本發(fā)明涉及一種太行菊總黃酮的提取方法。
背景技術(shù)：
：太行菊(Opisthopappustaihangensis)為菊科植物太行菊屬的頭狀花序，太行菊為草本植物。太行菊一般高為10-15厘米，太行菊的莖部的顏色為血色，四周被覆濃厚或稀少的短毛?；~片一般呈橢圓形或卵形，長(zhǎng)2.5-3.5，二回羽狀割裂對(duì)照規(guī)則，一、二回全數(shù)全裂。一回側(cè)裂片一般為1-2對(duì)。太行菊中化學(xué)成分比較復(fù)雜，其主要成分為黃酮類(lèi)化合物、揮發(fā)油和萜類(lèi)、棕櫚酸和野菊花黃色素類(lèi)等化學(xué)成分。其中黃酮的藥理作用主要有：改善血液循環(huán)、降低膽固醇的含量、抑制炎性生物酶的滲出、促進(jìn)傷口的快速愈合，并且具有降血壓、抗腫瘤、抗糖尿病和抑菌的作用。并且黃酮類(lèi)具備很強(qiáng)的抗氧化活性，對(duì)體內(nèi)的氧基具備很好的掃除作用。目前太行菊總黃酮的提取方法一般有如下幾種：1.傳統(tǒng)溶劑提取法，即用熱水進(jìn)行提取。2.醇提取法，根據(jù)相似相溶的原則，極性比較大的苷元及苷類(lèi)易溶于極性較大的丙酮、乙醇、甲醇或混合溶劑，黃酮類(lèi)物質(zhì)提取經(jīng)常使用的溶劑是丙酮、甲醇和乙醇。3.超聲波輔助提取法，工作原理是超聲波可以使植物的細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等結(jié)構(gòu)遭到破壞，有利于細(xì)胞中的活性成分溶出；另外，超聲過(guò)程中不斷地震蕩，更能增加溶質(zhì)的運(yùn)動(dòng)能力；因?yàn)槌暡ㄝo助提取法用時(shí)較短、能源消耗比較低、盡量不破壞植物中有效成分的特點(diǎn)，較常規(guī)浸泡提取法具有較大的優(yōu)勢(shì)。4.酶浸漬萃取法，是指在提取黃酮類(lèi)物質(zhì)的過(guò)程當(dāng)中，人為地采用適當(dāng)?shù)拿讣尤敕磻?yīng)過(guò)程中，使其產(chǎn)生轉(zhuǎn)糖和酶解反應(yīng)，使得產(chǎn)品黃酮得率和濃度大幅度增加的新興實(shí)驗(yàn)手段。采用合適的酶摻入反應(yīng)中，不但通過(guò)發(fā)生的酶解反應(yīng)使得植物組織得到分解，并且還使油溶性的總黃酮變?yōu)檩^易溶于水的糖苷類(lèi)，加速提取過(guò)程。5.超臨界萃取法是應(yīng)用一些溶劑在臨界點(diǎn)附近時(shí)具備差異的特性，對(duì)混合物中的可溶解性成分進(jìn)行提取的一種先進(jìn)的生物分離技術(shù)。與傳統(tǒng)方法相比，超臨界萃取法具有無(wú)味、無(wú)毒、安全，易分離、污染小等各種優(yōu)點(diǎn)。在超臨界萃取方法中通常選取CO2為超臨界溶劑，因?yàn)镃O2無(wú)毒、操作溫度低、臨界壓力低等各種性質(zhì)比較穩(wěn)定、具有不易燃易爆等優(yōu)點(diǎn)。由于黃酮類(lèi)結(jié)構(gòu)中存在酚羥基，穩(wěn)定性差，所以在用以上方法進(jìn)行直接提取的時(shí)候很容易發(fā)生氧化，提取效果并不理想。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種總黃酮得率高，減少氧化的太行菊總黃酮的提取方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入相當(dāng)于太行菊重量?jī)杀兜乃?wt%NaOH調(diào)pH值至8.5-9.5，攪拌10-20min，向其中依次加入堿性纖維素酶、堿性果膠酶、亞硝酸鈉、三乙醇胺、氟化鈉、椰子油脂肪酸二乙醇胺和氧化鋁顆粒，保持溫度在35-50℃之間攪拌0.5-6h，其中太行菊與堿性纖維素酶、堿性果膠酶、亞硝酸鈉、三乙醇胺、氟化鈉、椰子油脂肪酸二乙醇胺和氧化鋁顆粒的質(zhì)量比為：100:0.3-0.5:0.1-0.3:3.5-9.6:6-14:4-7:5-12:100-150，所述氧化鋁顆粒的粒徑為150-250μm；(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11-12，過(guò)濾，取濾液，用酸調(diào)pH至5.5-6.5，向溶液中加入丙酮萃取，收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到C2H5OH-(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，所述C2H5OH的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%-28%，所述(NH4)2SO4的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%-21%，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%-3%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為6-8，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述步驟(2)中的酸為0.1mol/L的HCl。作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述步驟(3)中總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%-20%。作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述太行菊與堿性纖維素酶、堿性果膠酶、亞硝酸鈉、三乙醇胺、氟化鈉、椰子油脂肪酸二乙醇胺和氧化鋁顆粒的質(zhì)量比為：100:0.4:0.2:6.5:10:5.5:8:120。作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述步驟(3)中，C2H5OH的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為23%，所述(NH4)2SO4的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所取得的有益效果如下：本發(fā)明所提供的方法通過(guò)研究太行菊獨(dú)特的性能，在堿性條件下進(jìn)行細(xì)胞壁的破壁和總黃酮的提取，減少了氧化，并且通過(guò)酶與亞硝酸鈉、三乙醇胺、氟化鈉和椰子油脂肪酸二乙醇胺共同作用，并在破壁萃取的過(guò)程中加入粒徑為150-250μm的氧化鋁顆粒，可以增加物料之間的碰撞、接觸和融合，有利于促進(jìn)太行菊總黃酮的溶出，有效提高了總黃酮得提取率，并減少了在提取過(guò)程中太行菊總黃酮的氧化。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)發(fā)明進(jìn)行清楚、完整的描述。實(shí)施例1一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉、10g三乙醇胺、5.5g氟化鈉、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒徑為150-250μm的氧化鋁顆粒，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮12.34g，UV檢測(cè)含量為97.89%。實(shí)施例2一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9.5，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉、10g三乙醇胺、5.5g氟化鈉、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒徑為150-250μm的氧化鋁顆粒，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮11.27g，UV檢測(cè)含量為96.29%。實(shí)施例3一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至8.5，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉、10g三乙醇胺、5.5g氟化鈉、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒徑為150-250μm的氧化鋁顆粒，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮11.63g，UV檢測(cè)含量為97.04%。實(shí)施例4一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.3g堿性纖維素酶、0.1g堿性果膠酶、3.5g亞硝酸鈉、6g三乙醇胺、4g氟化鈉、5g椰子油脂肪酸二乙醇胺和100g粒徑為150-250μm的氧化鋁顆粒，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至12，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮10.92g，UV檢測(cè)含量為96.94%。實(shí)施例5一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至8.5，攪拌15min，向其中依次加入0.5g堿性纖維素酶、0.3g堿性果膠酶、9.6g亞硝酸鈉、14g三乙醇胺、7g氟化鈉、12g椰子油脂肪酸二乙醇胺和150g粒徑為150-250μm的氧化鋁顆粒，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮11.23g，UV檢測(cè)含量為97.16%。對(duì)比例1一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶和0.2g堿性果膠酶，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例2一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶和120g粒徑為150-250μm的氧化鋁顆粒，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例3一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶和6.5g亞硝酸鈉，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例4一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉和10g三乙醇胺，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例5一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉和8g椰子油脂肪酸二乙醇胺，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例6一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉和5.5g氟化鈉，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例7一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉、10g三乙醇胺和5.5g氟化鈉，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例8一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉、10g三乙醇胺和8g椰子油脂肪酸二乙醇胺，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例9一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉、5.5g氟化鈉和8g椰子油脂肪酸二乙醇胺，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例10一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、6.5g亞硝酸鈉、10g三乙醇胺、5.5g氟化鈉和8g椰子油脂肪酸二乙醇胺，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例11一種太行菊總黃酮的提取方法，其具備包括如下步驟：(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用5wt%NaOH調(diào)pH值至9，攪拌15min，向其中依次加入0.4g堿性纖維素酶、0.2g堿性果膠酶、10g三乙醇胺、5.5g氟化鈉、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒徑為150-250μm的氧化鋁顆粒，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例12(1)將100g太行菊進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩，加入200g的水，用30%檸檬酸調(diào)pH值至6，向其中依次加入0.4g纖維素酶、0.2g果膠酶、6.5g亞硝酸鈉、10g三乙醇胺、5.5g氟化鈉、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒徑為150-250μm的氧化鋁顆粒，保持溫度在40±2℃的條件下攪拌2h。(2)用10wt%NaOH溶液調(diào)節(jié)步驟(1)所得溶液的pH至11，過(guò)濾，取濾液，用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至6，向溶液中加入丙酮萃?。?0ml/次，3次），收集有機(jī)相，蒸干得到總黃酮粗提物；(3)將步驟(2)得到的總黃酮粗提物加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。對(duì)比例13(1)準(zhǔn)確稱(chēng)取粉碎的太行菊粉末5g，以1：50（g:ml）料液比加入體積分?jǐn)?shù)70%乙醇中，超聲60℃，提取40min，抽濾，收集獲得的太行菊總黃酮粗提液，減壓蒸餾，得到總黃酮提取物；(2)將步驟(1)得到的總黃酮物提液加入到23%C2H5OH-17%(NH4)2SO4形成的雙水相體系中，總黃酮粗提物在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17%，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的NaCl，調(diào)節(jié)pH值為7，混勻，分相，減壓干燥得到太行菊總黃酮。效果例11破壁率檢測(cè)：用低倍顯微鏡進(jìn)行觀測(cè)，以每個(gè)視野為單位，讀取100個(gè)視野取平均值后按下式進(jìn)行計(jì)算：破壁率(％)＝(1-A/B)×100％式中：A為破碎后的完整細(xì)胞數(shù)；B為原始細(xì)胞數(shù)。2總黃酮含量的檢測(cè)，對(duì)實(shí)施例1、對(duì)比例1-5得到的總黃酮進(jìn)行含量檢測(cè)，具體方法如下：2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確稱(chēng)取120℃干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5.00mg，60%乙醇超聲溶解，定容于50ml容量瓶得0.1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確量取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于10ml容量瓶，加0.5mol/LNaNO2溶液0.50ml搖勻，靜置6min后加入0.3mol/LAlCl3溶液0.50ml搖勻，放置6min；然后再加入1.0mol/LNaOH溶液4.00ml，用60%乙醇定容，靜置15min后，于505nm處測(cè)吸光度。以蘆丁標(biāo)品濃度C為橫坐標(biāo)、吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并得出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=10.749x-0.00705，相關(guān)系數(shù)R2=0.99922。2.2總黃酮含量的測(cè)定量取樣品溶液1ml于10ml試管，加0.5mol/LNaNO2溶液0.50ml搖勻，靜置6min后加入0.3mol/LAlCl3溶液0.50ml搖勻，放置6min；然后再加入1.0mol/LNaOH溶液4.00ml，用60%乙醇定容，靜置15min后，于505nm處測(cè)吸光度。利用標(biāo)準(zhǔn)回歸方程計(jì)算樣品溶液中總黃酮的濃度，再進(jìn)一步計(jì)算其含量和得率，具體計(jì)算方法如下：。3總黃酮得率的測(cè)定：對(duì)實(shí)施例1、對(duì)比例1-12步驟(1)得到的溶液按上述方法1檢測(cè)破壁率，對(duì)實(shí)施例1、對(duì)比例1-12得到的總黃酮按上述方法2和3分別進(jìn)行含量檢測(cè)和提取率測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1：表1破壁率(%)總黃酮質(zhì)量(g)總黃酮的提取率(%)總黃酮的含量(%)實(shí)施例199.3612.3412.3497.89對(duì)比例164.325.875.8796.21對(duì)比例267.595.955.9596.34對(duì)比例357.645.725.7295.97對(duì)比例462.785.865.8696.61對(duì)比例563.035.775.7796.58對(duì)比例670.246.166.1696.91對(duì)比例772.456.336.3397.01對(duì)比例863.675.915.9196.83對(duì)比例971.296.136.1396.98對(duì)比例1077.847.917.9197.37對(duì)比例1199.2110.0610.0697.09對(duì)比例1253.274.954.9596.21對(duì)比例1355.389.879.8797.53由上表所示，單純的加入三乙醇胺、氟化鈉和椰子油脂肪酸二乙醇胺，破壁效果和溶出效果并不理想，氧化鋁顆粒、三乙醇胺、氟化鈉和椰子油脂肪酸二乙醇胺同時(shí)加入會(huì)對(duì)破壁以及溶出有較為有利的促進(jìn)作用，亞硝酸鈉的加入可以有效降低太行菊總黃酮在提取過(guò)程中的不穩(wěn)定性。非堿性條件下的酶解破壁，效果并不理想，本發(fā)明方法較常規(guī)的醇提工藝，總黃酮的提取率可提高25%以上。本發(fā)明中的堿性纖維素酶可為短小芽孢桿菌AC-4所產(chǎn)的酶，也可為現(xiàn)有技術(shù)中其他已經(jīng)分離獲得的堿性纖維素酶。堿性果膠酶可選用現(xiàn)有技術(shù)中的分離獲得的堿性果膠酶。以上所述實(shí)施方式僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，而并非本發(fā)明可行實(shí)施的窮舉。對(duì)于本領(lǐng)域一般技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明原理和精神的前提下對(duì)其所作出的任何顯而易見(jiàn)的改動(dòng)，都應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為包含在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3