因子VIII(FVIII)是在血漿中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)，其在導(dǎo)致血液凝固的反應(yīng)級聯(lián)中充當(dāng)輔因子。血液中FVIII活性的量的缺乏導(dǎo)致被稱為血友病A的凝血障礙，一種主要影響男性的遺傳病癥。血友病A目前用來源于人血漿或使用重組DNA技術(shù)制備的FVIII的治療性制劑治療。這樣的制劑響應(yīng)于出血事件施用(按需治療)或以頻繁、規(guī)律的間隔施用以防止不受控制的出血(預(yù)防)。已知FVIII在治療制劑中相對不穩(wěn)定。在血漿中，F(xiàn)VIII通常與另一種血漿蛋白vonWillebrand因子(vWF)(其在血漿中以VWF亞基對FVIII的大量摩爾過量存在，并被認(rèn)為保護(hù)FVIII免于過早降解)復(fù)合。另一種循環(huán)血漿蛋白(白蛋白)也可在體內(nèi)穩(wěn)定FVIII中起作用。因此，目前市售的FVIII制劑經(jīng)常依賴于將白蛋白和/或vWF用于在制造過程中和儲存期間穩(wěn)定FVIII。然而，目前市售的FVIII制劑中使用的白蛋白和vWF來源于人血漿，并且這樣的材料的使用具有某些缺點(diǎn)。通常加入與FVIII相比大量摩爾過量的白蛋白以增加FVIII在這樣的制劑中的穩(wěn)定性，這使得在這些制劑中更難以表征FVIII蛋白本身。人來源的白蛋白至FVIII的添加也被認(rèn)為是關(guān)于重組產(chǎn)生的FVIII制劑的缺點(diǎn)。這是因為，在這樣添加的白蛋白不存在的情況下，重組來源的FVIII制劑中的傳播病毒的理論風(fēng)險將降低。已經(jīng)描述了幾種制備沒有白蛋白或vWF(或具有相對低水平的這些賦形劑)的FVIII的嘗試。例如，美國專利5,565,427(EP508194)描述了除了賦形劑如氯化鈉和蔗糖之外還含有洗滌劑和氨基酸特別是精氨酸和甘氨酸的特定組合的FVIII制劑。美國專利US5,763,401(EP818204)還描述了不含白蛋白的治療性FVIII制劑，其包含15-60mM蔗糖、至多50mMNaCl、至多5mM氯化鈣、65-400mM甘氨酸和至多50mM組氨酸。Osterberg(轉(zhuǎn)讓給Pharmacia&Upjohn)的美國專利5,733,873(EP627924)公開了包含0.01-1mg/ml表面活性劑的制劑。還描述了使用低或高濃度的氯化鈉的其它嘗試。美國專利4,877,608(EP315968)公開了具有相對低濃度的氯化鈉即0.5mM至15mMNaCl的制劑。另一方面，美國專利5,605,884(EP0314095)教導(dǎo)了具有相對高濃度的氯化鈉的制劑的用途。其它FVIII制劑公開于WO2010/054238，EP1712223，WO2000/48635，WO96/30041，WO96/22107，WO2011/027152，EP2361613，EP0410207，EP0511234，US5565427，EP0638091，EP0871476，EP0819010，US5874408，US2005/0256038，US2008/0064856，WO2005/058283，WO2012/037530和WO2014/026954中。EP1712223A1公開了包含組氨酸和CaCl2的FVIII組合物，但EP1712223A1的組合物中的組氨酸和Ca2+的組合濃度太低，不能在水溶液中賦予所需的FVIII穩(wěn)定性?，F(xiàn)有技術(shù)的其它治療性FVIII制劑通常包含白蛋白和/或vWF用于穩(wěn)定FVIII的目的，因此與本公開內(nèi)容不相關(guān)。制備FVIII組合物的一個問題是提供適合于凍干并在隨后的重構(gòu)后使用的溶液。在這方面的重要標(biāo)準(zhǔn)是FVIII溶液應(yīng)當(dāng)顯示穩(wěn)定的FVIII活性并且在凍干之前應(yīng)該不顯示濁度。如果FVIII水溶液在凍干之前是渾濁的，則這是溶液中的一種或多種物質(zhì)(包括FVIII本身)已經(jīng)聚集的清楚跡象。這是非常不希望的，因為這通常是變性蛋白(其導(dǎo)致活性降低)的指示。FVIII制劑的第二個主要問題是其在凍干后的穩(wěn)定性。穩(wěn)定性差的跡象包括凍干、儲存和重構(gòu)后FVIII的剩余活性降低以及FVIII的高分子量復(fù)合物的存在。因此，存在對于不顯示任何濁度或其它相關(guān)的品質(zhì)損害(例如凍干前的活性顯著喪失)并且同時在凍干后具有長期穩(wěn)定性的包含F(xiàn)VIII的組合物的巨大需求。由于就組合物而言，凍干前的穩(wěn)定溶液和穩(wěn)定凍干物的要求可能顯著不同，因此當(dāng)開發(fā)這樣的穩(wěn)定制劑時必須考慮該兩個條件?，F(xiàn)在已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，這可以通過根據(jù)本發(fā)明的組合物實(shí)現(xiàn)，所述組合物包含在某一最小濃度下的組氨酸和鈣。本發(fā)明人特別發(fā)現(xiàn)，關(guān)于FVIII穩(wěn)定性，較低濃度的組氨酸可以通過較高的鈣濃度平衡，反之亦然。這例如在EP1712223A1中沒有被公開，因此，其中描述的組合物沒有預(yù)見在本發(fā)明中要求保護(hù)的主題。具體地，EP1712223A1的組合物的組氨酸濃度低于本申請的權(quán)利要求1所要求的。本發(fā)明的組合物具有另外的優(yōu)點(diǎn)，即它們在體積滲透摩爾濃度方面接近生理條件。這避免了可能由存在于因子VIII的許多現(xiàn)有技術(shù)制劑中的顯著超體積滲透摩爾濃度的組合物引起的刺激或其它局部效應(yīng)。發(fā)明概述本發(fā)明涉及FVIII的水性組合物，該組合物可用于治療患有血友病A的受試者。以下項目(1)至(93)描述了本發(fā)明的各個方面和實(shí)施方案：(1)凝血因子VIII的水性組合物，其包含：a.FVIII分子；b.40至195mM的鈉鹽；c.組氨酸；d.至少1mM的鈣鹽；和e.表面活性劑；其中[His]≥180mM-20*[Ca2+]，其中[Ca2+]是所述水性組合物中鈣離子的濃度，以毫摩爾/升表示，并且[His]是所述水性組合物中組氨酸的濃度，以毫摩爾/升表示；并且其中所述組合物的體積滲透摩爾濃度為600mOsmol/L或更低。(2)凝血因子VIII的水性組合物，其包含：a.FVIII分子；b.40至95mM的鈉鹽；c.組氨酸d.至少1mM的鈣鹽；和e.表面活性劑；其中[His]≥180mM-20*[Ca2+]，其中[Ca2+]是水性組合物中鈣離子的濃度，以毫摩爾/升表示，[His]是所述水性組合物中組氨酸的濃度，以毫摩爾/升表示，并且其中所述組合物的體積滲透摩爾濃度優(yōu)選為600mOsmol/L或更低。(3)凝血因子VIII的水性組合物，其包含：a.FVIII分子；b.至少40mM的鈉鹽；c.組氨酸d.蔗糖e.至少1mM的鈣鹽；和f.表面活性劑；其中[His]≥180mM-20*[Ca2+]，其中[Ca2+]是水性組合物中鈣離子的濃度，以毫摩爾/升表示，[His]是所述水性組合物中組氨酸的濃度，以毫摩爾/升表示，并且其中所述組合物的體積滲透摩爾濃度優(yōu)選為600mOsmol/L或更低。(4)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述式子滿足條件：[His]>0。(5)根據(jù)項目(1)或(3)所述的水性組合物，其中，所述鈉鹽的濃度為50至150mM。(6)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述鈉鹽的濃度為50至95mM。(7)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述鈉鹽的濃度為50至75mM。(8)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述鈉鹽的濃度為60至70mM。(9)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述鈉鹽的濃度為約65mM。(10)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中組氨酸的濃度為至少5mM。(11)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中組氨酸的濃度為至少10mM。(12)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中組氨酸的濃度為至少20mM。(13)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中組氨酸的濃度為至少30mM。(14)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中組氨酸的濃度為至少40mM。(15)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中組氨酸的濃度為至少50mM。(16)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中組氨酸的濃度為50至150mM。(17)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中組氨酸的濃度為約100mM。(18)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物的pH為5至9。(19)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物的pH為6至8。(20)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物的pH為6.5至7.5。(21)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物的pH為6.8至7.2。(22)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物的pH為約7。(23)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+25℃的溫度和40％的相對濕度下儲存6個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，相對于在(i)凍干和不儲存凍干的組合物、(ii)隨后立即在蒸餾水中重構(gòu)之后的相同組合物，顯示至少80％的FVIII:C活性恢復(fù)。(24)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+25℃的溫度和40％的相對濕度下儲存12個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，相對于在(i)凍干和不儲存凍干的組合物、(ii)隨后立即在蒸餾水中重構(gòu)之后的相同組合物，顯示至少80％的FVIII:C活性恢復(fù)。(25)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+25℃的溫度和40％的相對濕度下儲存18個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，相對于在(i)凍干和不儲存凍干的組合物、(ii)隨后立即在蒸餾水中重構(gòu)之后的相同組合物，顯示至少80％的FVIII:C活性恢復(fù)。(26)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+25℃的溫度和40％的相對濕度下儲存24個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，相對于在(i)凍干和不儲存凍干的組合物、(ii)隨后立即在蒸餾水中重構(gòu)之后的相同組合物，顯示至少80％的FVIII:C活性恢復(fù)。(27)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+25℃的溫度和40％的相對濕度下儲存36個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，相對于在(i)凍干和不儲存凍干的組合物、(ii)隨后立即在蒸餾水中重構(gòu)之后的相同組合物，顯示至少80％的FVIII:C活性恢復(fù)。(28)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+40℃的溫度和60％的相對濕度下儲存6個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，相對于在(i)凍干和不儲存凍干的組合物、(ii)隨后立即在蒸餾水中重構(gòu)之后的相同組合物，顯示至少80％的FVIII:C活性恢復(fù)。(29)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+40℃的溫度和60％的相對濕度下儲存12個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，相對于在(i)凍干和不儲存凍干的組合物、(ii)隨后立即在蒸餾水中重構(gòu)之后的相同組合物，顯示至少80％的FVIII:C活性恢復(fù)。(30)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+40℃的溫度和60％的相對濕度下儲存18個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，相對于在(i)凍干和不儲存凍干的組合物、(ii)隨后立即在蒸餾水中重構(gòu)之后的相同組合物，顯示至少80％的FVIII:C活性恢復(fù)。(31)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+40℃的溫度和60％的相對濕度下儲存24個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，相對于在(i)凍干和不儲存凍干的組合物、(ii)隨后立即在蒸餾水中重構(gòu)之后的相同組合物，顯示至少80％的FVIII:C活性恢復(fù)。(32)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物在(i)凍干、(ii)將凍干的組合物在+25℃的溫度和40％的相對濕度下儲存12個月和(iii)隨后在蒸餾水中重構(gòu)凍干的組合物之后，其濁度為18NTU或更小。(33)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述鈣鹽是氯化鈣。(34)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述鈉鹽是氯化鈉。(35)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物還包含碳水化合物。(36)根據(jù)上述(35)所述的水性組合物，其中所述碳水化合物選自蔗糖、海藻糖和棉子糖。(37)根據(jù)上述(35)或(36)所述的水性組合物，其中所述碳水化合物是蔗糖。(38)根據(jù)上述(35)至(37)中任一項所述的水性組合物，其中碳水化合物的濃度為1至20％w/w。(39)根據(jù)上述(35)至(37)中任一項所述的水性組合物，其中碳水化合物的濃度為2至10％w/w。(40)根據(jù)上述(35)至(37)中任一項所述的水性組合物，其中碳水化合物的濃度為3至8％w/w。(41)根據(jù)上述(35)至(37)中任一項所述的水性組合物，其中碳水化合物的濃度為4至6％w/w。(42)根據(jù)上述(35)至(37)中任一項所述的水性組合物，其中所述碳水化合物的濃度為約5％w/w。(43)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述表面活性劑的濃度為至少0.001％v/v。(44)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述表面活性劑的濃度為0.001至0.1％v/v。(45)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述表面活性劑的濃度為0.002至0.2％v/v。(46)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述表面活性劑的濃度為0.005％v/v。(47)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述表面活性劑是非天然存在的表面活性劑。(48)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述表面活性劑為聚山梨醇酯80。(49)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述表面活性劑為聚山梨醇酯20。(50)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物還包含至少一種除組氨酸以外的氨基酸。(51)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸選自精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸及其組合。(52)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸是精氨酸。(53)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸是天冬酰胺。(54)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸是天冬氨酸。(55)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸是谷氨酸。(56)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸是谷氨酰胺。(57)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸是賴氨酸。(58)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸是甲硫氨酸。(59)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸是苯丙氨酸。(60)根據(jù)上述(50)所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸是異亮氨酸。(61)根據(jù)上述(50)至(60)中任一項所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸的濃度為至少0.1mM。(62)根據(jù)上述(50)至(60)中任一項所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸的濃度為至少1mM。(63)如上述(50)至(60)中任一項所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸的濃度為5至300mM。(64)根據(jù)上述(50)至(60)中任一項所述的水性組合物，其中所述除組氨酸以外的至少一種氨基酸的濃度為10至200mM。(65)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物還包含至少一種抗氧化劑。(66)根據(jù)上述(65)所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑選自還原型谷胱甘肽、甲硫氨酸、半胱氨酸、亞硫酸鈉、維生素A、維生素E、抗壞血酸、抗壞血酸鈉及其組合。(67)根據(jù)上述(65)所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑是還原型谷胱甘肽。(68)根據(jù)上述(65)所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑是甲硫氨酸。(69)根據(jù)上述(65)所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑是半胱氨酸。(70)根據(jù)上述(65)所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑是亞硫酸鈉。(71)根據(jù)上述(65)所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑是維生素A。(72)根據(jù)上述(65)所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑是維生素E。(73)根據(jù)上述(65)所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑是抗壞血酸。(74)根據(jù)上述(65)所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑是抗壞血酸鈉。(75)根據(jù)上述(65)至(74)中任一項所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑的濃度為至少0.05mM。(76)根據(jù)上述(65)至(74)中任一項所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑的濃度為0.05至100mM。(77)根據(jù)上述(65)至(74)中任一項所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑的濃度為0.1至20mM。(78)根據(jù)上述(65)至(74)中任一項所述的水性組合物，其中所述至少一種抗氧化劑的濃度為0.25至5mM。(79)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述因子VIII分子是非天然存在的FVIII分子。(80)根據(jù)(79)所述的水性組合物，其中所述因子VIII分子已被重組產(chǎn)生。(81)根據(jù)(79)或(80)所述的水性組合物，其中所述因子VIII分子具有不同于人血漿來源的FVIII的糖基化模式。(82)根據(jù)上述(79)至(81)中任一項所述的水性組合物，其中所述FVIII分子具有不同于SEQIDNO：1的氨基酸序列。(83)根據(jù)上述(79)至(82)中任一項所述的水性組合物，其中所述FVIII分子選自(i)B結(jié)構(gòu)域缺失或截短的FVIII分子，(ii)單鏈FVIII分子，(iii)具有保護(hù)基團(tuán)或半衰期延長部分的FVIII分子，(iv)包含與異源氨基酸序列融合的FVIII氨基酸序列的融合蛋白，和(v)其組合。(84)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述因子VIII分子具有如SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。(85)根據(jù)上述任一項所述的水性組合物，其中所述組合物的濁度為18NTU或更小，優(yōu)選為6NTU或更小，更優(yōu)選為3NTU或更小。(86)根據(jù)上述(85)所述的水性組合物，其中所述組合物在凍干之前具有18NTU或更小，優(yōu)選6NTU或更小，更優(yōu)選3NTU或更小的濁度。(87)根據(jù)上述(85)所述的水性組合物，其中所述組合物在凍干和在蒸餾水中重構(gòu)后的濁度為18NTU或更小，優(yōu)選為6NTU或更小，更優(yōu)選為3NTU或更小。(88)一種可通過凍干根據(jù)上述任一項所述的水性組合物而獲得的組合物。(89)一種可通過用水溶液重構(gòu)根據(jù)上述(88)所述的凍干的水性組合物而獲得的水性組合物。(90)(89)所述的水性組合物，其中所述水溶液選自蒸餾水、鹽溶液和包含組氨酸的溶液。(91)一種穩(wěn)定FVIII分子的方法，包括混合上述(1)至(3)中任一項定義的組分以獲得水性組合物，并凍干該水性組合物。(92)(91)的方法，其中所得的水性組合物為根據(jù)上述(1)至(87)中任一項所述的組合物。(93)一種治療凝血障礙的方法，包括向受試者施用藥學(xué)有效量的上述(89)或(90)所述的組合物。附圖概述圖1描述了本發(fā)明組合物中組氨酸和鈣離子的濃度之間的關(guān)系。該圖總結(jié)了使用不同組氨酸和氯化鈣濃度的液體制劑研究(實(shí)施例7)的結(jié)果，其中其它賦形劑保持恒定(65mmol/L氯化鈉，5％蔗糖，0.005％80)。點(diǎn)表示高于18NTU的閾值水平的濁度，菱形表示澄清的溶液(濁度小于或等于18NTU)。該圖說明如果應(yīng)用某些濃度的組氨酸和鈣離子，則得到澄清的溶液。澄清溶液的要求由下文給出的式子表示。發(fā)明詳述因子VIII分子如本文所用，術(shù)語“因子VIII”或“FVIII”是指具有人天然因子VIII的至少一部分凝血活性的分子。人FVIII由2351個氨基酸(包括信號肽)和2332個氨基酸(不含信號肽)組成?！叭颂烊籉VIII”是具有如SEQIDNO：1(氨基酸1-2332)所示的全長序列的人血漿來源的FVIII分子。詳細(xì)的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)A1-a1-A2-a2-B-a3-A3-C1-C2具有相應(yīng)的氨基酸殘基(參考SEQIDNO1)：A1(1-336)，a1(337-372)，A2(373-710)，a2(711-740)，B(741-1648)，a3(1649-1689)，A3(1690-2020)，C1(2021-2173)和C2(2174-2332)。FVIII分子的凝血活性可以使用一步凝血測定法(例如，如Lee等人，ThrombosisResearch30，511519(1983)中所述的)或生色底物測定法(例如來自Chromogenix-InstrumentationLaboratorySpAV.leMonza338-20128Milano，Italy的coamaticFVIII測試試劑盒)來測定。這些活性測定法的進(jìn)一步細(xì)節(jié)描述于下文中。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明使用的FVIII分子具有人天然FVIII的至少10％的比摩爾活性。術(shù)語“比摩爾活性”是指每摩爾FVIII的凝血活性，并以“IU/摩爾FVIII”表示。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII分子是非天然存在的FVIII分子。優(yōu)選地，非天然存在的FVIII分子已被重組產(chǎn)生。在另一個實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII分子已在細(xì)胞培養(yǎng)物中產(chǎn)生。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，非天然存在的FVIII分子具有不同于血漿來源的FVIII的糖基化模式的糖基化模式。在另一個實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII分子選自(i)B結(jié)構(gòu)域缺失或截短的FVIII分子，(ii)單鏈FVIII分子，(iii)重組產(chǎn)生的雙鏈FVIII分子，(iv)具有保護(hù)基團(tuán)或半衰期延長部分的FVIII分子，(v)包含與異源氨基酸序列融合的FVIII氨基酸序列的融合蛋白，和(vi)其組合。術(shù)語“因子VIII”和“FVIII”在本文中同義使用。在本發(fā)明意義上的“因子VIII組合物”包括包含F(xiàn)VIII和FVIIIa的組合物。FVIIIa通常可以相對組合物中FVIII蛋白的總量以少量存在，例如，約1至2％FVIIIa?！癋VIII”包括可能存在和發(fā)生于一個個體至另一個個體的FVIII的天然等位基因變異。通過使用熟知的生產(chǎn)和純化方法，F(xiàn)VIII可以是血漿來源的或重組產(chǎn)生的。糖基化、酪氨酸硫酸化和其它翻譯后修飾的程度和位置可以取決于選擇的宿主細(xì)胞及其生長條件而變化。術(shù)語FVIII包括FVIII類似物。本文所用的術(shù)語“FVIII類似物”是指FVIII分子(全長或B結(jié)構(gòu)域截短/缺失的)，其中與SEQIDNO1或者對于B結(jié)構(gòu)域截短/缺失的FVII分子而言SEQIDNO1的相應(yīng)部分相比，一個或多個氨基酸已經(jīng)被取代或缺失。FVIII類似物不天然存在，而是通過人工操作獲得。包含在本發(fā)明的組合物中的因子VIII分子也可以是B結(jié)構(gòu)域截短/缺失的FVIII分子，其中剩余的結(jié)構(gòu)域?qū)?yīng)于SEQIDNO：1的氨基酸編號1-740和1649-2332中所示的序列。其它形式的B結(jié)構(gòu)域缺失的FVIII分子在其a3結(jié)構(gòu)域中另外具有部分缺失，其導(dǎo)致單鏈FVIII分子。因此，這些FVIII分子是在轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞(優(yōu)選哺乳動物來源的)中產(chǎn)生的重組分子。然而，B結(jié)構(gòu)域缺失的FVIII中剩余的結(jié)構(gòu)域(即三個A結(jié)構(gòu)域，兩個C結(jié)構(gòu)域和a1、a2和a3區(qū))可以與如SEQIDNO1所示的相應(yīng)氨基酸序列(氨基酸1-740和1649-2332)稍微不同，例如約1％，2％，3％，4％或5％不同。包含在本發(fā)明的組合物中的FVIII分子可以是雙鏈FVIII分子或單鏈FVIII分子。包含在本發(fā)明的組合物中的FVIII分子也可以是FVIII的生物活性片段，即其中除了B結(jié)構(gòu)域之外的結(jié)構(gòu)域已經(jīng)缺失或截短，但是其中缺失的/截短形式的FVIII分子保持其支持血塊形成的能力的FVIII?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的技術(shù)在體外評估FVIII活性。根據(jù)本發(fā)明的測定FVIII活性的優(yōu)選測試是生色底物測定法或一步測定法(見下文)?？梢栽谑Ｓ嗟慕Y(jié)構(gòu)域中引入氨基酸修飾(取代，缺失等)，例如，以改變因子VIII與各種其它組分(例如VonWillebrand因子(vWF)，低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白(LPR)，各種受體，其它凝血因子，細(xì)胞表面等)的結(jié)合能力，或以引入和/或消除糖基化位點(diǎn)等。不消除FVIII活性的其它突變也可以提供在用于本發(fā)明的組合物中的FVIII分子/類似物中。FVIII類似物還包括FVIII分子，其中親本多肽的一個或多個氨基酸殘基已缺失或被其它氨基酸殘基取代，和/或其中額外的氨基酸殘基已被添加至親本FVIII多肽。此外，因子VIII分子/類似物可以包含例如分子的截短的B結(jié)構(gòu)域中和/或一個或多個其它結(jié)構(gòu)域中的其它修飾(“FVIII衍生物”)。這些其它修飾可以是與因子VIII分子綴合的各種分子的形式(例如，聚合化合物，肽化合物，脂肪酸來源的化合物等)。術(shù)語FVIII包括糖基聚乙二醇化(glycopegylate)的FVIII。在本上下文中，術(shù)語“糖基聚乙二醇化的FVIII”旨在表示其中一個或多個PEG基團(tuán)已通過多肽的多糖側(cè)鏈(聚糖)連接于FVIII多肽的因子VIII分子(包括全長FVIII和B-結(jié)構(gòu)域截短/缺失的FVIII)。術(shù)語FVIII包括具有保護(hù)基團(tuán)或半衰期延長部分的FVIII分子。術(shù)語“保護(hù)基團(tuán)”/“半衰期延長部分”在本文中被理解為是指連接至一個或多個氨基酸位點(diǎn)鏈官能團(tuán)例如-SH、-OH、-COOH、-CONH2、NH2或一個或多個N-和/或O-聚糖結(jié)構(gòu)并且可增加許多治療性蛋白質(zhì)/肽的體內(nèi)循環(huán)半衰期(當(dāng)與這些蛋白質(zhì)/肽綴合時)的一個或多個化學(xué)基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)/半衰期延長部分的實(shí)例包括：生物相容性脂肪酸及其衍生物，羥基烷基淀粉(HAS)例如羥基乙基淀粉(HES)，聚(Glyx-Sery)n(高氨基酸聚合物(HAP))，透明質(zhì)酸(HA)，Heparosan聚合物(HEP)，磷酰膽堿基聚合物(PC聚合物)，聚合物(MersanaTherapeutics，MA，USA)，葡聚糖，聚唾液酸(PSA)，聚乙二醇(PEG)，F(xiàn)c結(jié)構(gòu)域，轉(zhuǎn)鐵蛋白，白蛋白，彈性蛋白樣肽，聚合物(Amunix，CA，USA)，白蛋白結(jié)合肽，vonWillebrand因子片段(vWF片段)，羧基末端肽(CTP肽，ProlorBiotech，IL)及其任何組合(參見例如McCormick，C.L.，A.B.Lowe，andN.Ayres，Water-SolublePolymers，inEncyclopediaofPolymerScienceandTechnology.2002，JohnWiley&Sons，Inc.)。衍生化的方式不是關(guān)鍵的，并且可以根據(jù)上文進(jìn)行闡明。可根據(jù)本發(fā)明使用的FVIII分子包括融合蛋白，其包含與異源氨基酸序列(優(yōu)選半衰期延長氨基酸序列)融合的FVIII氨基酸序列。優(yōu)選的融合蛋白是Fc融合蛋白和白蛋白融合蛋白。術(shù)語“Fc融合蛋白”在本文中意在包括與可以源自任何抗體同種型的Fc結(jié)構(gòu)域融合的FVIII。由于IgG抗體的相對長的循環(huán)半衰期，通常優(yōu)選的將是IgGFc結(jié)構(gòu)域。此外，可以修飾Fc結(jié)構(gòu)域以調(diào)節(jié)某些效應(yīng)子功能，例如，補(bǔ)體結(jié)合和/或結(jié)合至某些Fc受體。FVIII與Fc結(jié)構(gòu)域的融合(其具有結(jié)合FcRn受體的能力)通常將導(dǎo)致與wtFVIII的半衰期相比融合蛋白的延長的循環(huán)半衰期。因此，用于本發(fā)明的FVIII分子也可以是FVIII類似物的衍生物，例如FVIII類似物的融合蛋白，聚乙二醇化或糖基聚乙二醇化的FVIII類似物，或綴合至肝素前體(heparosan)聚合物的FVIII類似物。術(shù)語“白蛋白融合蛋白”在本文中意在包括與白蛋白氨基酸序列或其片段或衍生物融合的FVIII。異源氨基酸序列可以融合至FVIII的N-或C-末端，或者其可以內(nèi)部插入FVIII氨基酸序列內(nèi)。異源氨基酸序列可以是WO2008/077616A1中描述的任何“半衰期延長多肽”，其公開內(nèi)容通過引用并入本文。用于本發(fā)明的組合物的FVIII分子的實(shí)例包括例如WO2010/045568、WO2009/062100、WO2010/014708、WO2008/082669、WO2007/126808、US2010/0173831、US2010/0173830、US2010/0168391、US2010/0113365、US2010/0113364、WO2003/031464、WO2009/108806、WO2010/102886、WO2010/115866、WO2011/101242、WO2011/101284、WO2011/101277、WO2011/131510、WO2012/007324、WO2011/101267、WO2013/083858和WO2004/067566中描述的FVIII分子?？捎糜诒景l(fā)明的組合物中的FVIII分子的實(shí)例包括的活性成分以及WO2008/135501、WO2009/007451中所述的FVIII分子和WO2004/067566的命名為“dBN(64-53)”的構(gòu)建體。該構(gòu)建體具有SEQIDNO：2中所示的氨基酸序列。本發(fā)明的組合物中因子VIII的濃度通常在10-10,000IU/mL的范圍內(nèi)。在不同的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物中FVIII分子的濃度為10-8,000IU/mL，或10-5,000IU/mL，或20-3,000IU/mL，或50-1,500IU/mL，或3,000IU/mL，或2,500IU/mL，或2,000IU/mL，或1,500IU/mL，或1,200IU/mL，1,000IU/mL，或800IU/mL，或600IU/mL，或500IU/mL，或400IU/mL，或300IU/mL，或250IU/mL，或200IU/mL，或150IU/mL，或100IU/mL?！皣H單位”或“IU”是如通過FVIII活性測定法(例如使用針對以“IU”校準(zhǔn)的國際標(biāo)準(zhǔn)制劑校準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)品的一步凝血測定法或生色底物FVIII活性測定法)測量的FVIII的凝血活性(效力)的測量單位。一步凝血測定法是本領(lǐng)域已知的，例如在NLee,MartinL,等人,AnEffectofPredilutiononPotencyAssaysofFVIIIConcentrates,ThrombosisResearch(PergamonPressLtd.)30,511519(1983)中所述的。一步測定法的原理：該測試作為活化的部分凝血致活酶時間(aPTT)測定法的修改版本執(zhí)行：血漿與磷脂和表面活化劑的孵育導(dǎo)致固有凝血系統(tǒng)的因子的激活。鈣離子的添加觸發(fā)凝血級聯(lián)。確定形成可測量的纖維蛋白凝塊的時間。該測定在因子VIII缺陷型血漿的存在下執(zhí)行。通過包括在待測試樣品中的凝血因子VIII恢復(fù)缺陷型血漿的凝血能力。凝血時間的縮短與樣品中存在的因子VIII的量成比例。凝血因子VIII的活性通過與具有已知活性的因子VIII的標(biāo)準(zhǔn)制劑直接比較來以國際單位定量。另一種標(biāo)準(zhǔn)測定法是生色底物測定法。生色底物測定可以商購，例如coamaticFVIII測試試劑盒(Chromogenix-InstrumentationLaboratorySpAV.leMonza338-20128Milano,Italy)。生色測定法的原理：在鈣和磷脂的存在下，因子X被因子IXa活化為因子Xa。該反應(yīng)由作為輔因子的因子VIIIa刺激。FVIIIa通過反應(yīng)混合物中的少量凝血酶由待測量樣品中的FVIII形成。當(dāng)使用Ca2+、磷脂和因子IXa的最佳濃度和過量的因子X時，因子X的活化與因子VIII的效力成比例?；罨囊蜃覺從生色底物S-2765釋放生色團(tuán)pNA。因此，在405nm下測量的pNA的釋放與所形成的FXa的量成比例，并因此也與樣品的因子VIII活性成比例。除非在其出現(xiàn)的上下文中另有說明，冷凍干燥或凍干應(yīng)用于表示干燥過程，其中將材料(即活性藥物成分和各種制劑添加劑或“賦形劑”)的溶液轉(zhuǎn)化為固體。典型的冷凍干燥過程由“冷凍”、“初級干燥”和“次級干燥”三個階段組成。在冷凍階段，幾乎所有含有的水都轉(zhuǎn)化成冰，并且溶質(zhì)轉(zhuǎn)化為固體(結(jié)晶或無定形)。在初級干燥階段中，通過直接升華(其通過在水分子(冰)和周圍大氣之間保持有利的壓力梯度來實(shí)現(xiàn))從產(chǎn)物中除去冰。在次級干燥階段，通過解吸作用從產(chǎn)物中除去殘余水分。如果對冷凍干燥的組合物給定濃度(w/v)，它們指的是正好在冷凍干燥前的體積。除非另有說明，百分?jǐn)?shù)表示重量/重量百分比，并且溫度以攝氏度表示。體積滲透摩爾濃度本發(fā)明的因子VIII組合物通常具有小于0.6Osm/L的體積滲透摩爾濃度。這比包含高濃度氯化鈉的許多現(xiàn)有技術(shù)制劑中的體積滲透摩爾濃度更接近生理條件。在本發(fā)明的不同實(shí)施方案中，制劑具有低于0.55Osm/L，低于0.5Osm/L，低于0.45Osm/L或低于0.4Osm/L的體積滲透摩爾濃度。術(shù)語“體積滲透摩爾濃度”和“滲透濃度”在本文中可互換使用。體積滲透摩爾濃度或滲透濃度是溶質(zhì)濃度的量度，定義為每升(L)溶液的溶質(zhì)的滲透摩爾(Osm)的數(shù)量(osmol/L或Osm/L)。而摩爾濃度測量每單位體積溶液的溶質(zhì)的摩爾數(shù)，體積滲透摩爾濃度測量每單位體積溶液的溶質(zhì)顆粒的滲透摩爾數(shù)。體積滲透摩爾濃度的理論計算是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。簡而言之，對溶液的每種組分計算滲透系數(shù)f、分子在水中解離成的顆粒數(shù)n和摩爾濃度的乘積，并將所有組分的結(jié)果相加。溶液的體積滲透摩爾濃度可以從以下表達(dá)式計算：Osm/L＝∑ifiniCi，其中指數(shù)i表示特定組分的身份；f是特定組分的滲透系數(shù)；n是分子在水中解離成的顆粒數(shù)；C是組分的摩爾濃度。摩爾濃度具有一定的溫度依賴性；對于本目的，其指在25℃的濃度。評估溶液在注射后可能施加的滲透壓的替代方法是通過評估重量滲透摩爾濃度，其中相對于溶劑質(zhì)量評估組分的含量。如果溶液的密度和溶解組分的干質(zhì)量已知，重量滲透摩爾濃度(osmolality)和體積滲透摩爾濃度(osmolarity)可以容易地相互轉(zhuǎn)化。重量滲透摩爾濃度可以通過多種方法(最常見的是冰點(diǎn)降低)測量。例如，對于水，1Osmol的溶質(zhì)加入到1kg的水中使冰點(diǎn)降低1.86℃。例如，在歐洲藥典2.2.35和美國藥典第785章中描述了通過冰點(diǎn)抑制測量溶液的重量滲透摩爾濃度的方法。下表列出了一些重要賦形劑的滲透系數(shù)和顆粒數(shù)n。對于其它組分，f＝1的值為實(shí)際目的提供了足夠好的近似值，并且n的值對于與用于腸胃外使用的藥物制劑相關(guān)的基本上所有化合物是公知的。賦形劑fnNaCl0.932CaCl20.863蔗糖1.021組氨酸1.01L-甲硫氨酸1.01泊洛沙姆-1881.01聚山梨醇酯201.01聚山梨醇酯801.01鹽根據(jù)本發(fā)明的組合物包含鈉鹽。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物含有至少40mM的鈉鹽(例如NaCl)。在一系列實(shí)施方案中，組合物包含40至195mM的鈉鹽(例如NaCl)或45至180mM，或45至150mM，或50至125mM或50至100mM，或60至95mM，或60至75mM，例如約65mM。在另一個實(shí)施方案中，鈉鹽(例如NaCl)的濃度為40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57,58,59,60,61,62,63,64,65,66,67,68,69,70,71,72,73,74,75,76,77,78,79,80,81,82,83,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94或95mM。優(yōu)選地，鈉鹽是氯化鈉；在另一個實(shí)施方案中，鹽是乙酸鈉。在第三個實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物含有氯化鈉和乙酸鈉的混合物。根據(jù)本發(fā)明的組合物還包含鈣鹽。根據(jù)本發(fā)明使用的鈣鹽通?？扇苡谒沟闷湓谌芙庥谒芤褐袝r分解成一種或多種鈣離子和抗衡陰離子。術(shù)語“Ca2+”與術(shù)語“鈣離子”同義。在一個實(shí)施方案中，鈣濃度由下式定義，其中[Ca2+]是以毫摩爾/升計的鈣離子濃度，[His]是以毫摩爾/升計的組氨酸濃度：[Ca2+]≥9mM-0.05*[His]在另一個實(shí)施方案中，鈣濃度通過下式定義，其中[Ca2+]是以毫摩爾/升計的鈣離子濃度，[His]是以毫摩爾/升計的組氨酸濃度：[Ca2+]≥9.5mM-0.05*[His]在另一個實(shí)施方案中，鈣濃度通過下式定義，其中[Ca2+]是以毫摩爾/升計的鈣離子濃度，[His]是以毫摩爾/升計的組氨酸濃度：[Ca2+]≥10mM-0.05*[His]在另一個實(shí)施方案中，鈣濃度通過下式定義，其中[Ca2+]是以毫摩爾/升計的鈣離子濃度，[His]是以毫摩爾/升計的組氨酸濃度：[Ca2+]≥10.5mM-0.05*[His]上述式子的條件為[Ca2+]>0。通常，組合物含有至少1mM，優(yōu)選至少2mM，更優(yōu)選至少4mM，最優(yōu)選至少5mM的鈣鹽。在另一個實(shí)施方案中，組合物含有高達(dá)100mM的鈣鹽。在另一個實(shí)施方案中，組合物包含1-50mM的鈣鹽，或2-40mM，或3-30mM，或4-20mM。在一個具體實(shí)施方案中，組合物含有約10mM的鈣鹽。鈣鹽可以例如選自氯化鈣、乙酸鈣、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣、苯甲酸鈣及其混合物、以及本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其它可溶性鈣鹽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，鈣鹽是氯化鈣。組氨酸根據(jù)本發(fā)明的組合物包含組氨酸，優(yōu)選L-組氨酸。在一個實(shí)施方案中，組氨酸濃度由下式定義，其中[Ca2+]是以毫摩爾/升計的鈣離子濃度，[His]是以毫摩爾/升計的組氨酸濃度：[His]≥180mM-20*[Ca2+]在另一個實(shí)施方案中，組氨酸濃度由下式定義，其中[Ca2+]是以毫摩爾/升計的鈣離子濃度，[His]是以毫摩爾/升計的組氨酸濃度：[His]≥190mM-20*[Ca2+]在另一個實(shí)施方案中，組氨酸濃度由下式定義，其中[Ca2+]是以毫摩爾/升計的鈣離子濃度，[His]是以毫摩爾/升計的組氨酸濃度：[His]≥200mM-20*[Ca2+]在另一個實(shí)施方案中，組氨酸濃度由下式定義，其中[Ca2+]是以毫摩爾/升計的鈣離子濃度，[His]是以毫摩爾/升計的組氨酸濃度：[His]≥210mM-20*[Ca2+]上述式子的條件是[His]>0。通常，組氨酸的濃度為至少5mM，優(yōu)選至少10mM，優(yōu)選至少20mM，優(yōu)選20-400mM，優(yōu)選至少25mM，優(yōu)選25-200mM，優(yōu)選至少50mM，優(yōu)選50-300mM，優(yōu)選55-170mM，優(yōu)選60-150mM，優(yōu)選65-120mM，更優(yōu)選50-100mM，例如約100mM。在另一個實(shí)施方案中，組氨酸的濃度為10,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70,75,80,85,90,95,100,105,110,115,120,130,140,150,160,170,180,190,200,300或400mM。表面活性劑根據(jù)本發(fā)明的組合物包含表面活性劑。如本文所用，“表面活性劑”是指保護(hù)活性物質(zhì)避免空氣與溶液界面或溶液與表面界面誘導(dǎo)的應(yīng)激或損傷的試劑。優(yōu)選地，表面活性劑是非天然存在的表面活性劑。典型的非天然存在的表面活性劑(括號[]中給出商品名稱的實(shí)例)是聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，例如聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單月桂酸酯20]，聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單棕櫚酸酯[40]或聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯[80]，泊洛沙姆如聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物F68/泊洛沙姆188]，聚乙二醇辛基苯基醚[X-100]或聚氧乙二醇十二烷基醚[35]。表面活性劑在水性組合物中的使用是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。為了方便起見，參考Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,19thedition,1995。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，組合物包含山梨糖醇酐單油酸酯[80]。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含對氧化不敏感的表面活性劑，例如烷基糖。在另一個實(shí)施方案中，表面活性劑是植物來源的表面活性劑，和/或其不含石油化學(xué)品，和/或其已經(jīng)在不使用石化產(chǎn)品的情況下生產(chǎn)。在一個實(shí)施方案中，表面活性劑的濃度為至少0.001％v/v，優(yōu)選0.001-0.1％v/v，優(yōu)選0.002-0.3％v/v，更優(yōu)選0.003-0.1％v/v，最優(yōu)選約0.005％v/v。在另一個實(shí)施方案中，表面活性劑的濃度為0.001,0.002,0.003,0.004,0.005,0.006,0.007,0.008,0.009,0.01,0.02,0.03,0.04,0.05,0.06,0.07,0.08,0.09,0.1,0.2,0.5,0.7,0.8,0.9或1.0％v/v。在一個實(shí)施方案中，聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯[80]的濃度為至少0.001％v/v，優(yōu)選0.001-0.1％v/v，優(yōu)選0.002-0.3％v/v，更優(yōu)選0.003-0.1％v/v，最優(yōu)選約0.005％v/v。緩沖劑根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包含緩沖試劑。如本文所用，“緩沖試劑”或“緩沖劑”是指將制劑的pH維持在其中制劑的施用(例如靜脈內(nèi)或皮下)通常良好耐受的范圍內(nèi)(例如pH5至9)并且還避免pH變化并保護(hù)活性物質(zhì)避免凍干過程中的pH誘導(dǎo)的應(yīng)激或損傷的試劑。用作緩沖物質(zhì)的物質(zhì)的典型實(shí)例是例如碳酸鹽，磷酸鹽，檸檬酸鹽，硼酸鹽，2-氨基-2-羥甲基-1,3-丙二醇[＝TRIS]，組氨酸，甘氨酸。緩沖劑(或緩沖試劑)可以選自乙酸鹽，苯甲酸鹽，碳酸鹽，檸檬酸鹽，甘氨酰甘氨酸，Hepes，組氨酸，甘氨酸，和TRIS，n,n-二(羥乙基)甘氨酸(bicine)，三(羥甲基)甲基甘氨酸(tricine)，琥珀酸鹽，天冬氨酸，谷氨酸或其混合物。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，緩沖物質(zhì)的濃度為1至200mM，例如1至150mM或1至50mM或1至25mM或5至20mM或5至15mM。本發(fā)明的組合物通常具有4至10的pH。在另一個實(shí)施方案中，組合物具有5.0至9.0或6.0至8.0或6.5至7.5或6.8至7.2或約7的pH。在其它實(shí)施方案中，組合物的pH為5.5±0.2,5.6±0.2,5.7±0.2,5.8±0.2,5.9±0.2,6.0±0.2,6.1±0.2,6.2±0.2,6.3±0.2,6.4±0.2,6.5±0.2,6.6±0.2,6.7±0.2,6.8±0.2,6.9±0.2,7.0±0.2,7.1±0.2,7.2±0.2,7.3±0.2,7.4±0.2,或7.5±0.2。在其它實(shí)施方案中，組合物的pH為5.5±0.1,5.6±0.1,5.7±0.1,5.8±0.1,5.9±0.1,6.0±0.1,6.1±0.1,6.2±0.1,6.3±0.1,6.4±0.1,6.5±0.1,6.6±0.1,6.7±0.1,6.8±0.1,6.9±0.1,7.0±0.1,7.1±0.1,7.2±0.1,7.3±0.1,7.4±0.1,或7.5±0.1。在其它實(shí)施方案中，穩(wěn)定制劑的pH為5.5,5.6,5.7,5.8,5.9,6.0,6.1,6.2,6.3,6.4,6.5,6.6,6.7,6.8,06.9,7.0,7.1,7.2,7.3,7.4,7.5,7.6,7.7,7.8,7.9,或8.0。碳水化合物本發(fā)明的組合物還可以包含碳水化合物。如本文所用，“碳水化合物”是指糖，例如單糖、二糖或多糖或水溶性葡聚糖，包括例如果糖，葡萄糖，甘露糖，甘露醇，山梨糖，山梨醇，木糖，麥芽糖，乳糖，蔗糖，半乳糖，葡聚糖，海藻糖，支鏈淀粉，糊精，環(huán)糊精，可溶性淀粉，羥乙基淀粉和羧甲基纖維素。碳水化合物可以例如選自單糖，二糖或多糖(包括例如單糖果糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖，二糖乳糖、蔗糖、海藻糖、麥芽糖和多糖葡聚糖、棉子糖、水蘇糖)。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII組合物包含選自以下的一種或多種碳水化合物：蔗糖，棉子糖，海藻糖或其混合物。在一個實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII組合物包含濃度為2至10％w/w，優(yōu)選3至8％w/w，優(yōu)選4至6％w/w，最優(yōu)選5％w/w的碳水化合物。在另一個實(shí)施方案中，碳水化合物的濃度為2、3、4、5、6、7、8、9或10％w/w。在具體實(shí)施方案中，碳水化合物是蔗糖。在一個實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII組合物包含濃度為2-10％w/w，優(yōu)選3-8％w/w，優(yōu)選4-6％w/w，最優(yōu)選5％w/w的蔗糖。在另一個實(shí)施方案中，蔗糖的濃度為2、3、4、5、6、7、8、9或10％w/w。在具體實(shí)施方案中，碳水化合物是海藻糖。在一個實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII組合物包含濃度為2至10％w/w，優(yōu)選3至8％w/w，優(yōu)選4至6％w/w，最優(yōu)選5％w/w的海藻糖。在另一個實(shí)施方案中，海藻糖的濃度為2、3、4、5、6、7、8、9或10％w/w。在具體實(shí)施方案中，碳水化合物是棉子糖。在一個實(shí)施方案中，F(xiàn)VIII組合物包含濃度為2至10％w/w，優(yōu)選3至8％w/w，優(yōu)選4至6％w/w，最優(yōu)選5％w/w的棉子糖。在另一個實(shí)施方案中，棉子糖的濃度為2、3、4、5、6、7、8、9或10％w/w。氨基酸在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物還包含除組氨酸以外的一種或多種氨基酸。如本文所用，“氨基酸”是指任何天然或非天然的藥學(xué)上可接受的氨基酸。氨基酸的非限制性實(shí)例包括異亮氨酸，丙氨酸，亮氨酸，天冬酰胺，賴氨酸，天冬氨酸，甲硫氨酸，半胱氨酸，苯丙氨酸，谷氨酸，蘇氨酸，谷氨酰胺，色氨酸，甘氨酸，纈氨酸，脯氨酸，硒代半胱氨酸，絲氨酸，酪氨酸，精氨酸，組氨酸，鳥氨酸，?；撬岬?。除組氨酸以外的氨基酸優(yōu)選選自精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，谷氨酸，谷氨酰胺，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，異亮氨酸，亮氨酸及其組合。在一個實(shí)施方案中，水性組合物包含精氨酸和異亮氨酸。在一個實(shí)施方案中，水性組合物包含精氨酸、谷氨酸和苯丙氨酸。在一個實(shí)施方案中，水性組合物包含精氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸。在一個實(shí)施方案中，水性組合物包含精氨酸、異亮氨酸和甲硫氨酸。在一個實(shí)施方案中，水性組合物包含谷氨酰胺、谷氨酸、異亮氨酸和甲硫氨酸。在一個實(shí)施方案中，除組氨酸以外的氨基酸的濃度為至少0.2mM，優(yōu)選1至300mM，優(yōu)選5至300mM，優(yōu)選10至200mM，優(yōu)選55至150mM，優(yōu)選25至100mM，優(yōu)選40至180mM，優(yōu)選50至90mM。在另一個實(shí)施方案中，除組氨酸以外的氨基酸的濃度為0.2,0.5,1,2,3,4,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70,75,80,85,90,95,100,105,110,115,120,125,130,135,140,145,150,155,160,165,170,175,180,185,190,195或200mM。在一個實(shí)施方案中，精氨酸的濃度為至少1mM，優(yōu)選5至300mM，優(yōu)選10至200mM，優(yōu)選55至150mM，優(yōu)選25至100mM，優(yōu)選40至180mM，優(yōu)選50至90mM。在另一個實(shí)施方案中，精氨酸的濃度為1,2,3,4,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70,75,80,85,90,95,100,105,110,115,120,125,130,135,140,145,150,155,160,165,170,175,180,185,190,195或200mM。在一個實(shí)施方案中，異亮氨酸的濃度為至少1mM，優(yōu)選5至300mM，優(yōu)選10至200mM，優(yōu)選55至150mM，優(yōu)選25至100mM，優(yōu)選40至180mM，優(yōu)選50至90mM。在另一個實(shí)施方案中，異亮氨酸的濃度為1,2,3,4,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70,75,80,85,90,95,100,105,110,115,120,125,130,135,140,145,150,155,160,165,170,175,180,185,190,195或200mM。在一個實(shí)施方案中，谷氨酸的濃度為至少1mM，優(yōu)選5至300mM，優(yōu)選10至200mM，優(yōu)選55至150mM，優(yōu)選25至100mM，優(yōu)選40至180mM，優(yōu)選50至90mM。在另一個實(shí)施方案中，谷氨酸的濃度為1,2,3,4,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70,75,80,85,90,95,100,105,110,115,120,125,130,135,140,145,150,155,160,165,170,175,180,185,190,195或200mM。在一個實(shí)施方案中，苯丙氨酸的濃度為至少1mM，優(yōu)選5至200mM，優(yōu)選10至160mM，優(yōu)選55至150mM，優(yōu)選25至100mM，優(yōu)選40至180mM，優(yōu)選50至90mM。在另一個實(shí)施方案中，苯丙氨酸的濃度為1,2,3,4,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70,75,80,85,90,95,100,105,110,115,120,125,130,135,140,145,150,155,160,165,170,175,180,185,190,195或200mM?？寡趸瘎┍景l(fā)明的組合物還可以含有一種或多種抗氧化劑。本發(fā)明含義內(nèi)的“抗氧化劑”是減緩、抑制、中斷和/或停止氧化過程的藥學(xué)上相容的化合物或組合物?？寡趸瘎┨貏e包括以下物質(zhì)：生育酚及其酯，還原型谷胱甘肽，甲硫氨酸，一硫代甘油，半胱氨酸，高半胱氨酸，胱硫醚，維生素A，芝麻油的芝麻酚，苯偶姻樹脂的苯甲酸松柏酯，去甲二氫愈創(chuàng)木酸樹脂和去甲二氫愈創(chuàng)木酸(NDGA)，沒食子酸酯(尤其是甲基、乙基、丙基、戊基、丁基、十二烷基沒食子酸酯)，丁基化羥基苯甲醚(BHAIBHT，也稱為丁基對甲酚)；抗壞血酸及其鹽和酯(例如抗壞血酸棕櫚酸酯(acorbylpalmitate))，異抗壞血酸(erythorbinicacid)(阿拉伯糖型抗壞血酸(isoascorbinicacid))及其鹽和酯，單硫代甘油，甲醛次硫酸鈉，偏亞硫酸氫鈉，亞硫酸氫鈉，亞硫酸鈉，偏亞硫酸氫鉀，丁基化羥基苯甲醚，丁基化羥基甲苯BHT)，丙酸。典型的抗氧化劑是生育酚，例如α-生育酚及其酯，丁基化羥基甲苯和丁基化羥基苯甲醚。術(shù)語“生育酚”還包括生育酚的酯。已知的生育酚是α-生育酚。術(shù)語“α-生育酚”包括α-生育酚的酯(例如，α-生育酚乙酸酯)。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸，例如L-甲硫氨酸。在一個實(shí)施方案中，抗氧化劑的濃度為至少0.05mM，優(yōu)選0.05至100mM，優(yōu)選0.1至80mM，優(yōu)選0.2至50mM，優(yōu)選0.5至70mM，優(yōu)選1至25mM，優(yōu)選0.1至20mM，優(yōu)選0.25至1mM。在另一個實(shí)施方案中，抗氧化劑的濃度為0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,11.0,12.0,13.0,14.0,15.0,16.0,17.0,18.0,19.0,20.0,25.0,30.0,35.0,40.0,45.0,50.0,55.0,60.0,65.0,70.0,75.0,80.0,85.0,90.0,95.0或100.0mM。在一個實(shí)施方案中，甲硫氨酸的濃度為至少0.05mM，優(yōu)選0.05至100mM，優(yōu)選0.1至80mM，優(yōu)選0.2至50mM，優(yōu)選0.5至70mM，優(yōu)選1至25mM，優(yōu)選0.1至20mM，優(yōu)選0.25至5mM。在另一個實(shí)施方案中，甲硫氨酸的濃度為0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,11.0,12.0,13.0,14.0,15.0,16.0,17.0,18.0,19.0,20.0,25.0,30.0,35.0,40.0,45.0,50.0,55.0,60.0,65.0,70.0,75.0,80.0,85.0,90.0,95.0或100.0mM。在一個實(shí)施方案中，谷胱甘肽的濃度為至少0.05mM，優(yōu)選0.05至100mM，優(yōu)選0.1至80mM，優(yōu)選0.2至50mM，優(yōu)選0.5至70mM，優(yōu)選1至25mM，優(yōu)選0.1至20mM，優(yōu)選0.25至1mM。在另一個實(shí)施方案中，谷胱甘肽的濃度為0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,11.0,12.0,13.0,14.0,15.0,16.0,17.0,18.0,19.0,20.0,25.0,30.0,35.0,40.0,45.0,50.0,55.0,60.0,65.0,70.0,75.0,80.0,85.0,90.0,95.0或100.0mM。穩(wěn)定劑本發(fā)明的組合物可以包含穩(wěn)定劑。如本文所用，“穩(wěn)定劑”是指有助于穩(wěn)定處于溶液狀態(tài)或在凍融以及冷凍干燥和脫水凍干物的隨后儲存期間的水性制劑中的不穩(wěn)定治療劑的化學(xué)品(其它同義詞為例如“共溶劑”，“共溶質(zhì)”，“化學(xué)添加劑”；“賦形劑”)。用于本文提供的制劑和方法的合適穩(wěn)定劑的實(shí)例包括但不限于緩沖試劑(例如TRIS，HEPES，氨基酸等)，滲透物(例如糖，糖醇等)，冷凍保護(hù)劑/凍干保護(hù)劑(例如醇，諸如丙三醇，甲醇，異丙醇；糖，例如蔗糖，木糖醇，右旋糖，海藻糖；羧酸和羧酸鹽，例如乳酸和乳酸鹽，蘋果酸和馬來酸鹽；PEG，例如乙二醇，PEG200，PEG2000，PEG20000；聚合物如聚乙烯吡咯烷酮，PVP12，PVP17，PVP30；填充劑(例如氨基酸，多元醇如甘露醇等)，鹽，聚合物，表面活性劑，抗氧化劑等。穩(wěn)定劑的濃度取決于試劑的化學(xué)性質(zhì)，并且可以根據(jù)上文的公開內(nèi)容進(jìn)行選擇。穩(wěn)定性在上文提供的組合物的具體實(shí)施方案中，組合物是穩(wěn)定的。本文所用的術(shù)語“穩(wěn)定的”是指在儲存一段時間后如通過FVIII活性測定法測量的組合物的效力是儲存前的效力的至少80％。除非本文另有說明，穩(wěn)定性測試如來自歐洲藥品管理局的自2003年8月起的標(biāo)題為“NOTEFORGUIDANCEONSTABILITYTESTING:STABILITYTESTINGOFNEWDRUGSUBSTANCESANDPRODUCTS”的文件CPMP/ICH/2736/99中所述進(jìn)行。在一系列實(shí)施方案中，本文提供的組合物在凍干后將穩(wěn)定至少1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48或更多個月(25℃；40％相對濕度[RH])。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，凍干的組合物將穩(wěn)定至少6個月(25℃；40％RH)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，凍干的組合物將穩(wěn)定至少12個月(25℃；40％RH)。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，凍干的組合物將穩(wěn)定至少18個月(25℃；40％RH)。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，凍干的組合物將穩(wěn)定至少24個月(25℃；40％RH)。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，凍干的組合物將穩(wěn)定至少36個月(25℃；40％RH)。在上文提供的組合物的具體實(shí)施方案中，當(dāng)在25℃/40％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在30℃/40％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在40℃/40％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在25℃/60％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在30℃/60％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在40℃/60％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在25℃/65％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在30℃/65％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在40℃/65％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在25℃/75％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在30℃/75％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在40℃/75％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在25℃/25％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在30℃/25％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月，甚至更優(yōu)選至少36個月。在上文提供的組合物的另一個實(shí)施方案中，當(dāng)在40℃/25％RH下儲存時，凍干的組合物穩(wěn)定至少6個月，優(yōu)選至少12個月，更優(yōu)選至少24個月。優(yōu)選地，在凍干的組合物在上述條件之一下儲存后如通過SE-HPLC測定的高分子量組分的量為3％或更少。通過本申請實(shí)施例中所述的SE-HPLC測定高分子量組分的量。在一個實(shí)施方案中，當(dāng)在4℃以液體狀態(tài)儲存時，組合物穩(wěn)定至少48小時，優(yōu)選至少72小時，更優(yōu)選至少96小時，最優(yōu)選至少一周。當(dāng)在2至8℃以液體狀態(tài)儲存時，水性組合物通常保持至少80％的其因子VIII活性至少48小時，優(yōu)選至少72小時，更優(yōu)選至少96小時，最優(yōu)選至少一周。這適用于在凍干之前的水性組合物和/或在凍干和在水溶液例如在蒸餾水中重構(gòu)后的水性組合物。在上文提供的組合物的具體實(shí)施方案中，當(dāng)在4℃下以液態(tài)儲存時，組合物保持至少85％的其因子VIII活性至少48小時，優(yōu)選至少72小時，更優(yōu)選至少96小時，最優(yōu)選至少一周。這適用于在凍干之前的水性組合物和/或在凍干和在水溶液例如在蒸餾水中重構(gòu)后的水性組合物。在上文提供的組合物的具體實(shí)施方案中，當(dāng)在4℃下以液態(tài)儲存時，組合物保持至少90％的其因子VIII活性至少48小時，優(yōu)選至少72小時，更優(yōu)選至少96小時，最優(yōu)選至少一周。這適用于在凍干之前的水性組合物和/或在凍干和在水溶液例如在蒸餾水中重構(gòu)后的水性組合物。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，組合物顯示很少或沒有濁度，例如。在凍干之前或在凍干和在水中重構(gòu)后。如本文所用，術(shù)語“濁度”是指溶液的乳光。濁度可以目測或儀器測定，如Pharm.Eur.8.0第2.2.1節(jié)“Clarityanddegreeofopalescenceofliquids”中所述的。本申請中對濁度的任何提及是指在Pharm.Eur.8.0第2.2.1節(jié)“Clarityanddegreeofopalescenceofliquids”中所述的方法。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物具有18NTU或更小的濁度。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物具有6NTU或更小的濁度。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物具有3NTU或更小的濁度。在凍干前和在凍干和在蒸餾水中重構(gòu)后滿足這些濁度值。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是澄清的。在本申請中，當(dāng)組合物或溶液的乳光不比在Pharm.Eur.8.0第2.2.1節(jié)“Clarityanddegreeofopalescenceofliquids”中所述的“參考懸浮液III”的乳光更顯著時，認(rèn)為它是“澄清的”。當(dāng)本文提及“不具有濁度”或“無濁度”的組合物時，應(yīng)當(dāng)理解，組合物根據(jù)此定義是“澄清的”。優(yōu)選的是以下組合物(表1)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表2)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表3)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表4)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表5)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表6)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表7)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表9)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表10)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表11)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表12)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表13)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表14)，包括：進(jìn)一步優(yōu)選的是以下組合物(表15)，包括：在另一個實(shí)施方案中，組合物170-233還包含表面活性劑，例如聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯[例如80]，優(yōu)選濃度為至少0.001％w/w。在另一個實(shí)施方案中，組合物170-233還包含除組氨酸以外的一種或多種氨基酸。所述另一種氨基酸選自精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，谷氨酸，谷氨酰胺，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，異亮氨酸或其混合物，優(yōu)選濃度為至少1mM。在另一個實(shí)施方案中，組合物170-233還包含抗氧化劑，優(yōu)選濃度為至少0.05mM?？寡趸瘎┑膶?shí)例包括但不限于還原型谷胱甘肽、甲硫氨酸、半胱氨酸、亞硫酸鈉、維生素A、維生素E、抗壞血酸、抗壞血酸鈉及其混合物。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸，例如L-甲硫氨酸。在另一個實(shí)施方案中，組合物170-233具有6.0-8.0或6.5-7.5或6.8-7.2或7的pH。在另一個實(shí)施方案中，組合物170-233還包含：a.聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯[例如80]作為表面活性劑，優(yōu)選濃度為至少0.001％w/w，b.除了組氨酸之外的一種或多種氨基酸，其選自精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，谷氨酸，谷氨酰胺，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，異亮氨酸或其混合物，優(yōu)選濃度為至少1mM，c.選自還原型谷胱甘肽、甲硫氨酸、半胱氨酸、亞硫酸鈉、維生素A、維生素E、抗壞血酸、抗壞血酸鈉及其混合物的抗氧化劑，優(yōu)選濃度為至少0.05mM，和d.組合物具有6.0-8.0或6.5-7.5或6.8-7.2或7的pH。優(yōu)選的是以下組合物(表16)，包括：在另一個實(shí)施方案中，組合物234-297還包含表面活性劑，例如聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯[例如80]，優(yōu)選濃度為至少0.001％w/w。在另一個實(shí)施方案中，組合物234-297還包含除組氨酸以外的一種或多種氨基酸。所述另一種氨基酸選自精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，谷氨酸，谷氨酰胺，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，異亮氨酸或其混合物，優(yōu)選濃度至少為1mM。在另一個實(shí)施方案中，組合物234-297還包含抗氧化劑，優(yōu)選濃度為至少0.05mM?？寡趸瘎┑膶?shí)例包括但不限于還原型谷胱甘肽、甲硫氨酸、半胱氨酸、亞硫酸鈉、維生素A、維生素E、抗壞血酸、抗壞血酸鈉及其混合物。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸，例如L-甲硫氨酸。在另一個實(shí)施方案中，組合物234-297具有6.0-8.0或6.5-7.5或6.8-7.2或7的pH。在另一個實(shí)施方案中，組合物234-297還包含：e.聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯[例如80]作為表面活性劑，優(yōu)選濃度為至少0.001％w/w，f.選自精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸或其混合物的除組氨酸以外的一種或多種氨基酸，優(yōu)選濃度為至少1mM，g.選自還原型谷胱甘肽、甲硫氨酸、半胱氨酸、亞硫酸鈉、維生素A、維生素E、抗壞血酸、抗壞血酸鈉及其混合物的抗氧化劑，優(yōu)選濃度為至少0.05mM，和h.組合物具有6.0-8.0或6.5-7.5或6.8-7.2或7的pH。優(yōu)選的是以下組合物(表17)，其包括：在另一個實(shí)施方案中，組合物298-361還包含表面活性劑，例如聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯[例如80]，優(yōu)選濃度為至少0.001％w/w。在另一個實(shí)施方案中，組合物298-361進(jìn)一步包含除組氨酸以外的一種或多種氨基酸。所述另一種氨基酸選自精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，谷氨酸，谷氨酰胺，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，異亮氨酸或其混合物，優(yōu)選濃度至少為1mM。在另一個實(shí)施方案中，組合物298-361還包含抗氧化劑，優(yōu)選濃度為至少0.05mM?？寡趸瘎┑膶?shí)例包括但不限于還原型谷胱甘肽、甲硫氨酸、半胱氨酸、亞硫酸鈉、維生素A、維生素E、抗壞血酸、抗壞血酸鈉及其混合物。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸，例如L-甲硫氨酸。在另一個實(shí)施方案中，組合物298-361具有6.0-8.0或6.5-7.5或6.8-7.2或7的pH。在另一個實(shí)施方案中，組合物298-361進(jìn)一步包含：i.聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單油酸酯[例如80]作為表面活性劑，優(yōu)選濃度為至少0.001％w/w，j.選自精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸或其混合物的除組氨酸以外的一種或多種氨基酸，優(yōu)選濃度為至少1mM，k.選自還原型谷胱甘肽、甲硫氨酸、半胱氨酸、亞硫酸鈉、維生素A、維生素E、抗壞血酸、抗壞血酸鈉及其混合物的抗氧化劑，優(yōu)選濃度為至少0.05mM，l.組合物具有6.0-8.0或6.5-7.5或6.8-7.2或7的pH。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及可通過凍干上述水性組合物獲得的組合物。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通過凍干上述水性組合物獲得的組合物。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及可通過用合適的溶劑重構(gòu)上述凍干的水性組合物而獲得的組合物。在具體實(shí)施方案中，組合物可通過用合適的溶劑重構(gòu)如上所述的凍干的水性組合物而獲得，其中合適的溶劑是水溶液。在具體的實(shí)施方案中，組合物可通過用水溶液重構(gòu)如上所述的凍干的水性組合物而獲得，其中所述水溶液選自林格氏溶液、林格氏乳酸鹽溶液和用于腸胃外施用的任何其它合適的溶液。在具體的實(shí)施方案中，組合物可通過用水溶液重構(gòu)如上所述的凍干的水性組合物而獲得，其中水溶液是水，優(yōu)選“注射用水”。在具體實(shí)施方案中，組合物可通過用水溶液重構(gòu)如上所述的凍干的水性組合物而獲得，其中水溶液是氯化鈉溶液。在具體實(shí)施方案中，組合物可通過用水溶液重構(gòu)如上所述的凍干的水性組合物而獲得，其中水溶液是組氨酸溶液。本發(fā)明的另一方面是本文所述的組合物在治療血液凝固障礙(例如血友病A)中的用途。在上文提供的組合物的一個具體實(shí)施方案中，組合物被配制用于皮下和/或肌內(nèi)施用。組合物經(jīng)口、局部、經(jīng)皮、腸胃外、通過吸入噴霧、陰道、直腸或通過顱內(nèi)注射施用，優(yōu)選腸胃外施用。本文所用的術(shù)語腸胃外包括皮下注射、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腦池內(nèi)注射或輸注技術(shù)。還考慮了通過靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、肌內(nèi)、乳房內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、眼球后、肺內(nèi)注射和/或在特定部位的手術(shù)植入。通常，組合物基本上不含熱原(參見例如Ph.Eur.7.0/2.06.08.00)和可能對接受者有害的其它雜質(zhì)。實(shí)施例使用FVIII分子(SEQIDNO：2；WO2004/067566中描述的構(gòu)建體dBN(64-53))進(jìn)行以下實(shí)施例。該FVIII分子在下文中將被稱為“CSL627”。生色FVIII:C測定使用CoamaticFVIII測試試劑盒(Chromogenix-InstrumentationLaboratorySpAV.leMonza338-20128Milano,Italy)進(jìn)行生色FVIII:C測定。測定原理：在鈣和磷脂的存在下，因子X被因子IXa活化為因子Xa。該反應(yīng)由作為輔因子的因子VIIIa刺激。FVIIIa通過反應(yīng)混合物中的少量凝血酶由待測量樣品中的FVIII形成。當(dāng)使用Ca2+、磷脂和因子IXa的最佳濃度和過量的因子X時，因子X的活化與因子VIII的效力成比例?；罨囊蜃覺從生色底物S-2765釋放生色團(tuán)pNA。因此，在405nm下測量的pNA的釋放與所形成的FXa的量成比例，并因此也與樣品的因子VIII活性成比例。該測定被適應(yīng)于在來自SiemensHealthcareDiagnosticsGmbH,Ludwig-Erhard-Straβe12,65760Eschborn,Germany的自動凝血分析儀BehringCoagulationTimer(BCT)或BehringCoagulationSystem(BCS)上進(jìn)行。一步凝血測定使用來自SiemensHealthcareDiagnosticsproductsGmbH,Emil-von-Behring–Str.76,35041Marburg,Germany的PathromtinSL試劑和FVIII缺陷型血漿進(jìn)行FVIII:C一步凝血測定。測定原理：該測試作為活化的部分凝血致活酶時間(aPTT)測定法的修改版本執(zhí)行：血漿與磷脂和表面活化劑的孵育導(dǎo)致固有凝血系統(tǒng)的因子的激活。鈣離子的添加觸發(fā)凝血級聯(lián)。測量形成可測量的纖維蛋白凝塊的時間。該測定在因子VIII缺陷型血漿的存在下執(zhí)行。通過包括在待測試樣品中的凝血因子VIII恢復(fù)缺陷型血漿的凝血能力。凝血時間的縮短與樣品中存在的因子VIII的量成比例。凝血因子VIII的活性通過與具有已知活性的因子VIII的標(biāo)準(zhǔn)制劑直接比較來以國際單位定量。該測定被適應(yīng)于在來自SiemensHealthcareDiagnosticsGmbH,Ludwig-Erhard-Straβe12,65760Eschborn,Germany的自動凝血分析儀BehringCoagulationTimer(BCT)或BehringCoagulationSystem(BCS)上進(jìn)行。通過尺寸排阻HPLC的高分子量組分(HMWC)使用COSMOSILDiol-300-II7.5x600mm柱(NacalaiTesque,Kyoto,Japan)進(jìn)行尺寸排阻HPLC，并且在激發(fā)波長280nm和發(fā)射波長340nm下進(jìn)行熒光檢測。流動相的組成為300mMNaCl,20mMHEPES,10mMCaCl2*2H2O,0,005％80,10％異丙醇，pH7.0。在環(huán)境室溫下在75分鐘內(nèi)以0.5mL/min的流速等度洗脫。實(shí)施例1：在經(jīng)由脫鹽柱的緩沖液交換后，制備FVIII制劑并評價溶液性質(zhì)根據(jù)供應(yīng)商的說明書，通過經(jīng)由NAP-25脫鹽柱(GEHealthcareSephadexTMG25；目錄號17-0852-01)的緩沖液交換將FVIII:C活性(生色底物法)為9500IU/ml的純化的CSL627配制成所需組合物。該緩沖液交換導(dǎo)致1.4的稀釋因子。然后研究不同組合物在FVIII:C活性上的產(chǎn)率和其外觀(濁度)。FVIII:C的產(chǎn)率計算為在緩沖液交換后獲得的組合物中FVIII:C的量除以在緩沖液交換前的溶液中的FVIII:C的量的百分比，通過緩沖液交換(稀釋因子1.4)適當(dāng)調(diào)整稀釋度。表18*在經(jīng)由脫鹽柱的緩沖液交換后通過生色底物活性測定法測定的FVIII:C活性產(chǎn)率實(shí)施例2：在經(jīng)由脫鹽柱的緩沖液交換后，制備FVIII制劑并評價溶液性質(zhì)如實(shí)施例1所述通過緩沖液交換獲得不同的組合物(起始材料中的FVIII:C活性為9733IU/mL)。評價組合物在緩沖液交換后的其外觀。此外，隨后將組合物無菌過濾(0.22μm)，并在過濾(時間0)后直接測定它們的FVIII:C活性，并在+2-+8℃下儲存1、2、3、15、30和60天和在+25℃和+40℃下儲存1、2和3天后測定它們的FVIII:C活性。將恢復(fù)(穩(wěn)定性)計算為儲存后的FVIII:C(生色底物FVIII活性測定)除以時間0時的FVIII:C活性的百分比。定義時間0(0.22μm過濾后)時的FVIII:C活性為100％。表19*FVIII:C恢復(fù)基于在不同溫度條件下(液態(tài)下的穩(wěn)定性測試)的儲存后的FVIII:C活性測量(生色底物活性測定)表20*FVIII:C恢復(fù)基于在不同溫度條件下(液態(tài)下的穩(wěn)定性測試)的儲存后的FVIII:C活性測量(生色底物活性測定)表21*FVIII:C恢復(fù)基于在不同溫度條件下(液態(tài)下的穩(wěn)定性測試)的儲存后的FVIII:C活性測量(生色底物活性測定)實(shí)施例3：經(jīng)由脫鹽柱的緩沖液交換后溶液的外觀如實(shí)施例1所述通過緩沖液交換獲得不同的組合物(起始材料中通過生色底物FVIII活性測定的FVIII:C活性為8317IU/mL)。評價組合物在緩沖液交換后的其外觀。表22實(shí)施例4：在經(jīng)由脫鹽柱的緩沖液交換后在FVIII:C活性上的產(chǎn)率和溶液的外觀和在儲存后FVIII:C活性的恢復(fù)。如實(shí)施例1所述通過緩沖液交換獲得不同的組合物(起始材料中的FVIII:C活性為4780IU/mL)。評價組合物在緩沖液交換后的其外觀。此外，隨后將組合物無菌過濾(0.22μm)，并在過濾(時間0)后直接測定它們的FVIII:C活性(生色底物測定)，并在2-8℃下儲存1、2和3天和在25℃和40℃下儲存3天后測定它們的FVIII:C活性。配制過程的在FVIII:C活性上的產(chǎn)率計算為在緩沖液交換后獲得的組合物中的FVIII:C除以在緩沖液交換前的溶液中的FVIII:C的百分比，其中適當(dāng)調(diào)整稀釋度。將儲存后的恢復(fù)(穩(wěn)定性)計算為儲存后的FVIII:C除以時間0時的FVIII:C活性的百分比。定義時間0(0.22μm過濾后)時的FVIII:C活性為100％。表23*經(jīng)由脫鹽柱的緩沖液交換后的FVIII:C恢復(fù)(基于使用生色底物FVIII活性測定的FVIII活性測量)**在不同溫度條件下(液態(tài)下的穩(wěn)定性測試)的儲存后的FVIII:C恢復(fù)(基于使用生色底物FVIII活性測定的FVIII活性測量)實(shí)施例5：在升高的溫度下儲存后在冷凍干燥的制劑中的HMWC形成(SE-HPLC)。通過用合適的緩沖溶液稀釋FVIII濃縮物來調(diào)節(jié)本實(shí)施例的制劑的FVIII:C活性和賦形劑的濃度。獲得的制劑顯示FVIII:C濃度為430-480IU/mL。然后將溶液分配(2.5mL)并冷凍干燥。將獲得的凍干物儲存在+40℃，并在1、3、6和12個月后取樣。在凍干物儲存之前和之后從重構(gòu)的溶液中取樣并在-70℃冷凍。在水浴(+37℃)中解凍后通過SE-HPLC測定樣品中的HMWC。表24實(shí)施例6在升高的溫度下儲存后在冷凍干燥的制劑中的FVIII:C生色底物活性測定和HMWC形成(SE-HPLC)通過用合適的緩沖溶液稀釋FVIII濃縮物來調(diào)節(jié)FVIII:C活性和賦形劑的濃度。然后將溶液分配(2.5mL)并冷凍干燥。將獲得的凍干物儲存在+40℃，并在1、3、6、12、18和24個月后取樣。在凍干物儲存之前和之后從重構(gòu)的溶液中取樣并在-70℃冷凍。在水浴(+37℃)中解凍后測定冷凍儲存的樣品中的HMWC。測定冷凍干燥前的新鮮溶液中和直接在冷凍干燥后或儲存后的新鮮重構(gòu)凍干物中的FVIII:C活性(生色底物FVIII活性測定)。將恢復(fù)(穩(wěn)定性)計算為儲存后的FVIII:C除以時間0時的FVIII:C活性的百分比。定義時間0(冷凍干燥后)時的FVIII:C活性為100％。表25實(shí)施例7：在經(jīng)由脫鹽柱的緩沖液交換后，制備FVIII制劑和評價溶液性質(zhì)。根據(jù)供應(yīng)商的說明書并如實(shí)施例1中所述，通過經(jīng)由NAP-25脫鹽柱(GEHealthcareSephadexTMG25；目錄號17-0852-01)的緩沖液交換將純化的CSL627配制成所需的組合物。隨后，基于生色活性測定稀釋不同的組合物以獲得使用生色底物FVIII活性測定的約7000IU/mL的FVIII:C活性(效力)。然后研究不同的組合物的外觀(濁度)。表27結(jié)果在圖1中圖示。點(diǎn)表示高于18NTU的閾值水平的濁度，菱形表示澄清的溶液(濁度小于或等于18NTU)。實(shí)施例8在升高的溫度下儲存后在冷凍干燥的制劑中的HMWC形成(SE-HPLC)。通過用合適的緩沖溶液稀釋FVIII濃縮物(CSL627)來調(diào)節(jié)本實(shí)施例的制劑的FVIII:C活性和賦形劑的濃度。獲得的制劑顯示約390-435IU/mL的FVIII:C濃度。然后將溶液分配(2.5mL)并冷凍干燥。將獲得的凍干物儲存在+40℃，并在1、3、6、9和12個月后取樣。在凍干物儲存之前和之后從重構(gòu)的溶液中取樣并在-70℃冷凍。在水浴(+37℃)中解凍后通過SE-HPLC測定樣品中的HMWC。表28實(shí)施例9在升高的溫度下儲存后在冷凍干燥的制劑中的FVIII:C生色底物活性測定和HMWC形成(SE-HPLC)通過用合適的緩沖溶液稀釋FVIII濃縮物(CSL627)來調(diào)節(jié)FVIII:C活性和賦形劑的濃度。然后將溶液分配(2.5mL)并冷凍干燥。將獲得的凍干物儲存在+40℃，并在1、3、6、9和12個月后取樣。在凍干物儲存之前和之后從重構(gòu)的溶液中取樣并在-70℃冷凍。在水浴(+37℃)中解凍后測定冷凍儲存的樣品中的HMWC。測定冷凍干燥前的新鮮溶液中和直接在冷凍干燥后或儲存后的新鮮重構(gòu)凍干物中的FVIII:C活性(生色底物FVIII活性測定)。將恢復(fù)(穩(wěn)定性)計算為儲存后的FVIII:C除以時間0時的FVIII:C活性的百分比。定義時間0(冷凍干燥后)時的FVIII:C活性為100％。表29表30實(shí)施例10在升高的溫度下儲存后在冷凍干燥的制劑中的FVIII:C生色底物活性測定和HMWC形成(SE-HPLC)通過用合適的緩沖溶液稀釋FVIII濃縮物(CSL627)來調(diào)節(jié)FVIII:C活性和賦形劑的濃度。然后將溶液分配(2.5mL)并冷凍干燥。將獲得的凍干物儲存在+40℃，并在3、6和9個月后取樣。在凍干物儲存之前和之后從重構(gòu)的溶液中取樣并在-70℃冷凍。在水浴(+37℃)中解凍后測定冷凍儲存的樣品中的HMWC。測定冷凍干燥前的新鮮溶液中和直接在冷凍干燥后或儲存后的新鮮重構(gòu)凍干物中的FVIII:C活性(生色底物FVIII活性測定)。將恢復(fù)(穩(wěn)定性)計算為儲存后的FVIII:C除以時間0時的FVIII:C活性的百分比。定義時間0(冷凍干燥后)時的FVIII:C活性為100％。表31表32表33表34序列表<110>CSLBehringGmbHCSLBehringGmbH<120>因子VIII制劑<130>A213<150>EP14179732.4<151>2014-08-04<160>2<170>PatentInversion3.5<210>1<211>2332<212>PRT<213>智人<400>1AlaThrArgArgTyrTyrLeuGlyAlaValGluLeuSerTrpAspTyr151015MetGlnSerAspLeuGlyGluLeuProValAspAlaArgPheProPro202530ArgValProLysSerPheProPheAsnThrSerValValTyrLysLys354045ThrLeuPheValGluPheThrAspHisLeuPheAsnIleAlaLysPro505560ArgProProTrpMetGlyLeuLeuGlyProThrIleGlnAlaGluVal65707580TyrAspThrValValIleThrLeuLysAsnMetAlaSerHisProVal859095SerLeuHisAlaValGlyValSerTyrTrpLysAlaSerGluGlyAla100105110GluTyrAspAspGlnThrSerGlnArgGluLysGluAspAspLysVal115120125PheProGlyGlySerHisThrTyrValTrpGlnValLeuLysGluAsn130135140GlyProMetAlaSerAspProLeuCysLeuThrTyrSerTyrLeuSer145150155160HisValAspLeuValLysAspLeuAsnSerGlyLeuIleGlyAlaLeu165170175LeuValCysArgGluGlySerLeuAlaLysGluLysThrGlnThrLeu180185190HisLysPheIleLeuLeuPheAlaValPheAspGluGlyLysSerTrp195200205HisSerGluThrLysAsnSerLeuMetGlnAspArgAspAlaAlaSer210215220AlaArgAlaTrpProLysMetHisThrValAsnGlyTyrValAsnArg225230235240SerLeuProGlyLeuIleGlyCysHisArgLysSerValTyrTrpHis245250255ValIleGlyMetGlyThrThrProGluValHisSerIlePheLeuGlu260265270GlyHisThrPheLeuValArgAsnHisArgGlnAlaSerLeuGluIle275280285SerProIleThrPheLeuThrAlaGlnThrLeuLeuMetAspLeuGly290295300GlnPheLeuLeuPheCysHisIleSerSerHisGlnHisAspGlyMet305310315320GluAlaTyrValLysValAspSerCysProGluGluProGlnLeuArg325330335MetLysAsnAsnGluGluAlaGluAspTyrAspAspAspLeuThrAsp340345350SerGluMetAspValValArgPheAspAspAspAsnSerProSerPhe355360365IleGlnIleArgSerValAlaLysLysHisProLysThrTrpValHis370375380TyrIleAlaAlaGluGluGluAspTrpAspTyrAlaProLeuValLeu385390395400AlaProAspAspArgSerTyrLysSerGlnTyrLeuAsnAsnGlyPro405410415GlnArgIleGlyArgLysTyrLysLysValArgPheMetAlaTyrThr420425430AspGluThrPheLysThrArgGluAlaIleGlnHisGluSerGlyIle435440445LeuGlyProLeuLeuTyrGlyGluValGlyAspThrLeuLeuIleIle450455460PheLysAsnGlnAlaSerArgProTyrAsnIleTyrProHisGlyIle465470475480ThrAspValArgProLeuTyrSerArgArgLeuProLysGlyValLys485490495HisLeuLysAspPheProIleLeuProGlyGluIlePheLysTyrLys500505510TrpThrValThrValGluAspGlyProThrLysSerAspProArgCys515520525LeuThrArgTyrTyrSerSerPheValAsnMetGluArgAspLeuAla530535540SerGlyLeuIleGlyProLeuLeuIleCysTyrLysGluSerValAsp545550555560GlnArgGlyAsnGlnIleMetSerAspLysArgAsnValIleLeuPhe565570575SerValPheAspGluAsnArgSerTrpTyrLeuThrGluAsnIleGln580585590ArgPheLeuProAsnProAlaGlyValGlnLeuGluAspProGluPhe595600605GlnAlaSerAsnIleMetHisSerIleAsnGlyTyrValPheAspSer610615620LeuGlnLeuSerValCysLeuHisGluValAlaTyrTrpTyrIleLeu625630635640SerIleGlyAlaGlnThrAspPheLeuSerValPhePheSerGlyTyr645650655ThrPheLysHisLysMetValTyrGluAspThrLeuThrLeuPhePro660665670PheSerGlyGluThrValPheMetSerMetGluAsnProGlyLeuTrp675680685IleLeuGlyCysHisAsnSerAspPheArgAsnArgGlyMetThrAla690695700LeuLeuLysValSerSerCysAspLysAsnThrGlyAspTyrTyrGlu705710715720AspSerTyrGluAspIleSerAlaTyrLeuLeuSerLysAsnAsnAla725730735IleGluProArgSerPheSerGlnAsnSerArgHisArgSerThrArg740745750GlnLysGlnPheAsnAlaThrThrIleProGluAsnAspIleGluLys755760765ThrAspProTrpPheAlaHisArgThrProMetProLysIleGlnAsn770775780ValSerSerSerAspLeuLeuMetLeuLeuArgGlnSerProThrPro785790795800HisGlyLeuSerLeuSerAspLeuGlnGluAlaLysTyrGluThrPhe805810815SerAspAspProSerProGlyAlaIleAspSerAsnAsnSerLeuSer820825830GluMetThrHisPheArgProGlnLeuHisHisSerGlyAspMetVal835840845PheThrProGluSerGlyLeuGlnLeuArgLeuAsnGluLysLeuGly850855860ThrThrAlaAlaThrGluLeuLysLysLeuAspPheLysValSerSer865870875880ThrSerAsnAsnLeuIleSerThrIleProSerAspAsnLeuAlaAla885890895GlyThrAspAsnThrSerSerLeuGlyProProSerMetProValHis900905910TyrAspSerGlnLeuAspThrThrLeuPheGlyLysLysSerSerPro915920925LeuThrGluSerGlyGlyProLeuSerLeuSerGluGluAsnAsnAsp930935940SerLysLeuLeuGluSerGlyLeuMetAsnSerGlnGluSerSerTrp945950955960GlyLysAsnValSerSerThrGluSerGlyArgLeuPheLysGlyLys965970975ArgAlaHisGlyProAlaLeuLeuThrLysAspAsnAlaLeuPheLys980985990ValSerIleSerLeuLeuLysThrAsnLysThrSerAsnAsnSerAla99510001005ThrAsnArgLysThrHisIleAspGlyProSerLeuLeuIleGlu101010151020AsnSerProSerValTrpGlnAsnIleLeuGluSerAspThrGlu102510301035PheLysLysValThrProLeuIleHisAspArgMetLeuMetAsp104010451050LysAsnAlaThrAlaLeuArgLeuAsnHisMetSerAsnLysThr105510601065ThrSerSerLysAsnMetGluMetValGlnGlnLysLysGluGly107010751080ProIleProProAspAlaGlnAsnProAspMetSerPhePheLys108510901095MetLeuPheLeuProGluSerAlaArgTrpIleGlnArgThrHis110011051110GlyLysAsnSerLeuAsnSerGlyGlnGlyProSerProLysGln111511201125LeuValSerLeuGlyProGluLysSerValGluGlyGlnAsnPhe113011351140LeuSerGluLysAsnLysValValValGlyLysGlyGluPheThr114511501155LysAspValGlyLeuLysGluMetValPheProSerSerArgAsn116011651170LeuPheLeuThrAsnLeuAspAsnLeuHisGluAsnAsnThrHis117511801185AsnGlnGluLysLysIleGlnGluGluIleGluLysLysGluThr119011951200LeuIleGlnGluAsnValValLeuProGlnIleHisThrValThr120512101215GlyThrLysAsnPheMetLysAsnLeuPheLeuLeuSerThrArg122012251230GlnAsnValGluGlySerTyrAspGlyAlaTyrAlaProValLeu123512401245GlnAspPheArgSerLeuAsnAspSerThrAsnArgThrLysLys125012551260HisThrAlaHisPheSerLysLysGlyGluGluGluAsnLeuGlu126512701275GlyLeuGlyAsnGlnThrLysGlnIleValGluLysTyrAlaCys128012851290ThrThrArgIleSerProAsnThrSerGlnGlnAsnPheValThr129513001305GlnArgSerLysArgAlaLeuLysGlnPheArgLeuProLeuGlu131013151320GluThrGluLeuGluLysArgIleIleValAspAspThrSerThr132513301335GlnTrpSerLysAsnMetLysHisLeuThrProSerThrLeuThr134013451350GlnIleAspTyrAsnGluLysGluLysGlyAlaIleThrGlnSer135513601365ProLeuSerAspCysLeuThrArgSerHisSerIleProGlnAla137013751380AsnArgSerProLeuProIleAlaLysValSerSerPheProSer138513901395IleArgProIleTyrLeuThrArgValLeuPheGlnAspAsnSer140014051410SerHisLeuProAlaAlaSerTyrArgLysLysAspSerGlyVal141514201425GlnGluSerSerHisPheLeuGlnGlyAlaLysLysAsnAsnLeu143014351440SerLeuAlaIleLeuThrLeuGluMetThrGlyAspGlnArgGlu144514501455ValGlySerLeuGlyThrSerAlaThrAsnSerValThrTyrLys146014651470LysValGluAsnThrValLeuProLysProAspLeuProLysThr147514801485SerGlyLysValGluLeuLeuProLysValHisIleTyrGlnLys149014951500AspLeuPheProThrGluThrSerAsnGlySerProGlyHisLeu150515101515AspLeuValGluGlySerLeuLeuGlnGlyThrGluGlyAlaIle152015251530LysTrpAsnGluAlaAsnArgProGlyLysValProPheLeuArg153515401545ValAlaThrGluSerSerAlaLysThrProSerLysLeuLeuAsp155015551560ProLeuAlaTrpAspAsnHisTyrGlyThrGlnIleProLysGlu156515701575GluTrpLysSerGlnGluLysSerProGluLysThrAlaPheLys158015851590LysLysAspThrIleLeuSerLeuAsnAlaCysGluSerAsnHis159516001605AlaIleAlaAlaIleAsnGluGlyGlnAsnLysProGluIleGlu161016151620ValThrTrpAlaLysGlnGlyArgThrGluArgLeuCysSerGln162516301635AsnProProValLeuLysArgHisGlnArgGluIleThrArgThr164016451650ThrLeuGlnSerAspGlnGluGluIleAspTyrAspAspThrIle165516601665SerValGluMetLysLysGluAspPheAspIleTyrAspGluAsp167016751680GluAsnGlnSerProArgSerPheGlnLysLysThrArgHisTyr168516901695PheIleAlaAlaValGluArgLeuTrpAspTyrGlyMetSerSer170017051710SerProHisValLeuArgAsnArgAlaGlnSerGlySerValPro171517201725GlnPheLysLysValValPheGlnGluPheThrAspGlySerPhe173017351740ThrGlnProLeuTyrArgGlyGluLeuAsnGluHisLeuGlyLeu174517501755LeuGlyProTyrIleArgAlaGluValGluAspAsnIleMetVal176017651770ThrPheArgAsnGlnAlaSerArgProTyrSerPheTyrSerSer177517801785LeuIleSerTyrGluGluAspGlnArgGlnGlyAlaGluProArg179017951800LysAsnPheValLysProAsnGluThrLysThrTyrPheTrpLys180518101815ValGlnHisHisMetAlaProThrLysAspGluPheAspCysLys182018251830AlaTrpAlaTyrPheSerAspValAspLeuGluLysAspValHis183518401845SerGlyLeuIleGlyProLeuLeuValCysHisThrAsnThrLeu185018551860AsnProAlaHisGlyArgGlnValThrValGlnGluPheAlaLeu186518701875PhePheThrIlePheAspGluThrLysSerTrpTyrPheThrGlu188018851890AsnMetGluArgAsnCysArgAlaProCysAsnIleGlnMetGlu189519001905AspProThrPheLysGluAsnTyrArgPheHisAlaIleAsnGly191019151920TyrIleMetAspThrLeuProGlyLeuValMetAlaGlnAspGln192519301935ArgIleArgTrpTyrLeuLeuSerMetGlySerAsnGluAsnIle194019451950HisSerIleHisPheSerGlyHisValPheThrValArgLysLys195519601965GluGluTyrLysMetAlaLeuTyrAsnLeuTyrProGlyValPhe197019751980GluThrValGluMetLeuProSerLysAlaGlyIleTrpArgVal198519901995GluCysLeuIleGlyGluHisLeuHisAlaGlyMetSerThrLeu200020052010PheLeuValTyrSerAsnLysCysGlnThrProLeuGlyMetAla201520202025SerGlyHisIleArgAspPheGlnIleThrAlaSerGlyGlnTyr203020352040GlyGlnTrpAlaProLysLeuAlaArgLeuHisTyrSerGlySer204520502055IleAsnAlaTrpSerThrLysGluProPheSerTrpIleLysVal206020652070AspLeuLeuAlaProMetIleIleHisGlyIleLysThrGlnGly207520802085AlaArgGlnLysPheSerSerLeuTyrIleSerGlnPheIleIle209020952100MetTyrSerLeuAspGlyLysLysTrpGlnThrTyrArgGlyAsn210521102115SerThrGlyThrLeuMetValPhePheGlyAsnValAspSerSer212021252130GlyIleLysHisAsnIlePheAsnProProIleIleAlaArgTyr213521402145IleArgLeuHisProThrHisTyrSerIleArgSerThrLeuArg215021552160MetGluLeuMetGlyCysAspLeuAsnSerCysSerMetProLeu216521702175GlyMetGluSerLysAlaIleSerAspAlaGlnIleThrAlaSer218021852190SerTyrPheThrAsnMetPheAlaThrTrpSerProSerLysAla219522002205ArgLeuHisLeuGlnGlyArgSerAsnAlaTrpArgProGlnVal221022152220AsnAsnProLysGluTrpLeuGlnValAspPheGlnLysThrMet222522302235LysValThrGlyValThrThrGlnGlyValLysSerLeuLeuThr224022452250SerMetTyrValLysGluPheLeuIleSerSerSerGlnAspGly225522602265HisGlnTrpThrLeuPhePheGlnAsnGlyLysValLysValPhe227022752280GlnGlyAsnGlnAspSerPheThrProValValAsnSerLeuAsp228522902295ProProLeuLeuThrArgTyrLeuArgIleHisProGlnSerTrp230023052310ValHisGlnIleAlaLeuArgMetGluValLeuGlyCysGluAla231523202325GlnAspLeuTyr2330<210>2<211>1444<212>PRT<213>人工序列<220><223>單鏈FVIIIdBN(64-53)<400>2AlaThrArgArgTyrTyrLeuGlyAlaValGluLeuSerTrpAspTyr151015MetGlnSerAspLeuGlyGluLeuProValAspAlaArgPheProPro202530ArgValProLysSerPheProPheAsnThrSerValValTyrLysLys354045ThrLeuPheValGluPheThrAspHisLeuPheAsnIleAlaLysPro505560ArgProProTrpMetGlyLeuLeuGlyProThrIleGlnAlaGluVal65707580TyrAspThrValValIleThrLeuLysAsnMetAlaSerHisProVal859095SerLeuHisAlaValGlyValSerTyrTrpLysAlaSerGluGlyAla100105110GluTyrAspAspGlnThrSerGlnArgGluLysGluAspAspLysVal115120125PheProGlyGlySerHisThrTyrValTrpGlnValLeuLysGluAsn130135140GlyProMetAlaSerAspProLeuCysLeuThrTyrSerTyrLeuSer145150155160HisValAspLeuValLysAspLeuAsnSerGlyLeuIleGlyAlaLeu165170175LeuValCysArgGluGlySerLeuAlaLysGluLysThrGlnThrLeu180185190HisLysPheIleLeuLeuPheAlaValPheAspGluGlyLysSerTrp195200205HisSerGluThrLysAsnSerLeuMetGlnAspArgAspAlaAlaSer210215220AlaArgAlaTrpProLysMetHisThrValAsnGlyTyrValAsnArg225230235240SerLeuProGlyLeuIleGlyCysHisArgLysSerValTyrTrpHis245250255ValIleGlyMetGlyThrThrProGluValHisSerIlePheLeuGlu260265270GlyHisThrPheLeuValArgAsnHisArgGlnAlaSerLeuGluIle275280285SerProIleThrPheLeuThrAlaGlnThrLeuLeuMetAspLeuGly290295300GlnPheLeuLeuPheCysHisIleSerSerHisGlnHisAspGlyMet305310315320GluAlaTyrValLysValAspSerCysProGluGluProGlnLeuArg325330335MetLysAsnAsnGluGluAlaGluAspTyrAspAspAspLeuThrAsp340345350SerGluMetAspValValArgPheAspAspAspAsnSerProSerPhe355360365IleGlnIleArgSerValAlaLysLysHisProLysThrTrpValHis370375380TyrIleAlaAlaGluGluGluAspTrpAspTyrAlaProLeuValLeu385390395400AlaProAspAspArgSerTyrLysSerGlnTyrLeuAsnAsnGlyPro405410415GlnArgIleGlyArgLysTyrLysLysValArgPheMetAlaTyrThr420425430AspGluThrPheLysThrArgGluAlaIleGlnHisGluSerGlyIle435440445LeuGlyProLeuLeuTyrGlyGluValGlyAspThrLeuLeuIleIle450455460PheLysAsnGlnAlaSerArgProTyrAsnIleTyrProHisGlyIle465470475480ThrAspValArgProLeuTyrSerArgArgLeuProLysGlyValLys485490495HisLeuLysAspPheProIleLeuProGlyGluIlePheLysTyrLys500505510TrpThrValThrValGluAspGlyProThrLysSerAspProArgCys515520525LeuThrArgTyrTyrSerSerPheValAsnMetGluArgAspLeuAla530535540SerGlyLeuIleGlyProLeuLeuIleCysTyrLysGluSerValAsp545550555560GlnArgGlyAsnGlnIleMetSerAspLysArgAsnValIleLeuPhe565570575SerValPheAspGluAsnArgSerTrpTyrLeuThrGluAsnIleGln580585590ArgPheLeuProAsnProAlaGlyValGlnLeuGluAspProGluPhe595600605GlnAlaSerAsnIleMetHisSerIleAsnGlyTyrValPheAspSer610615620LeuGlnLeuSerValCysLeuHisGluValAlaTyrTrpTyrIleLeu625630635640SerIleGlyAlaGlnThrAspPheLeuSerValPhePheSerGlyTyr645650655ThrPheLysHisLysMetValTyrGluAspThrLeuThrLeuPhePro660665670PheSerGlyGluThrValPheMetSerMetGluAsnProGlyLeuTrp675680685IleLeuGlyCysHisAsnSerAspPheArgAsnArgGlyMetThrAla690695700LeuLeuLysValSerSerCysAspLysAsnThrGlyAspTyrTyrGlu705710715720AspSerTyrGluAspIleSerAlaTyrLeuLeuSerLysAsnAsnAla725730735IleGluProArgSerPheSerGlnAsnSerArgHisProSerThrArg740745750GlnLysGlnPheAsnAlaThrThrIleProGluAsnThrThrLeuGln755760765SerAspGlnGluGluIleAspTyrAspAspThrIleSerValGluMet770775780LysLysGluAspPheAspIleTyrAspGluAspGluAsnGlnSerPro785790795800ArgSerPheGlnLysLysThrArgHisTyrPheIleAlaAlaValGlu805810815ArgLeuTrpAspTyrGlyMetSerSerSerProHisValLeuArgAsn820825830ArgAlaGlnSerGlySerValProGlnPheLysLysValValPheGln835840845GluPheThrAspGlySerPheThrGlnProLeuTyrArgGlyGluLeu850855860AsnGluHisLeuGlyLeuLeuGlyProTyrIleArgAlaGluValGlu865870875880AspAsnIleMetValThrPheArgAsnGlnAlaSerArgPr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