本發(fā)明涉及化妝品
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：護(hù)膚品首先具有養(yǎng)顏美容的功能，能增強(qiáng)皮膚的彈性和活力，其次可使人年輕、美麗，護(hù)膚品增強(qiáng)了人的自信心，提高了人的美好形象，促進(jìn)了社會(huì)的文明。隨著生活水平的提高，人們?cè)絹?lái)越注重皮膚的保養(yǎng)，然而內(nèi)在及外在等原因?qū)е赂鞣N皮膚問(wèn)題。皮膚問(wèn)題的內(nèi)在原因主要是因?yàn)槠つw表皮層不均一的收縮塌陷引起的，表現(xiàn)即皺紋、魚(yú)尾紋、細(xì)紋、眼尾紋等。皮膚由三層結(jié)構(gòu)構(gòu)成，分別是表皮層、真皮層和皮下脂肪。真皮層包含了膠原蛋白、彈力蛋白、和其他纖維，上述元素雖然構(gòu)成了支撐皮膚的骨架，使皮膚顯得光滑年輕，但易受UVA、UVB以及臭氧或其他氧化因素的損傷。皮膚問(wèn)題的外在因素主要由于生活壓力和生活環(huán)境，如加班熬夜、長(zhǎng)時(shí)間對(duì)電腦、吸煙、睡眠不足、飲酒、用眼過(guò)度等。加上全球工業(yè)化和城市化對(duì)環(huán)保的影響很大，各國(guó)人民普遍關(guān)注污染問(wèn)題，因此針對(duì)皮膚存在的各種問(wèn)題的化妝品也被研發(fā)應(yīng)用。護(hù)膚品的發(fā)展經(jīng)歷不同時(shí)代，由礦物油時(shí)代、天然成分時(shí)代、抗氧化時(shí)代發(fā)展到近期的零負(fù)擔(dān)時(shí)代。礦物油時(shí)代護(hù)膚品化妝品的原料來(lái)源于化學(xué)工業(yè)，價(jià)格低廉，原料相對(duì)簡(jiǎn)單，成本低，大多具有有害物質(zhì)。天然成分時(shí)代時(shí)發(fā)現(xiàn)在護(hù)膚品中添加各種天然原料對(duì)肌膚有一定的滋潤(rùn)作用，但大部分底料還是沿用礦物油時(shí)代的成分，添加劑、防腐劑等仍然有很多難以攻克難題?？寡趸瘯r(shí)代最著名的理論是自由基理論，主張肌膚衰老的根本原因是“肌膚氧化”，只有對(duì)抗氧化才能阻止肌膚衰老。零負(fù)擔(dān)時(shí)代，有別于之前很多護(hù)膚產(chǎn)品實(shí)屬天然實(shí)際并不一定天然，給肌膚造成了沒(méi)必要的損傷，追尋零負(fù)擔(dān)即將成為現(xiàn)階段護(hù)膚發(fā)展史中最實(shí)質(zhì)性的變革?；诹阖?fù)擔(dān)時(shí)代的宗旨，人們尋找具有高科技含量、有益肌膚健康又不受化學(xué)品污染的生物技術(shù)護(hù)膚品。因此，有必要研發(fā)一種化妝品、護(hù)膚品原料，不僅具有祛斑、亮膚的效果，還可以撫平皺紋及改善皮膚平滑度。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，以“生物轉(zhuǎn)化理論”為指導(dǎo)，本發(fā)明的目的是提出一種祛斑、亮膚、除皺抗皺的牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液。本發(fā)明的目的之二是提供上述牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的制備方法及其應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，包括牛奶培養(yǎng)基與益生菌發(fā)酵后提取的有效成分，所述益生菌為乳桿菌和雙歧桿菌混合物，其中所述益生菌的添加量為總重量的40～80克/噸。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進(jìn)一步地，所述牛奶培養(yǎng)基由牛奶和水組成，所述牛奶的比重占牛奶培養(yǎng)基重量的5～20％。所述牛奶優(yōu)選市售的巴氏奶。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進(jìn)一步地，所述乳桿菌和雙歧桿菌的重量比為1.2～0.8:0.8～1.2。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進(jìn)一步地，所述乳桿菌包括植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、瑞士乳桿菌、鼠李糖乳桿菌或羅伊氏乳桿菌中的一種或多種組合。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進(jìn)一步地，所述雙歧桿菌包括乳雙歧桿菌、短雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌中的一種或多種組合。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進(jìn)一步地，所述有效成分包括發(fā)酵液上清液、發(fā)酵液或發(fā)酵液上清液的萃取物。本發(fā)明還提供牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的制備方法，包括下述步驟：S1、將水和牛奶按照一定比例混合，滅菌處理后制得牛奶培養(yǎng)基；S2、將益生菌加入牛奶培養(yǎng)基，在溫度35～45℃條件下發(fā)酵24～72h；S3、發(fā)酵后產(chǎn)物經(jīng)離心、過(guò)濾后提取得發(fā)酵上清液，即牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液。本發(fā)明制備方法，進(jìn)一步地，步驟S1前，先將牛奶和水先進(jìn)行滅菌處理，滅菌條件為80～95℃，20～40min。滅菌處理保證牛奶培養(yǎng)基品質(zhì)穩(wěn)定，不會(huì)后續(xù)發(fā)酵過(guò)程中引入雜質(zhì)或雜菌，該滅菌處理?xiàng)l件，既能保留牛奶中的營(yíng)養(yǎng)成分及活性，又能滿足滅菌要求。本發(fā)明制備方法，進(jìn)一步地，步驟S3中所述離心條件為，轉(zhuǎn)數(shù)5000～10000r/min、離心半徑6～12cm、離心時(shí)間為15～30min；所述過(guò)濾的濾紙為0.22μm。該離心條件的轉(zhuǎn)速、離心半徑和離心時(shí)間是經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后的最好分離效果又最節(jié)省時(shí)間的離心條件。本發(fā)明所述牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液可在制備化妝品中應(yīng)用，所述化妝品包括具有清除DPPH自由基、抑制酪氨酸酶活性、美白、抗衰老中至少一種功能的產(chǎn)品。借由上述方案，本發(fā)明至少具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明方法采用可食用益生菌發(fā)酵，產(chǎn)品天然不需要添加酶等物質(zhì)，不僅有益肌膚健康又不受酶和化學(xué)品等污染，而且最大化的簡(jiǎn)化了生產(chǎn)步驟、節(jié)約生產(chǎn)成本。本發(fā)明方法條件溫和、操作簡(jiǎn)易，有利于實(shí)現(xiàn)大量生產(chǎn)、工業(yè)化生產(chǎn)，且充分保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液不含任何化學(xué)成分，可以直接作為面膜、精華液、爽膚水等化妝品使用，比現(xiàn)有市面上的其他產(chǎn)品更加天然，不會(huì)給肌膚造成任何負(fù)作用，且發(fā)酵成分中含有小分子多肽，易于讓皮膚充分吸收。上述說(shuō)明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，并可依照說(shuō)明書(shū)的內(nèi)容予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例并配合附圖詳細(xì)說(shuō)明如后。附圖說(shuō)明圖1是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對(duì)DPPH清除作用折線圖；圖2是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對(duì)對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用柱形圖；圖3是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對(duì)色斑改善作用柱形圖；圖4是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對(duì)皮膚黑色素改善作用折線圖；圖5是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液撫平皺紋效果柱形圖；圖6是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液改善皮膚平滑度折線圖。具體實(shí)施方式本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改動(dòng)和變型而不脫離本發(fā)明的精神和范圍。這樣，倘若本發(fā)明的這些修改和變型屬于本發(fā)明權(quán)利要求及其等同技術(shù)的范圍之內(nèi)，則本發(fā)明也意圖包含這些改動(dòng)和變型在內(nèi)。下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例中的液體培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)重量比10％左右，溶質(zhì)為牛奶。下述實(shí)施例中的牛奶來(lái)自市面銷(xiāo)售?！緦?shí)施例1】牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的制備方法牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液制備：將一定量的牛奶和水按照1:9的比例稱(chēng)量，得到發(fā)酵培養(yǎng)液；95℃，20min滅菌后，按照60g/噸的量接入益生菌，其中植物乳桿菌和乳雙歧桿菌各30g/噸，得到發(fā)酵體系。將發(fā)酵體系在37℃恒溫箱中發(fā)酵48小時(shí)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；將發(fā)酵產(chǎn)物在6500r/min、離心半徑為9cm的條件下離心20min，棄沉淀，收集離心上清液，然后用0.22μm濾膜過(guò)濾，再將此上清液108℃高壓滅菌20min，得到滅菌后的發(fā)酵濾液，即為本發(fā)明提供的牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液?！緦?shí)施例2】牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液在作為化妝品中的應(yīng)用一、牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液的安全性檢測(cè)人體斑貼試驗(yàn)主要是用于檢測(cè)化妝品終產(chǎn)品或原料的刺激性。本發(fā)明對(duì)實(shí)施例1獲得的牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液進(jìn)行人體封閉式斑貼試驗(yàn)，旨在對(duì)其潛在皮膚刺激性進(jìn)行評(píng)估。1、試驗(yàn)對(duì)象選擇合適的志愿者30人，年齡范圍在18-60歲隨機(jī)選擇。2、試驗(yàn)方法稱(chēng)取0.020g-0.025g固體樣品或半固體的樣品放入斑試器中備用。將液體樣品0.2mL到0.025mL滴加在濾紙片上，再將濾紙片置于斑試器內(nèi)。每個(gè)樣品均設(shè)置空白對(duì)照，在對(duì)照斑試器孔內(nèi)加入與樣品等量的樣品溶劑，如蒸餾水或橄欖油。試驗(yàn)部位選為人體背部，利用無(wú)刺激性的膠帶將斑試器固定貼敷于受試者背部。測(cè)試周期持續(xù)24h。為了試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可信和科學(xué)，在測(cè)試期間志愿者按照要求，不能摘掉斑試器，亦不可使受試部位接觸水。24h后去除斑試器，靜置30min后，等待壓痕消失，觀察皮膚的反應(yīng)。如果試驗(yàn)結(jié)果為陰性，則需要在斑貼試驗(yàn)后24h和48h分別再觀察一次。3、試驗(yàn)結(jié)果斑貼試驗(yàn)結(jié)果如表1所示：“-”＝陰性反應(yīng)；“±”＝可疑反應(yīng)：僅有微弱紅斑；“+”＝弱陽(yáng)性反應(yīng)(紅斑反應(yīng))：紅斑、浸潤(rùn)、水腫、可有丘疹；“++”＝強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)(皰疹反應(yīng))：紅斑、浸潤(rùn)、水腫、丘疹、皰疹；反應(yīng)可超出受試區(qū)；“+++”＝極強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)(融合性皰疹反應(yīng))：明顯紅斑、嚴(yán)重浸潤(rùn)、水腫、融合性皰疹，反應(yīng)超出受試區(qū)。根據(jù)化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007，人體斑貼試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)為：30例受試者中出現(xiàn)1級(jí)皮膚不良反應(yīng)的人數(shù)多于5例，或二級(jí)皮膚不良反應(yīng)的人數(shù)多于2例，或出現(xiàn)任何1例三級(jí)或三級(jí)以上皮膚不良反應(yīng)時(shí)，則判定受試物對(duì)人體有不良反應(yīng)，反之，則視為對(duì)人體無(wú)不良反應(yīng)。從表中可以看出：實(shí)施例1得到的牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液未產(chǎn)生可疑反應(yīng)，說(shuō)明本發(fā)明提供的牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液均具有安全性，不會(huì)給人體帶來(lái)不良反應(yīng)。表1、實(shí)施例1獲得的牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液的斑貼試驗(yàn)結(jié)果二、牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液的抗氧化性能檢測(cè)〖牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對(duì)DPPH清除功效〗DPPH是一種早期合成的有機(jī)自由基，常用來(lái)評(píng)估抗氧化物的供氫能力，它在有機(jī)溶劑中非常穩(wěn)定，呈紫色，而且在517nm處有一個(gè)特征吸收峰，當(dāng)遇到自由基清除劑時(shí)，DPPH的孤對(duì)電子被配對(duì)而使其退色，也就是在最大吸收波長(zhǎng)處的吸光值變小。因此，可通過(guò)測(cè)定吸光值的變化來(lái)評(píng)價(jià)樣品對(duì)DPPH自由基的清除效果。DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)的具體實(shí)驗(yàn)步驟為：以實(shí)施例1所得牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液作為待測(cè)物；(1)取等體積(一般為3mL)的待測(cè)物與2×10-4mol/L的DPPH溶液混勻(A1管)；(2)取等體積的無(wú)水乙醇(待測(cè)物溶劑)與2×10-4mol/L的DPPH溶液混勻(A2管)；(3)取等體積的無(wú)水乙醇與待測(cè)物混勻(A3管)；(4)反應(yīng)30min后，在517nm下測(cè)A1、A2、A3管吸光度值。清除率計(jì)算公式為：清除率(％)＝[(A2+A3)-A1]/A2做出發(fā)酵提取物對(duì)DPPH自由基清除作用曲線，見(jiàn)圖1。由圖1可知，實(shí)施例1所得牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對(duì)DPPH清除作用的IC50＝8.5％，說(shuō)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液具有一定的抗氧化能力，可清除自由基，促進(jìn)細(xì)胞代謝，增強(qiáng)細(xì)胞活力，改善機(jī)體的結(jié)構(gòu)和功能，提高機(jī)體生命力，從而延緩細(xì)胞老化，發(fā)揮其抗衰老的作用?！寂Ｄ贪l(fā)酵產(chǎn)物濾液的美白功效分析〗酪氨酸酶是黑素生成的關(guān)鍵酶，它控制著黑素的形成過(guò)程，其活性程度對(duì)色素的沉積起主要作用。目前市場(chǎng)上銷(xiāo)售的許多美白、祛斑產(chǎn)品都是以抑制酪氨酸酶達(dá)到美白作用，故對(duì)酪氨酸酶抑制作用的強(qiáng)弱是評(píng)價(jià)增白化妝品的主要指標(biāo)。通過(guò)測(cè)定樣品對(duì)酪氨酸酶的影響來(lái)評(píng)價(jià)樣品的美白功能，具體方法如下：按表2配置溶液：表2、溶液配制列表單位(mL)C1C2T1T2L-酪氨酸2222樣品0022PBS4523酪氨酸酶1010總體積7777注：C1和T1加入1mL酪氨酸酶，酶活為100U/mL；樣品為實(shí)施例1所得牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液；(1)C2管配好搖勻后，在37℃水浴鍋中水浴加熱10min，波長(zhǎng)475nm下調(diào)零。(2)C1管溶液配好搖勻，37℃水浴10min后，加酪氨酸酶1ml，繼續(xù)水浴10分鐘，測(cè)定C1吸光度值。(3)按(1)(2)同樣方法，以T2調(diào)零測(cè)定T1吸光度值。(4)計(jì)算樣品對(duì)酪氨酸酶的活性抑制率T(％)：T(％)＝(C1-T1)/C1×100％圖2所示，實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明實(shí)施例1所得10％牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制率為24.36％，1％的熊果苷對(duì)酪氨酸酶活性的抑制率98.12％。即本發(fā)明提供的10％牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的美白效果相當(dāng)于0.246％的熊果苷的效果，具有一定的美白功效?！寂Ｄ贪l(fā)酵產(chǎn)物濾液化妝品人體測(cè)試〗方法：分別各選20名年齡在28-50歲之間的女性志愿者使用含10％、20％牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的面膜，以不含牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的基質(zhì)配方作為空白對(duì)照，每天晚上使用1次。使用VISIA全臉?lè)治鰞x拍照分析，使用MPA580皮膚測(cè)試儀分析黑色素?cái)?shù)值。結(jié)果：牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液可顯著降低皮膚色斑數(shù)量，提亮膚色，減輕皺紋數(shù)量和程度，提高平滑度，使肌膚年輕化。①祛斑與亮膚效果參見(jiàn)圖3，牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液使用4周色斑數(shù)量已有顯著改善。參見(jiàn)圖4，使用6周后皮膚黑色素?cái)?shù)值有顯著下降。②撫平皺紋效果參見(jiàn)圖5，牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液具有顯著的促進(jìn)皮膚年輕化效果，使用4周后，不同濃度處理組皺紋數(shù)量均有極顯著降低。③改善皮膚平滑度參見(jiàn)圖6，牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液可快速改善皮膚平滑度，使用2周后有顯著改善。本發(fā)明尚有多種實(shí)施方式，凡采用等同變換或者等效變換而形成的所有技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3