本上如圖2所示的DSC圖。在實施方案28中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含實施方案19至27中任一項的結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽和藥學上可接受的賦形劑。在實施方案29中，本發(fā)明提供了化合物(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽。在實施方案30中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽和藥學上可接受的賦形劑。在實施方案31中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽。在實施方案32中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式A。在實施方案33中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式A，其具有包含處于以下位置的峰的X-射線粉末衍射圖：5.76±0.2、13.44±0.2、15.64±0.2、19.40±0.22θ。在實施方案34中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式A，其具有基本上如圖12所示的X-射線粉末衍射圖。在實施方案35中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式A，其具有基本上如圖13所示的DSC圖。在實施方案36中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含權利要求31至35中任一項的結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式A和藥學上可接受的賦形劑。在實施方案37中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式B。在實施方案38中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式B，其具有包含處于以下位置的峰的X-射線粉末衍射圖：7.02±0.2、16.30±0.2、17.30±0.2、21.86±0.22θ。在實施方案39中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式B，其具有基本上如圖15所示的X-射線粉末衍射圖。在實施方案40中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式B，其具有基本上如圖16所示的DSC圖。在實施方案41中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含實施方案37至40中任一項的結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮對甲苯磺酸鹽形式B和藥學上可接受的賦形劑。在實施方案42中，本發(fā)明提供了化合物(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽。在實施方案43中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽和藥學上可接受的賦形劑。在實施方案44中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽。在實施方案45中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式I。在實施方案46中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式I，其具有包含處于以下位置的峰的X-射線粉末衍射圖：12.50±0.2、13.86±0.22θ。在實施方案47中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式I，其具有基本上如圖6所示的X-射線粉末衍射圖。在實施方案48中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式I，其具有基本上如圖7所示的DSC圖。在實施方案49中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含實施方案44至48中任一項的結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式I和藥學上可接受的賦形劑。在實施方案50中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式II。在實施方案51中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式II，其具有包含處于以下位置的峰的X-射線粉末衍射圖：12.80±0.2、22.42±0.2、24.92±0.22θ。在實施方案52中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式II，其具有基本上如圖8所示的X-射線粉末衍射圖。在實施方案53中，本發(fā)明提供了結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式II，其具有基本上如圖9所示的DSC圖。在實施方案54中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含權利要求50至53中任一項的結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸鹽形式II和藥學上可接受的賦形劑。在實施方案55中，本發(fā)明提供了無定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽。在實施方案56中，本發(fā)明提供了無定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有基本上如圖21所示的X-射線粉末衍射圖。在實施方案57中，本發(fā)明提供了無定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽，其具有基本上如圖22所示的DSC圖。在實施方案58中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含實施方案55至57中任一項的無定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽和藥學上可接受的賦形劑。附圖簡述圖1示出VIII結晶性苯磺酸鹽形式A的XRPD圖。圖2示出VIII結晶性苯磺酸鹽形式A的DSC和TGA分析。圖3示出VIII結晶性苯磺酸鹽形式A的單晶結構分析。圖4示出VIII游離堿的XRPD圖。圖5示出VIII游離堿的DSC分析。圖6示出VIII萘二磺酸鹽形式I的XRPD圖。圖7示出VIII萘二磺酸鹽形式I的DSC分析。圖8示出含有少量形式I的VIII萘二磺酸鹽形式II的XRPD圖。圖9示出VIII萘二磺酸鹽形式II的DSC分析。圖10示出VIII萘二磺酸鹽形式I的DVS圖。圖11示出VIII甲苯磺酸鹽IPA溶劑化物的XRPD圖。圖12示出VIII甲苯磺酸鹽形式A的XRPD圖。圖13示出VIII甲苯磺酸鹽形式A的DSC分析。圖14示出VIII甲苯磺酸鹽形式A的DVS圖。圖15示出VIII甲苯磺酸鹽無定形和形式B的混合物的XRPD圖。圖16示出VIII甲苯磺酸鹽無定形和形式B的混合物的DSC分析。圖17示出VIII甲苯磺酸鹽無定形的XRPD圖。圖18示出VIII苯磺酸鹽形式A的DVS分析。圖19示出VIII結晶性苯磺酸鹽形式A的13C固態(tài)NMR圖。圖20示出VIII結晶性苯磺酸鹽形式A的19F固態(tài)NMR圖。圖21示出VIII苯磺酸鹽無定形的XRPD圖。圖22示出VIII苯磺酸鹽無定形的DSC分析。具體實施方式現(xiàn)在將詳細參考本發(fā)明的某些實施方案，在所附結構和式中說明其實施例。盡管將結合所列舉的實施方案來描述本發(fā)明，但是應當理解，它們并不旨在將本發(fā)明限制于那些實施方案。本發(fā)明旨在覆蓋可包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)的所有替換、修改和等同物。本領域技術人員將認識到與本文所述的那些相似或等同的可用于本發(fā)明的實踐中的許多方法和材料。本發(fā)明決不限于所描述的方法和材料。在一個或多個所引入的文獻、專利和類似材料(包括但不限于定義的術語、術語使用、所描述的技術等)與本申請不同或矛盾的情況下，以本申請為準。如本說明書中所使用，無論在過渡短語中還是在權利要求的主體中，術語“包括”和“包含”都應被解釋為具有開放式含義。也就是說，術語將被解釋為與短語“至少具有”或“至少包括”同義。當在方法的上下文中使用時，術語“包括”意指該方法至少包括所述的步驟，但可包括另外的步驟。當在化合物或組合物的上下文中使用時，術語“包含”意指化合物或組合物至少包含所述的特征或組分，但也可包括另外的特征或組分。此外，當在本說明書和以下權利要求書中使用時，詞語“包括”、“包含”和“含有”旨在指定所述特征、整數(shù)、組分或步驟的存在，但是它們不排除存在或添加一個或多個其它特征、整數(shù)、組分、步驟或它們的組合。當與小時結合使用時，術語“約”表示±5小時。當與溫度結合使用時，術語“約”表示±5攝氏度。當與百分比或其它值結合使用時，術語“約”表示±10％。術語“手性”是指具有鏡像配偶體不重疊性的分子，而術語“非手性”是指可重疊在其鏡像配偶體上的分子。術語“異構體”是指具有相同式，但分子中原子排列不同且性質(zhì)不同的化合物。術語“立體異構體”是指具有相同化學構成但原子或基團在空間中的排列方面不同的化合物?！胺菍τ钞悩嬻w”是指具有兩個或更多個手性中心并且其分子彼此不是鏡像的立體異構體。非對映異構體具有不同的物理性質(zhì)，例如，熔點、沸點、光譜性質(zhì)和反應性。非對映異構體的混合物可在高分辨率分析操作諸如電泳和色譜法下分離。術語“對映異構體”是指彼此不重疊的鏡像的化合物的兩種立體異構體。本文使用的立體化學定義和慣例通常遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionaryofChemicalTerms(1984)McGraw-HillBookCompany,NewYork；和Eliel,E.andWilen,S.,"StereochemistryofOrganicCompounds",JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork,1994。本文所述的化合物可含有不對稱或手性中心，因此以不同的立體異構形式存在。許多有機化合物以光學活性形式存在，即它們具有旋轉(zhuǎn)平面偏振光的平面的能力。在描述光學活性化合物時，前綴D和L或R和S用于表示分子關于其手性中心的絕對構型。前綴d和l或(+)和(-)用于指定化合物的平面偏振光的旋轉(zhuǎn)符號，其中(-)或1表示該化合物是左旋的。帶有(+)或d的前綴的化合物是右旋的。對于給定的化學結構，這些立體異構體是相同的，除了它們是彼此的鏡像。特定的立體異構體也可稱為對映異構體，并且這些異構體的混合物通常稱為對映異構體混合物。對映異構體的50:50混合物被稱為外消旋混合物或外消旋體，其可在化學反應或過程中沒有立體選擇性或立體特異性的情況下出現(xiàn)。術語“外消旋混合物”和“外消旋體”是指沒有光學活性的兩種對映異構體的等摩爾混合物。本文所述的本發(fā)明方法還可用于制備同位素標記的本發(fā)明化合物，其與本文所述的那些相同，但是事實上一個或多個原子被原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)與通常在自然界中發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同的原子替代。所述任何特定原子或元素的所有同位素均涵蓋在本發(fā)明化合物及其用途的范圍內(nèi)?？刹⑷氡景l(fā)明化合物中的示例性同位素包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，諸如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I或125I。某些同位素標記的本發(fā)明化合物(例如，用3H和14C標記的那些)可用于化合物和/或底物組織分布測定。氚化(3H)和碳-14(14C)同位素因其易于制備和檢測而是有用的。此外，用更重的同位素諸如氘(即2H)取代可提供由于更大的代謝穩(wěn)定性(例如，體內(nèi)半衰期增加或劑量需求降低)而產(chǎn)生的某些治療優(yōu)勢，因此在一些情況下可能是優(yōu)選的。正電子發(fā)射同位素諸如15O、13N、11C和18F可用于正電子發(fā)射斷層掃描(PET)研究以檢查底物受體占據(jù)。同位素標記的本發(fā)明化合物通?？赏ㄟ^以下類似于下文實施例中公開的那些方法，通過用同位素標記的試劑代替非同位素標記的試劑制備。術語“互變異構體”或“互變異構形式”是指不同能量的結構異構體，其可通過低能量勢壘互相轉(zhuǎn)化。例如，質(zhì)子互變異構體(也稱為質(zhì)子移變互變異構體)包括通過質(zhì)子遷移的相互轉(zhuǎn)化，諸如酮-烯醇和亞胺-烯胺異構化。價鍵互變異構體包括通過重組一些鍵合電子的互變。術語“非質(zhì)子性(或非極性)溶劑意指這樣的有機溶劑：諸如乙醚、輕石油(ligroin)、戊烷、己烷、環(huán)己烷、庚烷、氯仿、苯、甲苯、二噁烷、四氫呋喃、二氯甲烷或乙酸乙酯。術語“極性非質(zhì)子性溶劑”是指這樣的有機溶劑：諸如甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、N-甲基吡咯烷酮或六甲基磷酰胺。術語“極性質(zhì)子性溶劑”是指這樣的有機溶劑：諸如低級鏈烷醇、甲酸或乙酸。術語“醚溶劑(etherealsolvent)”是指這樣的溶劑，諸如四氫呋喃、二甲氧基乙烷、二噁烷，或二烷基醚，諸如二乙醚和甲基叔丁基醚。本文使用的術語化合物的“衍生物”意指可通過簡單的化學方法從原始化合物獲得的化合物。本文使用的術語“保護基團”是指這樣的化學基團：(a)使反應性基團免受不期望的化學反應；和(b)可在不再需要保護反應性基團之后容易地除去。例如，芐基是伯羥基官能團的保護基團。術語“羥基保護基團”或“醇保護基團”意指保留羥基的保護基團，否則羥基將通過某些化學反應被修飾。羥基保護基團可為在所有其它反應步驟完成后可容易地除去的醚、酯或硅烷，諸如低級酰基(例如，乙?；虮；蚨谆宥』坠柰榛?，或芳烷基(例如，在苯環(huán)上任選取代的芐基)。本文使用的術語“氯硅烷”是指(Ra)3SiCl，其中Ra在每次出現(xiàn)時獨立地為C1-6烷基或苯基。本文使用的術語“脫保護試劑”是指與受保護的化學部分接觸以除去保護基團的試劑。用于脫保護的試劑和方案是公知的，并且可在Greene和Wuts或Harrison和Harrison(參見下文)中找到?；瘜W領域的技術人員將理解，有時方案必須針對特定分子進行優(yōu)化，并且這種優(yōu)化與本領域技術人員的能力相協(xié)調(diào)。本文使用的術語“任選的”或“任選地”意指隨后描述的事件或情況可以但不必發(fā)生，并且該描述包括事件或情況發(fā)生的情況和它不發(fā)生的情況。例如，“任選被烷基單取代或二取代的芳基”意指烷基可以但不一定存在，并且描述包括其中芳基被烷基單取代或二取代的情況，以及其中該芳基不被烷基取代的情況。當提及化學反應時，本文使用的術語“處理”、“接觸”或“反應”意指在適當?shù)臈l件下添加或混合兩種或更多種試劑以產(chǎn)生所示的和/或所需的產(chǎn)物。應當理解，產(chǎn)生所示和/或所需產(chǎn)物的反應不一定直接源于最初添加的兩種試劑的組合，即，可存在一種或多種在混合物中產(chǎn)生的中間體，其最終導致形成所示的和/或所需的產(chǎn)物。術語“離去基團”具有與在合成有機化學中其通常相關的含義，即能夠被親核試劑替代的原子或基團，包括鹵素(諸如氯、溴和碘)、烷基磺?；趸⒎蓟酋；趸?、烷基羰基氧基(例如乙酰氧基)、芳基羰基氧基、甲磺?；趸⒓妆交酋；趸⑷谆酋；趸?、芳基氧基(例如2,4-二硝基苯氧基)、甲氧基、N,O-二甲基羥基氨基等。術語“磺酰氯”是指化合物RbS(O)2Cl，其中Rb選自C1-4烷基或苯基，其任選地取代有1至3個獨立地選自C1-3烷基、鹵素、硝基、氰基、C1-3烷氧基的基團。Wittig試劑可用于從醛形成烯烴。Wittig試劑通常由鏻鹽制備，鏻鹽又通過三苯基膦與烷基鹵化物的反應制備。為了形成Wittig試劑(內(nèi)鎓鹽)，將鏻鹽懸浮于溶劑諸如乙醚或THF中并用強堿諸如苯基鋰或正丁基鋰處理。Sharpless二羥基化或雙羥基化用于由前手性烯烴對映選擇性制備1,2-二醇。該操作用鋨催化劑和化學計量的氧化劑[例如K3Fe(CN)6或N-甲基嗎啉氧化物(NMO)]來進行；它在緩沖溶液中進行以確保穩(wěn)定的pH，因為在微堿性條件下反應進行得更快。通過添加對映異構體富集的手性配體[(DHQD)2PHAL、(DHQ)2PHAL或其衍生物]實現(xiàn)對映體選擇性。這些試劑也可作為用于對映異構優(yōu)選的穩(wěn)定的預先包裝的混合物(AD-mixα和AD-mixβ，AD＝不對稱二羥基化)。本方法可使用KarlFischer法測定樣品中痕量的水。該方法可縮寫為“KF”。在制備本文所述化合物的方法中，可能有利的是將反應產(chǎn)物彼此分離和/或與起始物質(zhì)分離。通過本領域常用的技術將每個步驟或一系列步驟的所需產(chǎn)物分離和/或純化(以下稱為分離)至所需的均勻度。通常，這樣的分離包括多相萃取、從溶劑或溶劑混合物中結晶、蒸餾、升華或色譜法。色譜可包括任何數(shù)量的方法，包括例如：反相和正相；尺寸排除；離子交換；高、中、低壓液相色譜法和裝置；小規(guī)模分析；模擬移動床(SMB)和制備薄層或厚層色譜，以及小規(guī)模薄層和快速色譜技術。另一類分離方法包括用選擇的試劑處理混合物以結合所需產(chǎn)物、未反應的起始物質(zhì)、反應副產(chǎn)物等或者使得可通過其它方式分離所需產(chǎn)物、未反應的起始物質(zhì)、反應副產(chǎn)物等。這些試劑包括吸附劑或吸收劑，諸如活性炭、分子篩、離子交換介質(zhì)等?；蛘?，試劑可為酸(在堿性物質(zhì)的情況下)、堿(在酸性物質(zhì)的情況下)、結合試劑(諸如抗體)、結合蛋白、選擇性螯合劑(諸如冠醚)、液/液離子萃取試劑(LIX)等。選擇適當?shù)姆蛛x方法取決于所涉及物質(zhì)的性質(zhì)。例如，蒸餾和升華中的沸點和分子量、色譜中存在或不存在極性官能團、多相萃取中物質(zhì)在酸性和堿性介質(zhì)中的穩(wěn)定性等。本領域技術人員將應用最可能實現(xiàn)所需分離的技術。本發(fā)明提供了用于制備(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VIII)的方法，所述化合物具有以下結構并為ERK激酶的強效抑制劑且用作治療癌癥或其它過度增殖性病癥的藥物。I和1-甲基-1H-吡唑-5-胺(XIV)在強堿存在情況下縮合得到IX，其通過使甲硅烷基醚與水性酸接觸容易轉(zhuǎn)化成VIII?？蓪@得的無定形游離堿轉(zhuǎn)化成結晶性芳基磺酸鹽。本文使用的術語“芳基磺酸”是指苯磺酸或萘單磺酸或萘二磺酸，其中芳基環(huán)任選取代有甲基或鹵素。本發(fā)明還提供了如下用于制備中間體I的方法：首先用強堿處理4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)并用甲磺酸(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯(VI)將所得化合物烷基化。酰胺的N-烷基化可在本領域技術人員公知的多種堿性條件下進行。該反應通常在-78℃至100℃的溫度在非質(zhì)子性溶劑諸如THF、DMF、DMSO、NMP或其混合物中進行。通常使用的堿是Grignard試劑、氫化鈉、氫化鉀、甲醇鈉、叔丁醇鉀、六甲基二硅氮烷鋰、六甲基二硅氮烷鈉或六甲基二硅氮烷鉀。在室溫(RT)在二甘醇二甲醚中用六甲基二硅氮烷鉀處理VII形成VII的鋰鹽，之后引入甲磺酸酯VI并將反應在90℃加熱4小時。硫醚氧化成亞砜或砜通常是容易的，并且能夠進行該轉(zhuǎn)化的許多試劑是已知的。硫氧化通常用過氧化氫、NaIO4、次氯酸叔丁酯、亞硝酸?；?、過硼酸鈉、過硫酸氫鉀或過酸諸如過氧乙酸和間氯過氧苯甲酸的水溶液進行。通常用約1當量的氧化劑可分離出亞砜。暴露于兩個或更多個當量導致氧化成砜。在環(huán)境溫度下于MTBE中用MCPBA氧化XI得到I。方案B(i)i-PrMgCl，LiCl，THF；(ii)HCO2Na，HCO2H，H2O，EtOH；(iii)GDH-105，嗎啉乙磺酸，MgCl2，從PEG6000，庚烷，1wt％KRED-NADH-112，NAD，葡萄糖(iv)TBSCl，DMAP，TEA，DCM，20-25℃，15h；(v)MsCl，DCM，20-25℃，3h從1-溴-4-氯-3-氟苯起始，以五個步驟制備甲磺酸酯VI，將其轉(zhuǎn)化為Grignard試劑，并與2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺接觸得到酮II。有機鋰和有機鎂化合物與N，O-二甲基羥基酰胺的縮合得到相應的酮。(S.NahmandD.M.Weinreb，S.M.TetrahedronLett.1981，22，3815)。Grignard試劑通過在LiCl存在情況下用異丙基氯化鎂處理1-溴-4-氯-3-氟苯形成。認為鹽的添加通過促進已知存在于Grignard試劑的經(jīng)典溶液中的聚合物聚集體的分解而增加Grignard試劑的反應性。(A.KrasovskiyandP.Knochel，Angew.Chem.Int.Ed.200443：3333)。用1NHCl淬滅Grignard反應后，用水洗滌有機相并濃縮。添加甲酸鈉、甲酸、乙醇和水并將混合物在80-90℃加熱以得到α-羥基酮III。通常在作為輔助因子(其在原位再生)的NADH或NADPH存在情況下，酶催化的酮還原通常以高立體選擇性進行。(J.C.Mooreetal.，Acc.Chem.Res，200740(12)：1412-19)。在酵母、細菌或來自哺乳動物細胞中發(fā)現(xiàn)的優(yōu)選的微生物氧化還原酶且該氧化還原酶可以分離出的一種或多種酶或全細胞的形式應用，任選地呈通過文獻中描述的許多常規(guī)方法之一的固定化形式。氧化的輔因子通常用作為輔助底物的仲醇連續(xù)再生。典型的輔助底物可選自2-丙醇、2-丁醇、戊-1，4-二醇、2-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-庚醇、己-1，5-二醇、2-庚醇或2-辛醇，優(yōu)選2-丙醇。優(yōu)選地，輔助因子借助于共底物在也催化目標反應的相同酶下再生。在2-丙醇用作輔助底物時形成的丙酮在另一優(yōu)選實施方案中從反應混合物中連續(xù)除去。輔助因子可通過摻入另外的氧化其天然底物并提供還原的輔助因子的酶來再生。例如，仲醇脫氫酶/醇、葡萄糖脫氫酶/葡萄糖、甲酸脫氫酶/甲酸、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶/葡萄糖-6-磷酸、亞磷酸脫氫酶/亞磷酸酯或氫化酶/分子氫等。此外，已知電化學再生方法以及包括金屬催化劑和還原劑的化學輔助因子再生方法是合適的。優(yōu)選的催化劑/輔助因子/共底物系統(tǒng)可隨不同的酮而變化。酶促還原于水性介質(zhì)中在有機共溶劑存在情況下進行，所述有機共溶劑可選自例如甘油、2-丙醇、乙醚、叔丁基甲基醚、二異丙基醚、二丁基醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、庚烷、己烷或環(huán)己烯或它們的混合物。有機共溶劑的存在是特別有利的，因為可形成均勻的混懸液，其允許簡單分離所需的式IV的醇。酶促還原的反應溫度通常保持在1℃至50℃之間，優(yōu)選在20℃至40℃之間的范圍內(nèi)。反應濃度(即酮和相應的醇的濃度)通常保持在1％至25％，優(yōu)選10％至20％。在本發(fā)明方法的一個特定實施方案中，在氧化輔助因子NAD、再循環(huán)酶GDH-105(CodexisInc.,RedwoodCity,CA,USA)和最終還原劑葡萄糖存在下，通過KRED-NADH-112(CodexisInc.,RedwoodCity,CA,USA)催化III的不對稱還原，以定量化學轉(zhuǎn)化得到99.5％對映體過量的(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇。最終步驟包括用叔丁基二甲基氯硅烷、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和三乙胺(TEA)于DCM中選擇性保護伯醇，隨后用甲磺酰氯、DMAP和TEA于DCM中形成甲磺酸酯，其可在單一反應容器中依序進行以得到甲磺酸(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯(VI)。本領域技術人員將理解，該方法可有利地應用于其它經(jīng)取代的溴苯衍生物。(i)1.0％PEPPSI(i-Pr),i-PrMgCl,LiCl,THF；步驟(ii)(a)tert-BuOK,THF(b)1NH2SO4，THF,RT通過4-氯-2-硫代甲基嘧啶(XIII)和2-氟-4-碘吡啶(XII)的鈀催化偶聯(lián)制備4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)。通過以下方式制備Grignard試劑：在LiCl存在情況下用i-PrMgCl進行金屬轉(zhuǎn)移(transmetallation)(Krasovskiy,同上)并在PEPPSI(i-Pr)([1,3-雙(2,6-二異丙基苯基)咪唑-2-基亞基](3-氯吡啶基)二氯化鈀(II),CASRN905459-27-0)存在情況下用XIII處理所得雜芳基Grignard。X與叔丁醇鉀反應得到4-(2-(叔丁氧基)吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶，將其用H2SO4處理以去除叔丁基并得到VII。在不脫離本文所公開的發(fā)明的情況下，可修改步驟的順序。在一個變通方案中，將2,4-二取代的嘧啶衍生物諸如2,4-二氯-嘧啶或4-氯-2-甲基硫基嘧啶與2-氟吡啶-4-基硼酸(Pd(dppf)Cl2,K3PO4,二噁烷)偶聯(lián)，得到2-氯-4-(2-氟吡啶-4-基)嘧啶，其與1-甲基-1H-吡唑-5-胺(LiHMDS,THF)縮合并水解，得到4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮，其可如先前所述使用兩個當量的堿進行烷基化。可能出現(xiàn)的常用縮寫包括：乙?；?Ac)、水性/水溶液(aq.)、氣氛(Atm)、叔丁氧基羰基(Boc)、焦碳酸二叔丁酯或boc酐(BOC2O)、芐基(Bn)、苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)鏻鎓六氟磷酸鹽(BOP)、丁基(Bu)、苯甲?；?Bz)、化學文摘登錄號(CASRN)、芐基氧基羰基(CBZ或Z)、羰基二咪唑(CDI)、二亞芐基丙酮(DBA)、1,5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯(DBU)、N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1,2-二氯乙烷(DCE)、二氯甲烷(DCM)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)、二異丁基氫化鋁(DIBAL或DIBAL-H)、二異丙基乙基胺(DIPEA)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、1,1'-雙-(二苯基膦基)乙烷(dppe)、1,1'-雙-(二苯基膦基)二茂鐵(dppf)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)、乙基(Et)、乙醚(Et2O)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)、2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ)、乙醚(Et2O)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)、乙酸(HOAc)、1-N-羥基苯并三唑(HOBt)、高壓液相色譜(HPLC)、異丙醇(IPA)、六甲基二硅氮烷鋰(LiHMDS)、二異丙基氨基鋰(LDA)、甲醇(MeOH)、熔點(mp)、MeSO2-(甲磺?；騇s)、甲基(Me)、乙腈(MeCN)、間氯過氧苯甲酸(MCPBA)、質(zhì)譜(ms)、甲基叔丁基醚(MTBE)、N-甲基嗎啉(NMM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、氯鉻酸吡啶鎓鹽(PCC)、石油醚(petether,即烴類)、苯基(Ph)、丙基(Pr)、異丙基(i-Pr)、磅/每平方英寸(psi)、溴-三-吡咯烷子基鏻鎓六氟磷酸鹽(PyBrOP)、吡啶(pyr)、室溫(rt或RT)、satd.(飽和的)、叔丁基甲基醚(TBME)、叔丁基二甲基甲硅烷基或t-BuMe2Si(TBDMS或TBS)、三乙胺(TEA或Et3N)、三氟甲磺酸酯或CF3SO2-(Tf)、三氟乙酸(TFA)、O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)、薄層色譜(TLC)、四氫呋喃(THF)、四甲基乙二胺(TMEDA)、三甲基甲硅烷基或Me3Si(TMS)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)、對甲苯磺酸一水合物(TsOH或pTsOH)、4-Me-C6H4SO2-或甲苯磺酸酯(Ts)、N-氨基甲酸酯-N-羧內(nèi)酸酐(UNCA)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫噸(Xantphos)、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)、四氫呋喃(THF)、小時(h)、間氯過氧化苯甲酸(MCPBA或mCPBA)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、磷酸煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADP)、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)、苯基(Ph)、甲基(Me)、乙基(Et)、叔丁基(t-Bu)、叔丁基二甲基氯硅烷(TBSCl)、甲磺?；?Ms)、乙酸乙酯(EtOAc)、氣相色譜(GC)、甲基乙基酮(MEK)、高壓液相色譜(HPLC)、X-射線衍射(XRPD)、核磁共振(NMR)、玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(TG)、熱重分析(TGA)、差示掃描量熱法(DSC)、聚四氟乙烯(PTFE)。當與烷基部分一起使用時，常規(guī)命名法包括前綴正(n)、異(i-)、仲(sec-)、叔(tert-或-t)和neo-具有其常規(guī)含義。(J.RigaudyandD.P.Klesney,NomenclatureinOrganicChemistry,IUPAC1979PergamonPress,Oxford.)。為了說明本發(fā)明，包括以下實施例。然而，應當理解，這些實施例不限制本發(fā)明，并且僅意在提出實施本發(fā)明的方法。本領域技術人員將認識到，本文所述的化學操作可適于適合可用的設備和環(huán)境。此外，在不偏離所公開的發(fā)明的情況下，可改變試劑諸如離去基團、活化基團、保護基團和試劑諸如強堿和鈀催化劑的選擇。方案1.原始合成方法原始合成方法涉及自三種市售物質(zhì)的八步線性合成，即4-氯-3-氟苯甲醛1、4-氯-2-(甲基硫基)嘧啶XIII和(2-氟吡啶-4-基)硼酸6-2(方案1)。1的Wittig反應生成烯烴中間體2，產(chǎn)率55％。苯乙烯的不對稱Sharpless二羥基化和隨后用TBSCl的二醇IV的選擇性單保護得到中間體V，歷經(jīng)兩步產(chǎn)率55％。中間體VI之一通過仲醇的甲磺?；@得。另一方面，吡啶酮中間體VII如下合成：XIII與6-2進行Suzuki交叉偶聯(lián)，隨后用HCl水溶液進行水解。需要通過Soxhlet萃取器用EtOAc歷時3天純化VII以確保6的良好純度和后續(xù)反應的合理轉(zhuǎn)化。VI和VII的Sn2取代能夠自中間體V得到中間體XI，歷經(jīng)2步產(chǎn)率50％。用m-CPBA氧化得到砜中間體I，其經(jīng)受用市售氨基吡唑即2-甲基吡唑-3-胺的SnAr取代，生成中間體IX，產(chǎn)率60％。最后，酸促進的TBS脫保護得到游離堿VIII，產(chǎn)率85％。該路線的化學受困于幾個單獨步驟中的低產(chǎn)率。由于相當復雜的反應曲線(reactionprofile)，需要大量繁瑣的純化諸如蒸餾、快速色譜和Soxhlet萃取。使用不夠理想的溶劑和試劑諸如二氯甲烷、氫化鈉和氧化鋨也阻礙了化學的放大。方案2.合成I的改進方法鑒定了合成I的改進路線。獲得羥基酮中間體III，歷經(jīng)兩步產(chǎn)率72％。市售芳烴3-1的Grignard交換和隨后的親核加成至Weinreb酰胺生成中間體II，然后將其水解得到III。酶促不對稱酮還原以高產(chǎn)率和高對映選擇性得到相同的二醇中間體IV。將選擇性TBS保護和甲磺?；南嗤椒ㄓ糜谏芍虚g體VI。改進吡啶酮VII的合成。將PEPPSI-IPr催化的Kumada偶聯(lián)用于以更高產(chǎn)率和更佳純度特征生成中間體X。應用兩步順序的水解以避免在原始方法期間形成腐蝕性HF。用t-BuOK/THF取代氟化物，隨后在酸性條件下去除叔丁基，得到吡啶酮中間體VII，產(chǎn)率80％。與原始路線相比，通過使用不同的堿和溶劑改進Sn2取代。在相同條件下氧化中間體XI以得到I。實施例1甲磺酸2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯步驟1：在氮氣下將4-溴-1-氯-2-氟苯(64kg)和無水甲苯(170kg)加入2000L鋼反應容器。將反應器抽真空并用N2回填，歷經(jīng)三次，并在氮氣氣氛下冷卻至-10至5℃。在-10至10℃向溶液中滴加i-PrMgCl.LiCl(280kg,1.3M于THF中)。將反應混合物在-10至10℃再攪拌15至30分鐘，然后歷經(jīng)1小時溫熱至約20至25℃。將反應混合物再攪拌6小時以完成交換。將所得溶液冷卻至-50至-40℃。將2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(44.5kg)于無水甲苯(289kg)中的溶液滴加至上述溶液中，同時維持溫度為-50至-30℃。歷經(jīng)1小時將反應混合物溫熱至20至25℃，然后攪拌3小時以完成反應。通過在-5至15℃的溫度添加1NHCl水溶液(808lg)淬滅反應混合物。分離水層并通過硅藻土墊過濾有機層。將有機層用10％NaCl水溶液(320kg)洗滌兩次，然后濃縮至約300L，得到1-(4-氯-3-氟苯基)-2-氯乙酮(51.8kg,81.9％產(chǎn)率)，其為于甲苯中的產(chǎn)物。步驟2：將II(51.7kg)于甲苯中的溶液濃縮并交換溶劑成EtOH以得到II于EtOH(326kg)中的混懸液。在15至35℃的溫度，在氮氣氣氛下，添加HCOONa.2H2O(54.8kg)和HCOOH(44.5kg)于水(414kg)中的溶液。將所得混合物加熱至回流并攪拌4至5小時。在發(fā)生大于95％轉(zhuǎn)化之后，將溶液冷卻至20至30℃。在10至30℃，歷經(jīng)2小時，滴加水(450kg)。將所得混懸液冷卻至-10和-3℃并將冷卻的溶液攪拌1至2小時。將固體過濾并用水(400kg)洗滌濾餅以去除殘余的HCOONa和HCOOH。將獲得的1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙酮懸浮于EtOAc(41kg)和正庚烷(64kg)中，然后溫熱至45至50℃，攪拌2小時，然后歷經(jīng)2小時冷卻至-2至5℃并在該溫度攪拌2小時。將固體過濾并在40至50℃真空干燥12小時以得到作為白色固體的產(chǎn)物(40.0kg,99.3％純度,84.5％產(chǎn)率)。步驟3：在氮氣下，向500L反應器加入純化水(150kg)、4-嗎啉乙磺酸(0.90kg)、無水MgCl2(0.030kg)、正庚烷(37kg)、1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙酮(30kg)、D-(+)-葡萄糖一水合物(34.8kg)和PEG6000(30.0kg)。在28至32℃，用1NNaOH水溶液將溶液的pH調(diào)節(jié)至6.5至7.0。添加輔助因子循環(huán)酶、葡萄糖脫氫酶(0.300kg)(CodexisInc.,RedwoodCity,CA,USA)、輔助因子煙酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD(0.300kg)(Roche)和氧化還原酶KRED-NADH-112(0.300kg)(CodexisInc.,RedwoodCity,CA,USA)。將所得混懸液在29至31℃攪拌10至12小時，同時通過添加1NNaOH水溶液(160kg)調(diào)節(jié)pH以維持反應混合物pH6.5至7.0。通過添加49％H2SO4(20kg)調(diào)節(jié)反應混合物的pH至1至2以淬滅反應。添加EtOAc(271kg)并將混合物在20至30℃攪拌10-15分鐘，然后通過硅藻土墊過濾。用EtOAc(122kg)洗滌濾餅。分離合并的有機層并用EtOAc(150kg)萃取水層。向合并的有機層添加水(237kg)。通過添加固體NaHCO3調(diào)節(jié)混合物的pH至7.0至8.0。將有機層分離，濃縮，然后用DCM稀釋以得到(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇(30.9kg,產(chǎn)率100％)，其為于DCM中的產(chǎn)物。步驟4：在氮氣下，向1000L反應器中加入(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇(29.5kg)和無水DCM(390kg)。將溶液冷卻至-5至0℃。按份添加叔丁基二甲基氯硅烷(25.1kg)，同時維持溫度在-5至2℃。在-5至2℃向上述溶液中滴加DMAP(0.95kg)和TEA(41.0kg)于無水DCM(122kg)中的溶液。將反應溶液攪拌1小時，然后溫熱至20至25℃并攪拌16小時。將(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙醇的溶液再冷卻至-10至-5℃。向上述溶液中滴加甲烷磺酰氯(19.55kg)于無水DCM(122kg)中的溶液，同時維持溫度在-10至0℃。將反應溶液在-10至0℃攪拌20至30分鐘，然后歷時1小時溫熱至0至5℃，并攪拌。將反應溶液用水(210kg)洗滌，隨后用5％檸檬酸水溶液(210kg)、2％NaHCO3水溶液(210kg)洗滌，最后用水(2x210kg)洗滌。將所得DCM溶液干燥(Na2SO4)，過濾并在低于15℃(套溫度低于35℃)真空干燥以得到甲磺酸(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯(49.5kg,83.5％產(chǎn)率,KarlFischer＝0.01％)，其為于DCM中的產(chǎn)物。實施例24-(2-(甲基磺?；?嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮步驟1：向1000L反應器中加入2-氟-4-碘吡啶(82.2kg)和無水THF(205kg)。將反應器抽真空并用N2回填三次，然后冷卻至-30至-20℃。向溶液中滴加i-PrMgCl.LiCl(319kg,1.3M于THF中)。將反應混合物溫熱至-20至-10℃并攪拌1.5小時以完成金屬轉(zhuǎn)移。向2000L反應器加入4-氯-2-甲基硫基嘧啶(45.6kg)、無水THF(205kg)和[1,3-雙(2,6-二異丙基苯基)咪唑-2-基亞基](3-氯吡啶基)二氯化鈀(II)(PEPPSITM-IPr,1.850kg)。將2000L反應器抽真空并用N2回填三次，加熱至55至57℃。歷時0.5至1小時，向反應器中添加(2-氟吡啶-4-基)氯化鎂的溶液，同時維持溫度在50至62℃。將所得反應混合物在50至62℃再攪拌2小時。將反應混合物冷卻至5至25℃，同時用水(273kg)淬滅反應混合物。通過添加固體檸檬酸一水合物(7.3kg)調(diào)節(jié)混合物的pH至8至9。將有機層分離，用12.5％NaCl水溶液(228kg)洗滌并在低于50℃真空濃縮以得到4-(2-氟吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶(38.3kg,61％產(chǎn)率)，其為于THF中的產(chǎn)物。步驟2：將4-(2-氟吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶(38.2kg)于THF中的溶液濃縮并與THF共蒸發(fā)以去除殘余的水。通過硅藻土墊過濾混懸液以去除無機鹽。向所得THF溶液(510kg)中按份添加tert-BuOK(39.7kg)，同時維持溫度在15至25℃。將混合物溫熱至20至25℃并攪拌5小時。添加NaHCO3(14.9kg)，然后添加檸檬酸(5kg)于THF(15kg)中的溶液以調(diào)節(jié)pH至8至9。添加水(230kg)。過濾混合物并用THF(100kg)洗滌濾餅。將合并的THF溶液用12.5％NaCl水溶液(320kg)洗滌并濃縮至約380L以得到4-(2-(叔丁氧基)吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶于THF中的溶液。向冷卻至15至30℃的THF溶液中添加1NH2SO4水溶液(311kg)。將混合物在該溫度攪拌4小時。加入MTBE(280kg)并用30％NaOH水溶液(120kg)將反應溶液的pH調(diào)節(jié)至14。分離水層并過濾有機相以去除無機鹽。將獲得的水層用MTBE(2x280kg)洗滌。向水溶液中添加2-MeTHF(1630kg)和i-PrOH(180kg)。然后用濃HCl(19kg)慢慢調(diào)節(jié)pH至8。分離有機層并用2-MeTHF(305kg)萃取水層。將合并的2-MeTHF萃取物用水(300kg)洗滌并濃縮至約100L。添加MTBE(230kg)并在20-30℃攪拌0.5小時。將固體過濾并于2-MeTHF(68kg)和MTBE(230kg)的混合溶液中漿化。將混懸液在35-50℃攪拌3小時，然后冷卻至0至10℃并再攪拌2小時。將固體過濾并在50至62℃真空干燥20小時以得到作為棕色固體的產(chǎn)物4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(33.55kg,89.6％測定,79.4％產(chǎn)率)。實施例3(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(XI)步驟1：將THF從4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(25.5kg)的THF溶液中共蒸發(fā)以除去殘余的水。添加無水雙-(2-甲氧基乙基)醚(75kg)。滴加KHMDS的溶液(131kg,1M于THF中)，同時維持溫度在25至40℃。將混合物加熱至75至80℃并攪拌30至40分鐘。在氮氣氣氛下將所得混合物冷卻至20至30℃。歷時30至60分鐘添加甲磺酸(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯(47.6kg)于THF(50kg)中的溶液，同時維持溫度在20至40℃。將反應溶液溫熱至80至85℃并攪拌7小時。將溶液冷卻至5至15℃并添加水(155kg)。用30％檸檬酸水溶液(30kg)調(diào)節(jié)溶液的pH至7.5。添加EtOAc(460kg)并將混合物攪拌20分鐘。分離有機層并用12.5％NaCl水溶液(510kg)洗滌。將合并的水層用EtOAc(115kg)萃取。將乙酸乙酯層濃縮至約360L以得到(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(44.6kg,75.7％產(chǎn)率)，其為于EtOAc中的產(chǎn)物。步驟2：向冷卻至5至10℃的(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(44.6kg)于EtOAc(401kg,10體積)中的溶液中按份添加MCPBA(58kg)。在10至-20℃，將反應混合物添加至NaHCO3(48.7kg)于水(304kg)中的溶液中。滴加Na2S2O3(15kg)于水(150kg)中的溶液以消耗殘余的MCBPA。分離有機層并用EtOAc(130kg)萃取水層。將合并的有機層用水(301kg)洗滌，濃縮并溶劑交換成DCM以得到(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基磺?；?嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(45.0kg,94.9％產(chǎn)率)，其為于DCM中的產(chǎn)物。將DCM溶液濃縮至約100L，通過SiO2墊(60kg)過濾并用EtOAc/DCM梯度(0、25和50％EtOAc)洗脫。將級分合并且濃縮以得到產(chǎn)物，將其用(丙酮:正庚烷＝1:3v/v)再漿化四次以得到終產(chǎn)物(31.94kg,71％產(chǎn)率)。實施例4(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸鹽(VIIIb)步驟1：向潔凈的100L圓柱形反應容器加入THF(13kg)，然后伴隨中度攪拌依序添加(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(I,5kg)和1-甲基-1H-吡唑-5-胺(1.1kg)，隨后添加THF(18kg)。將混合物冷卻至-35℃并以維持內(nèi)溫低于-25℃的速率向所得薄漿料中慢慢添加LiHMDS的THF溶液(17.4kg,1.0M)。添加完成后，將反應混合物在-35至-25℃保持20分鐘并通過HPLC監(jiān)測。如果HPLC結果指示≤98.5％轉(zhuǎn)化，在-35℃慢慢添加另外的LiHMDS(0.34kg,1.0M,0.05mol％)。在相同溫度用H3PO4溶液(4.4kg85％H3PO4和15kg水)淬滅反應混合物并保持內(nèi)溫低于30℃。用EtOAc(18kg)稀釋反應混合物并分離兩相，將有機層用H3PO4溶液(1.1kg85％H3PO4和12kg水)洗滌，隨后用第二H3PO4洗液(0.55kg85％H3PO4和12kg水)洗滌。如果1-甲基-1H-吡唑-5-剩余，則再次用H3PO4溶液(0.55kg85％H3PO4和12kg水層)洗滌有機層。最后，依序用水(20kg)及NaCl和NaHCO3溶液(2kgNaCl、0.35kgNaHCO3和10kg水)洗滌有機層。分離相后，通過與EtOAc共沸蒸餾取出有機溶液中殘余的水至≤0.5％(通過KF)，然后在低于50℃真空濃縮溶液至20-30L。然后使用35kgMeOH將溶劑換成MeOH，然后濃縮至20至30L用于下一步驟。步驟2：在室溫向(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(IX)于MeOH中的甲醇化溶液中添加HCl(10.7kg,1.25M于MeOH中)。反應輕微放熱。添加完成后，將反應混合物加熱至45℃。如果反應在14至16小時后未完成，則添加另外的HCl(1kg,1.25M于MeOH中)并在45℃繼續(xù)攪拌2小時。該反應裝備有具有酸洗滌器(scrubber)的蒸餾裝置。在低于50℃真空下將反應混合物濃縮至20至30L。向所得溶液中添加MeOH(35kg)并在低于50℃真空下將反應混合物再次濃縮至20至30L。然后使用40kgEtOAc將溶劑轉(zhuǎn)換成EtOAc。通過頂空GC檢測溶劑比率并繼續(xù)進行溶劑轉(zhuǎn)化直至其小于1/5。在低于50℃真空下將溶液濃縮至20至30L。將溶液冷卻低于30℃后，伴隨中度攪拌慢慢添加NaHCO3水溶液(1.2kgNaHCO3和20kg水)，隨后添加EtOAc(40kg)。將有機層用水(2x10kg)洗滌，然后在低于50℃真空下濃縮至20-30L。然后使用35kgMEK將溶劑轉(zhuǎn)換成MEK。通過頂空GC監(jiān)測殘余的MeOH并繼續(xù)進行溶劑轉(zhuǎn)換直至MeOH<0.3％。在低于50℃真空下將含有(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VIII)的溶液濃縮至20至30L用于下一步驟。步驟3：通過1μm線路過濾器將VIII于MEK中的溶液轉(zhuǎn)移至另一100L圓柱形反應溶液中。在單獨的容器中制備苯磺酸溶液(1.3kg苯磺酸、1.4kg水和4.4kgMEK)。將過濾后的VIII溶液加熱至75℃并向通過1μm線路過濾器所得溶液中添加0.7kg苯磺酸溶液。將作為于MEK中的漿料(0.025kgVIIIb結晶性晶種和0.4kgMEK)的VIII的結晶性苯磺酸鹽(0.425kg)種晶于該澄清溶液，其產(chǎn)生薄漿料。然后在2小時通過1μm線路過濾器添加剩余苯磺酸溶液。添加后，將漿料在75℃再加熱1小時，然后在最少3小時內(nèi)冷卻至18℃。將所得稠厚漿料在20℃攪拌14至16小時。使用Aurora干燥器過濾固體。通過HPLC(約3％損失)測定母液。然后用經(jīng)1μm線路過濾的15.8kgMEK和水溶液(0.8kg水和15kgMEK)，隨后用經(jīng)1μm線路過濾的30kgMEK洗滌固體。通過HPLC(<1％損失)測定洗液。將濕濾餅在真空和氮氣吹掃下在45℃套溫度干燥最少12小時以得到VIII的苯磺酸鹽，其標示為VIIIb。另外的實施例步驟1：首先向潔凈的100L圓柱形反應容器中加入13kgTHF。伴隨中度攪拌，依序加入5.0kgI和1.1kg1-甲基-1H-吡唑-5-胺，隨后加入剩余的THF(18kg)。在-35℃，向所得薄漿料中慢慢添加于THF中的17.4kgLiHMDS(1.0mol/L)并保持內(nèi)溫低于-25℃。添加之后，將反應混合物在-35至-25℃保持20分鐘。通過HPLC監(jiān)測反應。如果HPLC結果指示≤98.5％轉(zhuǎn)化，則在-35℃慢慢加入另外的于THF中的0.34kg(0.05mol％)LiHMDS(1.0mol/L)。否則，在相同溫度用19.4kgH3PO4溶液(4.4kg85％H3PO4和15kg水)慢慢淬滅反應混合物并保持內(nèi)溫低于30℃。用18kgEtOAc稀釋反應混合物。分離相之后，先后用13.1kgH3PO4溶液(1.1kg85％H3PO4和12kg水)和12.6kgH3PO4溶液(0.55kg85％H3PO4和12kg水)洗滌有機層。通過HPLC針對1-甲基-1H-吡唑-5-胺水平測定有機層。如果HPLC結果指示≥20μg/mL1-甲基-1H-吡唑-5-胺，則有機層需要用12.6kgH3PO4溶液(0.55kg85％H3PO4和12kg水)另外洗滌。否則，用20kg水洗滌有機層。再次針對1-甲基-1H-吡唑-5-胺水平測定有機層。如果HPLC結果指示≥2μg/mL1-甲基-1H-吡唑-5-胺，則有機層需要用20kg水另外洗滌。否則，用12.4kgNaCl和NaHCO3溶液(2kgNaCl、0.35kgNaHCO3和10kg水)洗滌有機層。分離相之后，通過與EtOAc共沸蒸餾取出有機溶液中殘余的水至≤0.5％(通過KF)，然后在低于50℃真空下濃縮該溶液至20至30L。然后使用35kgMeOH將溶劑轉(zhuǎn)換成MeOH，然后濃縮至20至30L用于下一步驟。步驟2：在環(huán)境溫度向來自最后步驟的IX于MeOH中的溶液中加入10.7kgHCl(1.25M于MeOH中)。觀察到其微微放熱。添加之后，將反應混合物加熱至45℃。14-16小時后，通過HPLC監(jiān)測反應。如果HPLC結果指示轉(zhuǎn)化≤98％，加入另外1kgHCl(1.25M于MeOH中)并將反應混合物在45℃再攪拌2小時。否則，該反應裝備有具有酸洗滌器的蒸餾裝置。在低于50℃真空下將反應混合物濃縮至20至30L。向所得溶液中加入35kgMeOH并在低于50℃真空下將反應混合物再濃縮至20至30L。然后使用40kgEtOAc將溶劑轉(zhuǎn)換成EtOAc。通過頂空GC監(jiān)測溶劑比率。如果MeOH/EtOAc的比率大于1/5，則溶劑轉(zhuǎn)換應當繼續(xù)。否則，在低于50℃真空下將反應混合物濃縮至20至30L。將溶液冷卻低于30℃之后，伴隨中度攪拌慢慢加入21.2kgNaHCO3溶液(1.2kgNaHCO3和20kg水)，隨后加入40kgEtOAc。分離相之后，用2X10kg水洗滌有機層。在低于50℃真空下將反應混合物濃縮至20至30L。然后使用35kgMEK將溶劑轉(zhuǎn)換成MEK。通過頂空GC監(jiān)測殘余的MeOH。如果MeOH的水平≥0.3％，則溶劑轉(zhuǎn)換應當繼續(xù)。否則，在低于50℃真空下將反應混合物濃縮至20至30L用于下一步驟。步驟3：通過3μm線路過濾器將來自最后步驟的VIII于MEK中的溶液轉(zhuǎn)移至另一100L圓柱形反應容器。在單獨的容器中制備7.1kg苯磺酸溶液(1.3kg苯磺酸、1.4kg水和4.4kgMEK)。將過濾后的G02584994溶液加熱至75℃并通過3μm線路過濾器向所得溶液中加入0.7kg苯磺酸溶液(10％)。向澄清溶液中加入0.425kgVIIIb結晶性晶種于MEK中的漿料(0.025kgVIIIb結晶性晶種和0.4kgMEK)。由此得到薄漿料。然后通過3μm線路過濾器在2小時內(nèi)加入剩余苯磺酸溶液。添加之后，將漿料在75℃再加熱1小時，然后在最少3小時內(nèi)冷卻至20℃。將所得稠厚漿料在20℃攪拌14-16小時。使用過濾干燥器過濾固體。通過HPLC(約3％損失)測定母液。然后用經(jīng)3μm線路過濾的15.8kgMEK和水溶液(0.8kg水和15kgMEK)洗滌固體，隨后用經(jīng)3μm線路過濾的30kgMEK洗滌。通過HPLC(<1％損失)測定洗液。將濕濾餅在真空和氮氣吹掃下在45℃套溫度干燥最少12小時。重結晶首先向潔凈的100L圓柱形反應容器中加入16kgEtOH。伴隨中度攪拌，加入3.5kgVIIIb，然后加入剩余的EtOH(8.5kg)。將稠厚的漿料加熱至78℃并加入水(約1.1kg)直至獲得澄清的溶液。將熱溶液通過3μm線路過濾器過濾至另一潔凈的100L圓柱形反應容器中。溫度降至55-60℃且溶液保持澄清。向所得溶液中加入0.298kgVIIIb結晶性晶種于EtOH中的漿料(0.018kgVIIIb結晶性晶種和0.28kgEtOH)。在60℃在真空下將稠厚的漿料濃縮至20至30L，然后在3小時內(nèi)冷卻至20℃。將所得漿料在20℃攪拌14至16小時。使用過濾干燥器過濾固體。通過HPLC(約10％損失)測定母液。然后用經(jīng)3μm線路過濾的11.1kgEtOH和水溶液(0.56kg水和11kgEtOH)洗滌固體，隨后用經(jīng)3μm線路過濾的21kgMEK洗滌。通過HPLC(3％損失)測定洗液。將濕濾餅在真空和氮氣吹掃下在45℃套溫度干燥最少12小時。另外的合成方法述于下文。步驟1：首先向潔凈的100L圓柱形反應容器中加入18kgTHF。伴隨中度攪拌，依序加入4.2kgI和0.9kg1-甲基-1H-吡唑-5-胺，隨后加入剩余的THF(21kg)。在-40℃，向所得薄漿料中慢慢添加于THF中的14.9kgLiHMDS(1.0mol/L)并保持內(nèi)溫低于-30℃。添加之后，將反應混合物在-35至-40℃保持20分鐘。通過HPLC監(jiān)測反應。HPLC結果指示≤99.1％轉(zhuǎn)化。在相同溫度用16.7kgH3PO4溶液(3.7kg85％H3PO4和13kg水)慢慢淬滅反應混合物并保持內(nèi)溫低于30℃。用17kgEtOAc稀釋反應混合物。分離相之后，先后用13.1kgH3PO4溶液(1.1kg85％H3PO4和12kg水)和10.5kgH3PO4溶液(0.46kg85％H3PO4和10kg水)洗滌有機層。通過HPLC針對1-甲基-1H-吡唑-5-胺水平測定有機層。HPLC結果指示≥2μg/mL1-甲基-1H-吡唑-5-胺。用15.8kgNaCl溶液(0.3kgNaCl和15.5kg水)洗滌有機層。再次針對G02586778水平測定有機層。HPLC結果指示≥0.5μg/mL1-甲基-1H-吡唑-5-胺。用10.3kgNaCl和NaHCO3溶液(1.7kgNaCl、0.6kgNaHCO3和8kg水)洗滌有機層。分離相之后，通過與EtOAc共沸蒸餾取出有機溶液中殘余的水至≤0.5％(通過KF)，然后在低于50℃真空下濃縮該溶液至20至30L。然后使用30kgMeOH將溶劑轉(zhuǎn)換成MeOH，然后濃縮至20至30L用于下一步驟。步驟2：在環(huán)境溫度向來自最后步驟的IX于MeOH中的溶液中加入9.0kgHCl(1.25M于MeOH中)。觀察到其微微放熱。添加之后，將反應混合物加熱至45℃。16小時后，通過HPLC監(jiān)測反應。HPLC結果指示轉(zhuǎn)化為99.4％。該反應裝備有蒸餾裝置。在低于50℃真空下將反應混合物濃縮至20L。向所得溶液中加入35kgMeOH并在低于50℃真空下將反應混合物再濃縮至20L。然后使用40kgEtOAc將溶劑轉(zhuǎn)換成EtOAc。通過頂空GC監(jiān)測溶劑比率。如果MeOH/EtOAc的比率大于1/5，則溶劑轉(zhuǎn)換應當繼續(xù)。否則，在低于50℃真空下將反應混合物濃縮至20L。將溶液冷卻低于30℃之后，伴隨中度攪拌慢慢加入18kgNaHCO3溶液(1kgNaHCO3和17kg水)，隨后加入34kgEtOAc。分離相之后，用2X8kg水洗滌有機層。在低于50℃真空下將反應混合物濃縮至20L。然后使用35kgMEK將溶劑轉(zhuǎn)換成MEK。通過頂空GC監(jiān)測殘余的MeOH。如果MeOH的水平≥0.3％，則溶劑轉(zhuǎn)換應當繼續(xù)。否則，在低于50℃真空下將反應混合物濃縮至20L用于下一步驟。步驟3：通過1μm精過濾器將來自最后步驟的VIII于MEK中的溶液轉(zhuǎn)移至另一100L圓柱形反應容器。在單獨的容器中制備6.0kg苯磺酸溶液(1.1kg苯磺酸、1.2kg水和3.7kgMEK)。將過濾后的溶液加熱至75℃并通過1μm線路過濾器向所得溶液中加入0.6kg苯磺酸溶液(10％)。向澄清溶液中加入0.36kgVIIIb結晶性晶種于MEK中的漿料(0.021kgVIIIb結晶性晶種和0.34kgMEK)。由此得到薄漿料。然后通過1μm線路過濾器在2小時內(nèi)加入剩余苯磺酸溶液。添加之后，將漿料在75℃再加熱1小時，然后在最少3小時內(nèi)冷卻至18℃。將所得稠厚漿料在18℃攪拌14-16小時。使用Aurora干燥器過濾固體。然后用經(jīng)1μm線路過濾的8.15kgMEK和水溶液(0.35kg水和7.8kgMEK)洗滌固體，隨后用經(jīng)1μm線路過濾的12kgMEK洗滌。重結晶首先向潔凈的100L圓柱形反應容器中加入21kgEtOH。伴隨中度攪拌，加入3.5kgVIIIb，然后加入剩余的EtOH(9kg)。將稠厚的漿料加熱至78℃并加入水(約1.2kg)直至獲得澄清的溶液。將熱溶液通過1μm線路過濾器過濾至另一潔凈的100L圓柱形反應容器中。溫度降至69℃且溶液保持澄清。向所得溶液中加入0.37kgVIIIb結晶性晶種于EtOH中的漿料(0.018kgVIIIb結晶性晶種和0.35kgEtOH)。在60-70℃在真空下將薄漿料濃縮至20L，然后在3小時內(nèi)冷卻至18℃。將所得漿料在18℃攪拌14-16小時。使用過濾干燥器過濾固體。然后用經(jīng)1μm線路過濾的8.6kgEtOH和水溶液(0.4kg水和8.2kgEtOH)洗滌固體。將溶液分成兩等份。然后用經(jīng)1μm線路過濾的6.7kgMEK洗滌。將濕濾餅在真空和氮氣吹掃下在35-40℃套溫度干燥最少12小時。備選的合成路線(以下步驟1至10)步驟1：操作：1.在N2下向具有槳式攪拌器的四頸套式燒瓶中加入化合物1和MeBrPPh32.向燒瓶中加入THF(5.0V.,KF<0.02％)(注意：V為溶液的體積比限定試劑的質(zhì)量或L/Kg)3.在0℃攪拌混懸液4.在0℃向燒瓶中逐份添加NaH(60％混懸于礦物油中)5.在0℃攪拌30分鐘6.加熱至30℃并攪拌6小時7.冷卻至0℃8.向燒瓶中加入PE(石油醚)(5.0V.)9.向燒瓶中添加TPPO的晶種(三苯基膦氧化物)(總體TPPO的1至約5％wt)10.在-10℃攪拌2小時11.過濾，并用PE(5.0V.)洗滌濾餅12.濃縮濾液至干13.通過減壓蒸餾純化產(chǎn)物得到作為無色油狀物的2步驟2：操作：1.在N2下添加(DHQD)2PHAL、Na2CO3、K2Fe(CN)6、K2OsO2(OH)4至燒瓶中(Ad-mixbeta,Aldrich,St.Louis,MO)2.冷卻至0℃3.添加tBuOH(5V)和H2O(5V)4.添加25.在0℃攪拌混合物6小時6.冷卻至0℃7.添加Na2SO3以淬滅反應混合物8.在0℃攪拌2小時9.過濾并用EA(乙酸乙酯)洗滌濾餅10.分離有機層11.過濾并濃縮至干步驟3：操作：1.在N2下向燒瓶中添加IV(1eq.)和DCM(5V)2.冷卻至0℃3.添加DMAP(0.1eq.)，然后添加TEA(1.5eq.)4.在0℃滴加TBSCl(1.05eq.)5.在0℃攪拌混合物1小時6.添加水以淬滅反應混合物7.分離兩層8.經(jīng)Na2SO4干燥有機層9.過濾10.濃縮濾液至干11.直接用于下一步驟步驟4：操作：1.在N2向燒瓶中添加V(1.0eq.)和DCM(5V)。2.冷卻至0℃3.添加TEA(1.51eq.)4.在0℃滴加MsCl(1.05eq.)5.在室溫攪拌混合物1小時6.為了更好的攪拌，添加DCM以稀釋混合物7.添加水以淬滅反應混合物8.分離兩層9.用NaHCO3洗滌有機層10.經(jīng)Na2SO4干燥11.過濾并濃縮濾液至干12.直接用于下一步驟步驟5:操作：1.在N2下向燒瓶中添加VII(1eq.)和DGME(20V)2.冷卻至0℃3.添加KHMDS(1M于THF中,1eq.)4.添加VI(1.2-1.5eq.)于DGME中的溶液5.在0℃攪拌5分鐘6.加熱至回流(套溫120℃)并攪拌持續(xù)4小時7.冷卻下來8.用水淬滅并用MTBE萃取9.用20％NaCl洗滌10.經(jīng)Na2SO4干燥11.濃縮至干并直接用于下一步驟步驟6：操作：1.在N2下向燒瓶中加入XI(1eq.)、DCM(8V)2.按份添加mCPBA3.在室溫攪拌2小時4.添加7％NaHCO3水溶液進行洗滌5.用Na2S2O4水溶液淬滅6.用20％NaCl水溶液洗滌7.經(jīng)Na2SO4干燥8.過濾并濃縮至干9.于MTBE(3V)中漿化所得物以得到I步驟7：操作：1.在N2下向燒瓶中添加I(1eq.)、1-甲基-1H-吡唑-5-胺(4eq.)、Cs2CO3、DMF(4V)2.在室溫攪拌3小時3.后處理以得到產(chǎn)物。步驟8：操作：1.將IX溶于MeOH中2.在環(huán)境溫度加入HCl(1.25M于MeOH中)。3.添加之后，將反應混合物加熱至45℃并持續(xù)16小時。4.將反應混合物冷卻至室溫并用NaHCO3水溶液淬滅且用EtOAc稀釋5.分離相之后，用水洗滌有機層。將有機層濃縮以得到粗VIII步驟9：操作：1.在N2下向具有槳式攪拌器的四頸套式燒瓶中加入化合物6-2,XIII、Pd-催化劑和碳酸氫鈉2.向燒瓶中加入水和1,4-二噁烷(5.0V.,KF<0.02％)3.在85℃攪拌混懸液16小時4.通過硅膠(2.0X)和硅藻土(0.5X)過濾5.通過真空蒸餾去除1,4-二噁烷6.在水(2.0V)和EtOAc(5.0V)之間分配7.分離有機相并濃縮8.通過從PE和EtOAc中重結晶進行純化步驟10：操作：·向燒瓶中添加X·添加2MHCl(10-15V)·加熱至100℃并攪拌3小時·冷卻下來·用30％NaOH水溶液中和pH至7-8·用THF萃取·用20％NaCl水溶液洗滌·經(jīng)Na2SO4干燥·過濾并濃縮至干結晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽的合成將(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(21.1mg,0.048mmol)溶于MEK(0.5mL)中。將苯磺酸(Fluka,98％,7.8mg,0.049mmol)溶于MEK(0.5mL)中并伴隨攪拌將所得溶液滴加至游離堿溶液中。出現(xiàn)沉淀并隨著添加更多苯磺酸沉淀物慢慢溶解。少量粘性固體殘留在小瓶底部。將小瓶內(nèi)容物超聲處理10分鐘，在此期間進一步出現(xiàn)沉淀。離心之后將固體分離并使用室內(nèi)真空在40℃真空干燥。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽結晶形式A的合成在設置為90℃的加熱塊(heatingblock)中，將(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮，苯磺酸鹽(23.1mg)溶于熱異丙醇(5mL)。關閉加熱塊上的熱源并使溶液冷卻至環(huán)境溫度，然后置于在約-20℃的冰箱中。收集固體，同時保持冰冷，并通過XRPD進行分析以得到(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮，苯磺酸鹽形式A。適于單晶結構確定(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸鹽結晶形式A單晶的合成如下文所述。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸鹽結晶形式A：具有用于結構確定的合適質(zhì)量的晶體通過以下方式生長于甲醇中：在約50℃攪拌，在約1天之后分離至Paratone-N油中并在環(huán)境條件下儲存。結構解析：將尺寸約為0.16×0.16×0.06mm的C27H23ClFN6O5S[C21H18ClFN6O2,C6H5O3S]的無色板以隨機取向安裝在纖維上。在配備有共聚焦光學器件的RigakuRapidII衍射儀上用CuKα輻射進行初步檢查和數(shù)據(jù)收集。使用SHELX2013進行精修[Sheldrick,G.M.ActaCryst.,2008,A64,112]。使用在3°<θ<63°的范圍內(nèi)的24479個反射的設置角度從最小二乘法精修獲得用于數(shù)據(jù)收集的晶胞常數(shù)和取向矩陣。來自DENZO/SCALEPACK的精修鑲嵌度為0.59°，表明中等的晶體質(zhì)量[Otwinowski,Z.；Minor,W.MethodsEnzymol.1997,276,307]。通過程序XPREP[Bruker,XPREPinSHELXTLv.6.12.,BrukerAXSInc.,Madison,WI,USA,2002]確定空間群。沒有系統(tǒng)消光，并且空間群被確定為P1(第1號)。在293±1K的溫度，將數(shù)據(jù)收集至126.9°的最大2θ值。用HKL3000整合框架[Flack,H.D.；Bernardinelli,G.,ActaCryst.1999,A55,908]。共收集了24479個反射，其中6536個是獨特的。對數(shù)據(jù)應用Lorentz和極化校正。CuKα輻射的線性吸收系數(shù)為2.450mm-1。使用SCALEPACK的經(jīng)驗吸收校正[Otwinowski,Z.；Minor,W.MethodsEnzymol.1997,276,307]。透射系數(shù)范圍為0.564至0.863。應用二次消光校正[Glusker,JennyPickworth；Trueblood,KennethN.CrystalStructureAnalysis:APrimer,2nded.；OxfordUniversitypress:NewYork,1985；p.87]。以最小二乘法精修的最終系數(shù)為0.00170(絕對單位)。計算等效反射的強度的均值。基于強度，均值的吻合因子為9.8％。使用SHELXT通過直接方法解析結構[Burla,M.C.,Caliandro,R.,Camalli,M,.Carrozzini,B.,Cascarano,G.L.,DeCaro,L.,Giacovazzo,C.,Polidori,G.,andSpagna,R.,J.Appl.Cryst.2005,38,381]。剩余的原子位于隨后的差值傅里葉合成中。獨立地精修位于氮原子上的氫原子。所有其它氫原子均包括在精修中，但是限制依靠與它們所鍵合的原子。通過最小化函數(shù)，在全矩陣最小二乘法中精修結構：∑w(|Fo|2-|Fc|2)2權重w被定義為1/[σ2(Fo2)+(0.2000P)2+(0.0000P)]，其中P＝(Fo2+2Fc2)/3。散射因子取自“InternationalTablesforCrystallography”[InternationalTablesforCrystallography,Vol.C,KluwerAcademicPublishers:Dordrecht,TheNetherlands,1992,表4.2.6.8和6.1.1.4]。在精修中使用的6536個反射中，在計算擬合殘差R中僅使用具有Fo2>2σ(Fo2)的反射。在計算中使用總共5796個反射。精修的最終周期包括771個可變參數(shù)和收斂(最大參數(shù)偏移小于其估計標準偏差的0.01倍)，具有未加權和加權吻合因子：R＝Σ|Fo-Fc|/ΣFo＝0.096單位權重的觀察值的標準偏差(擬合優(yōu)度)為1.385。最終差值傅立葉中的最高峰高度為這是相當高的，并且表明結構精修的質(zhì)量差。最小負峰高度為將用于確定絕對結構的Flack因子[Flack,H.D.ActaCryst.1983,A39,876]精修至-0.01(4)。使用無序來精修不對稱單元中的一個分子的一個羥基。這導致O22和H22原子分裂成O22A、H22A和O22B、H22B原子坐標對。由單晶分析確定的(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸鹽結晶形式A的單分子的代表示于圖3。羥甲基中的無序(disorder)可在圖3的右上方觀察到。VIIIb的單晶數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)收集參數(shù)(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸鹽以具有兩個對稱獨立的陽離子陰離子對的手性三斜空間群P-1形式結晶。雖然幾何參數(shù)表明所有的分子間相互作用可被視為相對強，兩種陽離子都是高度無序的。發(fā)現(xiàn)氯氟苯基的兩種構象具有約60:40的占有率。此外，羥甲基也是無序的，占有率約50:50。絕對立體化學被指定為S-構型。無定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽的合成在加熱塊中，將于叔丁醇(約20mL)中的(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸鹽(39.6mg)加熱至60℃。在添加苯磺酸鹽之前叔丁醇已經(jīng)在約30℃融化。添加水(200μ)并加熱直至得到澄清溶液。將溶液冷卻并通過0.2μm過濾器過濾且置于凍干機中。使用SPScientificVirTisAdVantage2.0臺式冷凍干燥機將該化合物凍干。使用70小時方案(recipe)從化合物中去除溶劑。化合物的初始冷凍在-70℃真空下在500mTorr壓力下進行1.5小時。這確保在開始初級干燥之前整個溶液完全冷凍。進行初級干燥以通過升華去除大量溶劑。溫度從-70℃升至-35℃，壓力降至100mTorr，持續(xù)1小時。在-35℃干燥1小時后，將溫度升至5℃，并在相同壓力下再干燥28小時。初級干燥在最后一步在15℃結束，保持16小時。將凍干壓力降低至50mTorr，并將溫度升至35℃保持16小時。二次干燥繼續(xù)，溫度降至30℃，壓力降至10mTorr，持續(xù)6小時。凍干循環(huán)的最后步驟具有降低至25℃的溫度，并且將壓力升高回到2500mTorr持續(xù)1小時。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,1,5-萘二磺酸鹽:結晶形式I的合成：將(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(21.8mg,0.0494mmol)溶于MEK(0.5mL)中。將1,5-萘二磺酸鹽四水合物(25.1mg,0.0871mmol)溶于甲醇(1.0mL)中并伴隨攪拌向游離堿溶液中滴加約0.36mL溶液。出現(xiàn)沉淀。將混懸液慢慢蒸發(fā)直至僅剩余痕量溶劑。使用室內(nèi)真空將固體在40℃真空干燥。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,1,5-萘二磺酸鹽:結晶形式II的合成：將(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(103.3mg,0.234mmol)溶于MEK(2.5mL)中。將1,5-萘二磺酸鹽四水合物(110.4mg,0.383mmol)溶于甲醇(2.0mL)中并伴隨攪拌向游離堿溶液中滴加約0.77mL溶液。出現(xiàn)沉淀，其包含一個大的厚塊(chunk)。用刮刀使厚塊破裂，隨后添加甲醇(0.77mL)。將混懸液攪拌3天。通過過濾分離出固體并使用室內(nèi)真空在60℃干燥以得到57mg黃色固體。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,甲苯磺酸鹽IPA溶劑化物和(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,甲苯磺酸鹽形式A的合成使用超聲處理將(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(105.1mg,0.239mmol)大部分溶于異丙醇(1mL)中。將對甲苯磺酸一水合物(97.5％純,52.9mg,0.271mmol)溶于異丙醇(1mL)中。伴隨攪拌向游離堿溶液中滴加甲苯磺酸鹽溶液以得到黃色固體。添加另外的異丙醇(1mL)。通過過濾分離固體并用1mL異丙醇淋洗反應器和固體。通過XRPD在對大氣開放的支架(holder)中分析固體，同時仍潤濕固體以得到無序的(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,甲苯磺酸鹽IPA溶劑化物。對XRPD樣品進行TG分析。將剩余固體在60℃真空下干燥4天以得到(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,甲苯磺酸鹽結晶形式A.(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮甲苯磺酸鹽，無定形形式的合成。將(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(104.3mg,0.237mmol)溶于乙醚(60mL)中。將對甲苯磺酸一水合物(52.0mg,0.273mmol)溶于乙醚(5mL)中。伴隨攪拌向游離堿溶液中滴加甲苯磺酸鹽溶液并將混懸液攪拌過夜。傾析醚并將固體風干以得到103mg黃色固體。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮甲苯磺酸鹽，無定形形式和形式B混合物的合成將(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮甲苯磺酸鹽，無定形形式(10.8mg)置于具有攪拌棒的小瓶中。添加甲基乙基酮(MEK,0.3mL)并將漿料攪拌4天。在60℃真空下蒸發(fā)溶劑以得到黃色固體。使用反射幾何學的RigakuMiniFlexII粉末X射線衍射儀獲得樣品的粉末X射線衍射圖。銅輻射源在30kV電壓和15mA電流操作。將每個樣品置于裝有零背景石英插入物的鋁樣品支架的空腔中，并用載玻片壓平，以呈現(xiàn)良好的表面紋理并插入樣品支架中。所有樣品在2°和40°之間的2θ角度范圍內(nèi)以2°/分鐘的掃描速率和0.02°的步長測量。使用具有機械冷卻器和標準試池(配置與樣品盤相同)的TAInstruments差示掃描量熱計(型號Q100或型號Q2000)來測量粉末樣品的熱性能。將每個樣品裝入具有含有0至1個針孔的非卷曲蓋的封閉的鋁盤中，并置于差示掃描量熱計(DSC)試池中。試池具有以約50cm3/分鐘流動的氮氣吹掃。試池和樣品在20℃平衡。然后將試池以10.00℃/分鐘加熱至209℃或250-350℃，同時監(jiān)測空參照盤和樣品盤之間的熱流差。調(diào)制式DSC用于分析(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮無定形游離堿。使用具有機械冷卻器和標準試池(配置與樣品盤相同)的TAInstruments差示掃描量熱計(型號Q2000)來測量粉末樣品的熱性能。將每個樣品裝入具有含有0至1個針孔的非卷曲蓋的封閉的鋁盤中，并置于差示掃描量熱計(DSC)試池中。試池具有以約50cm3/分鐘流動的氮氣吹掃。試池和樣品在25℃平衡，每60秒在±1℃調(diào)節(jié)溫度，并且等溫保持5分鐘。開啟數(shù)據(jù)存儲并將樣品在3℃斜升至100℃。然后將樣品以3℃/分鐘斜升至25℃。然后將樣品以3℃/分鐘加熱至200℃。顯示反轉(zhuǎn)信號。在TAInstrumentsQ5000SA蒸氣吸附分析儀上收集自動蒸氣吸附數(shù)據(jù)。NaCl和PVP用作校準標準。樣品在分析之前不干燥。在25℃在5至95％RH的范圍內(nèi)以10％RH增量在氮氣吹掃下收集吸附和解吸數(shù)據(jù)。將樣品在相應的RH保持1小時，然后移動到下一個RH范圍。沒有校正樣品的初始水分含量的數(shù)據(jù)。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮的游離堿為無定形固體(XRPD,圖4)。取決于通過差示掃描量熱法測量的純度和溶劑含量，玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(TG)在約74-96℃之間變化(DSC,圖5)。在試圖發(fā)現(xiàn)(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮游離堿的結晶形式中進行了大約200次結晶實驗沒有成功。在多個實驗中觀察到少量晶體，但這些被鑒定為自合成序列或自原料產(chǎn)生的雜質(zhì)，而不是(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮游離堿。在使用硝基甲烷作為溶劑和庚烷作為反溶劑在蒸氣擴散實驗中進行的實驗中注意到一個例外。分離出無定形和結晶性物質(zhì)的混合物。獲得的結晶性物質(zhì)被確定為±1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮。進行鹽篩以確定是否可發(fā)現(xiàn)合適的鹽形式。游離堿的pKa確定為小于2，這限制了可能的鹽共形成物(coformer)的范圍。此外，衍生自(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮游離堿的鹽pHmax小于2，并預期在水中歧化(disproportionate)。因此，不清楚可制備結晶性鹽，或者任何鹽在體內(nèi)(水性環(huán)境)具有可接受的暴露。使用氯化氫、硫酸、甲磺酸、乙磺酸、羥乙磺酸和乙二磺酸制備結晶性鹽的初始嘗試未能得到任何結晶性鹽。最終自1,5-萘二磺酸、對甲苯磺酸和苯磺酸獲得結晶性鹽。以下是顯示本文所述鹽的主要XRPD峰信息的表。本領域技術人員公知的是，取決于進行XRPD分析的條件，峰可向上或向下移動。通常，峰可偏移+/-0.2。在另一方面，峰可偏移+/-0.1。苯磺酸鹽反射位置°2θ晶面間距(dspacing)(埃)相對面積6.1614.34299.37.4611.84019.416.365.41410025.763.45680.625.983.42390.2甲苯磺酸鹽IPA溶劑化物反射位置°2θ晶面間距(埃)相對面積4.9817.72810013.286.66220.716.285.44060.419.724.49973.8甲苯磺酸鹽形式A甲苯磺酸鹽形式B反射位置°2θ晶面間距(埃)相對面積7.0212.58440.116.3025.43342.717.305.12257.821.864.063100萘二磺酸鹽形式I反射位置°2θ晶面間距(埃)相對面積12.507.07618.313.866.38518.6萘二磺酸鹽形式II反射位置°2θ晶面間距(埃)相對面積12.806.9106022.423.96276.224.923.570100藥物產(chǎn)品是否含有特定結晶形式的物質(zhì)，通常在片劑或膠囊中，可例如使用X射線衍射、拉曼光譜和/或固態(tài)NMR技術來確定。例如，(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸鹽結晶形式A的固態(tài)13C和19FNMR譜分別如圖19和20所示。獲得NMR譜的程序如下所述。使用13C和19F固態(tài)NMR譜分析(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸鹽結晶形式A。使用在500.13MHz(對于1H)、125.77MHz(對于13C)和470.55MHz(對于19F)操作的BrukerAvanceIIINMR光譜儀獲得光譜。13C實驗利用針對1H和13C調(diào)諧的具有4mm魔角旋轉(zhuǎn)(MAS)模塊的BrukerHX雙共振探針。19F實驗采用調(diào)諧到1H、19F和13C的也配備有4mmMAS模塊的BrukerHFC三共振探針。將樣品裝入4mmZrO2轉(zhuǎn)子中并用Kel-F驅(qū)動尖端密封。在293K收集所有數(shù)據(jù)。使用BrukerTopSpinTM3.2軟件收集、處理和分析數(shù)據(jù)。用于13C采集的脈沖序列采用傾斜的交叉極化(rampedcrosspolarization)(CP)1-3，5-π總邊帶抑制(totalsidebandsuppression)(TOSS)4，和使用SPINAL645方案的高功率1H去耦以及90kHz場強。在8000±3Hz進行魔角旋轉(zhuǎn)(MAS)。1H90°脈沖寬度為2.79μs，TOSS序列采用6.50μs的13C180°脈沖。CP接觸時間為3ms，循環(huán)延遲為18s，并且計算總共3888次掃描的均值以產(chǎn)生光譜?；瘜W位移通過將3-甲基戊二酸的甲基峰相對于四甲基硅烷設定為18.84ppm而進行外部參照6。用于19F采集的脈沖序列采用傾斜的CP1-3和使用SPINAL645方案的高功率1H去耦以及71kHz場強。在14000±5Hz進行魔角旋轉(zhuǎn)(MAS)。1H90°脈沖寬度為3.54μs，CP接觸時間為3ms，循環(huán)延遲為18s，并且計算總共16次掃描的均值以產(chǎn)生光譜。化學位移通過以下方式進行外部參照：將聚四氟乙烯(PTFE)的氟峰相對于CFCl3(通過將CFCl3加入PTFE樣品中實驗確定)設定為-122.38ppm。NMR參考文獻：1.Pines,A.；Gibby,M.G.；Waugh,J.S.,Proton-enhancednuclearinductionspectroscopy.Methodforhigh-resolutionNMRofdilutespinsinsolids.J.Chem.Phys.1972,56(4),1776-7.2.Stejskal,E.O.；Schaefer,J.；Waugh,J.S.,Magic-anglespinningandpolarizationtransferinproton-enhancedNMR.J.Magn.Reson.(1969-1992)1977,28(1),105-12.3.Metz,G.；Wu,X.；Smith,S.O.,Ramped-amplitudecrosspolarizationinmagic-angle-spinningNMR.J.Magn.Reson.Ser.A1994,110(2),219-27.4.Song,Z.；Antzutkin,O.N.；Feng,X.；Levitt,M.H.,Sidebandsuppressioninmagic-angle-spinningNMRbyasequenceof5pipulses.SolidStateNucl.Magn.Reson.1993,2(3),143-6.5.Fung,B.M.；Khitrin,A.K.；Ermolaev,K.,Animprovedbroadbanddecouplingsequenceforliquidcrystalsandsolids.J.Magn.Reson.2000,142(1),97-101.6.Barich,D.H.；Gorman,E.M.；Zell,M.T.；Munson,E.J.,3-Methylglutaricacidasa13Csolid-stateNMRstandard.SolidStateNucl.Magn.Reson.2006,30(3-4),125-129.(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羥基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸鹽結晶形式A的13C固態(tài)NMR譜特征在于相對于四甲基硅烷化學位移在157.7±0.2ppm、129.6±0.2ppm、125.8±0.2ppm和117.0±0.2ppm(在293K)的強峰。19F譜的特征在于相對于CFCl3化學位移在-111.1±0.4ppm和-115.4±0.4ppm(在293K)的兩個各向同性峰。VIII的結晶性苯磺酸鹽是一種高結晶性物質(zhì)，其熔點對于藥物劑型的開發(fā)是可接受的?；谄浜唵蔚墓虘B(tài)景觀(landscape)(僅鑒定一種結晶形式)，苯磺酸鹽形式優(yōu)于甲苯磺酸鹽和1,5-萘磺酸鹽形式。此外，非?？扇〉氖潜交撬猁}與甲苯磺酸鹽和1,5-萘二磺酸鹽形式相比具有較低的吸濕性。VIII的游離堿具有低pKa，小于1.8，因此，由于歧化為游離堿和酸，預期鑒定的任何鹽在水存在情況下不穩(wěn)定。因此，苯磺酸鹽的非吸濕性是出乎意料的，并且導致與甲苯磺酸鹽和萘磺酸鹽形式相比增強的穩(wěn)定性。在另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含本發(fā)明的化合物或鹽或鹽的結晶形式和藥學上可接受的賦形劑，諸如載體、佐劑或媒介物。在某些實施方案中，組合物被配制用于給予有此需要的患者。本文使用的術語“患者”或“個體”是指動物，諸如哺乳動物，諸如人。在一個實施方案中，患者或個體是指人。術語“藥學上可接受的”意指所提及的化合物或組合物與包含制劑的其它成分(諸如賦形劑)和/或待治療的患者(特別是人)化學和/或毒理學相容。術語“藥學上可接受的載體、佐劑或媒介物”是指不破壞用其配制的化合物的藥理學活性的無毒性載體、佐劑或媒介物。可用于本發(fā)明的組合物中的藥學上可接受的載體、佐劑或媒介物包括但不限于離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白諸如人血清白蛋白、緩沖物質(zhì)諸如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)諸如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯基吡咯烷酮、基于纖維素的物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。包含本發(fā)明化合物的組合物可通過口服、腸胃外、通過吸入噴霧、局部、經(jīng)皮、經(jīng)直腸、經(jīng)鼻、經(jīng)頰、舌下、經(jīng)陰道、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)、皮內(nèi)、硬膜外或通過植入的儲庫給藥。本文使用的術語“腸胃外”包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、肝內(nèi)、病灶內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸注技術。在一個實施方案中，包含本發(fā)明化合物的組合物被配制為用于口服給藥的固體劑型。用于口服給藥的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在某些實施方案中，包含式(I)的化合物或其鹽的固體口服劑型進一步包含一種或多種(i)惰性的藥學上可接受的賦形劑或載體，諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣；和(ii)填充劑或增量劑，諸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇或硅酸；(iii)粘合劑，諸如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖或阿拉伯膠；(iv)濕潤劑，諸如甘油；(v)崩解劑諸如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽或碳酸鈉；(vi)溶解阻滯劑諸如石蠟；(vii)吸收促進劑，諸如季銨鹽；(viii)潤濕劑，諸如鯨蠟醇或甘油單硬脂酸酯；(ix)吸收劑，諸如高嶺土或膨潤土；和(x)潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、聚乙二醇或月桂基硫酸鈉。在某些實施方案中，固體口服劑型被配制為膠囊、片劑或丸劑。在某些實施方案中，固體口服劑型還包含緩沖劑。在某些實施方案中，用于固體口服劑型的這種組合物可在包含一種或多種賦形劑(諸如乳糖(lactose)或乳糖(milksugar)、聚乙二醇等)作為填充劑的軟和硬填充的明膠膠囊中配制。在某些實施方案中，包含式I的化合物或其鹽的組合物的片劑、糖錠、膠囊、丸劑和顆粒劑任選地包含包衣或殼諸如腸溶衣。它們可任選地包含遮光劑，并且還可是其僅僅或優(yōu)選在腸道的某一部分中任選地以延遲方式釋放一種或多種活性成分的組合物。包埋組合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟，其也可用作軟和硬填充的明膠膠囊中的填充劑，使用賦形劑諸如乳糖(lactose)或乳糖(milksugar)以及高分子量聚乙二醇等。在另一個實施方案中，組合物包含本發(fā)明的微囊化化合物，并且任選地，還包含一種或多種賦形劑。在另一個實施方案中，組合物包含用于口服給藥的包含式I的化合物或其鹽的液體劑型制劑，并任選地進一步包含一種或多種藥學上可接受的乳劑、微乳劑、溶液、混懸液、糖漿劑和酏劑。在某些實施方案中，液體劑型任選地進一步包含一種或多種惰性稀釋劑諸如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇或脫水山梨醇的脂肪酸酯以及它們的混合物。在某些實施方案中，液體口服組合物任選地進一步包含一種或多種佐劑，諸如潤濕劑、混懸劑、增甜劑、矯味劑和芳香劑?？勺⑸渲苿?，例如無菌可注射水性或油性混懸液可根據(jù)已知技術使用合適的分散劑或潤濕劑和混懸劑配制。無菌可注射制劑還可為在無毒的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液、混懸液或乳液，例如作為在1,3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受的媒介物和溶劑為水、林格氏溶液、U.S.P和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌的不揮發(fā)油通常用作溶劑或混懸介質(zhì)。為此目的，可采用任何溫和的不揮發(fā)油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。此外，脂肪酸諸如油酸用于制備注射劑?？勺⑸渲苿┛衫缤ㄟ^經(jīng)由細菌截留過濾器過濾或通過摻入呈無菌固體組合物形式的滅菌劑來滅菌，所述無菌固體組合物可在使用前溶解或分散于無菌水或其它無菌可注射介質(zhì)中。為了延長本發(fā)明化合物的效果，通常希望減慢化合物自皮下或肌內(nèi)注射的吸收。這可通過使用具有差的水溶性的結晶性或無定形物質(zhì)的液體混懸液來實現(xiàn)。然后化合物的吸收速率取決于其溶解速率，其依次取決于晶體尺寸和結晶形式?？蛇x擇地，胃腸外給藥的化合物形式的延遲吸收通過將化合物溶解或混懸于油媒介物中來實現(xiàn)?？勺⑸涞膬煨问酵ㄟ^在可生物降解的聚合物諸如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微囊基質(zhì)來制備。根據(jù)化合物與聚合物的比例和所用特定聚合物的性質(zhì)，可控制化合物釋放的速率。其它可生物降解的聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。儲庫型可注射制劑也通過將化合物包埋在與身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳液中來制備。在某些實施方案中，將用于直腸或陰道給藥的組合物配制為栓劑，其可通過將本發(fā)明的化合物與合適的非刺激性賦形劑或載體(諸如可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟，例如在環(huán)境溫度為固體，但在體溫為液體，因此在直腸或陰道腔中融化并釋放本發(fā)明化合物的那些)混合來制備。本發(fā)明化合物的局部或經(jīng)皮給藥的實例劑型包括軟膏劑、糊劑、乳膏劑、洗劑、凝膠劑、粉劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或貼劑。將本發(fā)明的化合物在無菌條件下與藥學上可接受的載體和任選的防腐劑或緩沖劑混合。另外的制劑實例包括眼用制劑、滴耳劑、滴眼劑或透皮貼劑。經(jīng)皮劑型可通過將本發(fā)明的化合物溶解或分散于介質(zhì)例如乙醇或二甲基亞砜中來制備。吸收增強劑也可用于增加化合物穿過皮膚的通量。速率可通過提供速率控制膜或通過將化合物分散于聚合物基質(zhì)或凝膠中來控制。采用芐醇或其它合適的防腐劑、增強生物利用度的吸收促進劑、碳氟化合物和/或其它常規(guī)增溶劑或分散劑，可將本發(fā)明化合物的鼻氣霧劑或吸入制劑制備為鹽水溶液。在某些實施方案中，藥物組合物可與或不與食物一起施用。在某些實施方案中，藥學上可接受的組合物不和食物一起施用。在某些實施方案中，本發(fā)明的藥學上可接受的組合物與食物一起施用。對于任何特定患者的具體劑量和治療方案將取決于多種因素，包括年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時間、排泄速率、藥物組合、治療醫(yī)師的判斷、所治療的具體疾病的嚴重程度。組合物中提供的本發(fā)明化合物的量還將取決于組合物中的具體化合物。在一個實施方案中，每劑量腸胃外給藥的本發(fā)明化合物的治療有效量將在約0.01-100mg/kg，或約0.1至20mg/kg患者體重/天的范圍內(nèi)，使用的化合物的典型初始范圍為0.3至15mg/kg/天。在另一個實施方案中，口服單位劑型，諸如片劑和膠囊劑，含有約5至約100mg的本發(fā)明化合物。實例片劑口服劑型包含約2mg、5mg、25mg、50mg、100mg、250mg或500mg的式(I)的化合物或其鹽，并且還包含約5-30mg無水乳糖、約5-40mg交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、約5-30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和約1-10mg硬脂酸鎂。配制片劑的方法包括將粉末化成分一起混合并進一步與PVP的溶液混合。所得組合物可干燥、制粒、與硬脂酸鎂混合并使用常規(guī)設備壓制成片劑形式。氣溶膠制劑的實例可如下制備：將約2-500mg式I的化合物或其鹽溶解在合適的緩沖溶液例如磷酸鹽緩沖液，并且如果需要添加張度劑(tonicifier)，例如鹽諸如氯化鈉。可例如使用0.2微米過濾器過濾該溶液以去除雜質(zhì)和污染物。在前述描述或所附權利要求書中公開的特征，以其具體形式或根據(jù)用于執(zhí)行所公開的功能的裝置，或用于實現(xiàn)所公開的結果的方法或過程，適當?shù)乇硎?，可單獨地或以這些特征的任何組合用于以不同形式實現(xiàn)本發(fā)明。為了清楚和理解的目的，已經(jīng)通過說明和實施例相當詳細地描述了前述發(fā)明。對于本領域技術人員來說顯而易見的是，可在所附權利要求的范圍內(nèi)實施改變和修改。因此，應當理解，上述描述旨在是說明性的而不是限制性的。因此，本發(fā)明的范圍不應當參考上述描述來確定，而是應當參考以下所附權利要求以及這些權利要求所賦予的等同物的全部范圍來確定。本文提及的專利、公開的申請和科學文獻建立了本領域技術人員的知識，并且通過引用以其整體并入本文，其程度如同各自具體地和單獨地指出通過引用并入。本文所引用的任何參考文獻與本說明書的具體教導之間的任何沖突應以后者為準。同樣地，本領域理解的詞或短語的定義與本說明書中具體教導的詞或短語的定義之間的任何沖突應以有利于后者的方式解決。當前第1頁1 2 3