本發(fā)明涉及腎顯像劑。

背景技術(shù)：

日本的腎病患者有逐年增加的趨勢(shì)，這對(duì)國(guó)民健康造成了重大影響。其中，慢性腎病(chronic kidney disease：CKD)的惡化有時(shí)會(huì)引起嚴(yán)重的心血管疾病、或需要進(jìn)行人工透析。因此，近年來(lái)，正在進(jìn)行以預(yù)防CKD的重癥化為目的的各種研究(例如，非專利文獻(xiàn)1)。

在CKD診斷治療指南(非專利文獻(xiàn)2)中，CKD被定義為下述癥狀(i)、(ii)中的任一者或兩者持續(xù)3個(gè)月以上的情況：(i)通過尿異常、圖像診斷、血液、病理而確認(rèn)到腎損傷的存在，0.15g/gCr以上的蛋白尿(30mg/gCr以上的白蛋白尿)的存在尤其重要；(ii)GFR(腎小球?yàn)V過率)小于60mL/分鐘/1.73m²，該指南中還指明CKD的嚴(yán)重程度根據(jù)GFR和ACR(白蛋白/肌酸酐比)來(lái)分類。非專利文獻(xiàn)2中還記載了以下內(nèi)容：為了進(jìn)行CKD的診斷和確定治療方針，推薦在參考驗(yàn)?zāi)蚪Y(jié)果而判定適應(yīng)性的基礎(chǔ)上實(shí)施腎活檢，CKD的情況下，推薦根據(jù)腎功能進(jìn)行選擇，在對(duì)呈現(xiàn)形態(tài)性變化的疾病(尿路結(jié)石、梗阻性尿路病、囊性腎病等)的診斷中選擇腹部超聲檢查，在對(duì)腎動(dòng)脈狹窄的有無(wú)及程度的評(píng)價(jià)中選擇超聲多普勒法、MR血管造影、CT血管造影檢查。

CKD的特征在于由慢性腎小管間質(zhì)病變導(dǎo)致的進(jìn)行性腎功能減退，其包括腎小管萎縮、間質(zhì)性纖維化。這樣的變化使腎中的氧化減少，由此，介由各種細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、細(xì)胞信號(hào)，連續(xù)不斷地引發(fā)并促進(jìn)纖維化反應(yīng)。纖維化和低氧被視為導(dǎo)致CKD發(fā)展的主要因素，因此認(rèn)為，若能夠正確地對(duì)這些因素進(jìn)行評(píng)價(jià)、并且實(shí)現(xiàn)非侵入性的評(píng)價(jià)，則對(duì)CKD的治療是有用的。非專利文獻(xiàn)3中報(bào)道了在上述背景下，通過使用了fMRI的BOLD(血氧水平依賴，blood oxygenation level-dependent)-MRI，對(duì)CKD的缺血性病變檢測(cè)進(jìn)行了研究。

藥物性腎損傷是由用于治療或診斷的藥物(抗菌藥、鎮(zhèn)痛藥、抗癌藥、造影劑)引起的腎損傷。藥物性腎病多數(shù)為可逆性，但為了避免不可逆的腎功能損傷，需要準(zhǔn)確的早期診斷，作為藥物性腎損傷的必需定期檢查，可舉出血清肌酸酐、尿素氮、尿常規(guī)檢查。

核醫(yī)學(xué)檢查法作為檢查腎功能的方法之一而為人們所知。該核醫(yī)學(xué)檢查包含用于檢查腎動(dòng)態(tài)的腎圖、腎閃爍造影法，作為用于檢查腎動(dòng)態(tài)的放射性藥物，[¹³¹I]鄰碘馬尿酸(¹³¹I-OIH)、^99mTc-MAG3(巰基乙酰三甘氨酸)、^99mTc-DTPA(二乙三胺五乙酸)是已知的，作為用于腎閃爍造影法的放射性藥物，^99mTc-DMSA(二巰基丁二酸)是已知的。上述核醫(yī)學(xué)檢查與血液檢查、尿檢查不同，具有能夠分別評(píng)價(jià)左右腎臟的功能的優(yōu)點(diǎn)。

非專利文獻(xiàn)1：關(guān)于今后的腎疾病對(duì)策的模式(今後の腎疾患対策のあり方について)，腎疾病對(duì)策研討會(huì)(2008年3月)

非專利文獻(xiàn)2：基于證據(jù)的CKD診斷治療指南(エビデンスに基づくCKD診療ガイドライン)2013

非專利文獻(xiàn)3：美國(guó)腎臟病學(xué)會(huì)雜志(Journal of the American Society of Nephrology),2011,22(8),pp.1429-34

非專利文獻(xiàn)4：國(guó)際腎臟雜志(Kidney International),2008,74,pp.867-872

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

然而，以往的腎疾病的檢查方法存在以下這樣的課題。

如非專利文獻(xiàn)2中記載的那樣，報(bào)道了以下內(nèi)容的回顧性研究：CKD的情況下，通過在進(jìn)入G3期之后(最遲為G4期)使?？漆t(yī)生介入，從而使得腎功能降低速度變緩，能夠推遲應(yīng)導(dǎo)入透析的時(shí)期。作為其理由之一，認(rèn)為是由于專科醫(yī)生實(shí)施的藥物調(diào)節(jié)，但并沒有獲得可靠的證據(jù)。

另外，腎活檢雖然被認(rèn)為對(duì)于CKD的治療方針的確定、長(zhǎng)期預(yù)后的預(yù)測(cè)而言是有用的，但另一方面，無(wú)法通過腎活檢來(lái)把握腎功能、缺血狀態(tài)等。

對(duì)于以往的核醫(yī)學(xué)診斷法而言，腎功能的測(cè)定值的可靠性未被充分地驗(yàn)證，關(guān)于其作為臨床檢查的實(shí)用性尚殘留有課題。

如非專利文獻(xiàn)4中記載的那樣，腎臟內(nèi)的低氧狀態(tài)會(huì)使腎損傷惡化，盡管這是已知的，但尚不知曉能夠檢測(cè)出腎臟內(nèi)低氧狀態(tài)的已確立的技術(shù)。

藥物性腎損傷的情況下，對(duì)于不可逆的腎損傷的發(fā)生而言，在通過尿檢查、血液檢查檢測(cè)到異常時(shí)，病情已被延誤，存在即使停止給藥、腎功能損傷也不能恢復(fù)的情況。

本發(fā)明是鑒于上述情況而作出的，其目的在于，提供能夠基于腎內(nèi)環(huán)境而非侵入性地描繪出病變部位的新型腎顯像劑。

本申請(qǐng)的發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)，通過使用經(jīng)放射性氟(¹⁸F)標(biāo)記的特定的硝基咪唑系化合物，從而可以使用核醫(yī)學(xué)檢查法非侵入性地描繪出腎病變。硝基咪唑系化合物特異性地蓄積于低氧區(qū)域。因此，預(yù)期通過檢測(cè)腎臟內(nèi)低氧狀態(tài)的擴(kuò)展、定量評(píng)價(jià)低氧狀態(tài)，能夠評(píng)價(jià)腎的纖維化程度，實(shí)現(xiàn)腎病的早期發(fā)現(xiàn)、早期治療、預(yù)后預(yù)測(cè)、治療效果判定。

即，根據(jù)本發(fā)明，提供了腎顯像劑，其含有下述通式(1)表示的硝基咪唑系化合物或其鹽。

[化學(xué)式1]

上述通式(1)中，R₁為氫或羥甲基。A為下述(I)～(IV)中的任一種基團(tuán)。

[化學(xué)式2]

(I)表示的基團(tuán)中，R₂為氫或羥基，R₃為氫或羥甲基，R₄為羥基或羥甲基，k為0或1，m為0或1，n為0、1或2，X為放射性氟。

[化學(xué)式3]

(II)表示的基團(tuán)中，n為0、1或2，p為1或2，q為0、1或2，X為放射性氟。

[化學(xué)式4]

(III)表示的基團(tuán)中，n為0、1或2，X為放射性氟。

[化學(xué)式5]

(IV)表示的基團(tuán)中，n為0、1或2，X為放射性氟。

根據(jù)本發(fā)明，可提供能夠基于腎內(nèi)環(huán)境而非侵入性地描繪出病變部位的腎顯像劑。

附圖說(shuō)明

上述的目的及其他的目的、特征及優(yōu)點(diǎn)將通過以下所述的優(yōu)選實(shí)施方式、及與其對(duì)應(yīng)的以下附圖而更為明確。

圖1是¹⁸F-HIC101的PET顯像圖(MIP圖像)。(a)為CKD模型的圖像，(b)為健康模型的圖像。

圖2是表示¹⁸F-HIC101施予后100分鐘的體內(nèi)分布的結(jié)果的圖。

圖3是表示腎組織內(nèi)的HIF-1α的表達(dá)量和¹⁸F-HIC101的局部存在的比較的圖。

圖4是¹⁸F-FMISO的PET顯像圖(MIP圖像)。(a)為CKD模型的圖像，(b)為健康模型的圖像。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明中，所謂“放射性氟”，是指氟的放射性同位素，即氟-18(¹⁸F)。

本發(fā)明中，所謂“鹽”，只要是作為藥物可接受的鹽即可。例如，可形成由鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等無(wú)機(jī)酸、或乙酸、三氟乙酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、羥基乙酸、水楊酸、吡喃糖基酸(pyranosidyl acid)(葡糖醛酸、半乳糖醛酸等)、α-羥基酸(檸檬酸、酒石酸等)、氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸等)、芳香族酸(苯甲酸、肉桂酸等)、磺酸(對(duì)甲苯磺酸、乙磺酸等)等有機(jī)酸衍生的鹽。

本發(fā)明中，所謂“硝基咪唑系化合物”，是指上述通式(1)的化合物，例如，可舉出：

2-[¹⁸F]氟甲基-2-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)甲基]-1,3-丙二醇(¹⁸F-HIC101：A為(I)表示的基團(tuán)，R₁、R₂為氫，R₃、R₄為羥甲基，k為0，m為0，n為1的化合物)；

2-[¹⁸F]氟甲基-2-((4-羥甲基-2-硝基-1H-咪唑-1-基)甲基)-1,3-丙二醇(A為(I)表示的基團(tuán)，R₁、R₃、R₄為羥甲基，R₂為氫，k為0，m為0，n為1的化合物)；

2-[¹⁸F]氟甲基-2-(2-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)-1,3-丙二醇(A為(I)表示的基團(tuán)，R₁、R₂為氫，R₃、R₄為羥甲基，k為0，m為0，n為2的化合物)；

1-[¹⁸F]氟-3-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-2-丙醇(¹⁸F-FMISO：A為(I)表示的基團(tuán)，R₁、R₂、R₃為氫，R₄為羥基，k為0，m為0，n為1的化合物)；

1-[¹⁸F]氟-4-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-2,3-丁二醇(¹⁸F-FETNIM：A為(I)表示的基團(tuán)，R₁、R₃為氫，R₂、R₄為羥基，k為0，m、n為1的化合物)；

3-[¹⁸F]氟-2-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)甲氧基)-1-丙醇(¹⁸F-FRP-170：A為(I)表示的基團(tuán)，R₁、R₂、R₃為氫，R₄為羥甲基，k為1，m為0，n為1的化合物)；

N-(2-[¹⁸F]氟乙基)-2-硝基-1H-咪唑-1-乙酰胺(¹⁸F-FETA：A為(II)表示的基團(tuán)，R₁為氫，n為1，p為2，q為0的化合物)；

2-硝基-N-(2,2,3,3,3-[¹⁸F]五氟丙基)-1H-咪唑-1-乙酰胺(¹⁸F-EF5：A為(II)表示的基團(tuán)，R₁為氫，n為1，p為1，q為2的化合物)；

(3-[¹⁸F]氟-2-(4-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-1-丙醇(¹⁸F-HX4：A為(III)表示的基團(tuán)，R₁為氫，n為1的化合物)；或，

1-(5-脫氧-5-[¹⁸F]氟-α-D-阿拉伯呋喃糖基(arabinofuranosyl))-2-硝基-1H-咪唑(¹⁸F-FAZA：A為(IV)表示的基團(tuán)，R₁為氫，n為0的化合物)。

需要說(shuō)明的是，(I)～(IV)中，＊(星號(hào))表示鍵合部位。

從提高向腎病變的蓄積的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選脂溶性低于¹⁸F-FMISO的硝基咪唑系化合物，具體而言，優(yōu)選25℃時(shí)的辛醇/水分配系數(shù)(logP)比¹⁸F-FMISO的logP低的硝基咪唑系化合物。logP更優(yōu)選為-0.4以下，進(jìn)一步優(yōu)選logP在-2～-0.6的范圍內(nèi)的硝基咪唑系化合物。作為硝基咪唑系化合物的結(jié)構(gòu)，通式(1)中，R₁優(yōu)選為氫。

在通式(1)中的A為(I)的硝基咪唑系化合物中，從提高向腎病變的蓄積的觀點(diǎn)考慮，(I)中的R₂優(yōu)選為氫。另外，R₄優(yōu)選為羥甲基。另外，m優(yōu)選為0。另外，n優(yōu)選為1。更優(yōu)選的是，R₃為羥甲基，k為0。這樣的硝基咪唑系化合物可基于以下文獻(xiàn)信息來(lái)合成：WO2013/042668；《PET用放射性藥物的制造及品質(zhì)管理－合成與臨床使用指導(dǎo)(PET用放射性薬剤の製造および品質(zhì)管理－合成と臨床使用へのてびき)》(PET Chemistry Workshop編)－第4版(2011年修訂版)；J.Nucl.Med,2001,42,pp.1397-1404；核醫(yī)學(xué)年報(bào)(Annals of Nuclear Medicine),2007,21,pp.101-107；其他已知的信息。

在通式(1)中的A為(II)的硝基咪唑系化合物中，從提高向腎病變的蓄積的觀點(diǎn)考慮，n優(yōu)選為1。另外，優(yōu)選p為2時(shí)q為0，優(yōu)選p為1時(shí)q為2。這樣的硝基咪唑系化合物可基于以下文獻(xiàn)信息來(lái)合成：例如，英國(guó)癌癥雜志(British Journal of Cancer),2004,90,pp.2232-2242；應(yīng)用輻射與同位素(Applied Radiation and Isotopes),2001,54,pp.73-80；其他已知的信息。

在通式(1)中的A為(III)的硝基咪唑系化合物中，從提高向腎病變的蓄積的觀點(diǎn)考慮，n優(yōu)選為1。這樣的硝基咪唑系化合物可基于WO2008/124651、其他已知的信息來(lái)合成。

在通式(1)中的A為(IV)的硝基咪唑系化合物中，從提高向腎病變的蓄積的觀點(diǎn)考慮，n優(yōu)選為0。這樣的硝基咪唑系化合物可基于《PET用放射性藥物的制造及品質(zhì)管理－合成與臨床使用指導(dǎo)》(PET Chemistry Workshop編)－第4版(2011年修訂版)、其他已知的信息來(lái)合成。

本發(fā)明涉及的腎顯像劑可定義為：以適于向生物體內(nèi)施予的形態(tài)含有上述通式(1)表示的硝基咪唑系化合物或其鹽的處方物。本發(fā)明涉及的腎顯像劑優(yōu)選為通過非口服方式、即注射而施予的形態(tài)，更優(yōu)選為水溶液。該組合物可適當(dāng)含有pH調(diào)節(jié)劑、制藥學(xué)上允許的增溶劑、穩(wěn)定劑或抗氧化劑等附加成分。

對(duì)于本發(fā)明涉及的腎顯像劑而言，在導(dǎo)入生物體內(nèi)后，上述通式(1)表示的硝基咪唑系化合物會(huì)蓄積于低氧狀態(tài)的腎臟組織中。因此，可使用正電子發(fā)射斷層顯像法(PET，positron emission tomography)從生物體外非侵入性地檢測(cè)射線，從而將腎病變的擴(kuò)展·程度圖像化。因此，根據(jù)本發(fā)明的腎顯像劑，可針對(duì)各種腎病提供在以往的檢查方法中無(wú)法獲得的腎功能信息，從而能夠?qū)崿F(xiàn)腎病的早期發(fā)現(xiàn)、早期治療、預(yù)后預(yù)測(cè)、治療效果判定。

例如，對(duì)于CKD而言，通過使用本發(fā)明涉及的腎顯像劑對(duì)腎皮質(zhì)中的放射性蓄積進(jìn)行定量，可以合適地把握纖維化的進(jìn)度、優(yōu)化藥物治療，由此能夠推遲透析的時(shí)期。另外，利用本發(fā)明的腎顯像劑能夠獲得關(guān)于腎功能、缺血狀態(tài)的信息，因此，通過與腎活檢以互相補(bǔ)充的方式使用，可實(shí)現(xiàn)更正確的CKD的病況的把握、預(yù)后預(yù)測(cè)。

另外，在抗癌劑等的藥物治療時(shí)，通過使用本發(fā)明涉及的腎顯像劑監(jiān)測(cè)腎功能，能夠比血液、尿的變化更早期地發(fā)現(xiàn)腎功能損傷。因此，通過停止施予藥物或變更藥物，能夠避免不可逆的藥物性腎損傷。

實(shí)施例

以下，記載實(shí)施例而進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些內(nèi)容的限制。

本實(shí)施例中使用的化合物定義如下，均使用WO2013/042668中記載的方法合成。

¹⁸F-HIC101：2-[¹⁸F]氟甲基-2-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)甲基)-1,3-丙二醇(WO2013/042668實(shí)施例的化合物1)

¹⁸F-FMISO：1-[¹⁸F]氟-3-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-2-丙醇(¹⁸F-氟米索硝唑)

(實(shí)施例1)CKD模型動(dòng)物的制備[1]

向13例Lewis大鼠(雄性，8周齡，來(lái)源：日本SLC株式會(huì)社)尾靜脈施予7.5mg/kg的阿霉素(和光純藥工業(yè)(株)制)，對(duì)于除死亡的2例之外的11例，在施予后13天，按照考馬斯亮藍(lán)(Bradford)法測(cè)定尿蛋白。其中，選出尿蛋白值高的4例大鼠作為CKD模型動(dòng)物，在阿霉素施予后14天用于后述的實(shí)施例。4例的狀態(tài)示于表1。

作為健康模型，使用了施予等量的生理鹽水代替阿霉素而制作的4例。

需要說(shuō)明的是，使用ELISA試劑盒(其利用夾心法對(duì)小鼠、大鼠試樣中存在的L-FABP進(jìn)行定量)(R&D Systems公司制)，測(cè)定了各模型的尿中的FABP-4的量。另外，為了對(duì)由生物體活動(dòng)導(dǎo)致的尿中成分的濃縮及稀釋的影響加以校正，使用利用了雅費(fèi)氏(Jaffe)反應(yīng)的試劑盒(Cayman Chemical公司制)實(shí)施了尿中肌酸酐的測(cè)定。

[表1]

*p<0.05(CKD模型vs健康模型)

將各4例的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差示于表1。CKD模型組中，¹⁸F-FMISO施予組與¹⁸F-HIC101施予組間的尿蛋白及L-FABP的值未確認(rèn)到顯著性差異。

(實(shí)施例2)PET顯像[1]

將¹⁸F-HIC101(放射化學(xué)純度為84.2％)以18.6±0.9MBq/只施予至實(shí)施例1中制作的4只CKD模型、以17.0±2.7MBq/只施予至4只健康模型，自施予80分鐘后起，使用動(dòng)物用PET裝置(eXploreVista，GE公司制)，實(shí)施靜態(tài)(static)顯像。采集條件為250-700keV的能量窗下10分鐘。將采集的數(shù)據(jù)利用3D-OSEM法重建并圖像化。利用圖像測(cè)定各切面(slice)中的腎臟的SUV(經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化的攝取值，standardized uptake value)最高值的平均值(除去腎盂而設(shè)定關(guān)注區(qū)(ROI))、正常組織的SUV平均值?；谶@些值，使用正常組織比、正常腎比進(jìn)行評(píng)價(jià)。需要說(shuō)明的是，測(cè)定結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析使用了學(xué)生t檢驗(yàn)(student’s t-test)。結(jié)果示于圖1、表2。

[表2]

(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)，*p＜0.001，$p＝0.045，n＝4，學(xué)生t檢驗(yàn)

圖1是利用最大值投影法進(jìn)行圖像處理而得到的MIP圖像。圖1(a)為CKD模型，圖1(b)為健康模型。圖1中，用黑色箭頭示出的部位為腸管，用白色箭頭示出的部位為腎盂。通過圖像分析確認(rèn)到，CKD模型中的腎組織(腎盂除外)的SUV最大值顯著地高于健康模型(左右均為p＜0.001)，另外，在正常組織比方面也顯著地更高(左右均為p＜0.001)。圖1的例子中，腎組織的SUV最大值為10。需要說(shuō)明的是，確認(rèn)到正常組織的SUV平均值在CKD模型中也顯著地高(p＝0.045)。

(實(shí)施例3)體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)[1]

實(shí)施例2的PET顯像結(jié)束后，置于麻醉下直到施予100分鐘后為止，然后放血處死。接著，采集左右腎臟、血液、腦、肺、心臟、肝臟、脾臟、胃、小腸、大腸、腎上腺、肌肉、骨、腎臟周圍的脂肪、尿、全身其余部位，測(cè)定重量及放射性活度。需要說(shuō)明的是，結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析使用了學(xué)生t檢驗(yàn)。結(jié)果示于圖2、表3。

[表3]

(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)，*p＜0.05，n＝4，學(xué)生t檢驗(yàn)

圖2中，各臟器中的左側(cè)柱為健康模型組，右側(cè)柱為CKD模型組。較之健康模型組而言，CKD模型組中，在左右腎臟中的蓄積顯著地高。另外，作為主要組織的血液、心臟、肺、肝臟、肌肉中，CKD模型組中的蓄積顯著地高。需要說(shuō)明的是，小腸、大腸、尿中未確認(rèn)到顯著性差異，但認(rèn)為這是由于膽汁排泄速度和尿排泄存在個(gè)體差異。

(實(shí)施例4)腎臟內(nèi)蓄積的局部存在評(píng)價(jià)

將實(shí)施例3中得到的腎組織在放射性活度測(cè)定后分成相等的兩半，將其中一半包埋于O.C.T.復(fù)合物(Compound)(Sakura Finetek公司制)中，使用冷凍切片機(jī)(Cryostat)(型號(hào)：CM3050，Leica公司制)，制作新鮮冷凍切片(厚度為10μm)，使用其實(shí)施放射自顯影(autoradiography)。用成像板使該腎組織切片曝光8～10小時(shí)后，使用生物圖像分析儀(型號(hào)：BAS-2500，F(xiàn)ujifilm公司制)進(jìn)行圖像化。

之后，使用放射性衰減后的同一切片實(shí)施免疫組織化學(xué)法(LSAB法)。在腎組織切片的固定和活化處理之后，分別使用抗大鼠HIF-1α小鼠單克隆抗體(來(lái)源：GeneTex公司制，稀釋100倍)作為一抗、使用抗小鼠IgG抗體(來(lái)源：DAKO公司制)作為二抗，使其與腎組織切片反應(yīng)，使用能與二抗反應(yīng)的經(jīng)HRP標(biāo)記的鏈霉親和素(DAKO公司制)，通過以DAB(3,3’-二氨基聯(lián)苯胺)為底物的顯色反應(yīng)來(lái)檢測(cè)HRP活性，由此鑒定腎組織切片的HIF-1α的表達(dá)部位。作為陰性對(duì)照，使用連續(xù)地薄切而得到的1片鄰近切片，按照僅使一抗不與其反應(yīng)的步驟實(shí)施與上述相同的實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)了識(shí)別不到一抗以外的成分對(duì)于腎組織切片的非特異性反應(yīng)。使用顯微鏡系統(tǒng)(型號(hào)：BZ-9000，KEYENCE公司制)，獲得利用免疫組織化學(xué)染色而得到的標(biāo)本圖像的整體圖像。對(duì)于圖像，實(shí)施利用ImageJ摳出DAB陽(yáng)性部位后、進(jìn)行虛擬彩色化的圖像處理。

結(jié)果示于圖3。確認(rèn)到了2例CKD模型(SUV最大值為(左)4.30、(右)5.12)、1例健康模型(SUV最大值為1.06)的腎組織內(nèi)的HIF-1α的表達(dá)。結(jié)果，肉眼觀察到HIF-1α在CKD模型的腎皮質(zhì)部中高水平表達(dá)。與利用放射自顯影獲得的¹⁸F-HIC101的局部存在情況進(jìn)行了比較，結(jié)果，圖3中，白色箭頭示出的部位與HIF-1α的表達(dá)部位一致。需要說(shuō)明的是，圖3中，ARG為放射自顯影的縮寫。另外，在未處置的放射自顯影圖像中存在蓄積的部位為腎盂。

(實(shí)施例5)PET顯像[2]

將¹⁸F-FMISO(放射化學(xué)純度為96％以上)以18.7±1.1MBq/只施予至實(shí)施例1中制作的4只CKD模型、以19.5±0.69MBq/只施予至4只健康模型，自施予80分鐘后起，使用動(dòng)物用PET裝置(eXplore Vista，GE公司制)，實(shí)施靜態(tài)顯像。另外，在PET顯像后分別將各組的1例再次置于麻醉下，并在施予180分鐘后實(shí)施顯像。采集條件為250-700keV的能量窗下10分鐘，采集的數(shù)據(jù)利用3D-OSEM法重建并圖像化。利用圖像測(cè)定各切面中的腎臟的SUV最高值的平均值(除去腎盂而設(shè)定關(guān)注區(qū)(ROI))、正常組織的SUV平均值?；谶@些值，使用正常組織比、正常腎比進(jìn)行評(píng)價(jià)。需要說(shuō)明的是，測(cè)定結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析使用了學(xué)生t檢驗(yàn)。結(jié)果示于圖4、表4。

[表4]

(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)，*p<0.05(CKD模型vs健康模型)

對(duì)施予80分鐘后的PET圖像進(jìn)行分析，結(jié)果，與健康模型相比，CKD模型中的腎組織(腎盂除外)的SUV最大值顯著地高(左右均為p＜0.05)，在腎-正常組織比方面，在左腎中未確認(rèn)到顯著性差異(右：p＜0.01，左：p＝0.08)。

將施予180分鐘后的PET圖像與施予80分鐘后的PET圖像進(jìn)行比較，確認(rèn)到向腎皮質(zhì)部的蓄積變得高于腎盂的趨勢(shì)。肉眼確認(rèn)到CKD模型與健康模型的背景沒有差異，并且，與施予80分鐘后同樣。通過ROI分析的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SUV最大值較之施予80分鐘后有所增加，腎-正常組織比也存在隨之增加的趨勢(shì)。

圖4是在施予180分鐘后進(jìn)行顯像的、利用最大值投影法進(jìn)行圖像處理而得到的MIP圖像。圖4(a)為CKD模型，圖4(b)為健康模型。圖4中，用白色箭頭示出的部位為腎盂。

(實(shí)施例6)體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)[2]

對(duì)于在實(shí)施例5中于施予80分鐘后完成了PET顯像的各組中的3例、及沒有實(shí)施PET顯像的各組中的1例，置于麻醉下直到施予100分鐘后為止，然后放血處死。接著，采集左右腎臟、血液、腦、肺、心臟、肝臟、脾臟、胃、小腸、大腸、腎上腺、肌肉、骨、腎臟周圍的脂肪、尿、全身其余部位，測(cè)定重量及放射性活度。需要說(shuō)明的是，結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析使用了學(xué)生t檢驗(yàn)。結(jié)果示于表5。

[表5]

平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差

由以上結(jié)果確認(rèn)到，對(duì)于¹⁸F-HIC101及¹⁸F-FMISO而言，在CKD模型中均較之健康模型更優(yōu)先地被除腎盂以外的腎組織攝取。另外，對(duì)CKD模型中的攝入進(jìn)行了比較，結(jié)果，確認(rèn)了¹⁸F-HIC101的攝入高于¹⁸F-FMISO。這些結(jié)果表明，咪唑系化合物、尤其是¹⁸F-HIC101作為腎顯像劑是有用的。

本申請(qǐng)基于2014年9月25日提出申請(qǐng)的日本專利申請(qǐng)?zhí)卦?014-195802號(hào)主張優(yōu)先權(quán)，將其全部公開內(nèi)容并入本文中。