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      一種用于衰老基因表達調(diào)控的組合物及其在保健品中的應(yīng)用的制作方法

      文檔序號:12730947閱讀:431來源:國知局
      一種用于衰老基因表達調(diào)控的組合物及其在保健品中的應(yīng)用的制作方法與工藝

      本發(fā)明涉及一種用于衰老基因表達調(diào)控的組合物及其在保健品中的應(yīng)用,尤其涉及一種以HSF1及HSPs為靶點的衰老基因表達調(diào)控的組合物及其在保健品中的應(yīng)用。



      背景技術(shù):

      應(yīng)激(stress)是細胞應(yīng)對生存環(huán)境中多種不利因素的反應(yīng),溫度變化、蛋白質(zhì)錯誤折疊、氧化性損傷及病毒入侵都可以引起細胞應(yīng)激,它通過改變機體內(nèi)穩(wěn)態(tài),啟動相應(yīng)信號傳導(dǎo)途徑,引起一系列分子事件,產(chǎn)生廣泛而深刻的影響。

      應(yīng)激反應(yīng)的典型特征之一是激活細胞熱應(yīng)激因子(heat shock factor,HSF),進而表達一種或數(shù)種熱激蛋白(heat shock protein,HSP)。熱激轉(zhuǎn)錄因子是一類高度保守的蛋白,其在細胞生長、發(fā)育以及應(yīng)激反應(yīng)和疾病進程中都發(fā)揮重要作用。在人類基因組中,已發(fā)現(xiàn)4個熱激轉(zhuǎn)錄因子基因,已知熱激轉(zhuǎn)錄因子1(HSF1)在熱激反應(yīng)中起關(guān)鍵作用,熱激轉(zhuǎn)錄因子2(HSF2)在發(fā)育和神經(jīng)分化中起作用,熱激轉(zhuǎn)錄因子4(HSF4)則對晶狀體形成非常重要。體內(nèi)的HSF1可被多條壓力通路激活,包括熱激、蛋白錯誤折疊、重金屬、氧應(yīng)激等。在應(yīng)激條件下,HSF1發(fā)生磷酸化形成活性三聚體,入核與熱激因子效應(yīng)區(qū)(heat shock element,HSE)結(jié)合,激活/抑制相應(yīng)基因表達。

      HSF1調(diào)控了應(yīng)激表達網(wǎng)絡(luò),約占人類全基因組3%的基因座在熱激條件下被HSF1結(jié)合,其可與暫停的聚合酶Ⅱ結(jié)合,募集轉(zhuǎn)錄延伸因子P-TEFb、Cdk9-Cyclin T二聚體,以形成新的轉(zhuǎn)錄延伸復(fù)合物。Rawat和Mitra通過凝膠遷移實驗(EMSA)也已證實HSF1可以激活絕大多數(shù)衰老相關(guān)基因,是衰老的重要調(diào)控因子。

      由HSF1編碼的熱激蛋白(heat shock proteins,簡稱HSP)是生物體在高溫、鹽漬、干旱、滲透脅迫等環(huán)境條件下誘導(dǎo)合成的一類應(yīng)激蛋白。其在細胞內(nèi)起分子伴侶功能,參與新生肽鏈折疊、蛋白質(zhì)組裝與轉(zhuǎn)運。同時,在細胞發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)時,熱激蛋白還可以與那些由于環(huán)境刺激而自身構(gòu)象發(fā)生改變的蛋白相互作用,防止非特異性蛋白聚集,維持信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的活性。HSPs屬于高度保守蛋白,約占細胞總蛋白的5-20%。其根據(jù)分子量大小分類為6類:HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40和小分子HSPs。

      HSP90家族成員即使在無脅迫的條件下,在真核生物體內(nèi)也有一定量的表達,是真核生物必不可少的因子。從晶體結(jié)構(gòu)來看,HSP90的N末端是一個二聚體,由含有一個配基“口袋”的αβ三明治結(jié)構(gòu)組成,其一側(cè)是一高度扭曲的,有8條鏈組成的β折疊,另一側(cè)則被9條α螺旋所覆蓋,在螺旋的中心有一個“口袋”,β折疊的表面透過這個“口袋”形成一個ATP/ADP結(jié)合域?,F(xiàn)已明確這個25kD的N-末端具有格爾德霉素結(jié)合位點和根赤霉素結(jié)合位點。HSP90是一種鈣結(jié)合蛋白,其N末端可使C末端二聚化,而C末端具有鈣調(diào)蛋白結(jié)合位點,同時也是蛋白激酶、肌動蛋白、微管蛋白及類固醇激素受體等信號轉(zhuǎn)到蛋白的結(jié)合位點。HSP90其主要功能為胞內(nèi)信號傳導(dǎo)。如它可與甾體受體結(jié)合并維持一種特定的構(gòu)型,當受體與甾體激素結(jié)合后,HSP90從復(fù)合物中游離出來。

      HSP70家族則是研究最多的一類熱激蛋白,在生物體內(nèi)分布最廣,進化上最保守的一類蛋白質(zhì)。HSP70具有兩個主要的結(jié)構(gòu)域,N端是高度保守的44kD結(jié)構(gòu)域,且是ATP結(jié)合區(qū),C端是25kD的肽鏈識別結(jié)合區(qū)。其中C末端又可分為一個保守的15kD多肽結(jié)合功能域和一個不保守的近C端10kD的可變功能域。DnaK(HSC70)的底物結(jié)合功能域和部分可變功能域重組片段的結(jié)構(gòu)主要由兩部分組成,N端折疊成一個緊密的β三明治結(jié)構(gòu);C端由5個α螺旋組成,形成一個松弛的α螺旋結(jié)構(gòu)。N端部分的β三明治結(jié)構(gòu)由底部和上部2個片層結(jié)構(gòu)組成,每個片層結(jié)構(gòu)都含有4條反向平行的β折疊鏈,其中三明治結(jié)構(gòu)底部片層結(jié)構(gòu)由4條鏈組成,而上部的片層結(jié)構(gòu)由另外4條鏈組成。在生物體內(nèi),熱激蛋白主要是充當分子伴侶的角色,參與新生肽的跨膜運輸和折疊。在酵母體內(nèi),含有兩種HSP70的成員SSa和SSc,分別在細胞漿和細胞核內(nèi)表達。肽鏈剛產(chǎn)生時,依賴ATP酶的活性與SSa集合,當穿過線粒體膜時,進入線粒體內(nèi)與體內(nèi)合成的SSc結(jié)合,當ATP水解后,將結(jié)合的SSa釋放,在依賴Mg-ATP酶的條件依賴HSP60、HSP10分子伴侶的幫助下完成折疊并釋放到線粒體內(nèi)。同時HSP70也參與胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。

      上述HSP分子在不同的環(huán)境和信號通路中參與了細胞衰老、凋亡的調(diào)控過程。例如HSP90與IKKα結(jié)合,曾強了IKK活性,降解胞內(nèi)IκB,激活NF-κB,抑制了細胞凋亡。而HSP70通過激活HSF1參與了抗衰老基因激活的過程。除此以外,HSP還廣泛參與機體免疫以及能量代謝過程,通過調(diào)控相關(guān)因子減少細胞損傷,減緩細胞衰老。

      總體而言,HSF1及其編碼的HSPs以直接激活抗衰老酶通路或者間接調(diào)控抗衰老、抗凋亡信號通路激活的方式參與了細胞衰老進程。這類因子尚未開發(fā)但有廣闊前景的靶點,但目前,國內(nèi)外都未見有調(diào)控HSF1及其編碼的HSPs阻止或延緩細胞衰老與死亡的應(yīng)用。



      技術(shù)實現(xiàn)要素:

      本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種用于衰老基因表達調(diào)控的組合物,該組合物具有激活HSF-1及HSP轉(zhuǎn)錄的功能。

      本發(fā)明的另一目的在于提供一種含有上述組合物的保健品及上述組合物在保健品中的應(yīng)用。

      為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:一種用于衰老基因表達調(diào)控的組合物,含有下述組分:小肽,白藜蘆醇,β-羥基-β-甲基丁酸鹽(HMB),肉桂酸,褐藻素;所述組合物還包括葡萄籽提取物和/或亮氨酸。

      上述組合物中,褐藻素為磷酸二酯酶抑制劑。本發(fā)明的組合物由于包含特異應(yīng)激信號激活小肽和抗衰老途徑激活劑,其能高效激活HSF-1及HSP轉(zhuǎn)錄的功能,實現(xiàn)體外HSF-1及HSP的高效調(diào)控。HSF-1及其轉(zhuǎn)錄的熱激蛋白HSPs密切參與抗衰老酶表達及活性調(diào)節(jié)過程,該過程通過激活體內(nèi)應(yīng)激效應(yīng)因子,特異激活抗氧化、抗凋亡途徑,達到抗衰老的目的。體內(nèi)HSF-1活性的增加,可以競爭協(xié)同轉(zhuǎn)錄增強子NF-κB,從而特異增加腺苷酸環(huán)化酶、Sirt1和Sirt3活性,同時協(xié)同HSPs協(xié)助蛋白折疊和保護特性,激活抗衰老酶途徑。

      本發(fā)明的組合物獲得方便,且易于通過皮下滲透吸收。

      作為本發(fā)明所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的優(yōu)選實施方式,所述組合物中各組分的重量份為:小肽3.0~5.0份,白藜蘆醇0.030~0.6份,β-羥基-β-甲基丁酸鹽0.1~4.0份,肉桂酸0.02~0.4份,褐藻素0.01~0.1份,葡萄籽提取物0.6~4.0份,亮氨酸0.6~4.0份。

      作為本發(fā)明所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的更優(yōu)選實施方式,所述白藜蘆醇為0.035~0.5重量份,所述β-羥基-β-甲基丁酸鹽為0.2~3.0重量份。當白藜蘆醇與β-羥基-β-甲基丁酸鹽為特定的重量份時,二者產(chǎn)生協(xié)同作用,本發(fā)明組合物調(diào)控衰老基因表達的效果更佳。

      作為本發(fā)明所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的更優(yōu)選實施方式,所述白藜蘆醇為0.035~0.5重量份,所述亮氨酸為0.75~3.0重量份。當白藜蘆醇與亮氨酸為特定的重量份時,二者產(chǎn)生協(xié)同作用,本發(fā)明組合物調(diào)控衰老基因表達的效果更佳。

      作為本發(fā)明所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的優(yōu)選實施方式,所述小肽由JKB-A1和JKB-A2組成,所述JKB-A1與JKB-A2的重量比為2:1;所述JKB-A1為Gla-Glu-Glu-Lys-Ala-Asp-Pro(SEQ ID:5)所示的序列組成的小肽,所述JKB-A2為Glu-Glu-Lys-Ala-Asn(SEQ ID:6)所示的序列組成的小肽。

      作為本發(fā)明所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的優(yōu)選實施方式,所述組合物還含有煙酸、維生素B6、維生素B12、泛酸、鳶尾素中的至少一種;并且所述組合物含有賴氨酸、谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、組氨酸、丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺、?;撬?、肉堿、胱氨酸和半胱氨酸中的至少一種。

      另外,本發(fā)明還提供了一種含有上述組合物的保健品。上述組合物在保健品中的用量為保健有效量。

      作為本發(fā)明所述保健品的優(yōu)選實施方式,所述保健品還含有載體。本發(fā)明中的載體為食品中可用載體或者藥用載體,其通常用在制藥或食品保健品配方中,包括不限于乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉等。

      作為本發(fā)明所述保健品的優(yōu)選實施方式,所述保健品還含有潤滑劑、濕潤劑、增甜劑、增香劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑中的至少一種。

      本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)現(xiàn)有的常規(guī)技術(shù),將保健品的載體和/或賦形劑一起配制,根據(jù)本發(fā)明所述的保健品組合物,最終提供幾種形式的單劑量型和多劑量型。保健品中,載體或者潤滑劑、濕潤劑、增甜劑、增香劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑的用量,本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)進行選擇。

      最后,本發(fā)明還提供了上述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物在保健品中的應(yīng)用。

      與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物夠激活HSF-1及其編碼的HSPs,通過直接激活抗衰老酶通路或者間接調(diào)控抗衰老、抗凋亡信號通路激活的方式減緩肌體衰老。

      附圖說明

      圖1為實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物處理的HeLa細胞系中,HSF-1及其編碼的HSPs的相對表達水平圖;

      圖2為實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物激活抗衰老酶通路關(guān)鍵基因mRNA表達水平的檢測結(jié)果圖;

      圖3為經(jīng)實施例1~9所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物以及對比例1所述組合物處理的HeLa細胞系中,HSF-1的相對表達水平圖;

      圖4為經(jīng)實施例1~9所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物以及對比例1所述組合物處理的HeLa細胞系中,HSP-27的相對表達水平如圖4所示。

      具體實施方式

      為更好地說明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點,下面將結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。

      實施例中,JKB-A1為Gla-Glu-Glu-Lys-Ala-Asp-Pro(SEQ ID:5)所示的序列組成的小肽,JKB-A2為Glu-Glu-Lys-Ala-Asn(SEQ ID:6)所示的序列組成的小肽。

      實施例1

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物含有下述重量份的組分:小肽3.0份,白藜蘆醇0.6份,β-羥基-β-甲基丁酸鹽0.1份,肉桂酸0.2份,褐藻素0.05份,葡萄籽提取物4.0份,亮氨酸4.0份;其中,所述小肽由JKB-A1和JKB-A2組成,JKB-A1與JKB-A2的重量比為2:1。

      實施例2

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物含有下述重量份的組分:小肽5.0份,白藜蘆醇0.030份,β-羥基-β-甲基丁酸鹽4.0份,肉桂酸0.02份,褐藻素0.1份,葡萄籽提取物0.6份,亮氨酸0.6份;其中,所述小肽由JKB-A1和JKB-A2組成,JKB-A1與JKB-A2的重量比為2:1。

      實施例3

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物含有下述重量份的組分:小肽4.0份,白藜蘆醇0.030份,β-羥基-β-甲基丁酸鹽3.0份,肉桂酸0.4份,褐藻素0.01份,葡萄籽提取物2.0份,亮氨酸0.6份;其中,所述小肽由JKB-A1和JKB-A2組成,JKB-A1與JKB-A2的重量比為2:1。

      對比例1

      本對比例的一種組合物,其與實施例3所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物相比,不同之處僅在于:本對比例的組合物不含小肽。

      實施例4

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例3所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于白藜蘆醇和β-羥基-β-甲基丁酸鹽的重量份不同,本實施例中,白藜蘆醇為0.035重量份,β-羥基-β-甲基丁酸鹽為1.5重量份。

      實施例5

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例3所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于白藜蘆醇和β-羥基-β-甲基丁酸鹽的重量份不同,本實施例中,白藜蘆醇為0.5重量份,β-羥基-β-甲基丁酸鹽為3.0重量份。

      實施例6

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例3所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于白藜蘆醇和β-羥基-β-甲基丁酸鹽的重量份不同,本實施例中,白藜蘆醇為0.042重量份,β-羥基-β-甲基丁酸鹽為0.2重量份。

      實施例7

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例3所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于白藜蘆醇和亮氨酸的重量份不同,本實施例中,白藜蘆醇為0.035重量份,亮氨酸為1.5重量份。

      實施例8

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例3所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于白藜蘆醇和亮氨酸的重量份不同,本實施例中,白藜蘆醇為0.5重量份,亮氨酸為3.0重量份。

      實施例9

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例3所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于白藜蘆醇和亮氨酸的重量份不同,本實施例中,白藜蘆醇為0.042重量份,亮氨酸為0.75重量份。

      實施例10

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于:本實施例用于衰老基因表達調(diào)控的組合物不含葡萄籽提取物。

      實施例11

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于:本實施例用于衰老基因表達調(diào)控的組合物不含亮氨酸。

      實施例12

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于:本實施例用于衰老基因表達調(diào)控的組合物還含有鳶尾素和絲氨酸。

      實施例13

      本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的一種實施例,本實施例所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物與實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物的不同之處僅在于:本實施例用于衰老基因表達調(diào)控的組合物還含有泛酸和丙氨酸。

      實施例14

      本發(fā)明保健品的一種實施例,本實施例所述保健品含有實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物和載體。

      實施例15

      本發(fā)明保健品的一種實施例,本實施例所述保健品含有實施例2所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物、載體和潤滑劑。

      實施例16

      本發(fā)明保健品的一種實施例,本實施例所述保健品含有實施例3所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物、載體、潤滑劑和防腐劑。

      實施例17

      本實施例對實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物激活HSF-1mRNA轉(zhuǎn)錄水平進行了研究,具體研究方法如下:

      提取經(jīng)實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物處理的HeLa細胞系不同時間點的總RNA,利用反轉(zhuǎn)錄酶合成相關(guān)基因的cDNA第一鏈,在適當?shù)臏囟葏?shù)下擴增28-32個循環(huán)。為了保證實驗結(jié)果的可靠與準確,在PCR擴增目的基因時,加入一對內(nèi)參(如β-actin)的特異性引物,同時擴增內(nèi)參DNA,作為對照。擴增結(jié)果通過瓊脂糖凝膠電泳進行鑒定。其中,內(nèi)參基因為β-actin,上游引物:5’-TCGTGCGTGACATTAAGGAG-3’(如SEQ ID:1所示),下游引物5’-AGGAAGGAAGGCTGGAAGAG-3’(如SEQ ID:2所示),HSF-1上游引物5’-GCCTTCCTGACCAAGCTGT-3’(如SEQ ID:3所示),下游引物:5’-AAGTACTTGGGCAGCACCTC-3’(如SEQ ID:4所示),PCR實驗方法參照Sambrook,Molecular Cloning:A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory Pr;3rd edition.標準操作進行,采用ABI 7300實時熒光定量PCR儀進行檢測。經(jīng)不同含量(0、20ng/μL、100ng/μL)實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物處理的HeLa細胞系中,HSF-1及其編碼的HSPs的相對表達水平如圖1所示。由圖1可見,在本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物加入的條件下,熱激蛋白HSF-1的轉(zhuǎn)錄水平隨著抗衰老酶通路激活水平的提高而逐漸升高。

      實施例18

      本實施例對實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物激活抗衰老酶通路進行了研究,具體研究方法如下:

      將實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物在適當稀釋比例梯度下與生理鹽水混勻,肌肉注射給雌性4周齡Wistar大鼠,每隔24小時注射一次,共注射3次。最后一次注射后12小時檢測大鼠組織細胞中抗衰老酶通路關(guān)鍵基因mRNA表達水平。實施例1所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物激活抗衰老酶通路關(guān)鍵基因mRNA表達水平的檢測結(jié)果如圖2所示。由圖2可知,本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物在體內(nèi)存在的條件下,基因Bdnf、lgf1、Arc、cFOS、Npas4、和Zif268的表達量都出現(xiàn)明顯上調(diào)。

      實施例19

      本實施例比較了實施例1~9所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物以及對比例1所述組合物激活HSF-1mRNA轉(zhuǎn)錄的效果,具體比較的方法如下:

      將實施例1~9所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物(含量為100ng/μL)以及對比例1所述組合物(含量為100ng/μL)分別用于處理HeLa細胞,提取經(jīng)處理的HeLa細胞系不同時間點的總RNA,利用反轉(zhuǎn)錄酶合成相關(guān)基因的cDNA第一鏈,在適當?shù)臏囟葏?shù)下擴增28-32個循環(huán)。為了保證實驗結(jié)果的可靠與準確,在PCR擴增目的基因時,加入一對內(nèi)參(如β-actin)的特異性引物,同時擴增內(nèi)參DNA,作為對照。擴增結(jié)果通過瓊脂糖凝膠電泳進行鑒定。其中,內(nèi)參基因為β-actin,上游引物:5’-TCGTGCGTGACATTAAGGAG-3’(如SEQ ID:1所示),下游引物5’-AGGAAGGAAGGCTGGAAGAG-3’(如SEQ ID:2所示),HSF-1上游引物5’-GCCTTCCTGACCAAGCTGT-3’(如SEQ ID:3所示),下游引物:5’-AAGTACTTGGGCAGCACCTC-3’(如SEQ ID:4所示),PCR實驗方法參照Sambrook,Molecular Cloning:A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory Pr;3rd edition.標準操作進行,采用ABI 7300實時熒光定量PCR儀進行檢測。經(jīng)實施例1~9所述用于衰老基因表達調(diào)控的組合物以及對比例1所述組合物處理的HeLa細胞系中,HSF-1的相對表達水平如圖3所示,HSP-27的相對表達水平如圖4所示;圖3和圖4中,NT表示未經(jīng)本發(fā)明用于衰老基因表達調(diào)控的組合物或?qū)Ρ壤?所述組合物處理的組別。

      由圖3和圖4可見,當白藜蘆醇為0.035~0.5重量份且β-羥基-β-甲基丁酸鹽為0.2~3.0重量份或者白藜蘆醇為0.035~0.5重量份且亮氨酸為0.75~3.0重量份或者時,HSF-1和HSP-27的相對表達水平較高;尤其是當白藜蘆醇為0.5重量份且β-羥基-β-甲基丁酸鹽為3.0重量份或者白藜蘆醇為0.042重量份且亮氨酸為0.75重量份或者時,HSF-1和HSP-27的相對表達水平達更高。

      最后所應(yīng)當說明的是,以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對本發(fā)明保護范圍的限制,盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明,本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解,可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換,而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。

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