技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種枸杞提取物、抗疲勞作用的藥物制劑及其制備方法，屬于天然藥物提取技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

枸杞（學(xué)名：Lyciumchinense）是茄科枸杞屬的多分枝灌木植物，高 0.5-1 米，栽培時(shí)可達(dá) 2 米多。國(guó)內(nèi)外均有分布。

枸杞的作用包括有：1．增強(qiáng)非特異性免疫作用 寧夏枸杞的醇或水提取物，均能顯著增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)印度墨汁的吞噬能力。枸杞的提取物，也能明顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力。 2．保護(hù)肝臟及抗脂肪肝作用 枸杞的水提取物或甜菜堿，可提高大鼠肝臟的磷酯水平和總膽固醇含量。對(duì)四溴酜鈉(BSP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)、堿性磷酸酶、膽堿脂酶等試驗(yàn)均有改善作用。另外，還有促進(jìn)肝細(xì)胞再生作用，抑制脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)的沉積作用。枸杞對(duì)脂質(zhì)代謝及抗脂肪肝作用，主要和甜菜堿傳遞甲基供體有關(guān)。 3．其他作用 枸杞煎劑對(duì)小鼠正常造血功能有促進(jìn)作用，可使白細(xì)胞(主要是淋巴細(xì)胞)數(shù)增多，對(duì)環(huán)磷胺抑制白細(xì)胞(主要是淋巴細(xì)胞)生成也具有對(duì)抗作用。枸杞水提取物，能引起家兔血壓降低、心臟抑制、呼吸和腸平滑肌興奮，其作用可被阿托品阻斷。枸杞內(nèi)含有胍的衍生物具有降低血糖作用。甜菜堿還有刺激家禽生長(zhǎng)及促進(jìn)乳酸菌生長(zhǎng)及產(chǎn)酸作用。

枸杞多糖是一種水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分，相對(duì)分子質(zhì)量為68-200，成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。其中又以枸杞多糖的免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤作用的研究最多?，F(xiàn)已有很多研究表明枸杞多糖具有促進(jìn)免疫、抗衰老、抗腫瘤、清除自由基、抗疲勞、抗輻射、保肝、生殖功能保護(hù)和改善等作用。

CN101564469A公開了一種枸杞多糖提取物，其特征在于酸性多糖含量為85％-95％，中性多糖為1％-5％。采用水提醇沉、超濾和離子交換有機(jī)結(jié)合的方法，提取得到枸杞多糖提取物；藥理實(shí)驗(yàn)表明，該枸杞多糖具有很好的治療腫瘤的作用。CN101133833A公開一種枸杞活性多糖制備方法，用經(jīng)過(guò)40～60度酒精冷浸或加熱提取后的枸杞藥渣為原料，以水為溶劑進(jìn)行提取，從而獲得枸杞多糖提取物；選擇具有α－(1→4)糖苷鍵內(nèi)切活性的α－淀粉酶對(duì)枸杞多糖提取物中的枸杞粗多糖進(jìn)行酶解，從而獲得低分子量的枸杞活性多糖。

但是上述常規(guī)方法得到的枸杞多糖存在著活性低，保健治療效果有待進(jìn)一步提高的問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是：提供一種枸杞提取物，其具有較好的抗疲勞效果，并提供了相應(yīng)的藥物制劑。

技術(shù)方案是：

一種枸杞提取物，它是通過(guò)如下方法提取得到：

第1步、按重量份計(jì)，取枸杞20～30份，研磨成粉末，再加入6～8倍重量的水、硫酸鈉0.2～0.5份、磷酸二氫鈉0.2～0.4份，升溫至60～70℃浸提，時(shí)間是1～3小時(shí)，得到浸提液；

第2步、將浸提液通過(guò)微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得到微濾透過(guò)液；

第3步、將微濾透過(guò)液用納濾膜進(jìn)行濃縮，得到納濾濃縮液；

第4步、將納濾濃縮液進(jìn)一步蒸發(fā)至體積縮小為納濾濃縮液體積的30%～40%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的體積濃度大于80%，使產(chǎn)生沉淀，靜置1～3小時(shí)后，取下部的沉淀；

第5步、在沉淀中加入30～40份的水，再加入水的重量0.5～1%的酶，調(diào)節(jié)pH至5.0～6.0，混合均勻，進(jìn)行酶解，結(jié)束后升溫滅酶，得到酶解液；

第6步、將酶解液蒸發(fā)濃縮，直至體積縮小為25%～30%，再在濃縮液中加入乙醇使乙醇的體積濃度在80%以上，產(chǎn)生沉淀，濾出沉淀后，干燥，得到提取物。

第1步中研磨的粉末目數(shù)是200～400目。

第2步中微濾膜的平均孔徑是100～200 nm。

第3步中納濾膜的截留分子量是300～500Da。

第5步中，使用質(zhì)量濃度是1%～3%的鹽酸溶液對(duì)pH進(jìn)行調(diào)節(jié)；酶解時(shí)間為0.5～2h，酶解溫度為50～70℃。

第5步中，所述的酶選自堿性果膠酸裂解酶、堿性纖維素酶、堿性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物。

包含有上述枸杞提取物的藥物制劑。

上述的枸杞提取物在制備提高哺乳動(dòng)物抗疲勞能力藥物中的應(yīng)用。

有益效果

本發(fā)明提供的枸杞提取物，具有純度高、收率高的優(yōu)點(diǎn)，采用了酶解技術(shù)之后，促進(jìn)了其中的大分子向小分子的轉(zhuǎn)變，使抗疲勞作用效果更好。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

第1步、按重量份計(jì)，取枸杞20份，研磨成200～400目粉末，再加入6倍重量的水、硫酸鈉0.2份、磷酸二氫鈉0.2份，升溫至60℃浸提，時(shí)間是1小時(shí)，得到浸提液；

第2步、將浸提液通過(guò)平均孔徑是100nm的微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得到微濾透過(guò)液；

第3步、將微濾透過(guò)液用截留分子量是300Da的納濾膜進(jìn)行濃縮，得到納濾濃縮液；

第4步、將納濾濃縮液進(jìn)一步蒸發(fā)至體積縮小為納濾濃縮液體積的30%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的體積濃度80%，使產(chǎn)生沉淀，靜置1小時(shí)后，取下部的沉淀；

第5步、在沉淀中加入30份的水，再加入水的重量0.5%的酶，所述的酶選自堿性果膠酸裂解酶、堿性纖維素酶、堿性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用質(zhì)量濃度是1%的鹽酸溶液對(duì)pH進(jìn)行調(diào)節(jié)pH至5.0～6.0，混合均勻，進(jìn)行酶解，酶解時(shí)間為0.5h，酶解溫度為50℃，結(jié)束后升溫滅酶，得到酶解液；

第6步、將酶解液蒸發(fā)濃縮，直至體積縮小為25%，再在濃縮液中加入乙醇使乙醇的體積濃度在80%，產(chǎn)生沉淀，濾出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量43wt%。

實(shí)施例2

第1步、按重量份計(jì)，取枸杞30份，研磨成200～400目粉末，再加入8倍重量的水、硫酸鈉0.5份、磷酸二氫鈉0.4份，升溫至70℃浸提，時(shí)間是3小時(shí)，得到浸提液；

第2步、將浸提液通過(guò)平均孔徑是200 nm的微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得到微濾透過(guò)液；

第3步、將微濾透過(guò)液用截留分子量是500Da的納濾膜進(jìn)行濃縮，得到納濾濃縮液；

第4步、將納濾濃縮液進(jìn)一步蒸發(fā)至體積縮小為納濾濃縮液體積的40%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的體積濃度80%，使產(chǎn)生沉淀，靜置3小時(shí)后，取下部的沉淀；

第5步、在沉淀中加入40份的水，再加入水的重量1%的酶，所述的酶選自堿性果膠酸裂解酶、堿性纖維素酶、堿性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用質(zhì)量濃度是3%的鹽酸溶液對(duì)pH進(jìn)行調(diào)節(jié)pH至6.0，混合均勻，進(jìn)行酶解，酶解時(shí)間為2h，酶解溫度為70℃，結(jié)束后升溫滅酶，得到酶解液；

第6步、將酶解液蒸發(fā)濃縮，直至體積縮小為30%，再在濃縮液中加入乙醇使乙醇的體積濃度在80%，產(chǎn)生沉淀，濾出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量45wt%。

實(shí)施例3

第1步、按重量份計(jì)，取枸杞25份，研磨成200～400目粉末，再加入7倍重量的水、硫酸鈉0.3份、磷酸二氫鈉0.3份，升溫至65℃浸提，時(shí)間是2小時(shí)，得到浸提液；

第2步、將浸提液通過(guò)平均孔徑是150 nm的微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得到微濾透過(guò)液；

第3步、將微濾透過(guò)液用截留分子量是400Da的納濾膜進(jìn)行濃縮，得到納濾濃縮液；

第4步、將納濾濃縮液進(jìn)一步蒸發(fā)至體積縮小為納濾濃縮液體積的35%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的體積濃度80%，使產(chǎn)生沉淀，靜置2小時(shí)后，取下部的沉淀；

第5步、在沉淀中加入35份的水，再加入水的重量0.8%的酶，所述的酶選自堿性果膠酸裂解酶、堿性纖維素酶、堿性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用質(zhì)量濃度是2%的鹽酸溶液對(duì)pH進(jìn)行調(diào)節(jié)pH至5.0～6.0，混合均勻，進(jìn)行酶解，酶解時(shí)間為1h，酶解溫度為60℃，結(jié)束后升溫滅酶，得到酶解液；

第6步、將酶解液蒸發(fā)濃縮，直至體積縮小為28%，再在濃縮液中加入乙醇使乙醇的體積濃度在80%，產(chǎn)生沉淀，濾出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量47wt%。

對(duì)照例1

與實(shí)施例3的區(qū)別在于：浸提過(guò)程中未加入硫酸鈉。

第1步、按重量份計(jì)，取枸杞25份，研磨成200～400目粉末，再加入7倍重量的水、磷酸二氫鈉0.3份，升溫至65℃浸提，時(shí)間是2小時(shí)，得到浸提液；

第2步、將浸提液通過(guò)平均孔徑是150 nm的微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得到微濾透過(guò)液；

第3步、將微濾透過(guò)液用截留分子量是400Da的納濾膜進(jìn)行濃縮，得到納濾濃縮液；

第4步、將納濾濃縮液進(jìn)一步蒸發(fā)至體積縮小為納濾濃縮液體積的35%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的體積濃度80%，使產(chǎn)生沉淀，靜置2小時(shí)后，取下部的沉淀；

第5步、在沉淀中加入35份的水，再加入水的重量0.8%的酶，所述的酶選自堿性果膠酸裂解酶、堿性纖維素酶、堿性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用質(zhì)量濃度是2%的鹽酸溶液對(duì)pH進(jìn)行調(diào)節(jié)pH至5.0～6.0，混合均勻，進(jìn)行酶解，酶解時(shí)間為1h，酶解溫度為60℃，結(jié)束后升溫滅酶，得到酶解液；

第6步、將酶解液蒸發(fā)濃縮，直至體積縮小為28%，再在濃縮液中加入乙醇使乙醇的體積濃度在80%，產(chǎn)生沉淀，濾出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量43wt%。

通過(guò)實(shí)施例3和對(duì)照例1可以看出，通過(guò)在浸提過(guò)程中加入硫酸鈉可以有效地促進(jìn)細(xì)胞分解，使更多的提取物可以得到利用，提高了提取物中多糖含量。

對(duì)照例2

與實(shí)施例3的區(qū)別在于：在第5步的酶解中堿性果膠酸裂解酶未加入，其重量被堿性木聚糖酶所替代。

第1步、按重量份計(jì)，取枸杞25份，研磨成200～400目粉末，再加入7倍重量的水、硫酸鈉0.3份、磷酸二氫鈉0.3份，升溫至65℃浸提，時(shí)間是2小時(shí)，得到浸提液；

第2步、將浸提液通過(guò)平均孔徑是150 nm的微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得到微濾透過(guò)液；

第3步、將微濾透過(guò)液用截留分子量是400Da的納濾膜進(jìn)行濃縮，得到納濾濃縮液；

第4步、將納濾濃縮液進(jìn)一步蒸發(fā)至體積縮小為納濾濃縮液體積的35%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的體積濃度80%，使產(chǎn)生沉淀，靜置2小時(shí)后，取下部的沉淀；

第5步、在沉淀中加入35份的水，再加入水的重量0.8%的酶，所述的酶選自堿性纖維素酶、堿性木聚糖酶和漆酶的按照重量比0.5：3：1的混合物，使用質(zhì)量濃度是2%的鹽酸溶液對(duì)pH進(jìn)行調(diào)節(jié)pH至5.0～6.0，混合均勻，進(jìn)行酶解，酶解時(shí)間為1h，酶解溫度為60℃，結(jié)束后升溫滅酶，得到酶解液；

第6步、將酶解液蒸發(fā)濃縮，直至體積縮小為28%，再在濃縮液中加入乙醇使乙醇的體積濃度在80%，產(chǎn)生沉淀，濾出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量44wt%。

對(duì)陽(yáng)虛癥小鼠的影響

取雄性小鼠70只，體重20～23g，將小鼠隨機(jī)分7組：正常對(duì)照組、陽(yáng)虛證模型組(氫化 可的松0.125g/kg)及氫化可的松+本發(fā)明的枸杞提取物(實(shí)施例1～3、對(duì)照例1～2，0.5g/kg)5組。各組均灌胃給 藥或N.S，每天一次，連續(xù)用藥6天。給藥第4天(除正常對(duì)照組外)同時(shí)肌注氫化可的松 0.125g/kg，連續(xù)肌注3天。末次給藥后1小時(shí)記錄各組小鼠體重、體溫、自主活動(dòng)次數(shù)(10 分鐘內(nèi))及低溫游泳存活時(shí)間，結(jié)果見下表：

本發(fā)明制劑對(duì)陽(yáng)虛證小鼠的影響(n＝10， X±S)

注 ： 與陽(yáng)虛模型組比較 ※P ＜ 0.05，與實(shí)施例3組比較 #P<0.05。

結(jié)果表明本發(fā)明得到的提取物能使陽(yáng)虛證小鼠體溫升高，活動(dòng)增加，低溫游泳時(shí)間延長(zhǎng)，體重增加。實(shí)施例3相對(duì)于對(duì)照例2來(lái)說(shuō)，通過(guò)加入堿性果膠酸裂解酶，促進(jìn)了提取物的分解，使成分活性得到了提高，提高了促進(jìn)陽(yáng)虛證小鼠恢復(fù)體力的效果。