本發(fā)明涉及保健食品
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種緩解慢性疼痛的中藥組合物及其制備方法、應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：慢性疼痛是臨床上非常常見(jiàn)的一種疾病，是指持續(xù)一個(gè)月以上的疼痛，也有人把慢性疼痛比喻為一種不死的癌癥。慢性疼痛是一個(gè)癥狀，是由遠(yuǎn)傷病發(fā)生的。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國(guó)慢性疼痛的發(fā)病率大約為35％～45％，老年人的發(fā)病率很高，約為75％～90％。慢性疼痛的發(fā)生不僅僅給患者帶來(lái)不愉快的軀體體驗(yàn)，也預(yù)示人體體質(zhì)下降或其他部位可能出現(xiàn)健康危機(jī)，因?yàn)槠涑掷m(xù)時(shí)間長(zhǎng)、遷延難愈而導(dǎo)致了患者機(jī)體功能失調(diào)、免疫力下降和誘發(fā)各種并發(fā)癥，并導(dǎo)致一系列的心理、行為、家庭和社會(huì)問(wèn)題，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量，給社會(huì)造成巨大損失。一直以來(lái)，慢性疼痛的治療往往以鎮(zhèn)痛藥物為主，比較常用的緩解慢性疼痛的藥物還是以西藥為主，例如布洛芬、阿片類(lèi)藥物，這些西藥可以達(dá)到較好的治療效果。但是研究表明，采用這些西藥進(jìn)行鎮(zhèn)痛治療后，依然有高達(dá)50％以上的患者疼痛無(wú)法得到充分的緩解，甚至部分患者還會(huì)因長(zhǎng)期使用這些鎮(zhèn)痛藥物，導(dǎo)致不同程度的心理依賴(lài)和軀體依賴(lài)，使得生存質(zhì)量進(jìn)一步降低。同時(shí)，服用這些西藥會(huì)產(chǎn)生一定的副作用，例如布洛芬會(huì)導(dǎo)致消化不良、皮疹、轉(zhuǎn)氨酶升高等不良反應(yīng)，據(jù)美國(guó)《時(shí)代周刊》介紹，長(zhǎng)期服用布洛芬會(huì)造成腎功能衰竭；服用阿片類(lèi)藥物會(huì)產(chǎn)生惡心和嘔吐、便秘、過(guò)度鎮(zhèn)靜、膽絞痛、尿潴留、精神錯(cuò)亂和神經(jīng)系統(tǒng)毒性、呼吸抑制和藥物依賴(lài)等不良反應(yīng)。傳統(tǒng)中藥由于副作用較低引起了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。肉桂為樟科植物肉桂的干燥樹(shù)皮，歷代本草中均列為上品。肉桂油是肉桂的干燥枝、葉經(jīng)水蒸氣蒸餾提取的揮發(fā)油，可作香料。肉桂含有1％～2％揮發(fā)油，為黃色或黃棕色的澄清液體；有肉桂的特異香氣，味甜、辛。露置空 氣中或存放日久，色漸變深，質(zhì)漸濃稠。肉桂油廣泛用于醫(yī)藥、食品及輕化工業(yè)。肉豆蔻為肉豆蔻科肉豆蔻屬，常綠喬木，主產(chǎn)于印度尼西亞、斯里蘭卡、毛里求斯、印度、美國(guó)、英國(guó)，以及中國(guó)的四川、廣西。肉豆蔻油是肉豆蔻種子經(jīng)水蒸氣蒸餾提取制得，得油率為6％～10％。肉豆蔻油為無(wú)色至淡黃色液體，相對(duì)密度30.883～0.917，折射率1.475～1.488。具有濃郁青甜辛香。肉豆蔻油主要成分包括肉豆蔻酚醚、丁香酚、異丁香酚、芳樟醇、香葉醇、黃樟油素、龍腦、檸檬烯、蒎烯等。目前，還沒(méi)有將肉桂油和肉豆蔻油聯(lián)合使用的報(bào)道，更沒(méi)有任何報(bào)道顯示將二者聯(lián)合使用后在緩解疼痛方面能夠起到協(xié)同作用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明提供了一種緩解慢性疼痛的中藥組合物及其制備方法、應(yīng)用。該中藥組合物可有效緩解慢性疼痛，且組合物效果優(yōu)于單劑效果，兩者具有協(xié)同作用。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種中藥組合物，包括肉桂油和肉豆蔻油。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，將肉桂油和肉豆蔻油組合使用后，對(duì)二甲苯所致的炎癥有較強(qiáng)的抑制作用，可顯著減少小鼠扭體次數(shù)，可顯著減少大鼠腳掌的腫脹程度，可顯著降低大鼠疼痛閾值，減少疼痛相關(guān)因子的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明中藥組合物可有效緩解慢性疼痛，且組合物效果優(yōu)于單劑效果，兩者具有協(xié)同作用。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油為肉桂經(jīng)水蒸氣蒸餾得到。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉豆蔻油為肉豆蔻經(jīng)水蒸氣蒸餾得到。作為優(yōu)選，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～99)：(1～99)。優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～40)：(1～40)。優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～20)：(1～20)。優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～20)。優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～10)。更優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～5)：(1～4)。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為20:1。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為10:1。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為5:1。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:1。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:4。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:10。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:20。本發(fā)明還提供了一種該中藥組合物的制備方法，包括如下步驟：將肉桂采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行第一提取，得到肉桂油；將肉豆蔻采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行第二提取，得到肉豆蔻油；將肉桂油和肉豆蔻油混合，得到中藥組合物。作為優(yōu)選，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～99)：(1～99)。優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～40)：(1～40)。優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～20)：(1～20)。優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～20)。優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～10)。更優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～5)：(1～4)。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為20:1。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為10:1。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為5:1。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:1。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:4。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:10。在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:20。作為優(yōu)選，第一提取為：將肉桂粉碎后加水浸泡，然后加熱蒸餾提取；蒸餾提取的時(shí)間為0.5～6h。優(yōu)選地，肉桂蒸餾提取的時(shí)間為1～6h。更優(yōu)選地，肉桂蒸餾提取的時(shí)間為2～4h。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂蒸餾提取的時(shí)間為3h。作為優(yōu)選，以g/ml計(jì)，肉桂與水的比例為1：(1～40)。優(yōu)選地，以g/ml計(jì)，肉桂與水的比例為1：(1～30)。優(yōu)選地，以g/ml計(jì)，肉桂與水的比例為1：(15～25)。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，以g/ml計(jì)，肉桂與水的比例為1：20。作為優(yōu)選，第二提取為：將肉豆蔻粉碎后加水浸泡，然后加熱蒸餾提??；蒸餾提取的時(shí)間為1～12h。優(yōu)選地，肉豆蔻蒸餾提取的時(shí)間為3～9h。更優(yōu)選地，肉豆蔻蒸餾提取的時(shí)間為5～7h。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉豆蔻蒸餾提取的時(shí)間為6h。作為優(yōu)選，以g/ml計(jì)，肉豆蔻與水的比例為1：(1～20)。優(yōu)選地，以g/ml計(jì)，肉豆蔻與水的比例為1：(5～15)。更優(yōu)選地，以g/ml計(jì)，肉豆蔻與水的比例為1：(8～12)。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，以g/ml計(jì)，肉豆蔻與水的比例為1：10。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，該中藥組合物的制備方法，包括如下步驟：將肉桂粉碎后，將肉桂粉末與水混合，然后加熱蒸餾，蒸餾時(shí)間為3h，得到肉桂油；將肉豆蔻粉碎后，將肉豆蔻粉末與水混合，然后加熱蒸餾，蒸餾時(shí)間為6h，得到肉豆蔻油。將肉桂油與肉豆蔻油混合，得到本發(fā)明中藥組合物。本發(fā)明還提供了該中藥組合物在制備緩解慢性疼痛藥物或保健食品中的應(yīng)用；該中藥組合物包括肉桂油和肉豆蔻油；作為優(yōu)選，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～99)：(1～99)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～40)：(1～40)；作為優(yōu)選，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～20)：(1～20)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～20)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～10)；更優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～5)：(1～4)。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為20:1；在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為10:1；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為5:1；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:1； 在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:4；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:10；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:20。本發(fā)明還提供了一種緩解慢性疼痛的藥物，包括本發(fā)明中藥組合物；該中藥組合物包括肉桂油和肉豆蔻油；作為優(yōu)選，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～99)：(1～99)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～40)：(1～40)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～20)：(1～20)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～20)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～10)；更優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～5)：(1～4)。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為20:1；在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為10:1；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為5:1；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:1；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:4；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:10；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:20。作為優(yōu)選，本發(fā)明緩解慢性疼痛的藥物還包括藥學(xué)上可接受的輔料。作為優(yōu)選，本發(fā)明緩解慢性疼痛的藥物的劑型為顆粒劑、膠囊劑、口服劑或糖漿劑。但藥物的劑型并非限定于此，本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為可行的劑型均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明還提供了一種緩解慢性疼痛的保健食品，包括本發(fā)明中藥組合物；該中藥組合物包括肉桂油和肉豆蔻油；作為優(yōu)選，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～99)：(1～99)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～40)：(1～40)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～20)：(1～20)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～20)；優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～10)：(1～10)；更優(yōu)選地，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為(1～5)：(1～4)。在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為20:1；在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為10:1；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為5:1；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:1； 在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:4；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:10；在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，肉桂油與肉豆蔻油的質(zhì)量比為1:20。作為優(yōu)選，本發(fā)明緩解慢性疼痛的保健食品還包括食品學(xué)上可接受的輔料。作為優(yōu)選，本發(fā)明緩解慢性疼痛的保健食品的劑型為顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑、片劑、粉劑、軟糖、乳劑或口服液。本發(fā)明提供了一種緩解慢性疼痛的中藥組合物及其制備方法、應(yīng)用。該中藥組合物包括肉桂油和肉豆蔻油。本發(fā)明至少具有如下優(yōu)勢(shì)之一：1、本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，將肉桂油和肉豆蔻油組合使用后，對(duì)二甲苯所致的炎癥有較強(qiáng)的抑制作用，可顯著減少小鼠扭體次數(shù)，可顯著減少大鼠腳掌的腫脹程度，可顯著降低大鼠疼痛閾值，減少疼痛相關(guān)因子的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明中藥組合物可有效緩解慢性疼痛，且組合物效果優(yōu)于于單劑效果；2、本發(fā)明中的肉桂油與肉豆蔻油可藥食兩用，無(wú)副作用；3、本發(fā)明提供的中藥組合物的制備方法簡(jiǎn)單科學(xué)，可充分保留肉桂與肉豆蔻的油脂類(lèi)有效成分。具體實(shí)施方式本發(fā)明公開(kāi)了一種緩解慢性疼痛中藥組合物及其制備方法、應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類(lèi)似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明中。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本發(fā)明提供的緩解慢性疼痛的中藥組合物及其制備方法、應(yīng)用中所用原料藥或輔料均可由市場(chǎng)購(gòu)得。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：實(shí)施例1中藥組合物的制備將肉桂粉碎后，按照肉桂粉末與水1g：20ml的比例加水，然后置于水蒸氣蒸餾裝置中，加熱蒸餾至餾出水分中不含有油滴為止，蒸餾時(shí)間為3h，得到肉桂油。將肉豆蔻粉碎后，按照肉豆蔻粉末與水1g：10ml的比例加水，然后置于水蒸氣蒸餾裝置中，加熱蒸餾至餾出水分中不含有油滴為止，蒸餾時(shí)間為6h，得到肉豆蔻油。將20重量份的肉桂油與1重量份的肉豆蔻油混合，得到緩解慢性疼痛組合物。實(shí)施例2中藥組合物的制備將10重量份實(shí)施例1中得到的肉桂油與1重量份實(shí)施例1中得到的肉豆蔻油混合，得到緩解慢性疼痛組合物實(shí)施例3中藥組合物的制備將5重量份實(shí)施例1中得到的肉桂油與1重量份實(shí)施例1中得到的肉豆蔻油混合，得到緩解慢性疼痛組合物。實(shí)施例4中藥組合物的制備將1重量份實(shí)施例1中得到的肉桂油與1重量份實(shí)施例1中得到的肉豆蔻油混合，得到緩解慢性疼痛組合物。實(shí)施例5中藥組合物的制備將1重量份實(shí)施例1中得到的肉桂油與4重量份實(shí)施例1中得到的肉豆蔻油混合，得到緩解慢性疼痛組合物。實(shí)施例6中藥組合物的制備將1重量份實(shí)施例1中得到的肉桂油與10重量份實(shí)施例1中得到的肉豆蔻油混合，得到緩解慢性疼痛組合物。實(shí)施例7中藥組合物的制備將1重量份實(shí)施例1中得到的肉桂油與20重量份實(shí)施例1中得到的肉豆蔻油混合，得到緩解慢性疼痛組合物。實(shí)施例8中藥組合物緩解慢性疼痛功能的藥效實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)材料1.1藥物及主要試劑(1)主要試劑采用上述實(shí)施例5中獲得的中藥組合物；freund’s完全佐劑，sigma公司；聚山梨酯80，湖北盛天恒創(chuàng)生物科技有限公司；二甲苯，西安山川化工有限公司；冰醋酸(99.5％)，天津市永晟精細(xì)化工有限公司。(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，spf級(jí)，體重(20±2)g，由湖北中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。sd大鼠，雄性，spf級(jí)，體重(150±20)g，由湖北中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。(3)主要儀器電子分析天平，bs124s，德國(guó)startorius公司；足趾容積測(cè)量?jī)x，成都泰盟科技有限公司，pv-200；酶標(biāo)儀：美國(guó)bio-rad公司；超低溫冷凍冰箱，美國(guó)thermofisherscientific；超純水機(jī)，mill-qⅱ，milipore，bedford，ma，usa；試劑盒，南京建成生物工程研究所。2.試驗(yàn)方法2.1二甲苯致炎模型：選擇昆明種小鼠，按體重隨機(jī)分組，每組15只：模型組、實(shí)施例5樣品高劑量組、樣品中劑量組、樣品低劑量組、肉桂油單劑組及肉豆蔻油單劑組，實(shí)施例5樣品組給藥劑量依次為26.0mg/kg、13.0mg/kg、6.5mg/kg；肉桂油單劑組與肉豆蔻油單劑組給藥劑量均為13.0mg/kg。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)14d。模型組同期灌胃等容積蒸餾水。末次給藥后30min，在小鼠右耳兩面涂二甲苯造模，左耳做對(duì)照，頸椎脫臼處死，在左右耳相對(duì)稱(chēng)部位取下耳片，計(jì)算抑制率，觀察受試物對(duì)致炎模型的恢復(fù)作用。腫脹度＝右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量；腫脹率＝[(右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量)/左耳重量]×100％2.2醋酸扭體法致痛模型：選擇昆明種小鼠，按體重隨機(jī)分組，每組15只：模型組、實(shí)施例5樣品高劑量組、樣品中劑量組、樣品低劑量組、肉桂油單劑組及肉豆蔻油單劑組，實(shí)施例5樣品給藥劑量依次為26.0mg/kg、13.0mg/kg、6.5mg/kg；肉桂油單劑組與肉豆蔻油單劑組給藥劑量均為13.0mg/kg。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)14d。模型組同期灌胃等容積蒸餾水。末次給藥后30min，腹腔注射醋酸溶液造模，觀察扭體反應(yīng)，計(jì)算鎮(zhèn)痛率，觀察組合物對(duì)疼痛模型的恢復(fù)作用。2.3、弗氏佐劑致關(guān)節(jié)炎模型：取雄性sd大鼠，按體重隨機(jī)分組，每組15只：空白組、模型組、實(shí)施例5樣品高劑量組、樣品中劑量組、樣品低劑量組，實(shí)施例5樣品給藥劑量依次為18.0mg/kg、9.0mg/kg、4.5mg/kg；肉桂油單劑組與肉豆蔻油單劑組給藥劑量均為9.0mg/kg。各組給藥臨用前均溶于聚山梨酯80，按給藥容積為1ml/100g配置混懸液，灌胃給藥。用排水法測(cè)定各組大鼠右后足踝關(guān)節(jié)以下足跖的容積(ml)。致炎前3天按相應(yīng)給藥劑量灌胃給藥，1次/d，連續(xù)3d后，各組大鼠給予右后足趾皮內(nèi)注射freund’s完全佐劑0.1ml致炎，用排水法測(cè)定致炎前及致炎后3h、6h、24h，檢測(cè)大鼠右后足踝關(guān)節(jié)以下足跖的容積(ml)，重復(fù)3次，求平均值。致炎后各組繼續(xù)灌胃給藥，1次/d，于第7d、9d、11d分別檢測(cè)非致炎側(cè)足容積，以觀察大鼠繼發(fā)性足跖腫脹。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，眼眶取血，收集于預(yù)先加有edta和抑肽酶的ep管中，混勻靜置，分離血漿，檢測(cè)血液中p物質(zhì)含量；處死大鼠，切取左右腳足底皮膚組織，10％福爾馬林固定；將已石蠟包埋的皮膚組織蠟塊切片分別進(jìn)行nk-1r、cox-2的免疫組織化學(xué)染色，鏡檢。結(jié)果以mean±sd表示，采用spss統(tǒng)計(jì)軟件(12.0)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行anova分析。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組大鼠指標(biāo)水平變化見(jiàn)表1～表4。表1各劑量組對(duì)小鼠耳腫脹度、抑制率的影響組別例數(shù)耳腫脹度(mg)抑制率(℅)模型組1512.2±3.4#-高劑量組154.8±2.0※62.7中劑量組155.3±4.1※59.6低劑量組156.9±1.5※47.3肉桂油單劑組157.7±4.138.7肉豆蔻油單劑組159.0±2.731.3注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.05。由上述試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，小鼠左耳涂抹二甲苯后，與右耳對(duì)照比較，左耳產(chǎn)生明顯的腫脹，模型組較空白組小鼠耳腫脹度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，提示二甲苯造模成功；高、中、低劑量組與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，說(shuō)明實(shí)施例5中藥組合物高、中、低劑量組對(duì)二甲苯所致的炎癥有較強(qiáng)的抑制作用，且效果優(yōu)于單劑效果。表2小鼠扭體次數(shù)、鎮(zhèn)痛率組別例數(shù)扭體次數(shù)鎮(zhèn)痛率(℅)模型組1524.60±11.28-高劑量組1511.00±5.19※71.13中劑量組1511.04±4.47※69.60低劑量組1513.68±11.61※55.38肉桂油單劑組1513.60±7.8354.73肉豆蔻油單劑組1512.88±6.57※60.80注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.05。由上述試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，腹腔注射醋酸溶液后，觀察小鼠的扭體次數(shù)及計(jì) 算鎮(zhèn)痛率：模型組與空白組對(duì)比，扭體次數(shù)明顯增多，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)；各劑量組與模型組比較，扭體次數(shù)均有減少，有顯著性差異(p<0.05)。說(shuō)明實(shí)施例5中藥組合物高、中、低劑量組可顯著減少小鼠扭體次數(shù)，且效果優(yōu)于單劑效果。表3各受試樣品對(duì)大鼠腳掌的腫脹程度組別例數(shù)腫脹程度3h腫脹程度6h腫脹程度24h腫脹程度7d腫脹程度9d腫脹程度11d空白組151.61±0.141.62±0.151.61±0.141.63±0.141.61±0.151.61±0.14模型組152.20±0.12#2.26±0.19#2.21±0.11#2.08±0.15#2.22±0.10#2.13±0.13#高劑量組151.82±0.17※2.01±0.28※1.93±0.212.11±0.352.10±0.21※1.90±0.15中劑量組152.01±0.17※2.02±0.182.10±0.251.99±0.291.91±0.25※2.08±0.13※低劑量組152.12±0.172.33±0.132.28±0.182.06±0.132.21±0.182.11±0.14肉桂油單劑組151.80±0.11※2.11±0.11※2.16±0.192.17±0.122.11±0.08※2.05±0.05肉豆蔻油單劑組152.33±0.122.30±0.062.27±0.142.15±0.182.18±0.122.10±0.11注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.01。由上述試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，模型組大鼠腫脹程度與空白組比較有顯著性差異(p<0.05)；與模型組比較，高劑量組在腫脹程度有顯著性差異(p<0.05)，中劑量組在3h、11d腫脹程度有顯著性差異(p<0.05)。說(shuō)明實(shí)施例5中藥組合物高、中劑量組可顯著減少大鼠腳掌的腫脹程度，且效果優(yōu)于單劑效果。表4大鼠熱痛閾值注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.01。由上述試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，測(cè)量并計(jì)算大鼠熱痛閾值：模型組大鼠疼痛閾值在3h、6h、24h、7d、9d、11d后與空白組比較均有顯著性差異(p<0.05)；高、中劑量組與模型組比較均有顯著性差異(p<0.05)，低劑量組在3h、6h與模型組比較有顯著性差異(p<0.05)。說(shuō)明實(shí)施例5中藥組合物高、中、低劑量組可顯著降低大鼠疼痛閾值，且效果優(yōu)于單劑效果。表5不同組別疼痛相關(guān)因子nk-1r、cox-2含量組別例數(shù)p物質(zhì)含量(pg/ml)nk-1rcox-2空白組15178.913±22.6940.0222±0.000730.0146±0.001模型組15458.778±114.340#0.0648±0.00782#0.0384±0.00248#高劑量組15216.928±31.274※0.0298±0.00187※0.0165±0.00123※中劑量組15279.858±6.324※0.0383±0.00084※0.0215±0.00382※低劑量組15311.570±19.5440.0405±0.00065※0.0253±0.00182※肉桂油單劑組15266.654±17.547※0.0393±0.00483※0.0245±0.00184※肉豆蔻油單劑組15350.840±99.9660.0455±0.00125※0.0299±0.00052※注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.01。由上述試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，各組p物質(zhì)含量比較如下，模型組與空白組比較有顯著性差異(p<0.05)，各劑量組與模型組比較有顯著性差異(p<0.05)。各組大鼠疼痛相關(guān)因子nk-1r、cox-2比較，模型組與空白組比較有顯著性差異(p<0.05)，各劑量組與模型組比較差異有顯著性意義(p<0.05)。說(shuō)明實(shí)施例5中藥組合物高、中、低劑量組可顯著減少疼痛相關(guān)因子的含量，且效果優(yōu)于單劑效果。4.實(shí)驗(yàn)小結(jié)綜合各劑量組對(duì)二甲苯致炎模型，醋酸扭體法致痛模型及弗氏佐劑致關(guān)節(jié)炎模型的干預(yù)結(jié)果，各劑量組在緩解慢性疼痛功能方面上有一定療效，高、中劑量組與模型組緩解慢性疼痛功能方面的療效相對(duì)較為明顯。而在弗氏佐劑致關(guān)節(jié)炎模型中p物質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果，以及疼痛相關(guān)炎性因子測(cè)定結(jié)果也和其緩接慢性疼痛測(cè)定結(jié)果具有一致性。實(shí)施例9中藥組合物緩解慢性疼痛功能的藥效實(shí)驗(yàn)參照實(shí)施例8的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，分別用實(shí)施例1～4和實(shí)施例6、7的組合物替代實(shí)施例5的組合物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。樣品組小鼠給藥劑量均為13.0mg/kg.d；大鼠給藥劑量均為9.0mg/kg.d。各組大鼠生化指標(biāo)水平變化見(jiàn)表6～10。表6各劑量組對(duì)小鼠耳腫脹度、抑制率的影響組別例數(shù)耳腫脹度(mg)抑制率(℅)模型組1512.2±3.4#-實(shí)施例1158.0±1.235.8實(shí)施例2157.6±2.440.1實(shí)施例3156.7±3.4※48.8實(shí)施例4156.3±1.2※54.6實(shí)施例6157.9±3.135.4實(shí)施例7158.9±2.1※31.0注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.01。表7小鼠扭體次數(shù)、鎮(zhèn)痛率注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.05。表8各受試樣品對(duì)大鼠腳掌的腫脹程度組別例數(shù)腫脹程度3h腫脹程度6h腫脹程度24h腫脹程度7d腫脹程度9d腫脹程度11d空白組151.61±0.141.62±0.21.61h±0.141.63±0.141.61±0.151.61±0.14模型組152.20±0.12#2.26±0.2#2.21±0.11#2.11±0.15#2.22±0.10#2.13±0.13#實(shí)施例1152.10±0.172.12±0.182.11±0.17※2.06±0.132.06±0.21※2.05±0.15※實(shí)施例2152.16±0.222.22±0.242.28±0.222.15±0.121.99±0.12※2.01±0.11※實(shí)施例3152.00±0.102.12±0.162.11±0.171.97±0.182.03±0.21※1.98±0.26※實(shí)施例4151.81±0.12※2.09±0.262.16±0.331.98±0.091.88±0.23※※2.00±0.15※實(shí)施例6151.99±0.172.04±0.112.17±0.062.06±0.122.01±0.14※2.13±0.23實(shí)施例7152.07±0.112.13±0.28※2.14±0.132.02±0.102.01±0.25※2.15±0.13注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.05。表9大鼠熱痛閾值組別例數(shù)疼痛閾值3h疼痛閾值6h疼痛閾值24h疼痛閾值7d疼痛閾值9d疼痛閾值11d空白組1515.44±2.214.87±1.3515.43±2.6014.85±3.6115.84±3.3314.17±3.53模型組1515.56±3.4218.81±2.38#16.68±2.21#17.79±1.83#16.12±3.1316.80±4.13#實(shí)施例11515.12±4.1716.22±3.18※15.22±1.13※17.06±2.1315.08±3.08※16.05±3.05實(shí)施例21515.78±3.2316.12±3.2215.58±1.2316.96±3.6113.22±2.45※12.54±2.23※實(shí)施例31515.25±1.3715.45±1.3115.99±3.4615.01±3.2414.08±2.34※13.07±1.40※實(shí)施例41515.22±3.5614.99±2.43※14.92±2.34※14.04±2.14※16.01±1.2114.44±2.13※實(shí)施例61515.09±3.2716.23±2.3415.22±3.1415.76±3.3415.23±3.16※16.05±3.46實(shí)施例71515.33±2.1216.50±3.06※15.25±3.1815.25±3.1815.28±1.08※15.15±2.11※注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.05。表10不同組別疼痛相關(guān)因子nk-1r、cox-2含量組別例數(shù)p物質(zhì)含量(pg/ml)nk-1rcox-2空白組15178.913±22.6940.0222±0.000730.0146±0.00101模型組15458.778±114.340#0.0648±0.00782#0.0384±0.00248#實(shí)施例115325.511±43.059※0.0339±0.00065※0.0249±0.00182※實(shí)施例215325.511±7.788※0.0334±0.00187※0.0233±0.00079※實(shí)施例315277.167±24.356※0.0397±0.00124※0.0245±0.00064※實(shí)施例415310.511±13.975※0.0338±0.00087※0.0210±0.00389※實(shí)施例615299..511±33.456※0.0339±0.00357※0.0240±0.00248※實(shí)施例715343.840±84.9590.0452±0.00113※0.0303±0.00184※注：#與空白組比較p<0.05，##與空白組比較p<0.01，※與模型組比較p<0.05，※※與模型組比較p<0.05。以上試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明所述的不同配比肉桂油和肉豆蔻油組合物均表現(xiàn)出明顯的緩解慢性疼痛作用。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12