本發(fā)明屬于帕金森癥治療藥物領域，具體地說是涉及一種以工業(yè)大麻為主要原料制備的治療帕金森癥的藥物組合物。
背景技術(shù)：
：大麻的種植歷史悠久，古代大麻主要用于制作加工繩索、漁網(wǎng)、服裝和造紙原料，以及油脂、食品等。隨著社會的發(fā)展和進步，人們發(fā)現(xiàn)大麻中含有一種毒性成分(四氫大麻酚)可使人致幻成癮，歐美許多國家曾在相當長時期內(nèi)禁種大麻。由于大麻的經(jīng)濟利用價值高，到20世紀80年代，一些歐洲國家研究培育出了低毒大麻品種并獲得推廣種植。1990年歐共體率先緊急修訂農(nóng)業(yè)政策，廢除了禁種大麻的禁令，開始恢復大麻的生產(chǎn)和研究。隨后美國、加拿大、澳大利亞等國解除了大麻種植的禁令，全球大麻種植面積和纖維產(chǎn)量有了迅速增長，歐美國家對工業(yè)大麻的開發(fā)利用再次掀起，國際市場對生態(tài)大麻的需求也在迅速增長。根據(jù)大麻的經(jīng)濟屬性，為充分利用其為人類服務，1988年聯(lián)合國明確規(guī)定不具備提取毒性成分(四氫大麻酚THC)價值或直接作為毒品吸食的，專供工業(yè)用途的原料大麻，工業(yè)大麻(其生長期大麻花葉中的四氫大麻酚含量小于0.3％)，可以合法進行規(guī)模化種植與工業(yè)化開發(fā)利用。工業(yè)大麻是獨具特色、比較優(yōu)勢突出的生物資源。工業(yè)大麻與傳統(tǒng)有毒大麻具有本質(zhì)差別，工業(yè)大麻是一類無毒化的工業(yè)原料產(chǎn)品，具有極高的經(jīng) 濟利用價值。到2003年末世界各國先后一共選育出25個工業(yè)大麻品種，而且歐盟的法、德、英等七國也都成為工業(yè)大麻主要種植生產(chǎn)國，以工業(yè)大麻纖維和麻籽及其花、葉、根、莖為原料進行系列產(chǎn)品研發(fā)與產(chǎn)業(yè)化綜合開發(fā)，已在工業(yè)大麻初級加工主產(chǎn)品麻皮纖維、稈芯纖維、麻籽油脂和籽粕蛋白、藥用標準化提取物實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的基礎上，進一步進行深加工利用，派生出來的產(chǎn)品已達到二萬五千種以上，包含了人類的衣、食、住、行、用各大類產(chǎn)品。工業(yè)大麻產(chǎn)業(yè)的研究、開發(fā)和生產(chǎn)主要集中在歐洲、加拿大、美國等技術(shù)發(fā)達國家。工業(yè)大麻產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，首先是從選育無毒或低毒化的工業(yè)大麻新品種開始的，并以此為基礎實現(xiàn)了規(guī)?；姆N植和高技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的綜合開發(fā)利用，形成了一個“新興綠色產(chǎn)業(yè)群”和新型工業(yè)經(jīng)濟的快速增長點?；鹇槿蕿榇舐楦稍锍墒旃麑?，古代通常將火麻仁入藥，食療亦有記載。國家衛(wèi)生部已將火麻仁納入“既是藥品又是食品”——“藥食兩用”名單?；鹇槿实乃幮约八幚頌椋焊?，平。歸脾、胃、大腸經(jīng)。功能主治：潤燥，滑腸，通淋，活血。治腸燥便秘，消渴，熱淋，風痹，痢疾。月經(jīng)不調(diào)，疥瘡，癬癩。在醫(yī)書中有詳細療效記載，如《本經(jīng)》：“補中益氣?！?；《唐本草》：“主五勞?！保弧吨夂蠓健罚骸爸未罂?，日食數(shù)斗，小便赤澀者：麻子一升，水三升，煮三、四沸，取汁飲之。”；《日華子本草》：“補虛勞，長肌肉，下乳，止消渴，催生。治橫逆產(chǎn)?！保弧侗静菔斑z》：“下氣，利小便，去風痹皮頑，炒令香搗碎，小便浸取汁服；婦人倒產(chǎn)吞二七枚?！保弧妒朝煴静荨罚骸叭≈笾?，去五臟風、潤肺。治關節(jié)不通、發(fā)落，通血脈?！?。大麻的花葉均供藥用。麻葉的藥性及藥理為：辛；有毒。歸肺；膀胱； 大腸經(jīng)。功能主治：止痛，定喘，驅(qū)蛔。主治氣喘，跌撲疼痛，蛔蟲病。麻花的藥性及藥理為：苦；辛；性溫；有毒。功能主治：祛風；活血；生發(fā)。主風病肢體麻木；遍身瘙癢；婦女經(jīng)閉。隨著人類平均壽命的逐年增加，世界正步入全球老齡化時代。與年齡有關的神經(jīng)退化性疾病也隨之增加，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)方面，主要表現(xiàn)為興奮與抑制過程減弱，大腦功能降低，記憶力減退和喪失，隨后出現(xiàn)識別功能的進行性減退和情緒紊亂的加重等。帕金森病(PD)是一種以黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元(NDN)特征性缺失為主要病理改變的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，臨床上以靜止性震顫、肌僵直、運動遲緩和姿勢調(diào)節(jié)障礙為主要特征，其發(fā)病率可隨年齡的增加而提高。50歲以上為500人/10萬，60歲以上則達每年1000人/10萬，患病率之高，使之成為僅次于腦血管病的神經(jīng)系統(tǒng)常見病。帕金森病對患者、家庭和社會都帶來巨大的壓力，使得全世界對其給予眾多的關注，帕金森病的治療藥物研究成為老年醫(yī)學領域中的一個重要課題。大麻二酚(CBD)是從大麻花葉中萃取的一種無毒的可用于藥品、化妝品、保健食品的一種高附加值的酚類物質(zhì)。目前，以色列、美國、英國等發(fā)達國家已用其做原料并開發(fā)出多種特效藥品和化妝品。CBD是大麻中的非成癮性成分，能阻礙THC對人體神經(jīng)系統(tǒng)影響，并具有抗痙攣、抗風濕性關節(jié)炎、抗焦慮等藥理活性，亦有在治療帕金森癥方面的報道，但單獨使用大麻二酚(CBD)的治療效果并不理想。因此開發(fā)新的活性高，毒副作用小的治療藥物顯得非常必要。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種以工業(yè)大麻為主要原料制備的治療帕金森癥的藥物組合物。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)。除非另有說明，本發(fā)明所采用的百分數(shù)均為質(zhì)量百分數(shù)。一種治療帕金森癥的藥物，其特征在于，由下述重量份的原料混勻制成：工業(yè)大麻火麻仁提取物0.3份～99.7份，工業(yè)大麻火麻素99.7份～0.3份。所述的治療帕金森癥藥物的原料組成優(yōu)選為工業(yè)大麻火麻仁提取物40份和工業(yè)大麻火麻素60份。其中，所述的工業(yè)大麻火麻仁提取物通過以下方法制備而成：(1)取成熟的工業(yè)大麻火麻仁，經(jīng)烘干、除雜，粉碎后備用；(2)在20～85℃條件下，用乙醇對粉碎火麻仁料進行提取，乙醇濃度為95％～100％(V/V)，料液比為1:5～1:20；(3)濾出浸提液，減壓濃縮后即為工業(yè)大麻火麻仁提取物。在用乙醇對工業(yè)大麻火麻仁進行提取時，可采用以下多種方式進行：如室溫下浸提，每批物料浸提2次，每次7～10天；在60～85℃條件下，加熱提取2次，每次1～3小時；超聲波輔助提取，超聲波頻率30～60kHz，功率100～1000W，提取時間30～60min，浸提溫度25～50℃；亦可采用微波輔助提取等其它現(xiàn)有技術(shù)。所述的工業(yè)大麻火麻素通過以下方法制備而成：(1)取工業(yè)大麻的花、葉、麻糠或三者的混合物，經(jīng)烘干、除雜、粉碎至10～60目；(2)超臨界二氧化碳萃取：將上述粉碎好的工業(yè)大麻原料投入超臨界 二氧化碳萃取裝置中，控制萃取溫度40～50℃，萃取時間30～90min，萃取壓力25～35Mpa，二氧化碳流量40kg/h，分離釜出口收集萃取物；(3)萃取物用0.2～10倍體積的95％～100％(V/V)的乙醇洗脫，洗脫次數(shù)為1～3次；(4)收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，粉碎后即得工業(yè)大麻火麻素。所述的工業(yè)大麻的花、葉、麻糠三者混合物的優(yōu)選配比為1:3:2。普通的麻葉、麻花均具有毒性(含有四氫大麻酚THC—毒品大麻的至幻物質(zhì))。為排除原料藥的毒性，本發(fā)明優(yōu)選采用云南生長的工業(yè)大麻品種——“云麻1號”的花、葉、麻糠和火麻仁作為原料。按我國相關法律文件規(guī)定，“云麻1號”只能在云南境內(nèi)種植，并且其花、葉、麻糠只能在云南境內(nèi)加工。本發(fā)明的藥物組合物可進一步制成不同的藥物制劑，包括口服劑和針劑，其中口服劑包括膠囊劑、口服液、片劑、滴丸、顆粒劑等，針劑包括注射液劑型及注射用凍干粉針劑型等。在制備口服制劑時可選用的輔型劑可以是淀粉、糊精或環(huán)糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規(guī)充填劑。凍干粉針劑可以通過無菌噴霧干燥、低溫真空干燥、冷凍干燥等方法制備。各制劑的后期制備工藝及設備均屬制藥領域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明對此不作限定，故在此不予詳述。本發(fā)明的藥物組合物具有明確的治療帕金森癥的作用。實驗發(fā)現(xiàn)，該藥物能明顯減少6-OHDA制備的PD模型大鼠的旋轉(zhuǎn)次數(shù)，并隨給藥時間的延長，有一定效果增強的趨勢；能明顯改善MPTP誘導的小鼠PD模型小鼠的轉(zhuǎn)桿活動能力，并增加小鼠的運動。本發(fā)明藥物可明顯降低鼠腦組織的氧 化應激水平，使PD模型鼠腦組織MDA含量顯著降低，明顯提高SOD的活力，表現(xiàn)出明顯的抗氧化活性。結(jié)果提示該藥物的作用機制就是清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化，使氧自由基產(chǎn)生和清除處于動態(tài)平衡中，從而延緩PD的病情進展。故本發(fā)明所述的藥物具有明確的治療帕金森作用，效果優(yōu)于大麻二酚。具體實施方式下面通過實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但實施例并不是對本發(fā)明技術(shù)方案的限定。實施例1采用云南生長的工業(yè)大麻品種——“云麻1號”的花、葉、麻糠和火麻仁作為原料。取成熟的工業(yè)大麻火麻仁，經(jīng)烘干、除雜，粉碎后備用；用乙醇對粉碎火麻仁料進行提取(在60～85℃條件下，加熱提取2次，每次1～3小時)，乙醇濃度為95％～100％(V/V)，料液比為1:5～1:20；濾出浸提液，減壓濃縮后即為工業(yè)大麻火麻仁提取物。取工業(yè)大麻的花、葉、麻糠1:3:2質(zhì)量比的混合物，經(jīng)烘干、除雜、粉碎至10～60目；超臨界二氧化碳萃取：將上述粉碎好的工業(yè)大麻原料投入超臨界二氧化碳萃取裝置中，控制萃取溫度40～50℃，萃取時間30～90min，萃取壓力25～35Mpa，二氧化碳流量40kg/h，分離釜出口收集萃取物；萃取物用0.2～10倍體積的95％～100％(V/V)的乙醇洗脫，洗脫次數(shù)為1～3次；收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，粉碎后獲得工業(yè)大麻火麻素。取工業(yè)大麻火麻仁提取物40份，工業(yè)大麻火麻素60份，混勻，得本發(fā)明藥物B。實施例2重復實施例1，有以下不同點：在用乙醇對工業(yè)大麻火麻仁進行提取時，室溫下浸提，每批物料浸提2次，每次7～10天。取工業(yè)大麻的花、葉、麻糠1:1:1質(zhì)量比的混合物作為工業(yè)大麻火麻素的提取原料。取工業(yè)大麻火麻仁提取物0.3份，工業(yè)大麻火麻素99.7份，混勻，得本發(fā)明藥物A。實施例3重復實施例1，有以下不同點：在用乙醇對工業(yè)大麻火麻仁進行提取時，采用超聲波輔助提取，超聲波頻率30～60kHz，功率100～1000W，提取時間30～60min，浸提溫度25～50℃。取工業(yè)大麻的花、葉、麻糠3:2:1質(zhì)量比的混合物作為工業(yè)大麻火麻素的提取原料。取工業(yè)大麻火麻仁提取物99.7份，工業(yè)大麻火麻素0.3份，混勻，得本發(fā)明藥物C。實施例4取實施例1所得藥物100克(過80目篩)，加入60克微晶纖維素，過80目篩三遍，混合均勻，噴入95％乙醇溶液，制軟材，過40目篩制粒，60℃干燥半小時，分裝于3#膠囊中，鋁塑復合包裝，制得治療帕金森癥藥物膠囊劑。實施例5取實施例2所得藥物，加入物料量5～20％的干淀粉及1～5％的硬脂 酸鎂等，經(jīng)混合，制粒，干燥，壓片，制得治療帕金森癥藥物片劑。實施例6取實施例3所得藥物，加入蔗糖水及常規(guī)量的防腐劑，穩(wěn)定劑等輔料。過濾、滅菌，分裝入10mL瓶中，制成治療帕金森癥藥物口服液。實施例7取實施例1所得藥物，加入注射用水溶解，加入2.0‰活性炭，攪拌，過濾，繼以用0.45μm、0.22μm微孔濾膜分級過濾，補充注射用水，分裝于西林瓶中，冷凍干燥，回充高純度氮氣，加塞，壓蓋，包裝，制得治療帕金森癥藥物注射液。應用實施例1本發(fā)明對6-羥多巴(6-OHDA)制備的PD大鼠模型的保護作用。1、6-OHDA損毀大鼠黑質(zhì)制作帕金森病(PD)模型選取體重200-250gSD雄性大鼠，10％的水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠固定于立體定向儀，齒棒低于耳間線水平，使前后囟位于同一水平上，剪去顱頂?shù)氖竺?，碘酒擦拭后，正中切開皮膚，暴露前后囟，純雙氧水擦拭顱骨表面，使前后囟充分顯示，用牙科鉆在顱骨表面注藥點處鉆1個約2mm的小孔。調(diào)整微量注射器針尖的位置，參照包新民等的《大鼠腦立體定向圖譜》，在前囟4.4mm，矢狀縫(右)1.3mm，顱骨下8.5mm點注射8μg/4μl含0.2％抗壞血酸的6-OHDA鹽溶液。注射速度為0.5μL/min，術(shù)畢留針10min后以1mm/min的速度退針，磺胺粉封閉顱孔，縫合頭皮，碘酒擦拭縫合處，置籠喂養(yǎng)。毀損術(shù)后7天，腹腔注射阿樸嗎啡0.5mg/kg誘發(fā)大鼠穩(wěn)定的向毀損對側(cè)作旋轉(zhuǎn)運動，給藥10min后觀察其 行為，記錄30min的旋轉(zhuǎn)情況，每分鐘旋轉(zhuǎn)次數(shù)至少7次以上，被視為達到PD模型要求。2、抗氧化指標檢測——SOD活性和MDA含量測定鼠斷頭開顱，取腦組織標本，以濾紙吸干表面殘血，去除嗅腦、腦干、小腦。腦組織標本分別置于玻璃勻漿器，用冰生理鹽水按質(zhì)量與體積比為1∶9的比例冰浴下制備成10％的腦組織勻漿，立即放入-30℃冰箱中保存，待測。試驗前以考馬斯亮藍法測定腦組織蛋白定量。按試劑盒說明書要求，自復融后腦組織勻漿中取樣品采用722型光柵分光光度計分別測定腦組織中SOD活性、MDA含量。3、本發(fā)明對PD模型的治療作用(1)大鼠腦室內(nèi)微量注射6-OHDA前，本發(fā)明A、B、C(20mg/kg)，大麻二酚(20mg/kg)，分別灌服給藥。分別在給藥的7d，14d，21d，28d分別腹腔注射0.5mg/kg阿樸嗎啡，觀察大鼠向毀損對側(cè)的旋轉(zhuǎn)運動，結(jié)果顯示本發(fā)明能明顯減少PD模型大鼠的旋轉(zhuǎn)次數(shù)，并隨給藥時間的延長，有一定效果增強的趨勢，且各時間點效果均優(yōu)于大麻二酚(表1)。表1本發(fā)明對6-OHDA制備的PD大鼠模型的保護作用(n＝10)注：與模型組比較，*P＜0.05。(2)在本發(fā)明給藥14d后，處死5組大鼠，取腦皮層，測定SOD活力和MDA含量，表2顯示本發(fā)明能明顯降低6-OHDA毀損大鼠腦組織的氧化應激水平，本發(fā)明使PD模型大鼠腦組織MDA含量顯著降低，明顯提高SOD的活力，優(yōu)于大麻二酚，表現(xiàn)出抗氧化活性。表2本發(fā)明對6-OHDA損毀大鼠腦組織MDA水平和SOD活力的影響(n＝10)組別例數(shù)MDA(mol/L)SOD(mmol/L)模型組1011.03±3.3990.12±10.37大麻二酚組107.95±2.03*134.56±19.86*本發(fā)明A組105.68±1.35***160.18±14.88**本發(fā)明B組104.95±1.12***176.43±18.17***本發(fā)明C組106.73±1.68**150.79±16.56**注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。應用實施例2本發(fā)明對MPTP誘導的PD小鼠模型的保護作用1、皮下注射MPTP誘導C57/BL小鼠PD模型選取體重25-27g8w齡雄性C57/BL小鼠隨機分為5組，分別為模型組、本發(fā)明A組(20mg/kg)、本發(fā)明B組(20mg/kg)、本發(fā)明C組(20mg/kg)和大麻二酚組(20mg/kg)。對照組和模型組預先給予灌胃生理鹽水，給藥組給予上述劑量的藥物，第8d模型組和各給藥組皮下注射MPTP40mg/kg，給藥容量0.1ml/10g，一天一次，連續(xù)7天，第15d觀察小鼠的行為學指標和進行生化指標檢測。2、行為學檢測(1)自主活動計數(shù)參照KawaiH測試方法，自制30cm×30cm×15cm的有機玻璃盒，底部刻出6cm×6cm的格子，在安靜、光線較暗的環(huán)境中檢 測。小鼠適應環(huán)境10min后，計數(shù)5min內(nèi)小鼠移動的格子數(shù)，連續(xù)測5次取平均值。(2)Rotarod檢測Rotarod實驗需要動物在滾軸上保持平衡并連續(xù)運動，是廣泛采用的檢測運動協(xié)調(diào)性的實驗。C57/BL小鼠末次給藥1小時后把小鼠置于旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)棒儀上(滾軸直徑6cm，轉(zhuǎn)速為13r/min)，使之不斷地調(diào)整四肢，以保持身體平衡，若從轉(zhuǎn)桿跌落下來即自動記錄在轉(zhuǎn)桿的時間(最長檢測時間180s，超過者仍記為180s)。3、抗氧化指標檢測——SOD活性和MDA含量測定鼠斷頭開顱，取腦組織標本，以濾紙吸干表面殘血，去除嗅腦、腦干、小腦。腦組織標本分別置于玻璃勻漿器，用冰生理鹽水按質(zhì)量與體積比為1∶9的比例冰浴下制備成10％的腦組織勻漿，立即放入-30℃冰箱中保存，待測。試驗前以考馬斯亮藍法測定腦組織蛋白定量。按試劑盒說明書要求，自復融后腦組織勻漿中取樣品采用722型光柵分光光度計分別測定腦組織中SOD活性、MDA含量。4、本發(fā)明對MPTP誘導的PD小鼠模型的保護作用(1)MPTP使小鼠的轉(zhuǎn)桿時間明顯縮短和自發(fā)活動時間縮短，而本發(fā)明A、B、C(20mg/kg)在給藥14d后均能延長小鼠的轉(zhuǎn)桿時間，并增加小鼠的自發(fā)活動次數(shù)，顯示本發(fā)明和大麻二酚一樣能明顯改善PD模型小鼠的轉(zhuǎn)桿活動能力，并增加小鼠的運動，且效果優(yōu)于大麻二酚(表3、4)。表3本發(fā)明對MPTP誘導的PD小鼠轉(zhuǎn)桿活動能力的影響注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。表4本發(fā)明對MPTP誘導的PD小鼠自發(fā)活動的影響組別例數(shù)時間(分)模型組1071.93±12.18大麻二酚組(20mg/kg)10111.53±16.28**本發(fā)明A組(20mg/kg)10135.11±14.63**本發(fā)明B組(20mg/kg)10137.07±15.13**本發(fā)明C組(20mg/kg)10130.53±16.48**注：與模型組比較，**P＜0.01。(2)在本發(fā)明給藥14d后，處死5組小鼠，取腦皮層，測定SOD活力和MDA含量，表5顯示本發(fā)明能明顯降低MPTP誘導小鼠腦組織的氧化應激水平，本發(fā)明使PD模型小鼠腦組織MDA含量顯著降低，明顯提高SOD的活力，優(yōu)于大麻二酚，表現(xiàn)出明顯的抗氧化活性。表5本發(fā)明對MPTP誘導的PD模型小鼠腦組織MDA水平和SOD活力的影響組別例數(shù)MDA(mol/L)SOD(mmol/L)模型組108.11±1.6370.76±12.85大麻二酚組(20mg/kg)105.05±1.96*114.87±15.37**本發(fā)明A組(20mg/kg)103.07±0.83**143.64±10.04**本發(fā)明B組(20mg/kg)102.57±0.79***154.18±19.69***本發(fā)明C組(20mg/kg)103.83±1.28**134.02±11.54**注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.01。當前第1頁1 2 3