本發(fā)明涉及一種組合物，其包含含量不足以提供抗菌效果的抗菌劑、非常低濃度的生理上可接受的二價(jià)金屬離子和生理上可接受的聚合物，用于預(yù)防和/或治療口臭、呼吸異味、口干或咽喉腫痛。

發(fā)明背景

口臭，是帶有令人不愉快氣味的呼吸，這種氣味可能周期性沖擊或者是持續(xù)性的，取決于原因?？诔糁饕怯梢恍┰诳谇粌?nèi)形成天然菌落的細(xì)菌引起，特別是位于舌頭后部的隱窩內(nèi)和牙周袋中的細(xì)菌引起。所述細(xì)菌通過厭氧代謝產(chǎn)生揮發(fā)性硫化物，其主要是硫化氫和甲硫醇，它們產(chǎn)生令人不快的氣味。

本領(lǐng)域公知，鋅離子具有一些抗菌活性，并在一定程度上可減少口腔中揮發(fā)性硫化物的產(chǎn)生。已經(jīng)建議并研究了抗菌劑，諸如氯己定、氯化十六烷吡啶以及殼聚糖來減少揮發(fā)性硫化物的產(chǎn)生，從而消除令人不快的氣味，這些已經(jīng)被公開如下：

Young等人(Eur J Oral Sci 2003；111:400-404)公開了通過鋅、氯己定或氯化十六吡啶抑制口腔產(chǎn)生的揮發(fā)性硫化物，以及與濃度相關(guān)的作用。

Roldan等人(J Clin Periodontol 2004；31:1128-1134)公開了不同氯己定漱口劑對揮發(fā)性硫化物和唾液細(xì)菌計(jì)數(shù)的對比效果。

Verkaik等人(J Dentistry 2011；39:218-224)公開了天然抗微生物劑在牙膏配方中對抗口腔生物膜的體外功效。

第307168號公開了鋅離子的抗揮發(fā)性硫化物的作用主要是對抗硫化氫產(chǎn)生，而對于抗甲硫醇的產(chǎn)生作用很小，這解釋了不能完全消除口臭的原因。然而，當(dāng)將鋅離子和低濃度的某些陽離子抗菌劑組合時(shí)，則以協(xié)同作用聯(lián)合抑制了硫化氫和甲硫醇兩者的形成。

口腔中的微生物菌群是精細(xì)調(diào)節(jié)的保護(hù)性系統(tǒng)，在免疫系統(tǒng)以及降解我們吃進(jìn)去的營養(yǎng)物中起到重要作用，并進(jìn)一步負(fù)責(zé)保持消化系統(tǒng)的平衡。由于抗菌劑的抗菌活性導(dǎo)致的這種精密系統(tǒng)的變化可以導(dǎo)致真菌生長，口瘡、腹瀉等。所述藥劑還可以引起牙齒污染。

在導(dǎo)致本發(fā)明的研究中，本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)通過將量不足以提供抗細(xì)菌效果的抗菌劑與非常低濃度的生理上可接受的二價(jià)金屬離子和生理上可接受的聚合物組合，這種組合可以以協(xié)同方式減少硫化物氣體，同時(shí)對口腔內(nèi)微生物菌群沒有任何干擾。該組合物顯示了可以預(yù)防和/或治療口臭、呼吸異味、口干或咽喉腫痛。

已經(jīng)有推薦鋅錠劑可用于治療感冒(Eby III等人Medical Hypotheses 2010；74:482-92)。這仍然存在爭議，用于該目的的鋅的濃度比用于本發(fā)明組合物中的鋅濃度要高得多，且可能是通過抗細(xì)菌和/或抗病毒作用實(shí)現(xiàn)的。因此，非常令人吃驚和出人意料的是，即使沒有呈現(xiàn)明顯的抗菌效果，但本發(fā)明已經(jīng)被證明了能夠有效地對抗咽喉腫痛。這其中的機(jī)制尚未明了。

因此相信，本發(fā)明在預(yù)防和/或治療口臭、呼吸異味、口干或咽喉腫痛方面將是更安全和更有效的組合物。

附圖簡述

圖1：示出了對照的硫化氫百分含量。

該對照是在用半胱氨酸沖洗后在氣相色譜法中測定的硫化氫的含量。

單獨(dú)使用濃度為0.0049％的氯己定的結(jié)果顯示，在1小時(shí)后硫化氫氣體下降12％，2小時(shí)后下降8％，3小時(shí)后下降7％。

濃度為0.0049％的氯己定組合濃度為0.049％的Zn²⁺的結(jié)果顯示，1小時(shí)后硫化氫氣體減少39％，2小時(shí)后減少26％，3小時(shí)后減少17％。

濃度為0.0049％的氯己定組合濃度為0.049％的Zn²⁺和0.1％的殼聚糖的結(jié)果顯示，在1小時(shí)后硫化氫氣體下降58％，2小時(shí)后下降41％，3小時(shí)后下降32％。

圖2：示出了全唾液的需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)

i)在孔中用20μl溶液A(0.0049％CHX+0.049％Zn²⁺+0.1％的殼聚糖殼聚糖)進(jìn)行全唾液的需氧培養(yǎng)顯示沒有抑制；

ii)在孔中用20μl溶液A進(jìn)行全唾液的厭氧培養(yǎng)，顯示沒有抑制；

iii)在孔中用20μl溶液B(0.025％CHX+0.3％Zn²⁺)進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)顯示10mm的抑菌圈。

發(fā)明詳述

本發(fā)明的目的是提供一種組合物，其顯示對引起口臭、呼吸異味、口干或咽喉腫痛的揮發(fā)性硫化物氣體具有最大抑制效果，而對正常口腔菌群抑制作用最小。本發(fā)明因此提供了一種組合物，其包含含量不足以提供抗菌效果的抗菌劑、非常低濃度的生理上可接受的二價(jià)金屬離子和生理上可接受的聚合物，用于預(yù)防和/或治療口臭、呼吸異味、口干或咽喉腫痛。

目前，在口腔組合物中使用抗菌劑諸如雙胍類和季胺類化合物，以提供抗菌效果。

本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)通過將量不足以提供抗細(xì)菌效果的抗菌劑、非常低濃度的生理上可接受的二價(jià)金屬離子和生理上可接受的聚合物組合，這種組合能夠減少口腔中硫化物氣體和預(yù)防和/或治療口臭、呼吸異味、口干或咽喉腫痛。

進(jìn)一步出人意料地發(fā)現(xiàn)在微酸性條件下，殼聚糖與鋅和氯己定以非常低的濃度一起起到了協(xié)同作用。

殼聚糖是一種多糖，衍生自幾丁質(zhì)的脫乙酰，所述幾丁質(zhì)是天然存在的聚合物，是僅次于纖維素的天然第二大豐富的聚合物。已經(jīng)顯示殼聚糖是生物相容的和生物可降解的，具有一些抗菌作用，盡管其準(zhǔn)確的抗菌機(jī)制尚不知曉。然而，殼聚糖具有強(qiáng)烈的生物黏附特性，結(jié)合于帶負(fù)電荷的表面和結(jié)構(gòu)。

在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方式中，沒有顯示抗菌效果，因此，本發(fā)明組合物中殼聚糖或其衍生物的作用據(jù)信是通過結(jié)合到抗菌劑，例如氯己定來增強(qiáng)所述效果，將其靠近形成揮發(fā)性硫化物組合物的荷負(fù)電表面上的細(xì)菌，并連接抗菌劑，例如氯己定到鋅，以發(fā)揮它的據(jù)信是切斷SH鍵的作用。

殼聚糖對于鋅的作用據(jù)信是殼聚糖結(jié)合到粘膜和荷負(fù)電的牙齒表面，從而延長了鋅在口腔中的存留時(shí)間和作用。

在實(shí)施例1中，測試了包含如下組合的三種不同組合物:

-組合物1；氯己定，濃度為0.0049％重量。

-組合物2:濃度為0.0049％重量的氯己定組合濃度為0.049％重量的Zn²⁺。

-組合物3：濃度為0.0049％重量的氯己定組合濃度為0.049％重量的Zn²⁺和濃度為0.1％重量的殼聚糖。

如從實(shí)施例1和圖1中可以看出的，清楚地顯示組合物3在減少揮發(fā)性硫化物方面最有效。獲得了1個(gè)小時(shí)后下降58％，2小時(shí)后下降41％，3小時(shí)后下降32％的結(jié)果。與溶液2相比，作用分別增加19％、15％和15％。與溶液1相比，作用上差別分別為46％、33％和25％。

與組合物1和2相比，如上組合物3所述的氯己定、Zn²⁺和殼聚糖的組合顯示了協(xié)同作用。在實(shí)施例2中還進(jìn)一步顯示，實(shí)施例1中包含濃度為0.0049％的氯己定組合濃度為0.049％的Zn²⁺和濃度為0.1％的殼聚糖的組合物3，其濃度不足以顯示抗菌效果，對口腔內(nèi)菌群沒有任何影響。

在實(shí)施例1中，作為抗菌劑已經(jīng)測試氯己定，但也可以使用選自雙胍類和季胺類化合物的任何其他試劑或其鹽，或其任意組合。

可以選擇Cu或Sn替代Zn來作為生理上可接受的二價(jià)金屬離子。所述金屬離子可以以鹽、螯合物或其任意混合物的形式存在。

本發(fā)明組合物中也可以使用生理上可接受的聚合物，如殼聚糖以外的其他多糖或多糖衍生物。

可以單獨(dú)使用或與生理上可接受的聚合物組合使用具有pKa范圍在2-6，并選自苯甲酸、甘氨酸或其任何混合物的生理上可接受的有機(jī)酸。

組合物的pH可以在大約2.5-9.0，優(yōu)選大約2.5-大約6.5范圍。

組合物可以進(jìn)一步包括至少一種氟化物源。所述至少一種氟化物源可以以大約0.005％-2.5％重量的量存在于組合物中。所述至少一種氟化物源可以是可溶性無機(jī)氟化物鹽、可溶性有機(jī)氟化物鹽、HF或其任意混合物。

在實(shí)施例2中，測試了溶液A和B的提供抗微生物作用的能力。將來自口腔的微生物培養(yǎng)于陪替式培養(yǎng)皿中，并接受：

溶液A包含：氯己定(0.0049％重量)、Zn²⁺(0.049％重量)和殼聚糖(0.1％重量)；和

溶液B包含：氯己定(0.025％重量)和Zn²⁺(0.3％重量)。

表1和圖2i)和ii)所示的測試結(jié)果顯示，包含氯己定(0.0049％重量)、Zn²⁺(0.049％重量)和殼聚糖(0.1％重量)的溶液A沒有抑制微生物生長，除了兩個(gè)真菌菌株：白色念珠菌(C.albicans)和假絲酵母(C.parapsil)。然而，所述真菌不涉及硫化物氣體的生產(chǎn)。

如可以從表1和圖2iii)中看出的，包含氯己定(0.025％重量)和Zn²⁺(0.3％重量)的溶液B抑制生長。

因此，本發(fā)明組合物的技術(shù)效果可以被描述成通過中和(neutralizing)氣體來減少硫化物氣體。這背后的機(jī)制據(jù)信是抗菌劑切斷了硫化物氣體的S-H鍵；Zn以及可能還有殼聚糖將硫沉淀為硫化物，硫化物被吞咽并隨后被排泄。由于抗菌劑的低濃度，因此，口腔中的細(xì)菌/微生物菌群保持完好無損。

在實(shí)施例3中，顯示本發(fā)明的組合物還對咽喉腫痛具有作用，因?yàn)槭茉囌咴诘谝淮螞_洗后數(shù)小時(shí)后感覺到不適緩解。這背后的機(jī)制尚不清楚。

因此，本發(fā)明一個(gè)方面涉及包含抗菌劑、生理上可接受的二價(jià)金屬離子和生理上可接受的聚合物的組合物，所述抗菌劑可選自雙胍類和季胺類化合物或其組合；所述生理上可接受的二價(jià)金屬離子可選自Zn，Cu和Sn。

本文中所用的“抗菌劑”是指殺滅或抑制微生物生長的藥劑。

在組合物進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述抗菌劑可以是氯己定或其鹽。所述組合物中氯己定的存在量可以是0.001％-1％，優(yōu)選0.002-0.5％，更優(yōu)選0.004-0.01重量。

在組合物進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述抗菌劑可以以不足以有效殺滅或抑制口腔中細(xì)菌的生長的量存在于所述組合物中。

本文所用的“不足以提供抗菌效果的量”指的是一種藥劑的濃度或劑量不能殺滅或不能抑制微生物的生長。

在所述組合物的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述二價(jià)金屬離子的生理上可接受的鹽和/或二價(jià)金屬離子螯合物在組合物中的存在量可以為0.01％-0.5％重量，或0.01％-0.049％重量，或0.01％-0.04％重量。

在所述組合物的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述二價(jià)金屬離子的生理上可接受的鹽和/或二價(jià)金屬離子螯合物的存在量可以為0.01％-0.19％重量，或0.01％-0.15％重量。進(jìn)一步的，所述生理上可接受的二價(jià)金屬離子可以以鹽、螯合物或其任意混合物的形式存在。

在所述組合物的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方式中，所述生理上可接受的聚合物在組合物中的存在量可以為0.1％-2％重量，且可進(jìn)一步為包封的形式、微粒形式或納米粒形式，或它們的任意混合物。所述生理上可接受的聚合物可進(jìn)一步為包封的形式，其中聚合物可以包封在pH為3-7的水溶液中。此外，生理上可接受的聚合物可以為多糖或多糖衍生物。所述生理上可接受的聚合物可以為殼聚糖或殼聚糖衍生物。所述殼聚糖或殼聚糖衍生物可以以不足以提供抗菌效果的量存在于所述組合物中。

在所述組合物的一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物可以為水溶液或凝膠形式。

在組合物的一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物可以具有大約2.5-6.5的pH。

在所述組合物的一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗菌劑可選自雙胍類和季胺類化合物，或它們的任意組合，且可以重量比0.001％-1％的量存在于所述組合物中；所述生理上可接受的二價(jià)金屬離子可以是Zn、Cu或Sn，且可以以重量比0.01％-0.5％的量存在于所述組合物中；以及所述生理上可接受的聚合物可以是多糖或多糖衍生物，且可以以重量比0.1％-2％的量存在于所述組合物中。

在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述生理上可接受的聚合物可以是殼聚糖或殼聚糖衍生物，其可以以0.1％-2％的量存在于所述組合物中。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物用于預(yù)防和/或治療口臭。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物用于預(yù)防和/或治療呼吸異味。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物用于預(yù)防和/或治療口干。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物用于預(yù)防和/或治療咽喉腫痛。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物用于預(yù)防和/或治療由病毒感染或細(xì)菌感染引起的咽喉腫痛。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物可以被保持在口腔中大約10-120秒，然后再從口中吐掉。

在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用所述組合物漱口大約10-120秒然后再吐掉。

為了清楚理解的目的，已經(jīng)通過說明和舉例的方式對本發(fā)明的一些細(xì)節(jié)進(jìn)行了完全描述。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，通過在寬的和等同范圍的條件、配方和其他參數(shù)下，可以通過修飾或改變來實(shí)施相同的本發(fā)明，并且這些修飾或改變也包括在本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

測定受試者中口腔異味(H₂S)

該實(shí)驗(yàn)中待測組合物是：

組合物1：濃度為0.0049％的氯己定。

組合物2：濃度為0.0049％的氯己定組合濃度為0.049％的Zn²⁺。

組合物3：濃度為0.0049％的氯己定組合濃度為0.049％的Zn²⁺和濃度為0.1％的殼聚糖。

測試當(dāng)天，告訴受試者(三名受試者)早飯后不進(jìn)行他們通常的口腔衛(wèi)生程序。通過用5ml的6mM的L-半胱氨酸溶液(pH 7.2)沖洗受試者口腔30秒來引入口中異味。然后讓受試者閉住嘴巴1分30秒，之后通過使用連接到氣相色譜法的自動進(jìn)樣出口的10ml注射器抽吸口腔氣體來記錄基線口腔氣體樣本。然后直接測量揮發(fā)性硫化物H₂S。該程序之后立即用三種測試溶液(組合物1-3)之一10ml沖洗受試者1分鐘，然后將溶液吐出。在用相應(yīng)溶液沖洗后的1h、2h和3h重復(fù)半胱氨酸沖洗和口腔氣體分析。在測試期間不允許喝飲料和抽煙。

結(jié)果

從圖1可以看出結(jié)果，清楚顯示包含濃度為0.0049％的氯己定組合濃度為0.049％的Zn²⁺和濃度為0.1％的殼聚糖的溶液在減少揮發(fā)性硫化物方面最有效，其獲得了在1小時(shí)后減少58％，2小時(shí)后減少41％，3小時(shí)后減少32％的結(jié)果，與包含氯己定組合Zn²⁺的溶液相比，分別提高19％、15％和15％。與僅僅包含氯己定的溶液相比，作用的百分比差異分別是46％、33％和25％。

實(shí)施例2

由CHX(0.0049％)和Zn²⁺(0.049％)和殼聚糖(0.1％)構(gòu)成的溶液(A)與由CHX(0.025％)和Zn²⁺(0.3％)構(gòu)成的溶液(B)的生物溶液測試比較

來自口腔的微生物在陪替式培養(yǎng)皿上培養(yǎng)，并接受：

溶液A：CHX(0.0049％重量)和Zn²⁺(0.049％重量)和殼聚糖(0.1％重量)，和

溶液B：CHX(0.025％重量)和Zn²⁺(0.3％重量)，和

分別分配在培養(yǎng)皿中間的孔中?？梢愿鶕?jù)圍繞孔的抑菌圈測定抑制活性(見圖2iii)。測試結(jié)果示于表1。

表1

Ad.2和8.0.5ml未刺激的全唾液樣本收集在無菌量度試管中。在實(shí)驗(yàn)室中，分散樣本(渦旋60秒)，系列稀釋并接種在添加有5％綿羊血、0.0005％血晶素和0.00003％甲萘醌的胰蛋白胨-大豆瓊脂(BBL Microbiological Systems，Cockeysville，MD，USA)上。

每個(gè)瓊脂在中央包含標(biāo)準(zhǔn)化孔，其中充滿了溶液A或B。

·將20μl溶液A(0.049％CHX+0.049％Zn²⁺+0.1％殼聚糖)施加到孔中。

·將20ml溶液B(0.025％CHX+0.3％Zn²⁺)施加到孔中。

然后將它們都按如下進(jìn)行溫育：

Ad.3.厭氧溫育：在37℃厭氧室(90％N₂，5％H₂，5％CO₂)(Anoxomat，WS9000；Mart；Lichtenvoorde，The Netherlands)7-14天。

Ad.8.需氧溫育:37℃需氧溫育24-48h。

其余的按照如下在選擇性介質(zhì)上培養(yǎng)：

Ad 1.鏈球菌突變體，如上在輕唾瓊脂培養(yǎng)板(Mitis-salivarius-bacitracin agar plates)上厭氧培養(yǎng)3天。鏈球菌突變體鑒定為小的黏液狀菌落。

Ad 2.在37℃空氣中，于伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB瓊脂)上培養(yǎng)大腸桿菌3天。集落具有黑色中心和綠色金屬光澤。

Ad.4.在37℃空氣中，于頭孢氨曲南糖瓊脂(CAA)上培養(yǎng)糞腸球菌3天(Ford等1994)。

Ad 5.在37℃空氣中，將金黃色葡萄球菌在葡萄球菌瓊脂板上溫育3天，并通過它們在DNA瓊脂板(Difco)上降解DNA的能力來與表皮葡萄球菌區(qū)別。

Ad.6.在37℃空氣中，在Sabouraud T瓊脂板上培養(yǎng)白色念珠菌3天。它們?yōu)闊o光澤的、乳狀白粉，或粉紅色菌落。

Ad 7.在37℃空氣中，在沙氏葡萄糖瓊脂上培養(yǎng)假絲酵母3天。

Ad.9.在胰蛋白胨-大豆-血清-桿菌肽-萬古霉素(TSBV)培養(yǎng)基上厭氧溫育伴放線菌聚集菌(如上所述)3-5天，用于選擇性分離伴放線菌聚集菌(Slots 1982)。

結(jié)果

表1和圖2i)(需氧培養(yǎng))和ii)(厭氧培養(yǎng))的測試結(jié)果顯示，包含氯己定(0.0049％重量)和Zn²⁺(0.049％重量)和殼聚糖(0.1％重量)的溶液A沒有抑制微生物生長，除了兩個(gè)真菌菌株；白色念珠菌和假絲酵母。然而，所述真菌不涉及產(chǎn)生硫化物氣體。

可以從表1和圖2iii)看出包含氯己定(0.025％重量)和Zn²⁺(0.3％重量)的溶液B抑制生長，測試為抑菌圈的延伸，以mm計(jì)。

實(shí)施例3

用本發(fā)明組合物沖洗口腔/咽喉對咽喉腫痛具有積極效果。

5名患有咽喉腫痛的受試者用包含本發(fā)明組合物的溶液沖洗/漱口他們的口腔/咽喉1分鐘，一天兩次(在早上和晚上)。沖洗/漱口后吐出所述溶液。

所述溶液包含：

濃度為0.0049％的氯己定組合

濃度為0.049％的Zn²⁺和

濃度為0.1％殼聚糖。

受試者1患有咽喉腫痛2天

受試者2患有咽喉腫痛1天

受試者3患有咽喉腫痛2天

受試者4患有咽喉腫痛3天

受試者4患有咽喉腫痛1天

結(jié)果

在一天漱口兩次的兩天時(shí)間內(nèi)，所有受試者咽喉腫痛的所有癥狀均消失。