本發(fā)明涉及一種用于預(yù)防或治療脂肪肝疾病，特別是非酒精性脂肪性肝炎的組合物，所述組合物包含(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分。

背景技術(shù)：

所有脂肪肝疾病，包括發(fā)生在不喝酒者中的與酒精性肝病癥相似的脂肪肝，均稱作非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)。在NAFLD患者中，肝中的脂肪酸合成總是被激活的，并且脂肪酸合成的激活是代謝綜合征引起的在脂肪肝發(fā)展中的重要因素。

NAFLD大致分為兩組：單純性脂肪肝，一般認(rèn)為其具有輕微的預(yù)后，以及非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，由于單純性脂肪肝不斷伴有炎癥或纖維化，其被認(rèn)為具有不良預(yù)后，且據(jù)認(rèn)為NASH是NAFLD的嚴(yán)重類型之一。

到目前為止，已知二次打擊理論是NASH發(fā)生和發(fā)展的主要病理機(jī)制。二次打擊理論是這樣的，表示因素如生活習(xí)慣或遺傳因素的第一次打擊發(fā)展單純性脂肪肝，然后在脂肪肝狀態(tài)下主要誘導(dǎo)的多個因素如氧化應(yīng)激或炎性細(xì)胞因子充當(dāng)?shù)诙未驌粢允箚渭冃灾靖渭又刂罭ASH的嚴(yán)重階段。

對代謝綜合征的治療(已知是與NASH的發(fā)生相關(guān)的因素之一)是非常重要的，并且鑒于這方面，臨床上嘗試了對代謝綜合征具有抑制效果的藥物，如胰島素抗性改善劑、抗氧化劑、高脂血癥治療劑、肝保護(hù)劑和血管緊張素II受體拮抗劑。

但是，到目前為止對NASH的治療有臨床證據(jù)的藥物幾乎沒有進(jìn)展。例如，吡格列酮(其為胰島素抗性改善劑)非常有希望作為治療NASH的藥物，但是其在3期臨床試驗中未表現(xiàn)出實際的改善效果，并且由于副作用如骨折的風(fēng)險、體重增加、心力衰竭惡化和病危的問題，其未能顯著符合治療藥物的標(biāo)準(zhǔn)。

因此，迫切需要關(guān)于非酒精性脂肪性肝炎的預(yù)防或治療的研究。

與此同時，(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺是特定的線粒體的細(xì)胞壞死抑制劑，并且表現(xiàn)出以下效果：抑制毒素或應(yīng)激引起的細(xì)胞死亡、增加細(xì)胞的生存力以及同時抗氧化和抗炎。

換句話說，雖然已知(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺對細(xì)胞壞死相關(guān)的各種疾病有效，但是尚未有公開涉及預(yù)防和治療脂肪肝疾病和代謝綜合征，并且對這個問題沒有進(jìn)行研究。

本發(fā)明人通過發(fā)現(xiàn)用(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺治療NASH動物模型有效改善NASH的主要病理形式脂肪肝、肝炎癥和肝纖維化完成了本發(fā)明。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

技術(shù)問題

本發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防或治療關(guān)于NAFLD，特別是NASH的脂肪肝疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包含(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分。

解決方案

為了實現(xiàn)這個目的，本發(fā)明提供一種用于預(yù)防或治療脂肪肝疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包含(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分。

在本文中，脂肪肝疾病可以是非酒精性脂肪肝疾病，特別是非酒精性脂肪性肝炎或單純性脂肪肝，且本發(fā)明的組合物抑制肝脂肪的積累，并且通過抑制源自脂肪肝的氧化應(yīng)激或炎性細(xì)胞因子對抑制肝的炎癥和纖維化具有效果。

具體實施方式

以下更詳細(xì)地描述本發(fā)明。

根據(jù)本發(fā)明用于預(yù)防或治療脂肪肝疾病的藥劑包含(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分。

在本發(fā)明中，“脂肪肝疾病”一般指這樣的疾病，其中由中性脂肪沉積至肝細(xì)胞誘導(dǎo)的肝病癥，并且包括酒精性脂肪肝疾病和非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)。

在本發(fā)明中，“非酒精性脂肪肝疾病”與非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝綜合征具有相同的含義。非酒精性脂肪肝疾病包括非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和單純性脂肪肝。

例如，非酒精性脂肪肝疾病是這樣的肝病癥，其特征在于盡管沒有明顯的酒精攝入歷史，但是在肝活組織檢查上大泡性肝脂肪沉積與酒精性脂肪肝病癥相似，并且包括具有輕微預(yù)后的單純性脂肪肝和進(jìn)行性NASH。此外，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)具有以下特征：

1.沒有明顯的酒精攝入歷史(酒精的量：20g或以下/天)。

2.由明顯的自身免疫性的疾病如病毒(HCV、HBV)引起的慢性肝疾病未計算在內(nèi)。

3.代謝綜合征、肥胖、糖尿病、高脂血癥、高血壓、高尿酸血癥、睡眠呼吸暫停綜合征等是風(fēng)險因素。在具有多個風(fēng)險因素的實例中，單純性脂肪肝和NASH的可能性增加。

4.還包括引起脂質(zhì)代謝或線粒體功能異常的各種疾病或藥物。

例如，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)定義如下：

1.Matteoni(Matteoni,C.A.,et al.,1999,Gastroenterology,116:1413-1419)將NAFLD分為4類：第1類表示單純性脂肪肝，第2類表示脂肪性肝炎，第3類表示脂肪肝壞死(伴隨有氣球樣變性)，而第4類表示肝細(xì)胞壞死，其伴隨有Mallory小體(hyaline)或纖維化(伴隨有氣球樣變性)。鑒于長期預(yù)后，認(rèn)為類型3和4(其具有顯著高頻率發(fā)展為肝硬化或與肝相關(guān)的死亡)為非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

2.在美國肝疾病研究協(xié)會的單一主題會議2002(Single Topic Conference 2002,Neuschwander-Tetri,B.A.et al.,2003,Hepatology,37:1202-1219)中，鑒于作為NASH的關(guān)鍵組織病理學(xué)特征的脂肪變性(大泡性>微泡性，在小葉的中心區(qū)加重)、小葉炎癥(輕度，嗜中性粒細(xì)胞或單核白細(xì)胞的浸潤)和肝細(xì)胞氣球樣變性(明顯地在脂肪變性的肝細(xì)胞附近和小葉的中心區(qū)中)，認(rèn)為第3和4類NAFLD(Matteoni分類)為NASH。

3.Brunt(Brunt,E.M.,et al.,1999,Am.J.Gastroenterol.,94:2467-2474)根據(jù)纖維化程度將NASH的發(fā)展進(jìn)度分為4個階段。第1階段：小葉的中心區(qū)(3區(qū))，第2階段：1+門管區(qū)，第3階段：橋接形成，以及第4階段：肝硬化。

在本發(fā)明中，“單純性脂肪肝”指這樣的情況，其中在脂肪性肝疾病中，僅顯示肝細(xì)胞中的脂肪積累，未伴隨有肝細(xì)胞的壞死、炎癥或纖維化。

作為施用本發(fā)明的預(yù)防或治療藥劑的脂肪肝疾病，優(yōu)選非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)，更優(yōu)選單純性脂肪肝或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

如上文所述，在很大程度上支持二次打擊理論作為NASH的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制。二次打擊理論是NASH通過下文的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制發(fā)展至另一水平的假說。首先，作為第一次打擊，發(fā)生肝脂肪的積累(脂肪肝)，而作為第二次打擊，通過源自脂肪肝的氧化應(yīng)激或炎性細(xì)胞因子發(fā)生肝的炎癥和纖維化。

關(guān)于第一次打擊，本發(fā)明的(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺及其藥學(xué)可接受的鹽通過抑制肝脂肪合成激活和肝甘油三酯含量來抑制肝脂肪積累，從而優(yōu)先控制脂肪肝。此外，關(guān)于第二次打擊，本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽通過抑制肝中脂滴和炎性細(xì)胞的浸潤、抑制氧化應(yīng)激和炎性細(xì)胞因子且同時抑制肝炎癥相關(guān)基因和肝纖維化相關(guān)基因的表達(dá)來抑制肝的炎癥和纖維化。通過這些作用機(jī)制，(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺及其藥學(xué)可接受的鹽看來很可能有效阻斷NASH的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制。

根據(jù)本發(fā)明用于預(yù)防或治療脂肪肝疾病的藥劑包含(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺或其藥學(xué)可接受的鹽，并且如果需要，可以混合本領(lǐng)域已知的藥學(xué)可接受的添加劑。作為任選可組合的添加劑，它們可以在劑型或給藥途徑方面改變，并且包括例如賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑(slip modifier)、風(fēng)味增強(qiáng)劑、香味成分、著色劑或甜味劑。

此外，根據(jù)本發(fā)明用于預(yù)防或治療脂肪肝疾病的藥劑可以以各種形式的藥學(xué)可接受的制劑使用。這些形式中，膠囊劑、粉劑、片劑、微粒劑、顆粒劑、注射液、液體、軟膏劑或糊劑可以列為優(yōu)選實例。因此，根據(jù)本發(fā)明用于預(yù)防或治療脂肪肝疾病的藥劑可以口服或腸胃外給藥至患者。其中，鑒于便于患者使用，優(yōu)選口服制品。

在根據(jù)本發(fā)明用于預(yù)防或治療脂肪肝疾病的藥劑中，(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺或其藥學(xué)可接受的鹽的劑量可以就患者情況如年齡、體重、癥狀和給藥途徑適當(dāng)改變。例如，基于向成人(60kg)口服給藥的一天劑量為約1mg-1,000mg，優(yōu)選約10mg-750mg，基于注射給藥的一天劑量為約0.3mg-200mg，并且所述劑量可以每天給藥一次或者可分為幾次給藥。

發(fā)明效果

根據(jù)本發(fā)明，(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺或其藥學(xué)可接受的鹽可以有效抑制脂肪肝、肝的炎癥和纖維化，并且可以適用于預(yù)防或治療NAFLD，特別是NASH。

附圖說明

圖1為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對減少ob/ob小鼠中的TG和膽固醇含量的影響的圖片和圖表(n＝10，p<0.001相比媒介物)。

圖2為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對抑制ob/ob小鼠中的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)氧化的影響的圖片和圖表。

圖3為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對增強(qiáng)ob/ob小鼠線粒體的還原呼吸鏈的激活的影響的圖片和圖表。

圖4為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對減少ob/ob小鼠中增加的炎性細(xì)胞因子表達(dá)和巨噬細(xì)胞激活的影響的圖片和圖表。

圖5為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對抑制MCD(甲硫氨酸膽堿缺乏)飲食的ob/ob小鼠中的肝纖維化的影響的圖片和圖表。

實施例

下文用以下實施例更詳細(xì)地解釋本發(fā)明。但是，以下實施例僅意圖促進(jìn)理解本發(fā)明，并且本發(fā)明的保護(hù)范圍不受其限制。

實施例1：(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺對脂肪肝的抑制效果(利用伴有肥胖的脂肪肝模型進(jìn)行評價)

作為實驗動物，用于對照的6周齡雄性ob/+小鼠和6周齡C57BL/6JLep(-/-)雄性(ob/ob)小鼠購自Harlan(Indianapolis,IN)。將購買的小鼠維持在標(biāo)準(zhǔn)條件(25℃，55％濕度和12-小時光周期)下，具有正常飲食。將30只小鼠分為3組，每組10只小鼠。第1組包括10只C57BL/6J(ob/+對照組)小鼠，第2組是用鹽水溶液處理的媒介物處理的10只ob/ob小鼠，而第3組是每天以20mg/kg劑量的(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺(LG Life Sciences Ltd.,Daejeon,Republic of Korea)處理一次的組。鹽水溶液和(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺溶液口服給藥4周。處理之后，將動物麻醉并處死，并且迅速采集肝臟和儲存用于下一分析。

實施例1-1：在肥胖性脂肪肝模型中(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺對肝細(xì)胞中的TG積累、膽固醇積累和肝損傷的影響。

圖1為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對減少ob/ob小鼠中的TG和膽固醇含量的影響(n＝10,p<0.001相比媒介物)的圖片和圖表。

如圖1所示，當(dāng)與對照組小鼠(ob/+)中的肝進(jìn)行比較時，證實ob/ob肥胖小鼠具有約60％的脂肪組織以及肝細(xì)胞中從小到大各種大小的脂滴的積累。與此相反，觀察到在每天一次以20mg/kg劑量口服給藥(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺(比較組)至肥胖小鼠的情況下，當(dāng)通過H&E染色方法檢測時，脂肪組織顯著減少。此外，與媒介物處理的組相比，在用(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理小鼠的情況下，油紅O染色的區(qū)域顯著減少。

血清中的TG水平在每組的水平之間未表現(xiàn)出許多差異(數(shù)據(jù)未示出)，但是肝TG和膽固醇的量在用本發(fā)明的化合物處理的組中表現(xiàn)出顯著減少。證實與用媒介物處理的組相比，用本發(fā)明的化合物處理的組表現(xiàn)出血清中減少的ALT和AST。

實施例1-2：評估(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺對肥胖性脂肪肝模型中的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)氧化的影響。

圖2為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對ob/ob小鼠中的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)氧化抑制的影響的圖片和圖表。

如圖2所示，代表通過氧化應(yīng)激的DNA損傷的8-OHdG量表現(xiàn)出與ALT量的顯著相關(guān)性，并且與用媒介物處理的組相比，在用本發(fā)明的化合物處理的ob/ob小鼠的情況下，8-OHdG陽性肝細(xì)胞的數(shù)量非常低。此外，在線粒體功能紊亂中起重要作用的3-NT(硝基酪氨酸)的水平在ob/ob小鼠中大量增加，但是在用(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理的組中大幅度減少。此外，為了確定已知在NASH發(fā)生中作為重要因素氧化應(yīng)激的影響，測量了TBARS的量，并且在用(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理時觀察到顯著減少。

換句話說，圖2中示出的結(jié)果顯示本發(fā)明的(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺具有有效抑制氧化應(yīng)激和蛋白質(zhì)硝化的效果。

實施例1-3：評估(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺對線粒體呼吸鏈復(fù)合物的影響。

基于(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺抑制線粒體的ROS形成和通過ROS的氧化損傷的以前的結(jié)果，以及在用媒介物和(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理的ob/ob小鼠的肝中評估(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺對線粒體呼吸鏈復(fù)合物和OXPHOS復(fù)合物的表達(dá)的影響。

圖3為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對增強(qiáng)ob/ob小鼠中線粒體的還原呼吸鏈的激活的影響的圖片和圖表。

如圖3A所示，與ob/+對照組相比，在ob/ob小鼠肝中線粒體復(fù)合物I、III、IV和V的表達(dá)顯著減少。但是，在用本發(fā)明的化合物處理的ob/ob小鼠的情況下，在ob/ob小鼠肝中線粒體復(fù)合物I、III、IV和V的表達(dá)保持高達(dá)對照組的水平。此外，與ob/+對照組相比，通過BN-PAGE檢測OXPHOS復(fù)合物的結(jié)果，OXPHOS復(fù)合物I、III、IV和V顯著減少。但是，在用(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理4周的ob/ob小鼠的情況下，據(jù)顯示復(fù)合物之間的結(jié)合增強(qiáng)。典型地，在用(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理的情況下，線粒體呼吸鏈復(fù)合物I、III、IV和V的激活明顯增加，而復(fù)合物II的激活未表現(xiàn)出許多差異。

換句話說，圖3中示出的結(jié)果表明本發(fā)明的(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺改善了線粒體呼吸鏈激活和線粒體激活。

實施例1-4：評估(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺對ob/ob小鼠肝中的炎性細(xì)胞因子和巨噬細(xì)胞(Kupffer細(xì)胞)的影響。

已知炎癥和氧化應(yīng)激是NAFLD和NASH的發(fā)生和發(fā)展中的關(guān)鍵因素。本發(fā)明人通過使用免疫印跡分析了與炎癥信號相關(guān)的NF-κB、p38和JNK1/2的磷酸化。

圖4為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對減少ob/ob小鼠中增加的炎性細(xì)胞因子表達(dá)和巨噬細(xì)胞激活的影響的圖片和圖表。

如圖4A所示，在用媒介物處理的ob/ob小鼠的肝中，磷酸化的NF-κB、p65和p105的表達(dá)增加，并且炎癥標(biāo)記的p38和JNK 1/2的磷酸化水平增加。與此相反，在用本發(fā)明的化合物處理的ob/ob小鼠的情況下，NF-κB p65、NF-κB p105、p38和JNK 1/2的磷酸化顯著減少。這些結(jié)果表明(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺有效抑制為NAFLD發(fā)生的重要機(jī)制的炎癥相關(guān)的信號級聯(lián)。

此外，雖然用媒介物處理的ob/ob小鼠表現(xiàn)出肝中TNF-α的mRNA表達(dá)顯著增加，但是在用(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理的小鼠中TNF-α的表達(dá)受到抑制。作為用采集自切碎的肝的樣品進(jìn)行ELISA分析的結(jié)果，在用(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理的小鼠的情況下，顯示出顯著低量的TNF-α(圖4B)。

有趣的是，在用媒介物處理的組和用本發(fā)明的化合物處理的組之間未顯示IL-6mRNA量的差異。此外，作為F4/80(圖4C)和Cd68(圖4D)的免疫染色的結(jié)果，在用媒介物處理的ob/ob小鼠的肝中觀察到許多激活的巨噬細(xì)胞的浸潤，但是在用(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理的情況下，據(jù)顯示炎癥反應(yīng)減少。

實施例2：(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺對肝的炎癥和纖維化的抑制作用(利用伴有肥胖的脂肪性肝炎模型進(jìn)行評價)

為了確定肝纖維化的水平，測量并分析了膠原I的三色染色和表達(dá)。

圖5為示出在給藥本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)時對MCD(甲硫氨酸膽堿缺乏)飲食的ob/ob小鼠肝纖維化的抑制的影響的圖片和圖表。

如圖5A和5B所示，證實在缺乏甲硫氨酸和膽堿的MCD飲食的情況下，在ob/ob小鼠中的肝纖維化發(fā)展表現(xiàn)出許多影響。在另一方面，當(dāng)與媒介物處理的組進(jìn)行比較時，(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺處理的組表現(xiàn)出膠原I的三色染色和表達(dá)的抑制強(qiáng)度。

如圖5C所示，與正常飲食的ob/ob小鼠相比，MCD飲食的ob/ob小鼠含有更多的肝TG。但是，(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺-處理組的肝TG量表現(xiàn)出約50％的減少(ob/ob MCD-媒介物 400+/-80mg/g肝，ob/ob MCD-Comp 210+/-20)。此外，在用本發(fā)明的化合物處理的組中，血清中的ALT和AST的量顯著減少。

此外，圖5D顯示當(dāng)與正常飲食的ob/ob小鼠進(jìn)行比較時，MCD飲食的ob/ob小鼠中NF-κB p65、NF-κB p105、p38和JNK 1/2的磷酸化大大增加。在另一方面，據(jù)顯示纖維化標(biāo)記的磷酸化受到用本發(fā)明的化合物處理的抑制。

這樣的測試結(jié)果表明炎癥信號和肝纖維化在MCD飲食的ob/ob小鼠中顯著增加，但是本發(fā)明的化合物可以用作治療的潛在藥物，通過有效阻斷肝纖維化的進(jìn)程，從而改善肝功能。

如上文解釋的，證實本發(fā)明的(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺抑制肥胖脂肪肝模型中的TG積累、膽固醇積累和肝損傷，阻斷氧化應(yīng)激和脂質(zhì)氧化，增強(qiáng)線粒體呼吸鏈激活和線粒體激活，抑制炎性細(xì)胞因子和巨噬細(xì)胞(Kupffer細(xì)胞)的激活，并且其在伴有肥胖的脂肪性肝炎模型中具有抑制肝的炎癥和纖維化的效力。因此，本發(fā)明的(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1,1-二氧代-硫代嗎啉-4-基)甲基-1H-吲哚-7-基]胺或其藥學(xué)可接受的鹽可以有效抑制脂肪肝、肝的炎癥和纖維化，并且預(yù)期適用于預(yù)防或治療NAFLD，特別是NASH。