本發(fā)明涉及包含核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進用組合物、以及包含免疫誘導(dǎo)促進用組合物的、用于免疫誘導(dǎo)的疫苗藥物組合物。

背景技術(shù)：

通常廣泛使用的疫苗是對通過微生物或病毒等病原體或其一部分的毒性進行弱化、無效化的物質(zhì)，通過對生物體給藥來誘導(dǎo)用于預(yù)防感染病的免疫。

吞噬病毒、微生物等外來性異物的樹突狀細(xì)胞轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)，對幼稚T細(xì)胞(Th0細(xì)胞)傳遞異物的信息，誘導(dǎo)輔助(helper)T細(xì)胞的分化。Th0細(xì)胞收到樹突狀細(xì)胞的各種信息，分化成負(fù)責(zé)細(xì)胞性免疫的1型輔助T細(xì)胞(Th1細(xì)胞)、負(fù)責(zé)體液免疫的2型輔助T細(xì)胞(Th2細(xì)胞)(參照例如，[非專利文獻1]和[非專利文獻2])。

Toll樣受體(TLR)始于樹突狀細(xì)胞，多表達于負(fù)責(zé)自然免疫系的免疫活性細(xì)胞表面上，通過接收TLR配體而活性化，促進輔助T細(xì)胞的分化。由此，免疫反應(yīng)被活化(參照例如[非專利文獻3])。一直以來，免疫活化中，只知道通過TLR刺激的反應(yīng)路徑，除此以外的反應(yīng)路徑還不明確。

另一方面，已知霍亂毒素、大腸桿菌非耐熱性毒素等毒素類；通過抗原的緩釋性來提高免疫反應(yīng)效果那樣的油脂系佐劑中，也具有免疫活化作用，但關(guān)于其安全性與效果的平衡存在問題(例如，參照[非專利文獻4])。

現(xiàn)有技術(shù)文獻

非專利文獻

非專利文獻1：Lipscomb MF.et al.，Physiol Rev.，82，97-130(2002)

非專利文獻2：Zhou L.et al.，Immunity，30，646-655(2009)

非專利文獻3：Mazzoni A.et al.，J Leukoc Biol.，75，721-730(2004)

非專利文獻4：Stevceva L.et al.，Curr Pharm Des，11，801-811(2005)

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明要解決的問題

本發(fā)明鑒于上述現(xiàn)狀，目的在于提供用于對各種抗原進行免疫誘導(dǎo)的、能夠普遍使用的、有效地發(fā)揮細(xì)胞性免疫、體液免疫這樣的生物體防御作用的免疫誘導(dǎo)促進用組合物和疫苗藥物組合物。

用于解決問題的方案

本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，樹突狀細(xì)胞吞噬抗原時，通過藥物由外部施加刺激，如TLR配體那樣，自然免疫系被活性化，從而能夠誘導(dǎo)有效的免疫反應(yīng)。并且，通過控制作為免疫反應(yīng)起點的樹突狀細(xì)胞，能夠有效地誘導(dǎo)抗原特異的免疫反應(yīng)，著眼于這一點進行了深入的研究。結(jié)果，令人驚奇的發(fā)現(xiàn)是，通過使用對與局部存在于細(xì)胞表面的TLR完全不同的、在細(xì)胞內(nèi)特別是核內(nèi)存在的、承擔(dān)著對核內(nèi)的信息傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄控制的核受體起作用的藥物，能夠進行抗原特異的免疫誘導(dǎo)。

即，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，通過將核受體配體與抗原一起或分別地、對相同部位或不同的部位、直接對生物體進行給藥，利用不介由由TLR配體帶來的TLR刺激的反應(yīng)，從而能夠有效地誘導(dǎo)抗原特異的免疫反應(yīng)。

即，本發(fā)明為特征在于包含核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進用組合物。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物中的上述核受體配體優(yōu)選為選自由類視黃醇受體激動劑、類視黃醇X受體激動劑、甲狀腺激素受體激動劑和雌激素受體調(diào)節(jié)劑組成的組中的至少一種。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物中的上述核受體配體優(yōu)選為選自由類視黃醇受體激動劑、甲狀腺激素受體激動劑和雌激素受體調(diào)節(jié)劑組成的組中的至少一種，用于體液免疫誘導(dǎo)。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物中的上述核受體配體優(yōu)選為類視黃醇受體激動劑和/或類視黃醇X受體激動劑，用于細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物進而優(yōu)選包含輔助肽。

另外，本發(fā)明為特征在于包含用于免疫誘導(dǎo)的抗原和上述免疫誘導(dǎo)促進用組合物的疫苗藥物組合物。

本發(fā)明的疫苗藥物組合物優(yōu)選對體表面上給藥。

本發(fā)明的疫苗藥物組合物優(yōu)選通過皮內(nèi)注射、皮下注射或肌肉注射給藥。

另外，本發(fā)明的一個方式中，包含上述核受體配體和以TLR配體為代表的免疫誘導(dǎo)促進劑的免疫誘導(dǎo)促進用組合物和疫苗藥物組合物發(fā)揮出更高的體液免疫誘導(dǎo)效果。

以下，對于本發(fā)明進行詳細(xì)說明。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物和疫苗藥物組合物用于抗原特異的免疫誘導(dǎo)。

抗原特異的免疫誘導(dǎo)中，可列舉出：誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞等的細(xì)胞性免疫以及促進抗體產(chǎn)生的體液免疫。

對細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)效果定量測定的方法，沒有特別的限定，開發(fā)出了各種各樣的方法，例如，可以通過使用了免疫評價用模型動物的免疫誘導(dǎo)實驗和ELISPOT方法(IFN-γ)進行測定。作為用于ELISPOT方法的樣品，可列舉出例如，免疫評價用模型動物的脾臟。

對于體液免疫誘導(dǎo)效果進行定量測定的方法，沒有特別的限定，開發(fā)出了各種方法，例如，可以通過使用了免疫評價用模型動物的免疫誘導(dǎo)實驗和ELISA法(抗原特異性IgG抗體)進行測定。作為用于ELISA法的樣品，可列舉出例如，免疫評價用模型動物的血液。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物包含作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑。另外，本發(fā)明的疫苗藥物組合物包含抗原和上述免疫誘導(dǎo)促進用組合物。

通過包含上述抗原和作為上述核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑，本發(fā)明的疫苗藥物組合物能夠有效地誘導(dǎo)抗原特異的免疫反應(yīng)。

本說明書中使用時，術(shù)語“抗原”是指能夠誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的所有的物質(zhì)。對于上述抗原，沒有特別的限定，可列舉出例如：蛋白質(zhì)、肽等。要求抗原的皮膚滲透性的經(jīng)皮給藥中，優(yōu)選使用分子量小的抗原，可以使用例如由約8～12個氨基酸形成的肽。

對于上述抗原，沒有特別的限定，可列舉出例如：癌抗原肽、來自感染性病原體的抗原、感染性抗原肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“癌”是指癌基因的異常表達。作為上述癌，可列舉出例如：造血器官腫瘤、實體癌等伴隨有過剩表達的癌。

本說明書中使用時，術(shù)語“基因的異常的表達”是指某細(xì)胞中的該基因的表達水平與相同組織的其他細(xì)胞相比較，以例如2倍以上、4倍以上等倍率顯著地上升或降低。

本說明書中使用時，術(shù)語“過剩表達”是指異常的表達為表達水平的上升?；虻谋磉_水平可以使用該技術(shù)領(lǐng)域公知的任意方法容易地測定。

作為上述癌基因，可列舉出例如：存活蛋白基因、GPC3基因、HER2/neu基因、MAGE3基因、MAGE A1基因、MAGE A3/A6基因、MAGE A4基因、MAGE12基因、蛋白酶-3基因、AFP基因、CA-125基因、CD44基因、CEA基因、c-Kit基因、c-met基因、c-myc基因、L-myc基因、COX2基因、Cyclin(細(xì)胞周期蛋白)D1基因、Cytokeratin(細(xì)胞角蛋白)-7基因、Cytokeratin-19基因、Cytokeratin-20基因、E2F1基因、E2F3基因、EGFR基因、Gli1基因、hCGβ基因、HIF-1α基因、HnRNP A2/B1基因、hTERT基因、MDM基因、MDR-1基因、MMP-2基因、MMP-9基因、Muc-1基因、Muc-4基因、Muc-7基因、NSE基因、ProGRP基因、PSA基因、RCAS1基因、SCC基因、Thymoglobulin(抗胸腺細(xì)胞球蛋白)基因、VEGF-A基因、VEGF-A基因等。

伴隨著上述存活蛋白基因異常表達的癌中，包括惡性淋巴瘤、膀胱癌、肺癌、大腸癌等，但不限定于此。伴隨上述GPC3基因異常表達的癌中包括肝癌、膽管癌、胃癌等，但不限定于此。伴隨著上述HER2/neu基因異常表達的癌中包括乳癌、胃癌、卵巢癌、子宮癌、膀胱癌、非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌等，但不限定于此。伴隨著上述MAGE3基因異常表達的癌中，包括黑色素瘤、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、肝臟癌等，但不限定于此。伴隨著上述蛋白酶-3基因異常表達的癌包括急性骨髄性白血病、胰臟癌等，但不限定于此。

本說明書中使用時，術(shù)語“癌抗原”是指在腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞中特異性表達、能夠誘導(dǎo)細(xì)胞性免疫應(yīng)答的蛋白質(zhì)、肽等物質(zhì)。

本說明書中使用時，術(shù)語“癌抗原肽”是來自于癌抗原蛋白質(zhì)的部分肽、并且能夠誘導(dǎo)細(xì)胞性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。通常，癌抗原肽通過作為癌基因產(chǎn)物的癌抗原蛋白質(zhì)在癌細(xì)胞內(nèi)被分解而產(chǎn)生，通過MHC I類分子在癌細(xì)胞的表面呈遞。

上述癌抗原肽可以是由癌細(xì)胞分離和純化的內(nèi)源性的癌抗原肽，也可以是具有與內(nèi)源性的癌抗原肽相同氨基酸序列的合成肽。作為上述癌抗原肽，具體而言，優(yōu)選為存活蛋白2B肽、GPC3肽、HER2/neu＿A24肽、MAGE3＿A24肽、PR1肽、HER2/neu＿A02肽、MAGE3＿A02肽、HER2/neu＿E75肽、MUC1肽或者它們的變異肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“存活蛋白2B肽”是指由序列Ala Tyr Ala Cys Asn Thr Ser Thr Leu(序列號1)組成的、來自于癌基因產(chǎn)物存活蛋白的肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“GPC3肽”是指由序列Glu Tyr Ile Leu Ser Leu Glu Glu Leu(序列號2)組成的、來自于癌基因產(chǎn)物GPC3的肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“HER2/neu＿A24肽”是指由序列Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu(序列號3)組成的、來自癌基因產(chǎn)物HER2/neu的HLA-A24限制性肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“MAGE3＿A24肽”是指由序列Ile Met Pro Lys Ala Gly Leu Leu Ile(序列號4)組成的、來自癌基因產(chǎn)物MAGE3的HLA-A24限制性肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“PR1肽”是指由序列Val Leu Gln Glu Leu Asn Val Thr Val(序列號5)組成的、來自癌基因產(chǎn)物蛋白酶-3的肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“HER2/neu＿A02肽”是指由序列Lys Val Phe Gly Ser Leu Ala Phe Val(序列號6)組成的、來自癌基因產(chǎn)物HER2/neu的HLA-A02限制性肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“MAGE3＿A02肽”是指由序列Lys Val Ala Glu Ile Val His Phe Leu(序列號7)組成的、來自癌基因產(chǎn)物MAGE3的HLA-A02限制性肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“HER2/neu＿E75肽”是指由序列Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu(序列號8)組成的、來自癌基因HER2/neu產(chǎn)物(HER2蛋白質(zhì))的肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“MUC1肽”是指由序列Ser Thr Ala Pro Pro Val His Asn Val(序列號9)組成的、來自作為在很多癌細(xì)胞上高表達的糖蛋白的MUC1蛋白的肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“變異肽”是指肽的全部或一部分氨基酸被置換或修飾等而變異的肽。

對于上述變異肽，沒有特別的限定，可列舉出例如：(a)肽的氨基酸序列中1個～多個(例如，1個、2個、3個、4個或5個)氨基酸進行了置換、缺失或添加而成的氨基酸序列所組成的肽；(b)肽的氨基酸序列中全部或一部分氨基酸(例如，1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個)被修飾的氨基酸序列所組成的肽等。

對于上述變異肽所具有的氨基酸的修飾，沒有特別的限定，可列舉出例如：乙?；?、甲基化等烷基化、糖基化、羥基化、羧基化、醛化、磷酸化、磺酰化、甲?；?、肉豆蔻酰化、棕櫚酰化、硬脂酰化等脂肪鏈附加修飾；辛?；?、酯化、酰胺化、脫酰胺化、胱氨酸修飾、谷胱甘肽修飾、巰基乙酸修飾等二硫化物鍵形成修飾；糖化、泛素化、琥珀酰亞胺形成、谷胺?；愇於┗?。

上述變異肽也可以為包含1個以上氨基酸的置換、缺失或添加與1個以上氨基酸的修飾組合的肽。

上述來自感染性病原體的抗原是指能夠成為由被檢生物體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答靶標(biāo)的所有的物質(zhì)。另外，上述來自感染性病原體的抗原也可以為與免疫活性細(xì)胞接觸時，成為免疫應(yīng)答(例如，免疫活性細(xì)胞的成熟、細(xì)胞因子產(chǎn)生量的増加、抗體產(chǎn)生的促進等)靶標(biāo)的物質(zhì)。

作為本發(fā)明的體液免疫誘導(dǎo)用的疫苗藥物組合物，可以通過將上述來自感染性病原體的抗原和體液免疫誘導(dǎo)用的上述免疫誘導(dǎo)促進用組合物一起對對象給藥來處置(例如，治療或預(yù)防)感染性疾病。

作為本發(fā)明的細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)用的疫苗藥物組合物通過將上述癌抗原和細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)用的上述免疫誘導(dǎo)促進用組合物一起對對象給藥，從而對癌進行處置(例如，治療或預(yù)防)。

作為來自上述感染性病原體的抗原，只要為感染性病原體和來自感染性病原體的抗原，則沒有特別的限定。

作為因上述感染性病原體患上的疾病，沒有特別限定，例如可列舉出由腺病毒(例如，人腺病毒)、皰疹病毒(例如，單純皰疹病毒、水痘/帶狀皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、人皰疹病毒、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒)、小核糖核酸病毒(例如，脊髓灰質(zhì)炎病毒、感冒病毒、甲型肝炎病毒)、痘病毒(例如，天花病毒、痘苗病毒、傳染性軟疣病毒)、小核糖核酸病毒(例如，鼻病毒、腸道病毒)、正粘病毒(例如，流感病毒)、副粘病毒(例如，副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞體病毒(RSV)、新城疫病毒)、細(xì)小病毒(例如，腺隨伴病毒)、外衣病毒(例如，風(fēng)疹病毒)、冠狀病毒(例如，SARS冠狀病毒)、嗜肝DNA病毒(例如，乙型肝炎病毒)、黃病毒(例如，乙型腦炎病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒、西尼羅熱病毒、圣路易腦炎病毒、墨累山谷腦炎病毒、丙型肝炎病毒、庚型肝炎病毒)、肝炎病毒(例如，戊型肝炎病毒)、乳頭瘤病毒(例如，人乳頭瘤病毒)、杯狀病毒(例如，諾如病毒)、彈狀病毒(例如，狂犬病毒、水泡性口炎病毒)、纖絲病毒(例如，埃博拉出血熱病毒)、沙粒病毒(例如，拉沙病毒、丁型肝炎病毒)、布尼亞病毒(例如，加里福尼亞腦炎病毒、裂谷熱病毒)、呼腸孤病毒(例如，輪狀病毒)、逆轉(zhuǎn)錄病毒(例如，人類免疫缺陷病毒(HIV)、成人T細(xì)胞白血病病毒)等的病毒感染患上的疾病等病毒疾??；由埃希氏菌屬、腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、志賀菌、李斯特菌、氣桿菌、螺桿菌、克雷伯菌、變形桿菌、假單胞菌、鏈球菌、衣原體、支原體、肺炎球菌、奈瑟菌、梭菌、芽孢桿菌、棒狀桿菌、分枝桿菌、彎曲桿菌、弧菌、沙雷氏菌、普羅威登斯菌、色桿菌、布魯氏菌、耶爾森菌、嗜血桿菌、博德特桿菌等的細(xì)菌感染患上的疾病等細(xì)菌疾??；衣原體、念珠菌病、曲霉菌病、組織胞漿菌病、隱球菌性髓膜炎等真菌疾?。化懠?、肺孢子蟲肺炎、利什曼病、隱孢子蟲病、弓形蟲病、錐蟲感染等。

本說明書中使用時，術(shù)語“感染性抗原肽”是指源自來自感染性病原體的抗原蛋白質(zhì)并且能夠誘導(dǎo)細(xì)胞性免疫應(yīng)答的部分肽。通常，作為上述來自感染性病原體的抗原，優(yōu)選為IPEP87肽、HBVenv肽或者它們的變異肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“IPEP87肽”是指由序列Asp Leu Met Gly Tyr Ile Pro Ala Val(序列號10)組成的、來自丙型肝炎病毒(HCV)蛋白質(zhì)的肽。

本說明書中使用時，術(shù)語“HBVenv肽”是指由序列Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val(序列號11)組成的、來自乙型肝炎病毒(HBV)蛋白質(zhì)的肽。

上述的肽可以是游離形或者藥理學(xué)允許的任意鹽形的形式。

作為上述藥理學(xué)允許的任意的鹽，可列舉出例如：酸鹽(例如，乙酸鹽、TFA鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、草酸鹽、氫溴酸鹽、琥珀酸鹽、硝酸鹽、蘋果酸鹽、檸檬酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、丙酸鹽、蟻酸鹽、苯甲酸鹽、苦味酸鹽、苯磺酸鹽、十二烷基硫酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、戊二酸鹽、各種氨基酸鹽)、金屬鹽(例如，堿金屬鹽(例如，鈉鹽、鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如，鈣鹽、鎂鹽)、鋁鹽)、胺鹽(例如，三乙基胺鹽、芐基胺鹽、二乙醇胺鹽、叔丁基胺鹽、二環(huán)己胺鹽、精氨酸鹽、二甲基銨鹽、銨鹽等)等。其中，優(yōu)選為乙酸鹽或TFA鹽。

上述的肽可以使用以公知的方法合成或產(chǎn)生、分離和純化而成的物質(zhì)。

一個優(yōu)選的方式中，通過將含有核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進用組合物與抗原一起或者分別給藥；或者，通過將含有抗原和免疫誘導(dǎo)促進用組合物的疫苗藥物組合物給藥來實現(xiàn)免疫的效果的誘導(dǎo)。

本說明書中使用時，術(shù)語“免疫誘導(dǎo)促進劑”是指將一起給藥的誘導(dǎo)抗原免疫的效率與不這樣做的效率相比較、能夠改善的所有的物質(zhì)；對于促進免疫誘導(dǎo)的作用機理沒有限定，是指本說明書中特定的物質(zhì)。

一個優(yōu)選的方式中，通過給予含有核受體配體和抗原的疫苗藥物組合物來實現(xiàn)，所述核受體配體是選自由類視黃醇受體激動劑、類視黃醇X受體激動劑、甲狀腺激素受體激動劑和雌激素受體調(diào)節(jié)劑組成的組中的一種以上。

本說明書中使用時，術(shù)語“核受體配體”是指對核受體或者與其關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)起作用的物質(zhì)。一個方式中，核受體配體是免疫誘導(dǎo)促進劑的一種。

作為核受體配體，可以使用類視黃醇受體配體。進而，類視黃醇受體配體優(yōu)選為類視黃醇受體激動劑。本說明書中使用時，術(shù)語“類視黃醇受體激動劑”是指該物質(zhì)自身具有作用于類視黃醇受體的功能的物質(zhì)。作為類視黃醇受體激動劑，可列舉出：維生素A、視黃醇棕櫚酸酯、視黃醇乙酸酯、視黃醇丙酸酯、他扎羅汀、依曲替酯、維生素A酸、維甲酸、異維甲酸、阿利維甲酸、芬維A胺、他米巴羅汀、帕羅伐汀及它們的衍生物、以及它們的藥理學(xué)允許的鹽等。

作為核受體配體，可以使用類視黃醇X受體配體。進而，類視黃醇X受體配體優(yōu)選為類視黃醇X受體激動劑。

本說明書中使用時，術(shù)語“類視黃醇X受體激動劑”是指該物質(zhì)自身具有作用于類視黃醇X受體的功能的物質(zhì)。作為類視黃醇X受體激動劑，可列舉出：蓓薩羅丁及它們的衍生物、以及它們的藥理學(xué)允許的鹽等。

作為核受體配體，可以使用甲狀腺激素受體配體。進而，甲狀腺激素受體配體優(yōu)選為甲狀腺激素受體激動劑。

本說明書中使用時，術(shù)語“甲狀腺激素受體激動劑”是指該物質(zhì)自身具有作用于甲狀腺激素受體的功能的物質(zhì)。作為甲狀腺激素受體激動劑，可列舉出：替拉曲可、左旋甲狀腺素、碘塞羅寧、甲狀腺、Liotrix、Sobetirome及它們的衍生物、以及它們的藥理學(xué)允許的鹽等。

作為核受體配體，可以使用雌激素受體配體。進而，雌激素受體配體優(yōu)選為雌激素受體調(diào)節(jié)劑。

本說明書中使用時，術(shù)語“雌激素受體調(diào)節(jié)劑”是指該物質(zhì)自身具有作用于雌激素受體、具有弱的受體激動和阻礙雌激素結(jié)合的功能的物質(zhì)。作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑，可列舉出：氯米芬、雷洛昔芬、他莫昔芬、托瑞米芬及它們的衍生物、以及它們的藥理學(xué)允許的鹽等。

本說明書中所謂的“鹽”可以為任意的有機酸或無機酸，但優(yōu)選為藥理學(xué)允許的鹽。

本說明書中所謂的“藥理學(xué)允許的鹽”是指不會對給藥對象帶來有害作用且不會使疫苗藥物組合物中的配混成分的藥理活性消失的鹽，可列舉出：例如：無機酸鹽(例如，鹽酸鹽、磷酸鹽)、有機酸鹽(例如，乙酸鹽、苯二甲酸鹽、TFA鹽、檸檬酸鹽)、金屬鹽(例如，堿金屬鹽(例如，鈉鹽、鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如，鈣鹽、鎂鹽)、鋁鹽)、胺鹽(例如，三乙基胺鹽、芐基胺鹽、二乙醇胺鹽、叔丁基胺鹽、二環(huán)己基胺鹽、精氨酸鹽、二甲基銨鹽、銨鹽)等。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物中的作為上述核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑的含量，沒有特別的限定，基于組合物的總重量，優(yōu)選包含0.0001～100重量％，更優(yōu)選包含0.001～80重量％，更優(yōu)選包含0.01～50重量％。最優(yōu)選包含0.05～20重量％。

對于本發(fā)明的疫苗藥物組合物中的上述抗原含量，沒有特別限定，基于組合物的總重量優(yōu)選為0.000001～50重量％，更優(yōu)選為0.00001～20重量％。

本發(fā)明的疫苗藥物組合物中的作為上述核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑的含量，沒有特別限定，相對于1重量份抗原，優(yōu)選為0.001～10000重量份，更優(yōu)選為0.01～10000重量份。

上述免疫誘導(dǎo)促進劑的含量小于下限值0.001重量份時，不能充分地得到免疫誘導(dǎo)效果。上述免疫誘導(dǎo)促進劑的含量大于上限值10000重量份時，安全性會成為問題。

本發(fā)明的疫苗藥物組合物除了上述核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑之外，在不有損本發(fā)明效果的范圍內(nèi)，也可以進一步含有第二免疫誘導(dǎo)促進劑。對于上述第二免疫誘導(dǎo)促進劑，沒有特別的限定，可列舉出例如輔助肽等。

通過組合使用上述第二免疫誘導(dǎo)促進劑，能夠進一步有效地促進免疫誘導(dǎo)。

另外，作為第二免疫誘導(dǎo)促進劑使用輔助肽的情況下，更優(yōu)選作為細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)用的免疫部活化劑而使用。

本說明書中使用時，術(shù)語“輔助肽”是指對輔助T細(xì)胞進行活性化的所有的肽。

作為上述輔助肽的第二細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)促進劑，可列舉出例如：來自結(jié)核菌的輔助肽、來自麻疹病毒的輔助肽、來自乙型肝炎病毒的輔助肽、來自丙型肝炎病毒的輔助肽、來自沙眼的輔助肽、來自熱帶瘧原蟲孢子體的輔助肽、來自鑰孔戚血藍蛋白(keyhole limpet haemocyanin)的輔助肽、來自破傷風(fēng)毒素的輔助肽、來自百日咳毒素的輔助肽、來自白喉毒素的輔助肽、來自癌細(xì)胞的輔助肽(例如，IMA-MMP-001輔助肽、CEA-006輔助肽、MMP-001輔助肽、TGFBI-004輔助肽、HER-2/neu(aa776-790)輔助肽、AE36輔助肽、AE37輔助肽、MET-005輔助肽、BIR-002輔助肽)、通用輔助模擬物(例如，PADRE)、它們的變異肽等。其中，優(yōu)選為Peptide(肽)-25、變異Peptide-25、PADRE。

本說明書中使用時，術(shù)語“PADRE”是指由序列D-Ala Lys cyclohexyl(環(huán)己基)-Ala Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala D-Ala(序列號12)組成的13氨基酸的肽。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物和疫苗藥物組合物中的上述第二免疫誘導(dǎo)促進劑的含量沒有特別的限定，相對于1重量份的抗原，優(yōu)選為0.001～500重量份，更優(yōu)選為0.005～200重量份，進而優(yōu)選為0.01～100重量份。上述含量小于下限值0.001重量份時，不能充分地得到免疫誘導(dǎo)效果。上述含量大于上限值500重量份時，安全性存在問題。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物和疫苗藥物組合物也可以根據(jù)需要含有添加劑。上述添加劑根據(jù)基材的主要成分、上述抗原和作為上述核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑的適合性、意圖的給藥方案等，可列舉出例如：等滲劑、防腐殺菌劑、抗氧化劑、溶解劑、溶解助劑、懸浮化劑、填充劑、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定化劑、吸收促進劑、釋放速度控制劑、著色劑、增塑劑、交聯(lián)劑、粘合劑等。這些添加劑可以單獨使用或者組合使用2種以上。

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物和疫苗藥物組合物可以對皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥；優(yōu)選對體表面上給藥，更優(yōu)選經(jīng)皮給藥或經(jīng)粘膜給藥。即，本發(fā)明的疫苗藥物組合物為皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥用疫苗藥物組合物，優(yōu)選為經(jīng)皮給藥用或經(jīng)粘膜給藥用疫苗藥物組合物。通過經(jīng)皮給藥或經(jīng)粘膜給藥向?qū)ο蠼o予本發(fā)明的疫苗藥物組合物，由此能夠有效地誘導(dǎo)抗原特異的體液免疫。

本說明書中所謂的“對象”是指能夠在實用階段給予疫苗藥物組合物來誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的任何動物。上述對象典型地為包括人的哺乳類(例如，小鼠、大鼠、犬、貓、兔子、馬、牛、綿羊、豬、山羊、猴、大猩猩)。特別優(yōu)選的對象是人。

＜經(jīng)粘膜給藥用疫苗藥物組合物＞

作為上述經(jīng)粘膜給藥，可列舉出例如：舌下給藥、鼻腔給藥、頰側(cè)給藥、直腸給藥、陰道給藥等。

上述經(jīng)粘膜給藥用疫苗藥物組合物的劑型為例如，凝膠劑(啫喱劑)、霜劑、軟膏劑、硬膏劑等半固體劑；液體制劑；散劑、細(xì)粒劑、顆粒劑、薄膜劑、片劑、口腔內(nèi)崩解片(冷凍干燥型)等固體制劑；氣溶膠劑等粘膜用噴劑；吸入劑等。這些組合物的劃分、定義、性質(zhì)、制法等是該技術(shù)領(lǐng)域公知的，可以參照例如日本藥典第16版。另外，對于這些材料，沒有特別的限定，可以使用現(xiàn)有已知的物質(zhì)。

上述劑型中。優(yōu)選液體制劑、固體制劑(口腔內(nèi)崩解片(冷凍干燥型)、薄膜劑等)。

作為上述液體制劑所使用的溶劑，可列舉出：適量的水、乙醇、甘油、丙二醇等。通過在這些溶劑中分散或溶解配混成分(即，上述抗原、上述作為核受體配體劑的免疫誘導(dǎo)促進劑、根據(jù)需要的上述第二免疫誘導(dǎo)促進劑等)，從而能夠制備液體制劑。

對于上述凝膠劑(啫喱劑)所使用的基材，沒有特別的限定，可列舉出例如：羧基乙烯基聚合物、凝膠基質(zhì)、無脂肪性軟膏、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉、羧甲基纖維素、淀粉、黃原膠、刺梧桐膠、海藻酸鈉、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、乙酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP)、羧甲基乙基纖維素(CMEC)、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧基乙烯基聚合物、黃蓍膠、阿拉伯膠、塔拉膠、羅望子膠、車前子膠、瓊脂、結(jié)冷膠、葡甘露聚糖、刺槐豆膠、瓜爾豆膠、角叉菜膠、糊精、葡聚糖、直鏈淀粉、羧甲基纖維素鉀、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、普魯蘭多糖、殼聚糖、羧甲基淀粉鈉、車前屬種皮、半乳甘露聚醣、EUDRAGIT、酪蛋白、海藻酸烷基酯、明膠、聚乙二醇等水凝膠基材等。通過將這些基材溶解于溶劑中，并配混上述配混成分，從而能夠制備具有流動性的凝膠劑或具有成形性的凝膠劑。作為溶劑，優(yōu)選為水，也可以使用甘油、丙二醇等。

作為上述霜劑所使用的基材，可列舉出親水性軟膏、雪花膏等水/油型基材；親水性凡士林、精制羊毛脂、阿夸弗爾、優(yōu)塞林、Neocerin、含水羊毛脂、冷霜、親水Plastibase(液體石蠟與聚乙烯的復(fù)合軟膏基質(zhì))等油/水型基材。通過將這些基材投入到油脂系溶劑或水中，利用均質(zhì)器等進行高速攪拌，并配混上述配混成分，從而能夠制備霜劑。

作為用于上述薄膜劑的基材，沒有特別限定，例如可列舉出：聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉、羧甲基纖維素、淀粉、黃原膠、刺梧桐膠、海藻酸鈉、甲基纖維素、羧基乙烯基聚合物、瓊脂、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、乙酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP)、羧甲基乙基纖維素(CMEC)、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧基乙烯基聚合物、黃蓍膠、阿拉伯膠、刺槐豆膠、瓜爾豆膠、角叉菜膠、糊精、葡聚糖、直鏈淀粉、羧甲基纖維素鉀、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、普魯蘭多糖、殼聚糖、羧甲基淀粉鈉、車前屬種皮、半乳甘露聚醣、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物E、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物RS、甲基丙烯酸共聚物L(fēng)、甲基丙烯酸共聚物L(fēng)D、甲基丙烯酸共聚物S、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物、丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚乙烯醇縮醛二乙基氨基乙酸酯、酪蛋白及海藻酸烷基酯等。通過將這些基材溶解于水或乙醇等極性有機溶劑中，配混上述配混成分，進行薄膜涂布后使其干燥，從而能夠制備薄膜劑。

對于上述散劑、細(xì)粒劑、顆粒劑、片劑等所使用的添加劑，沒有特別的限定，可列舉出例如：乳糖、玉米淀粉、結(jié)晶纖維素等賦形劑、羥丙基纖維素、阿拉伯膠等結(jié)合劑等。將這些添加劑添加至適量的水或乙醇等溶劑中，配混上述配混成分進行混合攪拌之后，組合造粒、干燥、壓片等工序，從而能夠制備上述散劑、細(xì)粒劑、顆粒劑、片劑等。只要需要，也可以添加硬脂酸鎂等潤滑劑、羥丙基纖維素、蔗糖等包衣劑。

對于上述口腔內(nèi)崩解片(冷凍干燥型)中所使用的基材，沒有特別限定，可列舉出例如：明膠、普蘭糖等多糖類、羥丙基纖維素等水凝膠基材。另外，也可以使用甘露醇、海藻糖、山梨醇、甘氨酸等成形劑。通過將這些基材及成形劑溶解于水中，配混上述配混成分，進行分注后使其冷凍干燥，從而能夠制備口腔內(nèi)崩解片(冷凍干燥型)。

作為上述氣溶膠劑，可列舉出作為內(nèi)容物的液體制劑、流動性高的凝膠劑、霜劑、散劑等的微粉末。可以將這些內(nèi)容物使用噴霧裝置在氣體中以固體或液體的細(xì)顆粒的形式分散，由此能夠效率良好地對口腔粘膜、鼻腔粘膜等給藥部位給藥。

＜經(jīng)粘膜給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物＞

本發(fā)明的經(jīng)粘膜給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物在對象的各種核受體配體的粘膜給藥中，更有效地發(fā)揮出一起或分別給藥的各種抗原誘導(dǎo)的免疫。

作為上述經(jīng)粘膜給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物的給藥途徑和制劑，可以使用與上述經(jīng)粘膜給藥用疫苗藥物組合物同樣的給藥途徑和制劑。進而，對于上述經(jīng)粘膜給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物的制劑制備，可以使用與上述經(jīng)粘膜給藥用疫苗藥物組合物的制劑制備所使用的材料相同的材料。

＜經(jīng)皮給藥用疫苗藥物組合物＞

上述經(jīng)皮給藥用疫苗藥物組合物的劑型可以為例如：擦劑、露劑(lotion)等外用液體制劑；氣溶膠劑等外用噴劑；凝膠劑、膠帶劑、巴布劑等貼劑；軟膏劑、硬膏劑、霜劑。這些組合物的劃分、定義、性質(zhì)、制法等是該技術(shù)領(lǐng)域公知的，可以參照例如日本藥典第16版。另外，對于這些材料，沒有特別的限定，可以使用現(xiàn)有已知的物質(zhì)。

上述劑型中，優(yōu)選為霜劑、貼劑(膠帶劑、巴布劑等)。

作為上述擦劑所使用的基材，可列舉出水、乙醇、脂肪油、固體石蠟、軟石蠟、液體石蠟、甘油、石蠟油、蜜蠟、金屬皂、粘液(mucilage)、天然油(例如，杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油、橄欖油或它們的衍生物(例如，聚氧乙烯醚蓖麻油))、羊脂或其衍生物、脂肪酸和/或其酯(例如，硬脂酸、油酸、肉豆蔻酸異丙酯)。

上述露劑是將上述配混成分微細(xì)地均勻分散在水性的液體中而得到的制劑，包括懸浮性露劑和乳濁性露劑。作為懸浮劑，可列舉出阿拉伯膠、海藻酸鈉、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、膨潤土等。作為乳化劑，可列舉出月桂基硫酸鈉、失水山梨醇脂肪酸酯等。

作為上述軟膏劑中使用的基材，可列舉出：油脂類、蠟、烴化合物等通常作為疏水性基材使用的物質(zhì)。具體而言，可列舉出黃色凡士林、白色凡士林、石蠟、液體石蠟、Plastibase、有機硅等礦物性基材、蜜蠟、動植物性油脂等動植物性基材等。

作為上述霜劑所使用的基材，可列舉出親水性軟膏、雪花膏等水/油型基材；親水性凡士林、精制羊毛脂、阿夸弗爾、優(yōu)塞林、Neocerin、含水羊毛脂、冷霜、親水Plastibase等油/水型基材。

作為用于上述凝膠劑的基材，沒有特別限定，例如可列舉出羧基乙烯基聚合物、凝膠基質(zhì)、無脂肪性軟膏、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉、羧甲基纖維素、淀粉、黃原膠、刺梧桐膠、海藻酸鈉、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、乙酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP)、羧甲基乙基纖維素(CMEC)、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧基乙烯基聚合物、黃蓍膠、阿拉伯膠、塔拉膠、羅望子膠、車前子膠、瓊脂、結(jié)冷膠、葡甘露聚糖、刺槐豆膠、瓜爾豆膠、角叉菜膠、糊精、葡聚糖、直鏈淀粉、羧甲基纖維素鉀、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、普魯蘭多糖、殼聚糖、羧甲基淀粉鈉、車前屬種皮、半乳甘露聚醣、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物E、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物RS、甲基丙烯酸共聚物L(fēng)、甲基丙烯酸共聚物L(fēng)D、甲基丙烯酸共聚物S、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物、丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚乙烯醇縮醛二乙基氨基乙酸酯、酪蛋白、海藻酸烷基酯、明膠、聚乙二醇等水凝膠基材等。

作為用于上述巴布劑的基材，沒有特別限定，例如可列舉出明膠、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚丙烯酸鈉、高嶺土、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、甘油、丙二醇、水等。

上述膠帶劑優(yōu)選具有含有配混成分(即，上述抗原、作為上述核受體配體劑的免疫誘導(dǎo)促進劑、根據(jù)需要上述第二免疫誘導(dǎo)促進劑等)的粘合劑層和支撐上述粘合劑層的支撐體。還可以進一步含有在使用前不使上述粘合劑層露出，在使用時能夠容易地從述粘合劑層剝離的剝離襯墊。

對于形成上述粘合劑層的粘合劑，沒有特別限定，例如可列舉出含有丙烯酸系聚合物的丙烯酸系粘合劑；含有橡膠系彈性體的橡膠系粘合劑；有機硅橡膠、二甲基硅氧烷基質(zhì)、二苯基硅氧烷基質(zhì)等有機硅系粘合劑；聚乙烯基甲基醚、聚乙烯基乙基醚、聚乙烯基異丁基醚等乙烯基醚系粘合劑；乙酸乙烯酯-乙烯共聚物等乙烯基酯系粘合劑；對苯二甲酸二甲酯、間苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二甲酯等的羧酸成分與乙二醇等多元醇成分形成的聚酯系粘合劑等。其中，優(yōu)選丙烯酸系粘合劑、橡膠系粘合劑、有機硅系粘合劑。由于抗原的擴散/釋放性良好，因而優(yōu)選聚丙烯酸鈉等的親水性基材。

上述粘合劑層中的上述粘合劑的含量，沒有特別限定，作為固體成分，優(yōu)選為上述粘合劑層的總重量的10～90重量％，更優(yōu)選為20～80重量％。

上述丙烯酸系粘合劑含有包含(甲基)丙烯酸烷基酯作為第一單體的聚合物作為主要成分。

作為上述第一單體，可列舉出：具有碳原子數(shù)1～18的直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀烷基的(甲基)丙烯酸烷基酯等。其中，優(yōu)選為具有碳原子數(shù)4～18的直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀烷基的(甲基)丙烯酸烷基酯。進而，為了在常溫下賦予粘合性，更優(yōu)選使用使聚合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度降低的單體成分，更優(yōu)選為具有碳原子數(shù)4～8的直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀烷基(例如，丁基、戊基、己基、環(huán)己基、庚基、辛基、2-乙基己基等，優(yōu)選為丁基、2-乙基己基、環(huán)己基，特別優(yōu)選為2-乙基己基)的(甲基)丙烯酸烷基酯。

作為上述第一單體，具體而言，優(yōu)選為丙烯酸丁酯、丙烯酸2-乙基己酯、甲基丙烯酸2-乙基己酯、丙烯酸環(huán)己酯、甲基丙烯酸環(huán)己酯，特別優(yōu)選為丙烯酸2-乙基己酯。這些第一單體可以單獨使用一種或者組合2種以上使用。

上述第一單體也可以與第二單體共聚，作為這樣的第二單體，可列舉出：具有使用交聯(lián)劑時能夠成為交聯(lián)點的官能團的單體。作為能夠參與交聯(lián)反應(yīng)的官能團，可列舉出羥基、羧基、乙烯基等，優(yōu)選為羥基、羧基。

作為上述第二單體，具體而言，可列舉出：(甲基)丙烯酸羥基乙酯、(甲基)丙烯酸羥丙基酯、N-羥基烷基(甲基)丙烯酰胺、(甲基)丙烯酸、衣康酸、馬來酸、馬來酸酐、中康酸、檸康酸、戊烯二酸等。其中，從獲得的容易性的觀點出發(fā)，優(yōu)選為丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸羥基乙酯(特別是丙烯酸2-羥基乙酯)，特別優(yōu)選為丙烯酸。這些第二單體可以單獨使用或者組合2種以上使用。

上述第一單體和第二單體也可以進一步與第三單體共聚。

作為上述第三單體，可列舉出例如：乙酸乙烯酯、丙酸乙烯酯等乙烯基酯類；甲基乙烯基醚、乙基乙烯基醚等乙烯基醚類；N-乙烯基-2-吡咯烷酮、N-乙烯基己內(nèi)酰胺等乙烯基酰胺類；(甲基)丙烯酸甲氧基乙酯、(甲基)丙烯酸乙氧基乙酯、(甲基)丙烯酸四氫糠基酯等(甲基)丙烯酸烷氧基酯；(甲基)丙烯酸羥丙基酯、α-羥基甲基丙烯酸酯等含羥基單體(由于作為第三單體使用，所以不是交聯(lián)點)；(甲基)丙烯酰胺、二甲基(甲基)丙烯酰胺、N-丁基(甲基)丙烯酰胺、N-羥甲基(甲基)丙烯酰胺等具有酰胺基的(甲基)丙烯酸衍生物；(甲基)丙烯酸氨基乙酯、(甲基)丙烯酸二甲基氨基乙酯、(甲基)丙烯酸叔丁基氨基乙酯等(甲基)丙烯酸氨基烷基酯；(甲基)丙烯酸甲氧基乙二醇酯、(甲基)丙烯酸甲氧基二乙二醇酯、(甲基)丙烯酸甲氧基聚乙二醇酯、(甲基)丙烯酸甲氧基聚丙二醇酯等(甲基)丙烯酸烷氧基亞烷基二醇酯；(甲基)丙烯腈；苯乙烯磺酸、烯丙基磺酸、(甲基)丙烯酸磺基丙酯、(甲基)丙烯酰氧基萘磺酸、丙烯酰胺甲磺酸等具有磺酸的單體；乙烯基哌啶烷酮、乙烯基嘧啶、乙烯基哌嗪、乙烯基吡咯、乙烯基咪唑、乙烯基惡唑、乙烯基嗎啉等含乙烯基的單體等。其中，優(yōu)選乙烯基酯類、乙烯基酰胺類；乙烯基酯類優(yōu)選乙酸乙烯酯，乙烯基酰胺類優(yōu)選N-乙烯基-2-吡咯烷酮。這些第三單體可以單獨使用或者組合2種以上使用。

是上述(甲基)丙烯酸烷基酯(第一單體)與上述具有能夠參與交聯(lián)反應(yīng)的官能團的乙烯基單體(第二單體)的共聚物的情況下，上述(甲基)丙烯酸烷基酯與上述具有能夠參與交聯(lián)反應(yīng)的官能團的乙烯基單體的重量比優(yōu)選為99～85：1～15，更優(yōu)選為99～90：1～10。

是上述(甲基)丙烯酸烷基酯(第一單體)、上述具有能夠參與交聯(lián)反應(yīng)的官能團的乙烯基單體(第二單體)與除此以外的其他單體(第三單體)的共聚物的情況下，上述(甲基)丙烯酸烷基酯、上述具有能夠參與交聯(lián)反應(yīng)的官能團的乙烯基單體與除此以外的其他單體的重量比優(yōu)選為40～94：1～15：5～50，更優(yōu)選為50～89：1～10：10～40。

對于聚合反應(yīng)，沒有特別的限定，可以用現(xiàn)有已知的方法進行，可列舉出例如：添加聚合引發(fā)劑(例如，過氧化苯甲酰、偶氮雙異丁腈)，在溶劑(例如，乙酸乙酯)中使上述的單體在50～70℃下反應(yīng)5～48小時的方法。

上述丙烯酸系粘合劑更優(yōu)選含有：丙烯酸2-乙基己酯/丙烯酸/N-乙烯基-2-吡咯烷酮的共聚物、丙烯酸2-乙基己酯/N-(2-羥基乙基)丙烯酰胺/N-乙烯基-2-吡咯烷酮的共聚物、丙烯酸2-乙基己酯/丙烯酸2-羥基乙酯/乙酸乙烯酯的共聚物、丙烯酸2-乙基己酯/丙烯酸的共聚物，特別優(yōu)選含有丙烯酸2-乙基己酯/丙烯酸/N-乙烯基-2-吡咯烷酮的共聚物。

可以對上述丙烯酸系粘合劑利用紫外線照射、電子束照射等放射線照射實施物理的交聯(lián)處理，也可以使用三官能性異氰酸酯等異氰酸酯系化合物、有機過氧化物、有機金屬鹽、金屬醇鹽、金屬螯合化合物、多官能性化合物(例如，多官能性外部交聯(lián)劑、二(甲基)丙烯酸酯等多官能性內(nèi)部交聯(lián)用單體)等交聯(lián)劑實施化學(xué)的交聯(lián)處理。

對于形成上述橡膠系粘合劑的橡膠系彈性體，沒有特別的限定，可列舉出例如：聚異丁烯-聚丁烯系、苯乙烯-二烯-苯乙烯嵌段共聚物、苯乙烯-丁二烯系、腈系、氯丁二烯系、乙烯基吡啶系、聚異丁烯系、丁基系、異戊二烯-異丁烯系等。其中，從對于上述配混成分的溶解性和皮膚粘接性的觀點出發(fā)，優(yōu)選聚異丁烯(PIB)、苯乙烯-二烯-苯乙烯嵌段共聚物(例如，苯乙烯-丁二烯-苯乙烯嵌段共聚物(SBS)、苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯嵌段共聚物(SIS))。這些橡膠系彈性體可以單獨使用一種或者組合2種以上使用。

作為上述橡膠系粘合劑，為了得到合適的粘附力和對于上述配混成分的溶解性，以同一成分或不同成分計，將平均分子量不同的橡膠系彈性體混合來使用。優(yōu)選例如，平均分子量15萬～550萬的高分子量的聚異丁烯與平均分子量1萬～15萬的中分子量的聚異丁烯和/或平均分子量500～4000的低分子量聚異丁烯的混合物。相對于聚異丁烯的總體量，高分子量的聚異丁烯的配混量為10～80重量％，優(yōu)選為20～70重量％。相對于聚異丁烯的總體量，中分子量的聚異丁烯的配混量為0～90重量％，優(yōu)選為10～80重量％。相對于聚異丁烯的總體量，低分子量的聚異丁烯的配混量為0～80重量％，優(yōu)選為10～60重量％。

本說明書中所謂的“平均分子量”是指利用Flory的粘度式計算的粘均分子量，其是由20℃下的烏氏粘度計的毛細(xì)管1的流動時間利用Schulz-Blaschke式算出斯托丁格指數(shù)(Staudinger Index)(J₀)，使用該J₀值通過下述式求出的。

(式)

J₀＝η_sp/c(1+0.31η_s。)(Schulz-Blaschke式)

η_sp＝t/t₀-1

t：溶液的流動時間(利用Hagenbach-couette校正公式)

t₀溶劑的流動時間(利用Hagenbach-couette校正公式)

c：溶液的濃度(g/cm³)

粘均分子量

在上述橡膠系粘合劑中，為了賦于適度的粘合性，可以配混例如松香系樹脂、聚萜烯樹脂、香豆酮-茚樹脂、石油系樹脂、萜烯-酚醛樹脂、二甲苯樹脂、脂環(huán)族飽和烴樹脂等增粘劑。這些增粘劑可以單獨使用1種或者組合使用2種以上。

上述增粘劑的含量以上述橡膠系粘合劑的總重量為基準(zhǔn)優(yōu)選為50重量％以下、更優(yōu)選為5～40重量％。

作為上述有機硅系粘合劑，可列舉出：包含有機聚硅氧烷系、聚二甲基硅氧烷系、聚二甲基二苯基硅氧烷系等的有機硅系粘合劑。其中，優(yōu)選使用來自Dow Corning Corporation公司制造的BIO PSA這樣的商業(yè)上能獲得的有機硅系粘合劑。

上述粘合劑層也可以進一步含有皮膚滲透性增強劑。

本說明書中的“皮膚滲透性增強劑”是指能夠改善經(jīng)皮給藥的抗原透過皮膚的效率的所有的物質(zhì)。

作為上述皮膚滲透性增強劑，優(yōu)選在室溫(25℃)下為液態(tài)(即，具有流動性)。在混合使用2種以上的皮膚滲透性增強劑時，優(yōu)選最終混合物在室溫(25℃)下為液態(tài)，具有皮膚滲透促進效果。作為這樣的有機液態(tài)成分，從與上述粘合劑層中的相容性的觀點考慮，優(yōu)選疏水性液態(tài)成分。

作為上述皮膚滲透性增強劑，可列舉出：高級醇、脂肪酸酯、多元醇脂肪酸酯。

作為上述高級醇，優(yōu)選碳原子數(shù)8～18的高級醇，更優(yōu)選碳原子數(shù)8～14的高級醇。作為上述脂肪酸酯，優(yōu)選為碳原子數(shù)8～18的脂肪酸與碳原子數(shù)1～18的一元醇的脂肪酸酯，更優(yōu)選為碳原子數(shù)12～16的脂肪酸與碳原子數(shù)1～18的一元醇的脂肪酸酯。其中，優(yōu)選為脂肪酸酯，特別優(yōu)選為肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、癸二酸二乙酯。

上述皮膚滲透性增強劑具體可列舉出油醇、辛基十二烷醇等高級醇；甘油、乙二醇、聚丙二醇等多元醇；油酸、辛酸等高級脂肪酸；肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、油酸乙酯等脂肪酸酯；癸二酸二乙酯、己二酸二異丙酯等多元酸酯；三異硬脂酸二甘油酯、單油酸失水山梨醇酯、二辛酸丙二醇酯、單月桂酸聚乙二醇酯、四油酸聚氧乙烯山梨糖醇酯等多元醇脂肪酸酯；聚氧乙烯月桂基醚等聚氧乙烯烷基醚；角鯊?fù)?、液體石蠟等烴；橄欖油、蓖麻油等植物油；硅油；N-甲基吡咯烷酮、N-十二烷基吡咯烷酮等吡咯烷酮類；癸基甲基亞砜等亞砜。這些皮膚滲透性增強劑可以單獨使用一種或者組合2種以上使用。

使用上述丙烯酸系粘合劑或上述橡膠系粘合劑的情況下，作為上述皮膚滲透性增強劑，可以使用例如，聚乙烯基吡咯烷酮、交聯(lián)聚維酮、聚丙二醇、聚乙烯醇、羧基乙烯基聚合物、羥丙基纖維素或者它們的混合物。其中，優(yōu)選為聚乙烯基吡咯烷酮、交聯(lián)聚維酮、聚丙二醇。

對于上述粘合劑層中的上述皮膚滲透性增強劑的含量，沒有特別的限定,優(yōu)選為上述粘合劑層總重量的0.1～70重量％，更優(yōu)選為1～65重量％，進而優(yōu)選為5～60重量％。上述皮膚滲透性增強劑的含量為0.1重量％以上的情況下,能夠得到高的皮膚滲透促進效果。上述皮膚滲透性增強劑的含量為70重量％以下時，能夠抑制上述粘合劑層整體的粘附力、內(nèi)聚力的降低且得到高的皮膚滲透促進效果。

對于上述粘合劑層的厚度，沒有特別的限定，優(yōu)選為10～1000μm。通過設(shè)為上述范圍的厚度，從而使上述粘合劑層含有有效量的上述配混成分、使其發(fā)揮充分的粘合力、形成上述粘合劑層等變得容易。

對于上述支撐體沒有特別限定，優(yōu)選為實質(zhì)上對上述配混成分具有不滲透性的物質(zhì)，即不會發(fā)生上述粘合劑層中所含的上述抗原、作為上述核受體配體劑的免疫誘導(dǎo)促進劑、根據(jù)需要上述第二免疫誘導(dǎo)促進劑等通過支撐體而自背面流失從而含量降低的支撐體。

作為上述支撐體，例如可列舉出：聚酯、聚酰胺、聚偏氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、乙烯-丙烯酸乙酯共聚物、聚四氟乙烯、離聚物樹脂、金屬箔等單獨的薄膜或它們的層疊薄膜等。其中，為了使上述支撐體與上述粘合劑層的粘接性(錨固性)提高，而優(yōu)選為由上述材質(zhì)形成的無孔的塑料薄膜與多孔薄膜的層疊薄膜。該情況下，上述粘合劑層優(yōu)選在多孔薄膜側(cè)形成。

作為上述多孔薄膜，只要提高與上述粘合劑層的錨固性就沒有特別限定，例如可列舉出紙、織布、無紡布、編織布、實施了機械穿孔處理的片等。其中，從操作性等的觀點考慮，優(yōu)選為紙、織布、無紡布。上述多孔薄膜的厚度從錨固性提高、膠帶劑的柔軟性及貼附操作性等方面考慮，優(yōu)選為1～200μm。另外，織布或無紡布時，上述多孔薄膜的單位面積重量優(yōu)選為5～30g/m²，更優(yōu)選為6～15g/m²。

特別是作為上述支撐體，優(yōu)選厚度1.5～6μm的聚酯薄膜(優(yōu)選為聚對苯二甲酸乙二醇酯薄膜)與單位面積重量6～15g/m²的聚酯(優(yōu)選聚對苯二甲酸乙二醇酯)制無紡布的層疊薄膜。

作為上述剝離襯墊，只要能夠進行剝離處理，并確保足夠輕的剝離力就沒有特別限定，例如可列舉出通過在與上述粘合劑層的接觸面涂布有機硅樹脂、氟樹脂等而實施了剝離處理的聚酯、聚氯乙烯、聚偏氯乙烯、聚對苯二甲酸乙二醇酯等的薄膜、優(yōu)質(zhì)紙、玻璃紙等紙、優(yōu)質(zhì)紙或玻璃紙等與聚烯烴的層壓薄膜等。

上述剝離襯墊的厚度優(yōu)選為10～200μm，更優(yōu)選為25～100μm。

特別是作為上述剝離襯墊，從阻隔性、價格等方面考慮，優(yōu)選由聚酯(特別是聚對苯二甲酸乙二酯)樹脂形成。在此情況下，從操作性方面考慮，厚度優(yōu)選為25～100μm左右。

＜經(jīng)皮給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物＞

本發(fā)明的經(jīng)皮給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物在對象的各種核受體配體的經(jīng)皮給藥中，更有效地發(fā)揮出一起或分別給藥的各種抗原誘導(dǎo)的免疫。

作為上述經(jīng)皮給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物的制劑，可以使用與上述經(jīng)皮給藥用疫苗藥物組合物相同的制劑。進而，對于上述經(jīng)皮給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物的制劑制備，可以使用與上述經(jīng)皮給藥用疫苗藥物組合物的制劑制備所使用的材料相同的材料。

＜皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥用疫苗藥物組合物＞

上述皮內(nèi)、皮下或肌內(nèi)給藥用疫苗藥物組合物的劑型只要是具有例如液體制劑、水溶性或疏水性的懸浮劑、霜劑等能夠注射給藥程度的流動性的劑型即可。這些組合物的劃分、定義、性質(zhì)、制法等是該技術(shù)領(lǐng)域公知的，可以參照例如日本藥典第16版。另外，對于這些材料，沒有特別的限定，可以使用現(xiàn)有已知的物質(zhì)。

作為用于上述液體制劑的溶劑，可列舉出適量的水、生理鹽水、乙醇、甘油、丙二醇等。通過使上述配混成分分散或溶解在這些溶劑中，從而能夠制備液體制劑。

對于上述水溶性懸浮劑所使用的基材，沒有特別的限定，可列舉出例如：羧基乙烯基聚合物、凝膠基質(zhì)、無脂肪性軟膏、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉、羧甲基纖維素、淀粉、黃原膠、刺梧桐膠、海藻酸鈉、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、乙酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP)、羧甲基乙基纖維素(CMEC)、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧基乙烯基聚合物、黃蓍膠、阿拉伯膠、塔拉膠、羅望子膠、車前子膠、瓊脂、結(jié)冷膠、葡甘露聚糖、刺槐豆膠、瓜爾豆膠、角叉菜膠、糊精、葡聚糖、直鏈淀粉、羧甲基纖維素鉀、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、普魯蘭多糖、殼聚糖、羧甲基淀粉鈉、車前屬種皮、半乳甘露聚醣、EUDRAGIT、酪蛋白、海藻酸烷基酯、明膠、聚乙二醇等水凝膠基材等。通過將這些基材溶解于溶劑中，并配混上述配混成分，從而能夠制備具有流動性的懸浮劑。作為溶劑，優(yōu)選為生理鹽水，也可以使用甘油、丙二醇等。

作為上述疏水性懸浮劑所使用的基材，可列舉出親水性軟膏、雪花膏等水/油型基材；親水性凡士林、精制羊毛脂、阿夸弗爾、優(yōu)塞林、Neocerin、含水羊毛脂、冷霜、親水Plastibase等油/水型基材。通過將這些基材投入到油脂系溶劑或水中，利用均質(zhì)器等進行高速攪拌，并配混上述配混成分，從而能夠制備油脂系懸浮劑。

＜皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物＞

本發(fā)明的皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物在對象的各種核受體配體的皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥中，更有效地發(fā)揮出一起或分別給藥的各種抗原誘導(dǎo)的免疫。

作為上述皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物的制劑，可以使用與上述皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥用疫苗藥物組合物相同的制劑。進而，對于上述皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥用免疫誘導(dǎo)促進用組合物的制劑制備，可以使用與上述皮內(nèi)、皮下或肌肉給藥用疫苗藥物組合物的制劑制備所使用的材料相同的材料。

向?qū)ο蠼o予本發(fā)明的疫苗藥物組合物時，上述抗原的治療上有效量根據(jù)疾病的嚴(yán)重程度、對象的年齡及相對的健康以及其它已知的因素而可以大范圍地變化，通常，1天用量約0.1μg～1g/kg體重能夠得到令人滿意的結(jié)果。將上述作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑與上述抗原同時或逐次給藥，優(yōu)選為同時給藥。

另外，向?qū)ο蠼o予本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物時、以及向?qū)ο蠼o予含有免疫誘導(dǎo)促進用組合物的疫苗藥物組合物時，上述作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑的治療上有效量根據(jù)所使用的具體的核受體配體、其他免疫誘導(dǎo)促進劑的有無等可以在寬范圍內(nèi)變化，通常，1天用量約0.1μg～1g/kg體重能夠得到令人滿意的結(jié)果。

需要說明的是，可以將1天用量1次給藥；也可以分為2次以上(例如，2次、3次、4次、5次等)多次來給藥。每1次的連續(xù)給藥時間優(yōu)選在1分鐘～7天之間適宜選擇。給藥間隔可以為每天1次～1年1次(例如，1天1次、2天1次、3天1次、1周1次、2周1次、1個月1次、3個月1次、6個月1次、1年1次)或者更長的給藥間隔，可以根據(jù)患者的狀態(tài)、疾病的重癥度、治療目的或預(yù)防目的等而適宜選擇。通常，對于現(xiàn)實中患有重度疾病的患者的治療目的，以更高頻率和/或高用量給予本發(fā)明的疫苗藥物組合物；對于不具有疾病的患者的預(yù)防目的，以更低頻率和/或低用量給予本發(fā)明的疫苗藥物組合物。

發(fā)明的效果

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物和疫苗藥物組合物由于能夠非侵入地體表面上的給藥(例如，經(jīng)皮給藥或經(jīng)粘膜給藥)或者低侵入地皮膚表面上的給藥(例如，進行膠帶剝離等角質(zhì)剝離處理、以及微針、電穿孔等角質(zhì)穿孔處理的皮膚表面的給藥等)，由此能夠得到優(yōu)異的應(yīng)變性。即，在疼痛、恐懼心理、注射痕和緊隨的瘢痕化、進行重復(fù)給藥的情況下經(jīng)?；蚨ㄆ谌メt(yī)院成為患者的生活負(fù)擔(dān)等患者的QOL觀點產(chǎn)生的問題被降低。另外，由于給藥是簡便的，所以能夠患者自行給藥，能夠避免醫(yī)療從業(yè)者的針刺感染事故的風(fēng)險，不會產(chǎn)生注射針等需要特殊廢棄的醫(yī)療廢棄物。

本發(fā)明的免疫活化組合物和疫苗藥物組合物有如下優(yōu)點：只要為膠帶劑、巴布劑等貼劑的形式，則能夠切實地給予規(guī)定的給藥量，能夠任意地控制藥物釋放速度，另外，在給藥時不會附著于其他部位。進而，貼劑有如下優(yōu)點：由于能夠容易地拆卸，所以在副作用產(chǎn)生的情況等通過由施用部位去除貼劑，能夠由患者自己立即中止給藥。

通過給予本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物或疫苗藥物組合物，與抗原的單獨給藥相比較，抗體產(chǎn)生誘導(dǎo)效果顯著地提高。

附圖說明

圖1是表示將實施例1～8、比較例1～2中得到的經(jīng)皮給藥用霜劑經(jīng)皮給藥時的小鼠脾細(xì)胞中的IFN-γ產(chǎn)生細(xì)胞點數(shù)的評價結(jié)果的圖。

圖2是表示將實施例9～20、比較例3～8中得到的經(jīng)皮給藥用膠帶劑經(jīng)皮給藥時的小鼠脾細(xì)胞中的IFN-γ產(chǎn)生細(xì)胞點數(shù)的評價結(jié)果的圖。

圖3是表示將實施例21～28、比較例9中得到的鼻腔給藥用液體制劑鼻腔給藥時的小鼠血清中OVA特異性IgG抗體效價結(jié)果的圖。

圖4是表示將實施例29～36、比較例10中得到的舌下給藥用液體制劑舌下給藥時的小鼠血清中OVA特異性IgG抗體效價結(jié)果的圖。

圖5是表示將實施例37～52、比較例11～12中得到的舌下給藥用固體制劑舌下給藥時的小鼠血清中OVA特異性IgG抗體效價結(jié)果的圖。

圖6是表示將實施例53～56、比較例13中得到的皮下給藥用液體制劑皮下給藥時的小鼠血清中OVA特異性IgG抗體效價結(jié)果的圖。

圖7是表示將實施例57～60、比較例14中得到的經(jīng)皮給藥用霜劑經(jīng)皮給藥時的小鼠血清中OVA特異性IgG抗體效價結(jié)果的圖。

具體實施方式

以下，示出實施例，對本發(fā)明具體地進行說明，但本發(fā)明并不限定于這些實施例。

(實施例1～8、比較例1～2)

(經(jīng)皮給藥用霜劑的制備)

制備具有下述表1的組成的經(jīng)皮給藥用霜劑。具體而言，以下述表1中所示的配混量配混下述所示的抗原肽5重量％、核受體配體3重量％、根據(jù)需要的輔助肽1重量份和二甲基亞砜(DMSO)15重量％，向其中加入基材(基質(zhì)霜)成為總計100重量％，進行混和，從而得到經(jīng)皮給藥用霜劑。使用的基質(zhì)霜用表14所述的組成配混材料，混和并制備。白色凡士林、失水山梨醇單硬脂酸酯、異硬脂酸、芐醇、硬脂醇、聚山梨醇酯60、濃甘油、二甲基亞砜(DMSO)是從和光純藥工業(yè)買到的。鯨蠟醇從東京化成工業(yè)買到。

準(zhǔn)備將PET薄膜/PET無紡布層疊品(面積0.7cm²)與固定用粘合帶的中央部以PET薄膜側(cè)作為膠帶側(cè)貼合而成的復(fù)合基材。在該復(fù)合基材的無紡布部分涂布經(jīng)皮給藥用霜劑4mg，將其作為免疫試驗的給藥樣品。

(核受體配體)

維甲酸(all-trans(全反)視黃酸、和光純藥工業(yè)公司制)

異維甲酸(13-cis(順)視黃酸、Sigma-Aldrich公司制)

阿利維甲酸(9-cis視黃酸、和光純藥工業(yè)公司制)

蓓薩羅丁(Sigma-Aldrich公司制)

(抗原肽)

OVAp(OVA肽、序列Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu(序列號13)的8氨基酸的肽)

(輔助肽)

PADRE

＜評價1＞

對于實施例、比較例中得到的經(jīng)皮給藥用霜劑，進行以下的評價。

(細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)效果的評價)

按照以下的步驟，使用經(jīng)皮給藥用霜劑，使用免疫評價用模型動物進行小鼠免疫試驗。之后，通過ELISPOT法評價抗原特異的細(xì)胞性免疫的誘導(dǎo)水平。將評價結(jié)果示于圖1中。

(1)免疫評價用模型動物

此處所說的“免疫評價用模型動物”是指用于評價疫苗藥物組合物(此處，經(jīng)皮給藥用霜劑)的免疫誘導(dǎo)特性的模型動物，具體而言，是指用于評價經(jīng)皮給藥用霜劑的細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)水平的模型動物。

作為免疫評價用模型動物，考慮到經(jīng)皮給藥用霜劑中的抗原與動物MHC類1分子的合適性，使用能夠評價利用經(jīng)皮給藥用霜劑中的抗原的細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)的動物。

即，抗原為HLA-A*24型MHC限制性類1肽的情況下，用BALB/c小鼠進行評價?？乖瓰镠LA-A*02型MHC限制性肽的情況下，使用能夠評價利用HLA-A*02型MHC限制性肽的細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)的基因變異小鼠進行評價?？乖瓰槠渌鸋LA型的MHC限制性肽的情況下，使用能夠評價利用該HLA型MHC限制性肽的細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)的動物進行評價。

(2)經(jīng)皮給藥用霜劑的小鼠免疫試驗

將下述表1中所示的小鼠的背部剃毛，設(shè)置用于使由剃毛帶來的皮膚損傷恢復(fù)的飼養(yǎng)期間，之后，對小鼠的背部皮膚給予經(jīng)皮給藥用霜劑4mg 24小時，去除，進行6天的飼養(yǎng)。自給藥起經(jīng)過6天之后摘除脾臟，制備脾細(xì)胞懸濁液。向固定化了抗小鼠IFN-γ抗體的ELISPOT平板的孔中，與培養(yǎng)液一起加入脾細(xì)胞(1×10⁶個細(xì)胞/孔)和抗原肽(100μM)，在37℃、5％CO₂的培養(yǎng)條件下進行20小時共培養(yǎng)，用ELISPOT法評價IFN-γ產(chǎn)生細(xì)胞點數(shù)。將IFN-γ產(chǎn)生細(xì)胞點數(shù)作為“免疫結(jié)果”示于下述表1中。

[表1]

(實施例9～20、比較例3～8)

(經(jīng)皮給藥用膠帶劑的制備)

制備具有下述表2組成的經(jīng)皮給藥用膠帶劑。具體而言，以下述表2中所示的配混量配混下述所示的抗原肽、核受體配體和輔助肽，在其中將下述表2中所示的粘性基材和有機溶劑(乙酸乙酯)以有機溶劑干燥后的各成分與粘性基材的總計成為100重量％的方式進行配混、混和，從而制備粘合劑溶液。以干燥后的厚度成為約80μm的方式將得到的粘合劑溶液涂敷于剝離襯墊，通過干燥去除有機溶劑，從而形成粘合劑層。作為剝離襯墊，使用實施了有機硅剝離處理的聚對苯二甲酸乙二酯(PET)制襯墊(厚度75μm)。使得到的粘合劑層與支撐體貼合，從而得到經(jīng)皮給藥用膠帶劑。作為支撐體，使用聚對苯二甲酸乙二酯(PET)薄膜(厚度25μm)。

將該經(jīng)皮給藥用膠帶劑以成為面積0.7cm²的方式切出，將其作為免疫實驗的給藥樣品。給藥時，將剝離襯墊剝離進行給藥。

(核受體配體)

維甲酸(all-trans視黃酸、和光純藥工業(yè)公司制)

(抗原肽)

HER2/neu＿E75(HER2/neu＿E75肽、癌抗原肽)

IPEP87(IPEP87肽、來自感染性病原體的抗原)

MAGE-A3＿A02(MAGE3＿A02肽、癌抗原肽)

(輔助肽)

PADRE

(粘性基材)

丙烯酸(在非活性氣體氣氛下，使丙烯酸2-乙基己酯75份、N-乙烯基-2-吡咯烷酮22份、丙烯酸3份和偶氮雙異丁腈0.2份在乙酸乙酯中60℃下進行溶液聚合而得到的丙烯酸系粘合劑溶液)

PIB(將聚異丁烯(OppanolB200、BASF公司制)24份、聚異丁烯(OppanolB12、BASF公司制)36份和脂環(huán)族系石油樹脂(AlconP-100、荒川化學(xué)公司制)40份溶解于甲苯中而得到的PIB粘合劑溶液)

＜評價2＞

對于實施例、比較例中得到的經(jīng)皮給藥用膠帶劑，進行以下的評價。

(細(xì)胞性免疫誘導(dǎo)效果的評價)

通過與經(jīng)皮給藥用霜劑的評價同樣的操作，對抗原特異的細(xì)胞性免疫的誘導(dǎo)水平進行評價。將評價結(jié)果示于圖2中。

[表2]

(實施例21～36、比較例9～10)

(經(jīng)粘膜給藥用液體制劑的制備)

制備具有下述表3和4組成的經(jīng)粘膜給藥(鼻腔給藥或舌下給藥)用液體制劑。具體而言，以下述表3和4中所示的配混量將抗原(卵清蛋白(OVA))、作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑配混，向其中加入生理鹽水，鼻腔給藥為10μL或者舌下給藥為30μL，進行混和，從而得到經(jīng)粘膜給藥(鼻腔給藥或舌下給藥)用液體制劑。

(核受體配體)

維甲酸(all-trans視黃酸、和光純藥工業(yè)公司制)

異維甲酸(13-cis視黃酸、Sigma-Aldrich公司制)

阿利維甲酸(9-cis視黃酸、和光純藥工業(yè)公司制)

左旋甲狀腺素鈉水合物(Sigma-Aldrich公司制)

碘塞羅寧(Sigma-Aldrich公司制)

氯米芬檸檬酸鹽(Sigma-Aldrich公司制)

雷洛昔芬鹽酸鹽(LKT Laboratories公司制)

他莫昔芬檸檬酸鹽(和光純藥工業(yè)公司制)

(實施例37～52、比較例11～12)

(舌下給藥用固體制劑的制備)

制備具有下述表5組成的舌下給藥用固體制劑(冷凍干燥制劑或薄膜劑)。具體而言，以下述表5中所示的配混量配混抗原(卵清蛋白(OVA))、作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑、作為基材的羥丙基纖維素(HPC-SSL、日本曹達公司制)，向其中加入生理鹽水，進行混和，從而得到制劑溶液。之后，分注制劑溶液25mg，進行冷凍干燥而得到冷凍干燥制劑，或者進行減壓干燥而得到薄膜劑。對于作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑，可以使用與經(jīng)粘膜給藥用液體制劑的制備中所使用的免疫誘導(dǎo)促進劑同樣的物質(zhì)。

＜評價3＞

對于實施例、比較例中得到的經(jīng)粘膜給藥用液體制劑或舌下給藥用固體制劑，進行以下的評價。

(體液免疫誘導(dǎo)效果的評價)

按照以下的步驟，使用經(jīng)粘膜給藥用液體制劑或舌下給藥用固體制劑，使用免疫評價用模型動物進行小鼠免疫試驗。之后，通過測定小鼠血清中的抗原(OVA)特異性IgG抗體，評價全身性免疫應(yīng)答。將評價結(jié)果示于圖3～5中。

(1)經(jīng)粘膜給藥用液體制劑或舌下給藥用固體制劑的小鼠免疫試驗

對于預(yù)先準(zhǔn)備的小鼠(BALB/c小鼠、雌性7周齡)進行麻醉處理之后，對于各小鼠，鼻腔給藥(實施例21～28、比較例9)10μL、舌下給藥(實施例29～36、比較例10)30μL的經(jīng)粘膜給藥用液體制劑，另外，給予舌下給藥用固體制劑(實施例37～52、比較例11～12)。在該給藥1周之后，再次對小鼠實施麻醉，分別進行同樣的給藥。由第2次給藥起進而1周之后，采集小鼠血清。

(2)ELISA法

(小鼠血清中的抗原特異性IgG抗體效價測定方法(ELISA法))

向ELISA用96孔平板中添加用碳酸緩沖液稀釋的含有OVA的溶液(100μg/mL)各100μL，放置一晩。

將事先預(yù)備的清洗液(含Tween20的PBS)清洗3次孔，將封閉劑(Block Ace、大日本住友制藥公司制)用純化水稀釋成4g/100mL的封閉溶液對各孔各添加200μL，在室溫下放置2小時。之后，用清洗液清洗3次孔。

對采集的小鼠血清在4℃、3000g下進行10分鐘離心分離，并回收上清。使用將封閉劑用磷酸鹽緩沖液(NACALAI TESQUE,INC.制)稀釋至0.4g/100mL而成的溶液，將上清各2倍梯度稀釋，將該溶液分別向孔中各添加50μL，在室溫下放置2小時。

之后，用清洗液清洗3次孔。用將封閉劑用磷酸鹽緩沖液(NACALAI TESQUE,INC.制)稀釋至0.4g/100mL的溶液，將HRP標(biāo)記的抗小鼠IgG抗體(Goat-anti mouse IgG Fc HRP、BETHYL)稀釋至10000倍，向孔中各添加100μL該溶液，在室溫下放置1小時。

之后，用清洗液對孔進行3次清洗，向孔中添加TMB溶液(ELISA POD TMB試劑盒、NACALAI TESQUE,INC.制)各100μL，在暗處放置30分鐘。

之后，向孔中添加各100μL、1M硫酸用液，對于該96孔平板，用酶標(biāo)儀(SpectraMax M2^e、Molecular Devices公司制)測定450nm的吸光度。基于梯度稀釋時的吸光度，用Log2求出小鼠血清中的IgG抗體效價。

[表3]

[表4]

[表5]

(實施例53～56、比較例13)

(皮下給藥用液體制劑的制備)

制備具有下述表6組成的皮下給藥用制劑。具體而言，以下述表6中所示的配混量配混抗原(卵清蛋白(OVA))、作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑，向其中加入生理鹽水制成為200μL、進行混和，得到皮下給藥用液體制劑。

＜評價4＞

對于實施例、比較例中得到的皮下給藥用制劑，進行以下的評價。

(體液免疫誘導(dǎo)效果的評價)

按照以下的步驟，使用皮下給藥用制劑、使用免疫評價用模型動物進行小鼠免疫試驗。之后，通過測定小鼠血清中的抗原(OVA)特異性IgG抗體，評價全身性免疫應(yīng)答。將評價結(jié)果示于圖6中。

(1)皮下給藥用制劑的小鼠免疫試驗

對于預(yù)先準(zhǔn)備的小鼠(BALB/c小鼠、雌性7周齡)進行了麻醉處理之后，對于各小鼠，對于小鼠背部皮下給藥200μL。在該給藥1周之后，再次對小鼠實施麻醉，分別進行同樣的給藥。由第2次給藥起進而1周之后，采集小鼠血清。

(2)ELISA法

通過與＜評價3＞相同的操作，通過ELISA法測定小鼠血清中的抗原(OVA)特異性IgG抗體。

[表6]

(實施例57～60、比較例14)

(經(jīng)皮給藥用霜劑的制備)

制備具有下述表7組成的經(jīng)皮給藥用霜劑。具體而言，以下述表7中所示的配混量，配混抗原(卵清蛋白(OVA))、核受體配體，向其中加入基材(基質(zhì)霜)成為總100重量份，進行混和，得到經(jīng)皮給藥用霜劑。使用的基質(zhì)霜用表14所述的組成配混材料，混和并制備。

對于作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑，使用與鼻腔或舌下給藥用液體制劑的制備中所使用的免疫誘導(dǎo)促進劑同樣的物質(zhì)。白色凡士林、失水山梨醇單硬脂酸酯、異硬脂酸、芐醇、硬脂醇、聚山梨醇酯60、濃甘油從和光純藥工業(yè)買到。鯨蠟醇從東京化成工業(yè)買到。

準(zhǔn)備將PET薄膜/PET無紡布層疊品(面積0.7cm²)與固定用粘合帶的中央部以PET薄膜側(cè)作為膠帶側(cè)貼合而成的復(fù)合基材。該復(fù)合基材的無紡布部分涂布經(jīng)皮給藥用霜劑4mg，將其作為小鼠免疫試驗的給藥樣品。

＜評價5＞

對于實施例、比較例中得到的經(jīng)皮給藥用霜劑，進行以下的評價。

(體液免疫誘導(dǎo)效果的評價)

按照以下的步驟，使用經(jīng)皮給藥用霜劑，使用免疫評價用模型動物進行小鼠免疫試驗。之后，通過測定小鼠血清中的抗原(OVA)特異性IgG抗體，評價全身性免疫應(yīng)答。將評價結(jié)果示于圖7中。

(1)經(jīng)皮給藥用霜劑的小鼠免疫試驗

預(yù)先將小鼠(C57BL6NCr小鼠、雌性7周齡)右背部剃毛，設(shè)置用于使由剃毛導(dǎo)致的皮膚損傷恢復(fù)的飼養(yǎng)期間，對小鼠的右背部皮膚給予經(jīng)皮給藥用霜劑4mg。同時將左背部剃毛。24小時后，去除右背部的經(jīng)皮給藥用霜劑。由該給藥1周之后，對小鼠的左背部皮膚同樣地給予經(jīng)皮給藥用霜劑，24小時后去除。由第2次給藥起進而1周之后，采集小鼠血清。

(2)ELISA法

通過與＜評價3＞相同的操作，通過ELISA法測定小鼠血清中的抗原(OVA)特異性IgG抗體。

[表7]

(實施例61～180、比較例15～54)

制備具有下述表8～12組成的經(jīng)粘膜給藥(鼻腔給藥或舌下給藥)用液體制劑。具體而言，以下述表8～12中所示的配混量配混抗原和核受體配體，鼻腔給藥時向其中加入生理鹽水設(shè)為10μL；舌下給藥時向其中加入生理鹽水設(shè)為30μL，進行混和，從而得到經(jīng)粘膜給藥(鼻腔給藥或舌下給藥)用液體制劑。

作為抗原、作為流感疫苗抗原，使用含有流感疫苗抗原的溶液H1N1(A/California/07/2009、阪大微生物病研究會制)、H3N2(A/Victoria361/2011、阪大微生物病研究會)、B型(B/Wisconsin/1/2010、阪大微生物病研究會)、B型(B/Brisbane/60/2008、阪大微生物病研究會)。使用了含有肺炎球菌莢膜多糖的溶液(Pneumovax NP、MSD公司制造)、含有HPV16重組蛋白的溶液(HPV16、PROSPEC公司制造)、含有減毒活輪狀病毒的溶液(Rota Teq口服溶液、MSD公司制造)、含有滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒的溶液(Imovax Polio皮下注射劑、Sanofi公司制造)、含有滅活甲型肝炎病毒的溶液(Aimmugen、化學(xué)及血清療法研究所公司制造)、含有滅活乙型腦炎病毒的溶液(Encevac皮下注射用、化學(xué)及血清療法研究所公司制造)、含有減毒活腮腺炎病毒的溶液(流行性感冒活疫苗、北里第一三共疫苗株式會社制造)、含有減毒活麻疹病毒的溶液(麻疹活疫苗、北里第一三共疫苗株式會社制造)、含有減毒活風(fēng)疹病毒的溶液(干燥減毒活風(fēng)疹疫苗、北里第一三共疫苗株式會社制造)、含有破傷風(fēng)類毒素結(jié)合流感菌b型多糖的溶液(ActHIB、Sanofi公司制造)、含有重組HBs抗原蛋白的溶液(Bimmugen、化學(xué)及血清療法研究所公司制造)、含有減毒活黃熱病毒的溶液(黃熱疫苗、Sanofi公司制造)、含有破傷風(fēng)類毒素的溶液(破傷風(fēng)類毒素、Denka Seiken Co.,Ltd.制造)、含有減毒活水痘病毒的溶液(干燥減毒活水痘疫苗、阪大微生物病研究會公司制造)、含有活BCG(卡介苗)的溶液(干燥BCG疫苗、日本BCG制造株式會社制造)、含有滅活狂犬病病毒的溶液(組織培養(yǎng)滅活狂犬病疫苗、化學(xué)及血清療法研究所公司制造)。

對于作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑，使用維甲酸(all-trans視黃酸、和光純藥工業(yè)公司制)、碘塞羅寧(Sigma-Aldrich公司制)、他莫昔芬檸檬酸鹽(和光純藥工業(yè)公司制)。

＜評價6＞

對于實施例、比較例中得到的經(jīng)粘膜給藥用液體制劑，進行以下的評價。

(體液免疫誘導(dǎo)效果的評價)

按照以下的步驟，使用經(jīng)粘膜給藥用液體制劑、使用免疫評價用模型動物進行小鼠免疫試驗。之后，通過測定小鼠血清中的抗原特異性IgG抗體，評價全身性免疫應(yīng)答。

(1)經(jīng)粘膜給藥用液體制劑的小鼠免疫試驗

通過進行與經(jīng)粘膜給藥用液體制劑或舌下給藥用固體制劑的評價即＜評價3＞同樣的操作，采集小鼠血清。

(2)ELISA法

通過進行與經(jīng)粘膜給藥用液體制劑或舌下給藥用固體制劑的評價即＜評價3＞同樣的操作，通過ELISA法測定小鼠血清中的抗原特異性IgG抗體。

通過上述體液免疫誘導(dǎo)效果的評價，經(jīng)粘膜給藥(鼻腔給藥或舌下給藥)包含作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑的經(jīng)粘膜給藥用液體制劑(實施例21～36)的情況下，與不包含作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑的經(jīng)粘膜給藥用液體制劑(比較例9、10)相比較，能夠得到高的抗原特異性IgG抗體效價。

即，使用如下述表8～12所示的抗原的情況下，也通過使用作為核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進劑，從而能夠得到高的抗原特異性IgG抗體效價。

[表8]

[表9]

[表10]

[表11]

[表12]

(實施例181～184、比較例55)

按照與表7的經(jīng)皮給藥用霜劑相同的要領(lǐng)，制備具有表13組成的經(jīng)皮給藥用霜劑。將小鼠(C57BL6NCr小鼠、雌性7周齡)的右背部剃毛，對用日東電工制OPP膠帶(EZ Dunplon No.3301EZ)實施了5次角質(zhì)剝離處理的皮膚給藥霜劑(低侵入給藥)。同時將左背部剃毛。24小時后，去除右背部的經(jīng)皮給藥用霜劑。在該給藥1周后，對于小鼠的左背部皮膚同樣地進行角質(zhì)剝離處理，給藥經(jīng)皮給藥用霜劑，24小時后去除。由第2次給藥進而1周之后，采集小鼠血清，通過ELISA法測定小鼠血清中的抗原(OVA)特異性IgG抗體。利用該低侵入給藥的免疫方法，能夠?qū)τ诮o藥抗原誘導(dǎo)特異的體液免疫。

[表13]

[表14]

產(chǎn)業(yè)上的可利用性

本發(fā)明的免疫誘導(dǎo)促進用組合物和疫苗藥物組合物能夠普遍地用于對各種抗原的免疫誘導(dǎo)，不僅用于皮下給藥也優(yōu)選用于經(jīng)皮給藥或經(jīng)粘膜給藥。

序列表

<110> 日東電工株式會社(NITTO DENKO CORPORATION)

<120> 包含核受體配體的免疫誘導(dǎo)促進用組合物以及疫苗藥物組合物

<130> F6316WO

<150> JP2014-159000

<151> 2014-08-04

<160> 13

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> 人類(Homo sapiens)

<400> 1

Ala Tyr Ala Cys Asn Thr Ser Thr Leu

1 5

<210> 2

<211> 9

<212> PRT

<213> 人類(Homo sapiens)

<400> 2

Glu Tyr Ile Leu Ser Leu Glu Glu Leu

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人類(Homo sapiens)

<400> 3

Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu

1 5

<210> 4

<211> 9

<212> PRT

<213> 人類(Homo sapiens)

<400> 4

Ile Met Pro Lys Ala Gly Leu Leu Ile

1 5

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人類(Homo sapiens)

<400> 5

Val Leu Gln Glu Leu Asn Val Thr Val

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人類(Homo sapiens)

<400> 6

Lys Val Phe Gly Ser Leu Ala Phe Val

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 未知

<220>

<223> MAGE3_A02 肽

<400> 7

Lys Val Ala Glu Ile Val His Phe Leu

1 5

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人類(Homo sapiens)

<400> 8

Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu

1 5

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 人類(Homo sapiens)

<400> 9

Ser Thr Ala Pro Pro Val His Asn Val

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 丙型肝炎病毒

<400> 10

Asp Leu Met Gly Tyr Ile Pro Ala Val

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 乙型肝炎病毒

<400> 11

Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val

1 5

<210> 12

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PADRE

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> 環(huán)己基丙氨酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (13)..(13)

<223> D-丙氨酸

<400> 12

Ala Lys Ala Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala

1 5 10

<210> 13

<211> 8

<212> PRT

<213> 原雞（Gallus gallus）

<400> 13

Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu

1 5