本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種二甲雙胍作為治療椎間盤退行性病藥物中活性成分的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

二甲雙胍是當(dāng)前全球應(yīng)用最廣泛的口服降糖藥之一，應(yīng)用于臨床已有５０多年的歷史。二甲雙胍具有良好的單藥／聯(lián)合治療的療效和安全性證據(jù)，以及良好的衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)效益證據(jù)。無(wú)論對(duì)于血糖控制，還是糖尿病心血管并發(fā)癥的預(yù)防，其都有明確的臨床證據(jù)。因此，該藥已成為全球控制糖尿病的核心藥物。在我國(guó)，二甲雙胍也已經(jīng)有近２０年的使用經(jīng)驗(yàn)。１９９５年，ＦＤＡ正式批準(zhǔn)二甲雙胍用于治療II型糖尿?。ǎ裕玻模停玻埃埃茨隁W盟正式批準(zhǔn)二甲雙胍用于治療１０歲以上的兒童Ｔ２ＤＭ。

目前，二甲雙胍的醫(yī)藥用途主要集中在II型糖尿病上，雖然在抗腫瘤、抗癌方面也有發(fā)現(xiàn)，但并沒(méi)有運(yùn)用到對(duì)治療椎間盤退行性病變的治療上。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)行對(duì)二甲雙胍了解認(rèn)知不全面，本發(fā)明提供一種二甲雙胍作為治療椎間盤退行性病藥物中活性成分的應(yīng)用，系二甲雙胍作為藥物的新用途，說(shuō)明二甲雙胍對(duì)治療椎間盤退行性病變具有良好效果。

本發(fā)明提供一種二甲雙胍作為治療椎間盤退行性病藥物中活性成分的應(yīng)用，即二甲雙胍在治療及延緩動(dòng)物椎間盤退行性病變產(chǎn)品中的應(yīng)用，二甲雙胍分子結(jié)構(gòu)式為：

。

所述二甲雙胍的作用目標(biāo)為椎間盤髓核細(xì)胞。

所述二甲雙胍的使用方式為將二甲雙胍溶于生理鹽水制備為溶液，所述二甲雙胍用量為50mg/kg/day。

本發(fā)明提供一種實(shí)現(xiàn)二甲雙胍作為治療椎間盤退行性病藥物中活性成分的應(yīng)用的藥物，所述藥物以二甲雙胍為主要活性成分，并配合生物材料對(duì)二甲雙胍進(jìn)行包載形成的復(fù)合制劑，所述生物材料為并聚已酸內(nèi)酯、聚乳酸-聚乙二醇、聚乙烯醇中任意一種。

所述藥物活性成分為二甲雙胍與抗退變藥物相互配伍形成的主藥，所述抗退變類藥物包括：葡萄糖胺、雌激素、白藜蘆醇、姜黃素中任一一種或幾種。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可以有效治療及延緩動(dòng)物椎間盤退行性病變，為治療及延緩動(dòng)物椎間盤退行性病藥物制備奠定了基礎(chǔ)，可以有效治療和延緩動(dòng)物椎間盤退行性病。

附圖說(shuō)明

圖1為大鼠尾椎磁共振T2像對(duì)照?qǐng)D；

圖2為priffmann分級(jí)評(píng)分對(duì)照?qǐng)D；

圖3為椎間盤快綠番紅SO對(duì)照?qǐng)D；

圖4為椎間盤組織學(xué)評(píng)分對(duì)照?qǐng)D；

圖5為髓核細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白印跡試驗(yàn)的對(duì)照?qǐng)D1；

圖6為髓核細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白印跡試驗(yàn)的對(duì)照?qǐng)D2；

圖7為Tunel試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的對(duì)比圖；

圖8為用半乳糖苷酶試驗(yàn)（SAβ-gal）檢測(cè)細(xì)胞衰老的對(duì)照?qǐng)D；

圖9為衰老相關(guān)蛋白印跡試驗(yàn)的對(duì)照?qǐng)D1；

圖10為衰老相關(guān)蛋白印跡試驗(yàn)的對(duì)照?qǐng)D2；

圖11為實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)退變相關(guān)基因改變的對(duì)比圖；

圖12為免疫熒光檢測(cè)退變相關(guān)基因的對(duì)比圖。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體的描述，只用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定，該領(lǐng)域的技術(shù)工程師可根據(jù)上述發(fā)明的內(nèi)容對(duì)本發(fā)明作出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。

試驗(yàn)例

新的適應(yīng)癥：

用于延緩及治療動(dòng)物椎間盤退行性病變。

實(shí)驗(yàn)證據(jù)支持新適應(yīng)癥

實(shí)驗(yàn)步驟如下：

（1）造模方法：取8周齡SD大鼠，每只重量在200-250g之間，使用4%水合氯醛麻醉后，經(jīng)碘伏消毒，取大鼠第7、8節(jié)尾椎（Co7/8），27g穿刺針刺入，刺入長(zhǎng)度為4mm，維持1min。

（2）將60只SD大鼠分成3組：依次為對(duì)照組、單純椎間盤退變組和椎間盤退變后二甲雙胍治療組，椎間盤退變后二甲雙胍治療組在造模成功后每天腹腔注射二甲雙胍治療，所述二甲雙胍為于北京索萊寶科技有限公司購(gòu)置的鹽酸二甲雙胍，將二甲雙胍溶于生理鹽水，二甲雙胍注射量為50mg/Kg/day。

（3）分別在損傷后第8周及第16周，進(jìn)行大鼠尾椎磁共振檢測(cè)，并用priffmann分級(jí)法評(píng)估椎間盤退變情況。

（4）在第8周及第16周取椎間盤組織進(jìn)行快綠-番紅SO染色，觀察椎間盤髓核組織的退變及膠原改變。

（5）取大鼠的椎間盤髓核細(xì)胞給予過(guò)氧化氫（100μM）處理2小時(shí)模擬退變環(huán)境，再用二甲雙胍(100μM)處理24小時(shí)，通過(guò)蛋白印跡方法以及凋亡檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)各組的大鼠髓核細(xì)胞凋亡水平。

（6）在大鼠體外髓核細(xì)胞上通過(guò)蛋白印跡方法以及半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)各組的大鼠髓核細(xì)胞衰老水平。

（7）在大鼠體外髓核細(xì)胞上通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR及免疫熒光，檢測(cè)各組的大鼠髓核細(xì)胞退變相關(guān)基因的改變。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

（1）如圖1、圖2所示單純椎間盤退變組的磁共振T2像顯示，退變的椎間盤呈現(xiàn)明顯的低信號(hào)，priffmann評(píng)分也相比對(duì)照組更低，而二甲雙胍治療后，椎間盤的低信號(hào)相對(duì)于疾病組有明顯的提升，priffmann評(píng)分也升高了，這些結(jié)果證明了二甲雙胍能顯著延緩椎間盤退變程度。

（2）如圖3、圖4所示，對(duì)8周及16周的退變椎間盤進(jìn)行番紅-快綠染色，進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)單純椎間盤退變組退變后，椎間盤的組織結(jié)構(gòu)紊亂，髓核細(xì)胞分布零散混亂，纖維環(huán)排列紊亂，細(xì)胞外基質(zhì)膠原流失嚴(yán)重。而二甲雙胍治療后的模型動(dòng)物的椎間盤，組織結(jié)構(gòu)更加接近正常，髓核細(xì)胞分布相對(duì)規(guī)則，纖維環(huán)結(jié)構(gòu)仍相對(duì)完整，細(xì)胞外基質(zhì)保留更多。通過(guò)組織學(xué)評(píng)分后分析，二甲雙胍治療組的評(píng)分顯著大于單純退變組。

（3）如圖5、圖6和圖7所示，通過(guò)蛋白印跡試驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)髓核細(xì)胞在過(guò)氧化氫處理后凋亡蛋白表達(dá)顯著提高，提示細(xì)胞發(fā)生凋亡，而二甲雙胍治療后可以明顯抑制凋亡蛋白的表達(dá)，提示有效抑制了髓核細(xì)胞的凋亡。同時(shí)，我們對(duì)大鼠髓核細(xì)胞進(jìn)行了TUNEL凋亡試劑盒的檢測(cè)，得到相同的結(jié)果。

（4）參照?qǐng)D8、圖9和圖10可知，通過(guò)半乳糖苷酶試驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)過(guò)氧化氫損傷能夠促進(jìn)增加髓核細(xì)胞的衰老，而二甲雙胍治療可以減輕細(xì)胞的衰老程度。對(duì)衰老相關(guān)蛋白p16INK4A的蛋白印跡分析，也證明了過(guò)氧化氫促進(jìn)了衰老蛋白的表達(dá)，而二甲雙胍可以下調(diào)該蛋白。

（5）由圖11、圖12可以看出，對(duì)細(xì)胞退變相關(guān)基因如Col2a1、aggrecan,MMP3, Adamts5等進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)后，發(fā)現(xiàn)過(guò)氧化氫能夠抑制細(xì)胞外基質(zhì)如Col2a1、aggrecan 基因的表達(dá)，而增加了MMP3, Adamts5 等降解酶基因的表達(dá)。而二甲雙胍處理后，可以相對(duì)促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)基因的表達(dá)，而抑制降解酶相關(guān)基因。對(duì)Col2a1 以及MMP3 的免疫熒光，也證實(shí)了相同的結(jié)果。

另外，本實(shí)施例作為已知結(jié)構(gòu)的二甲雙胍，可直接從市場(chǎng)采購(gòu)或者化學(xué)合成，含二甲雙胍的藥物組合物可以是一些長(zhǎng)效或者局部緩釋制劑，例如，可以利用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的一些生物材料，包括聚已酸內(nèi)酯，聚乳酸-聚乙二醇，聚乙烯醇等等，包載二甲雙胍，形成復(fù)合制劑。同時(shí)，二甲雙胍也可以與一些已被證明有抗退變作用的藥物相互配伍，形成新的復(fù)合制劑，這些抗退變類藥物包括：維生素類如維生素C、E，雌激素類，中藥類如白藜蘆醇、姜黃素等。