本發(fā)明涉及中醫(yī)藥制備技術領域，尤其涉及一種苦參總堿和苦參總黃酮的組合物及其制備方法。
背景技術：
苦參是豆科槐屬多年生落葉亞灌木植物苦參(Sophora flavescens Ait.)的干燥根，性味苦、寒，歸心、肝、脾、腎、大腸、小腸諸經。具有清熱燥濕、殺蟲利尿的功效，可作苦味健胃劑、利尿劑、消炎藥、止瀉藥和驅蟲藥。
苦參的主要功能性成分為黃酮類和生物堿類成分，現有同時提取苦參黃酮和苦參總堿的工藝較少，如專利“一種同時制備苫參總黃酮提取物與總生物堿提取物的方法”，該專利公開的方法是通過提取、過濾、濃縮、干燥等步驟結合大孔樹脂等分離手段得到提取物，但該方法沒有涉及苦參生物堿和黃酮類物質的進一步分離，應該只得到苦參生物堿和苦參黃酮的粗提物，純度不高 ；再如專利“一種生產苦參總黃酮及黃酮鹽類的方法”，該專利采用的方法是先用酸水提取生物堿直至完全，再用醇提取苦參黃酮類物質，醇提液經處理得到純度較高的黃酮和黃酮鹽類產品，該方法采用兩次提取的方法能耗大、溶劑用量大，且未提及生物堿的純化步驟，僅得到黃酮和黃酮鹽類物質。專利號為“201110045288.0”，發(fā)明名稱為“一種苦參總黃酮與苦參總堿的聯(lián)合制備工藝”公開了一種進一步優(yōu)化的提取方案，但是該方案仍然存在提取效率不足，步驟繁瑣的缺陷。
技術實現要素：
本發(fā)明為解決現有技術中的上述問題提出的一種苦參總堿和苦參總黃酮的組合物及其制備方法，完全分離總黃酮和總堿的同時，能夠兼顧極高的提取效率和操作的簡便易行。
為了實現上述技術目的，本發(fā)明的技術措施為：
一種苦參總堿和苦參總黃酮的組合物的制備方法，包括以下步驟：
步驟一，苦參原料粉碎后過篩，使用醇溶液提取2-3次，然后合并提取液；
步驟二，將步驟一獲得的合并提取液離心過濾獲得總黃酮提取濾液，同時留存濾渣備用；
步驟三，將步驟二獲得的濾液使用大孔吸附樹脂吸附洗脫，濃縮干燥得苦參總黃酮提取物；
步驟四，將步驟二獲得的留存濾渣提取2-3次，然后合并提取液；
步驟五，將步驟四獲得的合并提取液減壓濃縮，調節(jié)pH為3-4，靜置，濾過，得上清液；
步驟六，將獲得的上清液使用陽離子交換樹脂吸附洗脫，然后用水及乙醇洗去部分雜質，再用濃氨水堿化樹脂，再用乙醇洗脫，收集洗脫物，濃縮干燥即得苦參總堿提取物。
為了優(yōu)化上述技術方案，本發(fā)明所采取的進一步的技術措施為：
優(yōu)選地，步驟一中苦參原料粉碎后過10目篩。
優(yōu)選地，步驟一中提取使用的醇溶液為80%乙醇溶液，每次提取時間為1-1.5小時。
優(yōu)選地，步驟三中使用大孔吸附樹脂吸附洗脫在上樣完成后靜置飽和30min，先用蒸餾水6倍柱體積洗脫，再用70%乙醇液4倍柱體積洗脫，收集70%乙醇洗脫液，濃縮干燥得苦參總黃酮提取物。
優(yōu)選地，步驟四中將步驟二獲得的留存濾渣，按照醇提取前質量加10倍量水，分別提取3次，每次1h。
優(yōu)選地，步驟五中使用1mol/L鹽酸溶液調節(jié)pH。
優(yōu)選地，步驟六中上清液經處理合格的732陽離子交換樹脂，用10倍樹脂體積水及6倍樹脂體積的30%乙醇洗去部分雜質，再用1倍樹脂體積濃氨水堿化樹脂，用6倍樹脂體積30%乙醇洗脫，收集此次30%醇洗脫物，濃縮干燥即得苦參總堿提取物10g。
優(yōu)選地，還包括將步驟三獲得的苦參總黃酮提取物和步驟六獲得的苦參總堿提取物合并為苦參總堿和苦參總黃酮的組合物的步驟。
另一方面，本發(fā)明還提供根據上述制備方法所制備得到的苦參總堿和苦參總黃酮的組合物以及其在制備治療宮頸癌藥物中的應用。
本發(fā)明采用上述技術方案，與現有技術相比，本發(fā)明不但能夠實現高效率的苦參總堿和苦參總黃酮的完全分離，同時最大限度地簡略了操作步驟和所需耗材。
附圖說明
圖1為本發(fā)明制備方法的流程示意圖。
具體實施方式
本發(fā)明提供了一種苦參總堿和苦參總黃酮的組合物的制備方法，包括以下步驟：
步驟一，苦參原料粉碎后過篩，使用醇溶液提取2-3次，然后合并提取液；
步驟二，將步驟一獲得的合并提取液離心過濾獲得總黃酮提取濾液，同時留存濾渣備用；
步驟三，將步驟二獲得的濾液使用大孔吸附樹脂吸附洗脫，濃縮干燥得苦參總黃酮提取物；
步驟四，將步驟二獲得的留存濾渣提取2-3次，然后合并提取液；
步驟五，將步驟四獲得的合并提取液減壓濃縮，調節(jié)pH為3-4，靜置，濾過，得上清液；
步驟六，將獲得的上清液使用陽離子交換樹脂吸附洗脫，然后用水及乙醇洗去部分雜質，再用濃氨水堿化樹脂，再用乙醇洗脫，收集洗脫物，濃縮干燥即得苦參總堿提取物。
下面通過具體實施例對本發(fā)明進行詳細和具體的介紹，以使更好的理解本發(fā)明，但是下述實施例并不限制本發(fā)明范圍。
實施例一制備實施例
苦參粉碎成10目粉，稱取500g，分別用80%醇提取3次，提取時間為2h，1h，1h，分別合并3次提取液，過濾，棄去藥渣，減壓濃縮至0.5g生藥材/ml。上處理好的AB-8樹脂柱，上樣完成后靜置飽和30min，先用蒸餾水6倍柱體積洗脫，再用70%乙醇液4倍柱體積洗脫，收集70%乙醇洗脫液，濃縮干燥得苦參總黃酮提取物24.69g。
苦參提取后的藥渣，按照醇提取前質量加10倍量水，分別提取3次，每次1h。分別合并3次提取液，過濾，棄去藥渣，減壓濃縮至相對密度1.06-1.07（50℃），加1mol/L鹽酸溶液調PH至3-4，靜置，濾過，上清液經處理合格的732陽離子交換樹脂，用10倍樹脂體積水及6倍樹脂體積的30%乙醇洗去部分雜質，再用1倍樹脂體積濃氨水堿化樹脂，用6倍樹脂體積30%乙醇洗脫，收集此次30%醇洗脫物，濃縮干燥即得苦參總堿提取物10g。
實施例二應用實施例
本實施例驗以宮頸癌細胞HeLa細胞系為對象，檢測本發(fā)明制備的組合物對HeLa細胞生長的影響，驗證本發(fā)明制備的苦參總堿和苦參總黃酮的組合物對宮頸癌的影響。
實驗方法：
宮頸癌細胞HeLa，通過體外培養(yǎng)、待測物處理，再利用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法，觀察受試樣品對含病毒基因組細胞生長活力的影響，指示樣品對感染病毒的細胞生長增殖的影響。
利用本發(fā)明的制備方法制備苦參總堿和苦參總黃酮，苦參總黃酮提取物和苦參總堿提取物按照相同生藥量進行復配，以不同的總黃酮和總堿提取物的濃度進行體外細胞增殖實驗，確定復配后對HeLa細胞的體外增殖作用影響。
實驗結果：
實驗結論：
從兩次試驗的細胞存活率可見，受試物作用72小時后，本發(fā)明制備的苦參總堿提取物和苦參總黃酮提取物在一定濃度范圍內對Hala細胞的生長表現出劑量依賴性抑制。苦參總堿和苦參總黃酮復方組合物在實驗濃度范圍內對Hala細胞的存活率均顯示出明顯的劑量依賴性抑制，通過各復方中單方濃度對細胞存活率的量效反應曲線計算出各自的IC50值后，與單方自身的IC50值比較，苦參總堿和苦參總黃酮提取物在復方2中效價強度增加2倍以上。說明苦參總堿和總黃酮復配使用較單獨使用在體外抑制HeLa細胞具有增效作用。
以上對本發(fā)明的具體實施例進行了詳細描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實施例。對于本領域技術人員而言，任何對本發(fā)明進行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應涵蓋在本發(fā)明的范圍內。