本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種清熱中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備治療子宮疾病藥物方面的應(yīng)用。

技術(shù)背景

子宮炎是盆腔生殖器官炎癥之一，為婦女常見病，炎癥可局限于一個部位，也可幾個部位同時發(fā)病，臨床上尤以后一種情況為多見，急性炎癥有可能引起彌漫性腹膜炎、敗血癥以致感染性休克等嚴重后果；子宮水腫一般由于急性炎癥引起，會導(dǎo)致月經(jīng)量過多，如果不及時治療可能導(dǎo)致慢性子宮肥大等；子宮肥大，是指子宮均勻增大，本病的基本病理改變是子宮肌層內(nèi)平滑肌細胞及血管壁的變化。子宮呈均勻增大，肌層肥厚達2.5～3.2cm。切面呈灰白色或粉紅色，硬度增加，纖維束呈編織狀排列。動靜脈明顯擴張，在新生的血管周圍有成團的彈力纖維增生。伴有不等程度子宮出血的一種疾病。主要臨床癥狀為白帶增多，月經(jīng)量過多，持續(xù)天數(shù)延長；月經(jīng)期延長，但經(jīng)量不多等，另外，由于結(jié)締組織增生及炎癥沿宮頸旁或經(jīng)宮骶韌帶向盆腔擴散，有腰骶部疼痛或會陰部墜脹感。導(dǎo)致子宮肥大的原因包括子宮增生，原發(fā)性子宮血管病變，雌激素持續(xù)刺激和功能性子宮出血，慢性附件炎、盆腔結(jié)締組織炎及子宮慢性肌炎導(dǎo)致的子宮肌層內(nèi)膠原纖維增生，盆腔淤血引起子宮結(jié)締組織增生，支原體、衣原體、細菌、病毒等病原體感染等原因。目前一般子宮肥大等情況多考慮保守治療，雄激素治療可減小流血量，保守治療無效者，可考慮全子宮切除術(shù)，給患者帶來很大傷害。

阿奇霉素適用于敏感細菌所引起的感染，包括支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮膚和軟組織感染，急性中耳炎，鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染。近年也有見使用于治療盆腔炎。

目前未見中藥組合物與阿奇霉素聯(lián)合應(yīng)用于制備治療子宮疾病藥物的相關(guān)技術(shù)報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是填補現(xiàn)有中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素的應(yīng)用技術(shù)

不足，提供一種清熱中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備治療子宮疾病藥物方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

提供清熱中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備治療子宮疾病的藥物方面的應(yīng)用，尤其是應(yīng)用于制備治療改善子宮充血、水腫和/或增生肥大藥物方面的應(yīng)用；所述抗生素為阿奇霉素；所述中藥組合物的活性成分由千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木(十大功勞)和單面針組成。

優(yōu)選地，所述清熱中藥組合物中，穿心蓮和單面針的摻入量各為藥材總重量的9％；金櫻根、功勞木和千斤拔的摻入量各為藥材總重量的16％。

所述中藥組合物的制備方法可參照株洲千金藥業(yè)股份有限公司婦科千金片的制備方法。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明提供了一種新的中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素的聯(lián)合應(yīng)用，阿奇霉素適用于敏感細菌所引起的感染，包括支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮膚和軟組織感染，急性中耳炎，鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染。本發(fā)明將其與由千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木(十大功勞)和單面針組成的中藥組合物聯(lián)合應(yīng)用，在治療子宮疾病尤其是改善子宮充血、水腫以及增生肥大方面具有良好的應(yīng)用效果，并通過大量動物實驗證明所述中藥組合物和阿奇霉素發(fā)揮協(xié)同作用，對改善子宮臟器指數(shù)趨向正常方面具有確切的影響作用，為中藥組合物和阿奇霉素的新領(lǐng)域應(yīng)用都提供了有力技術(shù)支持。

附圖說明

圖1 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF治療組動物子宮疾病病理切片圖。

圖2 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF組治療前后子宮臟器系數(shù)變化情況。

圖3 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF組治療前后胸腺臟器系數(shù)變化情況。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例進一步說明本發(fā)明。下述實施例僅用于示例性說明，不能理解為對本發(fā)明的限制。除非特別說明，下述實施例中使用的原料為常規(guī)市購或商業(yè)途徑獲得的原料，除非特別說明，下述實施例中使用的方法和設(shè)備為本領(lǐng)域常規(guī)使用的方法和設(shè)備。

實施例1

1.實驗菌種：金黃色葡萄球菌(ATCC25923)，大腸埃希菌(ATCC25922)購

買于中國國家菌種庫。受試菌株凍干粉用無菌M-H(B)培養(yǎng)基混懸后均勻鋪于無菌M-H(A)平板表面，35℃孵育過夜復(fù)活，18h后平板表面生長出菌苔，選取其中長勢良好的單一菌團，重新涂抹于M-H(A)斜面，相同條件下孵育18h，密封，4℃條件下冷藏保存；試驗前一天取斜面菌涂抹于M-H(A)平板，35℃孵育過夜，即可使用。所有操作均在超凈工作臺完成。

2.菌液制備方法

方法一：(高濃度菌液制備)

挑3～4個單菌落于40毫升的M-H(B)培養(yǎng)基中。受試菌隔夜增菌培養(yǎng)16小時(37℃，水浴搖床振搖16小時)，次日取出原菌液用全波長多功能讀數(shù)議測OD值(細菌生長飽和期)；取20mL，分裝于離心管中，每管2mL，離心10000～15000rpm/min，10分鐘，棄取上清液之中的M-H(B)，用2mL生理鹽水混勻后，再離心15000rpm/min，10分鐘，棄取上清液中的生理鹽水，收集細菌細胞菌體2mL。將相同方法培養(yǎng)的金色葡萄球菌和大腸埃希菌按1：1混合即獲得4mL混合菌液。將該菌液為100菌液濃度，用生理鹽水進行10倍稀釋，稀釋至0.1×100，0.01×100，備用(共3個劑量)。

方法二：(低濃度菌液制備)

挑單一菌落(包括金色葡萄球菌和大腸埃希菌)于2毫升的生理鹽水中，分別配制成為0.5麥氏濃度(約1×108CFU·mL^－1)細菌混懸液，將金色葡萄球菌和大腸埃希菌混懸液混合，即得到混合菌液4mL。將該菌液設(shè)置成為10A菌液濃度，用生理鹽水進行對倍稀釋，稀釋至0.5×10^A，0.25×10^A，備用(共3個劑量)。

3.藥品與試劑：M-H(A)培養(yǎng)基(OXOID公司，生產(chǎn)批號：CM0337A)；M-H(B)培養(yǎng)基(OXOID公司，生產(chǎn)批號：CM0405B)；烏拉坦溶液(20％)；生理鹽水(四川科倫藥液股份有限公司，生產(chǎn)批號：M12012004)；其他試劑和耗材均由成都雅榮生化設(shè)備經(jīng)營部購買提供。

4.儀器：電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司，BPH-9162)；優(yōu)普系列超純水機(成都超純科技有限公司，UpK-1-10T)；微量加樣器(EppendorfResearch，10、100、100uL)；空氣浴振蕩器(哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)，HZQ-C)；自動電熱壓力蒸汽滅菌鍋(上海申安醫(yī)療器械廠，LDZX-40BI)；全波長多功能讀數(shù)議(美國Thermo)；菌落計數(shù)儀。

5.模型制備

具體操作方法：大鼠稱重標(biāo)記，腹部常規(guī)消毒，20％烏拉坦0.5mL/100g腹腔注射麻醉，用1mL注射器抽取預(yù)先制備的混合菌液，左手持鼠尾提起大鼠，用10mL注射器磨去針頭尖，于陰道底部的子宮頸分叉處小心進入一側(cè)宮腔內(nèi)，針頭在宮腔內(nèi)來回抽拉2次以機械性損傷子宮內(nèi)膜組織，然后朝卵巢方向推注菌液0.1mL，同樣操作步驟將0.1mL菌液注入另一側(cè)子宮，注射完畢后，倒置大鼠5min，以防菌液漏出。分別于24h，48h觀察記錄各組大鼠感染情況，以大鼠無死亡，于造模后24h、72h、96h后分別陰道刮片，進行菌落培養(yǎng)，選擇菌落計數(shù)≥30，≤100的感染菌量作為最佳感染菌量。將該菌量作為體內(nèi)感染的菌量。受試大鼠感染菌量為：

表1

所有實驗動物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常規(guī)消毒腹部，用無菌棉簽伸入宮口，來回抽拉2次后，將棉簽放入含2mL生理鹽水的試管中，獲得含測試品混懸液，取出棉簽，再用新的無菌棉簽充分蘸取混合液均勻涂抹于無菌M-H(A)平板表面，35℃孵育過夜，18h后進行菌落計數(shù)。240h犧牲動物，觀察子宮感染情況。各組典型鼠感染菌落計數(shù)，結(jié)果如下表2：

表2受試大鼠感染菌量

所有實驗動物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常規(guī)消毒腹部，用無菌落計數(shù)結(jié)果顯示，3組鼠所感染菌量符合實驗要求。同時，解剖后可見子宮等直觀可見炎性充血與炎性水腫。

6.試驗過程

模型及分組150只大鼠(雌性SPF級SD大鼠，220g±20g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所購得，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(川)2008-24)。16只用于空白，另行飼養(yǎng)。其余均采用造模方法麻醉后注射混合菌液。觀察5日，每日均隨機抽取6只及空白組2只麻醉后采集陰道分泌物用于細菌涂片。5日后存活大鼠隨機分為5組，即model、AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF(分別表示不予治療的模型組、單獨使用阿奇霉素組、阿奇霉素清熱合并組、阿奇霉素缺當(dāng)歸合并組、阿奇霉素全方合并組)。

model：不予治療的模型組；

AZM：阿奇霉素治療的模型組。

AZMQR：阿奇霉素+中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物)聯(lián)合治療模型組。

AZMDG：阿奇霉素+中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針、雞血藤、黨參參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物)聯(lián)合治療模型組。

AZMFF：阿奇霉素+中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針、雞血藤、當(dāng)歸、黨參參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物)聯(lián)合治療模型組。

1.受試劑量

(1)AZM劑量：本實施例對阿奇霉素(AZM)的可選受試劑量進行了分析和確定，目的為選擇一個試用后作用強度適中、時長適中的受試劑量，同時明確同中藥合并用藥時的時程長度。預(yù)試60、30、20、10mg/kg.d三天，發(fā)現(xiàn)原設(shè)定劑量過高，最終采用10mg/kg.d。

(2)受試藥物劑量：

原設(shè)定各中藥組合物的劑量為2.058g/kg.d，但預(yù)試發(fā)現(xiàn)，此劑量采用最大給容積配制的給藥液為稀漿狀，無法通過灌胃針頭。隨調(diào)整最終全方AZMFF給藥劑量為最大給藥量1.66g/kg.d，調(diào)整缺當(dāng)歸組劑量AZMDG為1.41g/kg.d、清熱組劑量AZMQR為1.16g/kg.d。

2.給藥時間

除空白和模型外，造模后第六日開始給予相應(yīng)藥物。AZM與各中藥分別給予，相差時間約2小時。所有給藥組在8點左右均先給予相應(yīng)劑量的AZM，兩個小時后開始給予相應(yīng)的中藥生理鹽水水混物。

3.樣本收集

第1日給予AZM兩小時后，經(jīng)尾靜脈采集各組大鼠末梢靜脈血。從第二日始各給藥組大鼠每日兩次采血，于給予阿奇前和給予中藥前各經(jīng)尾靜脈采集一次，每次采集血量約0.3mL，取樣時間誤差約30min。于給藥第2、4、6、8日給予AZM兩小時后，各組麻醉后犧牲約2～4只大鼠，采集下腔動脈抗凝全血，并同時收集犧牲大鼠的靶器官(子宮、孵巢、胸腺、脾臟)。

4.送樣測試

所有時間點0.3mL及末次全血，分取約0.2mL血漿用于UPLC-MS檢測AZM濃度。末次抗凝全血送檢血細胞計數(shù)、血流變。子宮從子宮體中部切分，取1/2福爾馬林固定后用于病理送檢。子宮、孵巢、胸腺、脾臟稱重并計算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)又稱臟體比，是實驗動物某臟器的重量與其體重之比值。正常時各臟器與體重的比值比較恒定。動物染毒后，受損臟器重量可以發(fā)生改變，故臟器系數(shù)也隨之而改變。臟器系數(shù)增大，表示臟器充血、水腫或增生肥大等；臟器系數(shù)減小，表示臟器萎縮及其他退行性改變。

實驗結(jié)果見圖1至圖3所示。圖1中，從左至右分別為AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF治療組動物子宮病理切片圖。結(jié)果顯示，實驗動物造模后，子宮和胸腺均充血、水腫，臟器系數(shù)與正常組比較均升高，給予不同的藥物組合治療后，各系數(shù)都降低，趨向于回復(fù)正常水平。各治療組之間的治療效果比較，子宮臟器系數(shù)：AZMDG>AZMQR>AZMFF>AZM。本發(fā)明中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素在改善子宮充血、水腫、增生等方面具有良好的應(yīng)用效果。

實施例2應(yīng)用例

1.研究對象：選擇門診自愿者2015年3月至2016年2月，因陰道不規(guī)則出血、月經(jīng)過多、痛經(jīng)經(jīng)診斷性刮宮病理診斷為子宮內(nèi)膜增生的患者30例，年齡35～50歲，單純型增生27例，復(fù)雜型增生3例，5例痛經(jīng)，10例子宮增大。

2.方法：所有患者在治療前均常規(guī)檢查血常規(guī)、肝和腎功能、卵泡刺激素(FSH)，黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)及孕酮(P)，采用B超檢查測量子宮大小及內(nèi)膜厚度。刮宮后第5天開始口服本發(fā)明中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物，湯劑或片劑)和阿奇霉素(參照阿奇霉素規(guī)定劑量)，阿奇霉素與本發(fā)明中藥組合物分開服用，相差時間約2小時。治療期間每月復(fù)診1次，復(fù)查血常規(guī)、肝和腎功能，了解用藥后不良反應(yīng)及月經(jīng)情況。2個月后停藥，停藥后l周內(nèi)重復(fù)上述檢查及診斷性刮宮病理學(xué)檢查。隨訪時間為6個月，無失訪病例。

3.統(tǒng)計學(xué)處理：采用t檢驗。

4.應(yīng)用結(jié)果：

臨床癥狀：有陰道出血者均在用藥后3～7天內(nèi)血止，停藥后29例(97％)恢復(fù)月經(jīng)，恢復(fù)時間為15～40天。用藥后5例痛經(jīng)癥狀緩解，10例子宮增大者子宮有不同程度縮小。隨訪30例患者均無復(fù)發(fā)，訴無明顯不良反應(yīng)。B超檢查顯示，治療后患者子宮內(nèi)膜厚度為(5.5±1.9)mm～(3～10mm)，明顯薄于治療前的(14.3±4.9)mm～(5～22mm)，P<0.05。病理學(xué)檢查示，治療后30例子宮內(nèi)膜為增殖期子宮內(nèi)膜，內(nèi)膜轉(zhuǎn)化率為100％。表明子宮內(nèi)膜增生受到明顯抑制，子宮出血有效控制。