卡鉑—是一種用于癌癥系統(tǒng)治療中比較有效的抗癌劑。這種化療藥物對試驗動物和人體腫瘤模型的治療非常有效，如子宮內(nèi)膜、膀胱、卵巢和睪丸瘤，以及頭和頸鱗片狀細胞瘤?？ㄣK等活性鉑化合物還廣泛地用于包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌的肺癌治療中。其他的活性鉑化合物(如下定義)也用于癌癥的治療中。

像其他癌癥化療劑一樣，典型地，如順鉑、卡鉑等活性鉑化合物具有劇毒。活性鉑化合物的主要不足是作為一個主要的劑量限制因素的極端腎毒性，由于只有幾分鐘的半衰期而通過腎臟的快速排泄，以及對血漿蛋白的較強親和力。

減少活性鉑化合物毒性的試驗，包括聯(lián)合化療、合成類似物(prestayko等人，1979cancertreatrev.6(1):17-39)；weiss等人，1993drugs.46(3):360-377),免疫療法和脂質(zhì)體包埋(sur等人，1993；weiss等人，1993)。相對于游離形式的劑型，包括在脂質(zhì)體內(nèi)包埋的活性鉑化活物的抗腫瘤劑，在保持抗腫瘤活性的同事，具有較低毒性(steerenberg等人，1987：weiss等人，1993)。

但是，由于卡鉑的水溶解度低以及低親油性，導(dǎo)致卡鉑/脂類的比率低，所以難以在脂質(zhì)體或者脂類絡(luò)合物中有效地包埋卡鉑。

包含卡鉑的脂質(zhì)體和脂類絡(luò)合物還存在另一個問題——化合物的穩(wěn)定性。特別是在儲存過程中的脂質(zhì)體中生物活性劑效力的持久性和生物活性劑的保持力為公認(rèn)問題(freise等人，1982；gondal等人，1993；potkul等人，1991amjobstetgynecol.164(2):652-658；steerenberg等人，1988；sweiss等人，1993)，另外有報道稱包含活性鉑化合物的脂質(zhì)體的保質(zhì)期有限，在4℃下為幾個星期(gondal等人，1993eurjcancer.29a(11):1536-1542；potkul等人，1991)。

發(fā)明概述

本發(fā)明描述的是一種新型的由脂類包埋卡鉑及其制備方法。尤為特別的，本發(fā)明描述的是一種卡鉑與脂類比率的新型脂類絡(luò)合卡鉑。本發(fā)明描述的方法是形成這種新型卡鉑聚集體的新方法。

除了其他以外，本發(fā)明提供一種包括脂質(zhì)體或脂類絡(luò)合物和卡鉑的組合物，所述脂質(zhì)體包含一種或者多種脂類，其中卡鉑與脂類的重量比率為1:40-1:5,或者1:30-1:5，或者1:20-1:12。一種或者多種脂類可以包括，例如50-100mol％dppc和0-50mol％膽固醇，又例如50-70mol％dppc和10-30mol％膽固醇.

同時本發(fā)明還提供一種卡鉑聚集體的制備方法，包括以下步驟：(a)卡鉑與疏水基質(zhì)負(fù)載系統(tǒng)結(jié)合：(b)在第一溫度下形成混合物：和(c)隨后在低于第一溫度下形成混合物：其中步驟(b)和(c)對提高卡鉑的封裝是有效的。一般是通過加熱來實現(xiàn)步驟(b)，而一般是通過冷卻來實現(xiàn)步驟(c)。在作為選擇的實施例中，循環(huán)從冷卻步驟開始，轉(zhuǎn)換到加熱步驟，重復(fù)這樣兩個步驟。所述方法包括繼續(xù)使步驟(b)和(c)重復(fù)二或三或者更多個循環(huán)。可以通過將卡鉑溶解在鹽溶液中形成卡鉑溶液。疏水基質(zhì)負(fù)載系統(tǒng)最好包括脂質(zhì)體或者脂類絡(luò)合物-型的脂類。在所有步驟(b)和(c)完成以后，卡鉑聚集體的制備方法可以進一步包括：(d)通過穿過具有分子重量定點選擇能力的膜來進行過濾，去除未包封的卡鉑，保留需要的脂質(zhì)體或者脂類絡(luò)合物，并且將脂質(zhì)體或者脂類絡(luò)合物相容的液體加入到洗凈的未包埋的卡鉑中。

本發(fā)明進一步提供了按照本發(fā)明方法制備的卡鉑聚集體和本發(fā)明組合物的藥劑配方。所述配方包括藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑或者適于對病人進行吸入或注射的傳輸。

附圖說明

圖1顯示出根據(jù)本發(fā)明的卡鉑脂類絡(luò)合物的抗癌活性,加藥后二天，測量ic50:9(卡鉑)；17(卡鉑脂質(zhì)體)μg/ml。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明包括一種新型的脂類絡(luò)合物的卡鉑聚集體，其生物活性劑與脂類比率高。本發(fā)明中生物活性與脂類的重量比率是在1:15到1:30之間。最優(yōu)選地，生物活性劑與脂類的重量比率是在1:15到1:25之間。

卡鉑聚集體的制備方法包括將卡鉑與適當(dāng)?shù)氖杷|(zhì)混合以及使混合物在兩種單獨的溫度下進行一個或者多個循環(huán)?？梢酝ㄟ^這個方法形成卡鉑聚集體。

本發(fā)明描述的肺部給藥吸入型卡鉑脂質(zhì)體的制備方法如下：將脂材溶于乙醇、甲醇等與水互溶的有機溶劑中并在攪拌下注入預(yù)熱至脂材相變溫度以上的卡鉑等滲葡萄糖或pbs溶液得到脂質(zhì)體溶液；也可以采取如下方法得到脂質(zhì)體溶液，將脂材溶于氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚等與水不互溶的有機溶劑中并在超聲或劇烈震蕩下注入卡鉑的等滲葡萄糖或pbs溶液中形成油包水型分散體系，有機相與水相的比例為3:1，減壓蒸干有機溶劑得到脂質(zhì)體溶液；也可以采取如下方法得到脂質(zhì)體溶液，將脂材溶于氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、乙醇、甲醇等有機溶劑中，減壓蒸干有機溶劑得到脂膜，加入預(yù)熱至脂材相變溫度以上的卡鉑的等滲葡萄糖或pbs溶液，震搖得到脂質(zhì)體溶液。通過以上方法得到的脂質(zhì)體可以通過均質(zhì)機或超聲等手段減小粒徑，也可以不減小粒徑而直接進行下一步驟。采用超濾、透析或過sephadex柱等方法除去游離卡鉑即得卡鉑脂質(zhì)體溶液。

如常規(guī)試驗?zāi)軌驔Q定的，在某些情況下，方法中采用的合適溫度可以隨方法中采用的脂類混合物而變化。

合成的卡鉑聚集體具有高的藥與脂類比率。配方可以適用于吸入或者注射。

為了公開目的，采用以下技術(shù)術(shù)語：

“溶液輸灌”是包括在少量、優(yōu)選微量的工藝相容溶劑中溶解一種或者多種脂類來形成脂類懸浮液或者溶液(優(yōu)選溶液)，然后將溶液住著到包含生物活性劑的水介質(zhì)中的方法，。典型地，能夠在含水工藝，例如透析中洗凈工藝相容溶劑。酒精為優(yōu)選溶劑?！耙掖驾敼唷保环N溶液輸灌類型，是包括在少量、優(yōu)選微量的乙醇中溶解一種或者多種脂類來形成脂類溶液，然后將溶液注射到包含生物活性劑的水介質(zhì)中的方法?！吧倭俊比芤簳r在輸灌過程中與形成脂質(zhì)體或者脂類絡(luò)合物相容的數(shù)量。

“疏水基質(zhì)負(fù)載系統(tǒng)”是有上述溶液輸灌方法生產(chǎn)的脂類/溶液混合物。

用于本發(fā)明的脂類可以是合成的、半合成的或者天然存在的脂類，包括磷脂、維生素e、固醇、脂肪酸、糖脂、陰離子脂、陽離子脂。所述磷脂能夠包括卵磷脂(epc)、磷脂酰甘油(epg)、磷脂酰肌醇(epi)、磷脂酰絲氨酸(eps)、磷脂酰乙醇胺(epe)、和磷脂酸(epa)：大豆相應(yīng)物，大豆卵磷脂(spc)：spg、sps、spi、spe和spa：氫化的卵和大豆相應(yīng)物(例如hepc、hspc)，硬脂酸(stearically)修正的卵磷脂乙醇胺，膽固醇衍生物，類胡蘿卜素，其他通過脂鍵結(jié)構(gòu)成的卵磷脂，該酯由在2和3位上含有12-26個碳原子鏈的甘油和在1位上含有不同個包含膽堿、甘油、肌糖、絲氨酸、乙醇胺的主要基團的甘油組成，以及相應(yīng)的卵磷脂酸。這些脂肪酸鏈可以是飽和或者不飽和的，磷脂可以由不同長度和飽和度的脂肪酸構(gòu)成。特別地，配方的組合物可以包括dppc，自然存在的肺表面活性劑的主要成分。其他的例子包括肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(dmpc)和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dmpg)和二棕櫚酸磷脂酰膽堿(dppc)和二棕櫚酸磷脂酰甘油(dppg)和二硬脂酰磷脂酰膽堿(dspc)和二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)，二油酰磷脂酰-膽堿(pspc)和棕櫚酰硬脂酰甘油(pspg)，三酰甘油，seranide、二酰甘油，鞘氨醇，鞘磷脂和如單-油酰-磷脂乙醇胺(mope)的單酰磷脂。

“生物活性劑”是對細胞、病毒、組織、器官或者有機體作用，是細胞、病毒、組織、器官或者有機體的功能產(chǎn)生變化的物質(zhì)。本發(fā)明中使用生物活性鉑是卡鉑。

試驗結(jié)果明顯地顯示出在脂質(zhì)體囊形成過程中主要包埋卡鉑來實現(xiàn)封裝。結(jié)果進一步顯示出，由于卡鉑濃度比溶解極限高很多，所以卡鉑的物理狀態(tài)為固態(tài)(聚集體)或者脂質(zhì)結(jié)合。結(jié)果進一步顯示出過程中不需要冷凍混合物，但是冷卻到冰凍溫度之上可以產(chǎn)生更好的效果。結(jié)果進一步顯示出3-4個冷卻和加熱循環(huán)的包埋效果和6個循環(huán)的包埋效果類似，其說明3-4個循環(huán)的溫度處理足以時限優(yōu)選級別的包埋。

結(jié)果進一步顯示了在提高包埋卡鉑效率的同時，可以將這個工藝放大。因此，本發(fā)明進一步提供用來供應(yīng)適于整個給藥為200mls或更多、或者800ls或更多(適當(dāng)?shù)纳倭吭黾?的方法。所有其他的條件都相同的情況下，可以相信生產(chǎn)較大體積通常比小規(guī)模易達到增加的效果。如果這樣的體積適于給藥時，能夠減少體積來使其適于存儲。

結(jié)果進一步顯示了，由于最小限度的泄漏，通過本發(fā)明方法制備的脂類絡(luò)合卡鉑能夠保持包埋在一年以上。配方的獨特性的進一步證實顯示出卡鉑被限制在脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)中并且不易泄漏。

實施例

實施例1

將20mg氫化大豆卵磷脂(hspc)和4mg膽固醇溶于5ml氯仿中，37℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿得到脂膜。加入預(yù)熱至60℃的濃度為1mg/ml的卡鉑等滲pbs溶液2ml，60℃下震蕩得到脂質(zhì)體溶液。利用高壓均質(zhì)機在800bar下均質(zhì)5分鐘得到小粒徑的脂質(zhì)體溶液。超濾法除去游離卡鉑即得卡鉑脂質(zhì)體溶液。除去游離藥物前包封率為6％。

實施例2

將20mg二棕櫚酸磷脂酰膽堿(dppc)和4mg膽固醇溶于1ml乙醇中，磁力攪拌下注入2ml50℃濃度為1mg/ml的卡鉑等滲葡萄糖溶液中得到脂質(zhì)體溶液。等滲葡萄糖溶液中透析除去游離卡鉑即得卡鉑脂質(zhì)體溶液。除去游離藥物前包封率為6％。

實施例3

將20mg氫化蛋黃卵磷脂(hepc)和4mg膽固醇溶于6ml氯仿中，劇烈震蕩下注入2ml濃度為1mg/ml的卡鉑等滲pbs溶液中，超聲得到油包水型分散體系。37℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿得到脂質(zhì)體溶液。過sephadexg50柱除去游離卡鉑，洗脫液為等滲pbs溶液。除去游離藥物前包封率為7％。

本說明書引述的包括但不限于專利和專利申請的出版物和參考資料，雖然只是引述了一個部分，但在此將其整體作為參考。本申請要求優(yōu)先權(quán)的任何專利申請按照對上述出版物和參考資料的態(tài)度再次一并參考。

雖然本發(fā)明只著重描述了優(yōu)選地實施例，但是，可以使用變化的優(yōu)選設(shè)備和方法，以及可以試圖使用與這里描述的方法不同的方法進行，這對于本領(lǐng)域一般人員而言是顯而易見的。因此，本發(fā)明包括在下述權(quán)利要求的精神和范圍內(nèi)的所有修改。